需氧革兰阳性杆菌及检验共109页
需氧革兰阳性杆菌检验
三、微生物学检验
• 要求快速检出、分离鉴定病原菌 以利早期确诊、查清疫源 及时治疗和采取预防对策
三、微生物学检验
（一）检验程序
三、微生物学检验
（二）标本的采集
• 皮肤炭疽：病灶深部标本 • 肺炭疽：痰和血液 • 肠炭疽：粪、呕吐物 • 脑膜炭疽：CSF、血液 • 死于败血症的动物，严禁宰杀和解剖，可消毒皮肤后
三、临床意义
(二)索状因子 细菌表面的一种糖脂，能破坏细胞的线粒体，影响细胞的
呼吸与磷酸化 (三)K抗原 -细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 -抗吞噬 -有利于细菌在黏膜表面的定植
三、临床意义
•所致疾病：白喉-急性呼吸道传染病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染 • 临床表现
– 细菌--上呼吸道粘膜，生长繁殖，产生毒素 细菌与毒素共同作用引起局部炎症： • 炎性渗出，坏死，纤维蛋白 →→假膜→→窒息
三、临床意义
• 锡克试验（Schick test）： （白喉外毒素皮内试验）
• 调查人群在感染或预防接种后对白喉是否产生免疫力 • 根据外毒素与抗毒素中和的原理，以少量白喉外毒素测定
机体有无相应抗毒素 • 缺点—观察时间长、操作繁琐，不易进行广泛测试
三、临床意义
•类白喉棒状杆菌致病性
•多为人或动物的正常菌群 •存在于鼻腔、咽喉部、外耳道、眼结膜、外阴和皮肤等处 •一般无致病性或仅能与其他细菌一起引起混合感染 •可引起医院内感染，如菌血症、心内膜炎、肺炎、咽炎等
三、微生物学检验
涂片染色
--G染色、荚膜染色、芽胞染色—初步报告 --荚膜荧光抗体染色
核酸检测 核酸杂交 分离培养
--BAP、戊烷脒多黏菌素B平板 --2%兔血清肉汤增菌→分离培养
需氧革兰阳性杆菌
2、临床检验程序
• 标本采集:
血液、脑脊液、呕吐物、粪便、分泌物等
• 标本直接检查:
--在CSF标本中成对排列,形如球菌,易误 认为肺炎链球菌
--有时与类白喉杆菌也极易混淆
• 分离培养:
杂菌污染标本接种20%NaCl心脑浸液肉汤2支 1支—10%CO2,37℃24～48h→分离培养 (BAP、 萘啶酸选择性平板) 1支—4℃ “冷增菌” →分离培养(每24h1次,
• 血琼脂平板 —有β溶血环
• 卵黄平板:
生长迅速,培养3h后,虽看不到菌落,但 该菌可分解卵磷脂而形成白色得混浊 环,称乳光反应或卵黄反应
生化反应:
•能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨苷等 •能胨化牛乳,液化明胶,VP(+) •触酶(+)、卵磷脂酶(+) • 多次传代后生化特性常可改变
抵抗力:
AP631炭疽噬菌体
• 串珠试验:
--接种于含青霉素(0、05～0、5U/ml)得肉汤 中,35℃ 6h,大而均匀成串得圆球状菌体
--与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 --类炭疽杆菌无此现象
•青霉素抑制试验:
接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板, 35℃24h
生长 受抑制不生长
•串珠和青霉素抑制联合试验:
•人类主要因接触带菌动物或其产品经皮肤损 伤感染而引起类丹毒。也可引起败血症或心 内膜炎
(二)微生物学检验
1、红斑丹毒丝菌基本特性 • 形态结构:
G+细长杆菌,单个存在或形 成短链,粗糙型菌落涂片可 呈长丝状,且有分支及断裂, 与放线菌得形态相近 无芽胞、无鞭毛、无荚膜
•培养特性:
厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环 境,传代后有氧环境也能生长,最适温度 30~35℃
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章考点：1.概述：概念2.棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、产单核李斯特菌●生物学性状●临床意义●微生物学检查常见的与临床有关的需氧革兰阳性杆菌有棒状杆菌属、芽胞杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属、加特纳菌属。
上述菌属的主要区别见表5-23-1。
表5-23-1 革兰阳性杆菌属的鉴别一、棒状杆菌属（一）简述：棒状杆菌属是①一群革兰阳性杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状.故名棒状杆菌。
②本菌着色不匀，有异染颗粒。
③无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
（无特殊结构）④需氧，⑤营养要求较高，能分解一些糖类，产酸不产气。
本属细菌种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，棒状杆菌除白喉棒状杆菌外，其余统称为类白喉棒状杆菌，大多数为条件致病菌。
（二）白喉棒状杆菌1.生物学特征（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌，大小为（2～5）μm×（0.5～1.0）μm。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
染色特点：在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒，这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
美蓝染色菌体着色不均匀，呈现着色深浅相间的节段或着色较深的颗粒；Neisser（奈瑟）染色，菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色，菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，生长最适温度为35℃～37℃，pH为7.2～7.8。
营养要求高，常用下列培养基进行分离培养。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，10～18h形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能在亚碲酸盐琼脂平板上能还原碲盐为元素碲，使菌落呈黑色。
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
微生物第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、产单核李斯特菌生物学性状、临床意义、微生物学检查。
棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒丝菌属加特纳菌属形态棒状杆菌有芽胞短杆、链或丝状细杆或线状杆菌、多形性触酶＋＋＋－－动力－＋＋－－对氧需、兼需、兼兼性兼性兼性G＋C mol% 51～65 32～60 36～38 35～40 42～44（一）白喉棒状杆菌G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
着色不匀，有异染颗粒（异染颗粒的主要成分是RNA核糖核酸和多偏磷酸盐，具有鉴定意义）。
无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
需氧，营养要求较高。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
1.培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。
血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
☆吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
(让其迅速生长并形成典型涂片染色形态的培养方法)亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
（选择鉴别培养基）<霍乱弧菌使菌落呈褐色>2.致病性本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，致病物质：白喉毒素（主要的致病因素、索状因子、K抗原），引起毒血症。
白喉棒状杆菌和毒素可使局部黏膜上皮发生炎性渗出并将炎性细胞和坏死组织和菌体凝结在一起，形成灰白色假膜，假膜脱落与气管内，可阻塞呼吸道成为白喉早期致死的主要原因。
而严重的毒血症引起的细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
3.免疫性：☆锡克试验或致敏红细胞凝集试验。
调查人群对白喉是否产生免疫力。
4.标本采集：无菌长棉拭子，从可疑的伪膜边缘采集分泌物，未见伪膜的疑似。
5.生化反应：主要用于鉴别白喉棒状杆菌与类白喉棒状杆菌。
尿素分解试验：白喉棒状杆菌（-），类白喉棒状杆菌（+）。
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验考点总结一、棒状杆菌属G+，杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状。
着色不匀，有异染颗粒。
无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
需氧，营养要求较高。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，其他大多数为条件致病菌。
（一）白喉棒状杆菌1.生物学性状（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
异染颗粒：Neisser（奈瑟）染色；Albert（阿培特）染色。
这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
异染颗粒（浓染颗粒）Neisser（奈瑟）染色：菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色：菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：在普通培养基上生长不良，形态不典型。
1）血液琼脂平板：灰白色S型菌落，有狭窄的β溶血环。
2）吕氏（Loeffler）血清斜面培养基：生长迅速，形成灰白色、湿润、S型菌落。
涂片染色形态典型，异染颗粒明显。
3）亚碲酸钾血琼脂：本菌能吸收亚碲酸盐，并使其还原为元素碲，使菌落呈黑色。
4）液体培养基。
（3）生化反应：触酶试验阳性，氧化酶试验阴性。
分解葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖，产酸不产气。
不分解乳糖，极少分解蔗糖。
能还原硝酸盐，不液化明胶，不产生吲哚，不分解尿素。
据亚碲酸钾血琼脂培养基、肉汤培养基的生长特点及生化反应，可将本菌分为轻、中、重三型。
在我国以轻型多见。
分型与所致疾病的严重程度无关，可用于流行病学调查。
2.致病性致病物质：白喉棒状杆菌引起白喉，多在秋冬季节流行。
以咽白喉最常见，喉白喉及鼻白喉次之，偶亦引起眼结膜、外耳道、阴道及皮肤的局部病变。
本菌一般不侵入血流，但其产生的大量外毒素可吸收入血，引起毒血症。
毒素能与敏感的心肌、肝、肾、肾上腺等组织细胞及外周神经，尤其与支配咽肌和腭肌的神经结合，引起细胞变性、坏死、内脏出血和神经麻痹等严重损害，是白喉晚期死亡的主要原因。
微生物学检验需氧革兰阳性杆菌及检验
分枝杆菌属种类
结核分枝杆菌复合群
结核分枝杆菌 牛分枝杆菌、 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌
光产色分枝杆菌 暗产色分枝杆菌 不产色分枝杆菌 迅速生长分枝杆菌
分 枝 杆 菌 属
非典型分枝杆菌
麻风分枝杆菌
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－形态染色
细长略弯，分枝生长易 着色 抗酸染色阳性
课件制作 陆曙梅
炭疽芽孢杆菌－－抗原结构与抵抗力
抗原结构： ※炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因 子组成，具有毒性作用。三种成分单独存在无 致病作用。 ※菌体抗原：耐热、耐腐败，能与相应抗体结合 发生沉淀反应，用于Ascoli试验 抵抗力：本菌芽孢抵抗力强，芽孢对碘和氧化 剂敏感 耐药性：本菌对青霉素、氨基糖甙类、四环素 类、环丙沙星敏感
课件制作 陆曙梅
白喉棒状杆菌－－毒力试验
意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重 要依据 方法 艾立克平板毒力试验 对流电泳法 协同凝集试验 动物实验
课件制作 陆曙梅
需氧芽孢杆菌属
是一大群下枯杨，能产生芽孢的革兰阳 性大杆菌。 种类： 炭疽芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌 蜡样芽孢杆菌 多粘杆菌等
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－生化反应
生化反应不活泼，不发酵糖类 与非结核分枝杆菌鉴别：
耐热触酶试验－；（非结核分枝杆菌＋）
与牛分枝杆菌鉴别 烟酸试验＋；（牛分枝杆菌－）
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－抵抗力与变异性
抵抗力特点：“三耐四敏” ※耐干燥、耐酸碱、耐孔雀绿（1：13000）
※对湿热、70％乙醇、紫外线、常用抗结核药物
课件制作 陆曙梅
结核分枝杆菌－－所致疾病与免疫性
经多途径感染，引起结核病，以肺结核 多见 类型：原发感染和继发感染 免疫性 ※抗结核免疫以细胞免疫为主 ※抗结核免疫属带菌免疫 ※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现
需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验
第二十三章需氧或兼性厌氧革兰阳性杆菌及检验本章考点：1.概述：概念2.棒状杆菌属（白喉棒状杆菌）、炭疽芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、产单核李斯特菌●生物学性状●临床意义●微生物学检查常见的与临床有关的需氧革兰阳性杆菌有棒状杆菌属、芽胞杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属、加特纳菌属。
上述菌属的主要区别见表5-23-1。
表5-23-1 革兰阳性杆菌属的鉴别棒状杆菌属芽胞杆菌属李斯特菌属丹毒丝菌属加特纳菌属形态棒状杆菌有芽胞短杆、链或丝状细杆或线状杆菌、多形性触酶+ + + - -动力- V + - -对氧需氧、兼性厌氧需氧、兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧兼性厌氧G+Cmol% 51～65 32～69 36～38 36～40 42～44一、棒状杆菌属（一）简述：棒状杆菌属是①一群革兰阳性杆菌，菌体粗细、长短不一，一端或两端膨大呈棒状.故名棒状杆菌。
②本菌着色不匀，有异染颗粒。
③无鞭毛、无荚膜、无芽胞。
（无特殊结构）④需氧，⑤营养要求较高，能分解一些糖类，产酸不产气。
本属细菌种类较多，有白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、溃疡棒状杆菌等。
引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌，棒状杆菌除白喉棒状杆菌外，其余统称为类白喉棒状杆菌，大多数为条件致病菌。
（二）白喉棒状杆菌1.生物学特征（1）形态与染色：菌体细长微弯，一端或两端膨大的革兰阳性杆菌，大小为（2～5）μm×（0.5～1.0）μm。
无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。
细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。
染色特点：在细菌的一端或两端有浓染的颗粒，和菌体着色不均匀，称为异染颗粒，这是白喉棒状杆菌的形态学特征，对鉴别细菌有重要意义。
美蓝染色菌体着色不均匀，呈现着色深浅相间的节段或着色较深的颗粒；Neisser（奈瑟）染色，菌体染成黄褐色，颗粒被染成紫黑色；Albert（阿培特）染色，菌体呈蓝绿色，异染颗粒蓝黑色。
（2）培养特性：需氧或兼性厌氧，生长最适温度为35℃～37℃，pH为7.2～7.8。
13章需氧革兰阳性杆菌(检验)
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图13-2
㈡标本的采集与处理
皮肤炭疽：病灶深部标本/分泌物 肺炭疽：痰、血液 肠炭疽：粪便、呕吐物 脑血炭疽：脑脊液、血液
其它：内脏、耳、舌尖、淋巴结、污染物等
㈢标本直接检查 1、直接镜检 2、荚膜荧光抗体染色 荧光显微镜
3、核酸检测
PCR、核酸杂交
在血琼脂平板上呈β溶血
三、微生物学检验
㈠检验程序 见图13-5 ㈡标本采集 排泄物、呕吐物和可疑食物
㈢标本直接镜检
㈣分离培养与鉴定 1、活菌计数 涂布法 倾注平板法
细菌数大于105个/克或大于105个/毫升，即有
发生食物中毒的可能
2、分离培养
普通琼脂平板
血琼脂平板
3、鉴定
依据形态、染色、菌落特点、生化反应、血
排列呈竹节状
有毒株有荚膜 芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，小于
菌体，位于菌体中央
无鞭毛
㈡培养特性
需氧
营养要求不高
在普通培养基中生长旺盛
菌落直径2mm～4mm
灰白色、无光泽、不透明、扁
平、边缘不整齐的粗糙型
在低倍镜下观察菌落边缘呈
“卷发状” 在液体培养基中呈絮状沉淀生长
第13章 需氧革兰阳性杆菌
芽胞杆菌属——炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌 李斯特菌属——产单核李斯特菌 丹毒丝菌属——红斑丹毒丝菌
加特纳菌属——阴道加特纳菌
第一节 炭疽芽胞杆菌
引起动物和人类炭疽病
是人类历史上第一个被发现的病原菌，俗
称炭疽杆菌
一、临床意义
1.致病物质
荚膜
抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散
第二节 蜡样芽胞杆菌
检验微生物学 革兰阳性需氧芽胞杆菌及检验
炭疽芽胞杆菌
23
二、临床意义
防治原则
家畜感染的防治和牧场的卫生防护 严格隔离或处死深埋 严禁现场剖检取材,死畜剥皮或煮食,必经焚毁或深埋2m 以下
特异性预防 接触人员应接种减毒活疫苗
革兰阳性需氧芽胞杆菌及检验
上海第六人民医院奉贤分院 唐群力
1
需氧芽胞杆菌属 李斯特菌属 丹毒丝菌属
阴道加特纳菌属
2
需氧芽胞杆菌属
芽胞杆菌属是一群需氧或兼性厌氧、能产生芽胞 的革兰阳性大杆菌
广泛存在于泥土、灰尘中，少数寄生于动物和昆 虫体内并对人类和动物致病
目前属内有232个种和亚种，是一个大属 其中炭疽芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、枯草芽胞杆
炭疽芽胞杆菌
21
二、临床意义
所致疾病
炭疽病： 传染源：患病食草动物及其制品或 被污染物 传播途径： 接触——皮肤炭疽 食入——肠炭疽 吸入——肺炭疽
（由吸入芽胞所致）
可并发败血症，甚至炭疽性脑膜炎， 死亡率极高
炭疽芽胞杆菌
22
二、临床意义
•乙类传染病
•发生肺炭疽按甲类处理
病后可获得持久免疫力
产酸不产气 有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气 水解淀粉、还原硝酸盐为亚硝酸盐 不产生吲哚和硫化氢、不利用枸橼酸盐、脲酶阴性 在牛乳中生长2～３天使牛乳凝固→然后缓慢融化 触酶（+）、卵磷脂酶弱（+）
炭疽芽胞杆菌
13
一、生物学性状
抗原构造
有菌体抗原、荚膜抗原、芽胞抗原、炭疽毒素四种
菌体抗原：为多糖半抗原
芽胞抵抗力很强，煮沸10min或干热140℃ 3h或103.4KPa高压蒸汽15min才能杀灭，在 干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致病 力不减，牧场一旦污染，传染性可持续数十 年
需氧革兰阳性杆菌及检验
一. 白喉杆菌(C. diphtheriae)
1. 生物学性状
–G+、染色不均、X形、 L形或V形排列 – 异染颗粒(Albert染色)
成分: 核糖核酸和多磷酸盐 作用: 储存养料
鉴定价值
鉴别选择培养基 亚碲酸钾血平板——黑色菌落
➢形态与染色
生物学性状
生物学性状
形态与染色
• 典型白喉杆菌菌体细长微弯， 一端或两端膨大呈棒状，无 荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。
• 分离培养：筛选鉴别培养基（含 0.03%～0.04%亚碲酸钾血琼脂）的 血平板，在些培养基上菌落呈黑色
• 根据白喉杆菌对亚碲酸钾的还原能 力，菌落的特点（形态与生化反应） 区分为：重型、轻型、中间型
亚碲酸盐平板
生化反应：
• 发酵葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气 • 吲哚试验阴性 • 尿素酶试验阴性 • 氧化酶试验阴性
锡克试验(Schick test)
• 意义：用白喉毒素作皮内试验，用于调查 人群对白喉的免疫力
• 方法：试验侧注射0.1ml白喉毒素，对照侧 注射0.1ml经80℃5min灭活的白喉毒素
• 结果：阳性：表示机体对白喉无免疫力， 应进行白喉疫苗接种，然后再用本试验测 定免疫效果。2．阴性：表示机体已产生免 疫力（是清除抗原过程方才无反应现象）
• 结构与作用（抑制细胞合成蛋白质）
– A片段和B片段 – B片段有受体结合、跨膜和转位功能，使A片段得以
进入细胞 – A片段有使EF-2酶失活的活性，影响蛋白质的合成，
细胞死亡，产生病变。 – 白喉毒素有剧毒，1-2个毒素分子进入细胞可将细
胞杀死。
• 作用靶：心肌和神经细胞
作用机制
所致疾病
• 传染源：患者及带菌者 • 传播途径：飞沫或污染 • 引起白喉：分咽白喉、喉白喉、鼻白喉和其他部位白
需氧革兰阳性杆菌检验
指导抗生素治疗
抗生素是治疗细菌感染的主要手段， 但不同种类的细菌对不同抗生素的敏 感性不同，通过需氧革兰阳性杆菌检 验可了解细菌对抗生素的敏感性，指 导临床医生选择合适的抗生素。
VS
需氧革兰阳性杆菌的耐药性不断增强， 通过检验可了解细菌的耐药性情况， 有助于预防和控制耐药菌株的传播。
流行病学调查与监测
获得性耐药
细菌通过基因交换或获得 外源基因，获得对药物的 抗药性。
传播途径
耐药菌可通过患者之间的 接触、医院环境、动物和 食品等多种途径传播。
耐药性的检测与监测
实验室检测
通过细菌培养、药敏试验 等方法检测细菌的耐药性。
监测系统
建立全国性的耐药性监测 系统，收集和分析耐药菌 的数据，为防控提供依据。
需氧革兰阳性杆菌检验在流行病学调查中具有重要意义，通过对病原菌的分布和流行趋势进行监测，有助于了解疾病的传播 途径和流行规律。
通过需氧革兰阳性杆菌检验可监测细菌的变异和进化情况，及时发现新发和突发的病原菌，为防控措施提供科学依据。
04
需氧革兰阳性杆菌检验的注意事项
实验室安全与防护
实验操作应在生物安 全柜中进行，确保空 气流通，防止交叉污 染。
生化反应鉴定
生化反应鉴定是通过检测细菌对不同 底物的代谢反应来鉴别细菌种类的。 需氧革兰阳性杆菌在生化反应中表现 出一定的特异性，如分解葡萄糖、果 糖、甘露醇等。
生化反应鉴定的方法有多种，如纸片 法、试管法等。通过观察生化反应的 结果，可以初步确定细菌的种类和亚 种。
血清学鉴定
血清学鉴定是通过检测细菌表面抗原与特异性抗体结合的 反应来鉴别细菌的。需氧革兰阳性杆菌的表面抗原不同， 与特异性抗体的结合反应也不同。
需氧革兰阳性杆菌检验
【精编】需氧革兰阳性杆菌及检验PPT课件
生物学特性
病毒无细胞结构，不能独立生长 繁殖，与需氧革兰阳性杆菌的生
物学特性存在显著差异。
检测方法
病毒的检测通常采用分子生物学 方法，如核酸检测，与需氧革兰
阳性杆菌的检测方法不同。
04
需氧革兰阳性杆菌的治疗与预 防
抗菌药物选择
根据病菌种类选择
针对不同种类的需氧革兰阳性杆菌，应选择不同的抗菌药物，以 确保治疗效果。
结果的准确性。
血清学试验
血清学试验是通过检测细菌对特 异性抗体的反应来判断细菌种类
的检验方法。
凝集试验是血清学试验中的一种 常用方法，通过将特异性抗体与 细菌细胞壁结合，观察是否发生
凝集反应来判断菌种。
血清学试验具有较高的特异性， 但操作较为繁琐，且需要已知抗 体作为对照，限制了其在临床上
的广泛应用。
案例二：表皮葡萄球菌感染的预防措施
总结词
表皮葡萄球菌感染的传播途径、预防措施及控制方法
详细描述
表皮葡萄球菌可通过直接接触或环境污染传播，预防措施包括加强手卫生、消 毒隔离、减少人员流动等。控制方法包括及时发现并隔离患者、加强环境清洁 和消毒工作等。
案例三：肠球菌感染的鉴别诊断
总结词
肠球菌感染与其他感染的鉴别诊断要点、诊断方法及治疗方案
与真菌的鉴别
形态学特征
真菌的形态学特征与需氧革兰阳 性杆菌存在明显差异，如菌丝、
孢子等结构。
培养特性
真菌与需氧革兰阳性杆菌在培养特 性上存在差异，如生长速度、菌落 形态等。
抗原结构
真菌与需氧革兰阳性杆菌的抗原结 构不同，可通过免疫学方法进行鉴 别。
与病毒的鉴别
大小形态
病毒的大小远小于需氧革兰阳性 杆菌，形态也不同。
需氧革兰阳性杆菌检验.
目录
第一节 棒状杆菌属 第二节 炭疽芽胞杆菌 第三节 腊样芽胞杆菌 第四节 产单核细胞李斯特菌 第五节 红斑丹毒丝菌 第六节 阴道加特纳菌
重点提示
• 棒状杆菌属形态结构、培养特性，鉴定要点 • 炭疽芽胞杆菌形态结构、培养特性，鉴定要点 • 蜡样芽胞杆菌形态结构、培养特性，引起食物中毒的诊断 • 产单核细胞李斯特菌形态结构、培养特性，鉴别要点 • 红斑丹毒丝菌形态结构、培养特性，鉴别要点 • 阴道加特纳菌形态结构、培养特性，标本直接检查意义及鉴定
• 分离出白喉杆菌，并证明其毒力 • 标本采集
• 分泌物 • 取双份 • 如不能及时检验，标本浸于无菌生理盐水或15%甘油生理
盐水保存
五、微生物学检验
（一）检验程序
五、微生物学检验
（二）直接涂片染色镜检
--2～3张涂片→G染色、异染颗粒染色 镜检—初报“直接涂片检出形似白喉杆菌”—早期诊断
--用无菌棉拭子浸以动物血清，采集标本，37℃10h，涂片染色 镜检—提高阳性率
五、微生物学检验
（三）分离培养
• 吕氏血清斜面：37℃、8～12h →→涂片染色镜检 --检出率要比直接涂片高，有助于快速诊断 • 亚碲酸钾BAP：37℃、24～48h，黑色菌落 • BAP：轻型有β溶血环，应注意与溶血性链球菌鉴别
五、微生物学检验
•鉴定
• 形态染色、菌落特点、生化反应 • 糖发酵试验、尿素酶、硝酸盐还原等——鉴别棒
三、临床意义
• 致病物质 (一)白喉外毒素：
• 毒力强，130ng/kg可使人死亡 • 抗原性强
• 编码外毒素的tox基因—β-棒状杆菌噬菌体
三、临床意义
• 作用机制
A亚单位可使细胞延伸因子-2（EF-2）灭活，影响蛋白质的合 成
《需氧革兰阳性杆菌》课件
易感人群
人群普遍易感，尤其是儿 童、老年人、身体虚弱者 等免疫力较低的人群。
季节性流行
需氧革兰阳性杆菌感染的 流行具有一定的季节性， 冬季和春季为高发季节。
02
需氧革兰阳性杆菌的致病性
致病机制
黏附和侵入
需氧革兰阳性杆菌通过黏 附素与宿主细胞表面受体 结合，侵入细胞内繁殖， 引发感染。
大环内酯类
糖肽类
如红霉素、阿奇霉素等，对某些需氧革兰 阳性杆菌如链球菌属、肺炎球菌等有较好 的抗菌作用。
如万古霉素、替考拉宁等，主要用于耐甲 氧西林金黄色葡萄球菌等对其他抗菌药物 耐药的革兰阳性菌的治疗。
治疗方案
01
根据病原菌种类和药敏试验结果选择合适的抗菌药物，并根据 患者的病情制定个性化的治疗方案。
避免接触感染源
避免接触可能携带需氧革兰阳性杆菌的人群和动 物，特别是那些已经患病的人。
控制策略
及时隔离和治疗
一旦发现感染病例，应立即采取隔离和治疗措施，以防止疾病传 播。
加强环境清洁和消毒
对可能存在细菌的场所进行定期清洁和消毒，特别是医疗机构和公 共场所。
提高公众认识
通过宣传和教育，提高公众对需氧革兰阳性杆菌的认识和预防意识 。
需氧革兰阳性杆菌
目 录
• 需氧革兰阳性杆菌概述 • 需氧革兰阳性杆菌的致病性 • 需氧革兰阳性杆菌的治疗 • 需氧革兰阳性杆菌的预防和控制 • 需氧革兰阳性杆菌研究进展
01
需氧革兰阳性杆菌概述
定义与分类
定义
需氧革兰阳性杆菌是一类在需氧 环境下生长，通过革兰染色呈现 阳性的细菌。
分类
需氧革兰阳性杆菌主要包括链球 菌属、葡萄球菌属、微球菌属等 ，这些细菌在形态、染色反应、 培养特性等方面存在差异。
【精选】实验十五需氧革兰阳性杆菌
实验目的
• 掌握炭疽芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌的形态、 落特点和常用鉴定试验。
• 掌握白喉棒状杆菌的培养特点及形态特征， 熟悉常用染色方法（ALBERT染色法）。
实验内容
• 炭疽杆菌： 1、GS:+大杆菌,呈矩形,短链状或竹节状,陈旧培养
物上可见芽孢. 2、菌落形态:粗糙,灰白色,边缘不整齐,低倍镜下直
接观察卷发状菌落，或看卷发状菌落示教片。 3、串珠试验：将新鲜炭疽杆菌肉汤培养物用棉签均
匀涂布于血平板上，干后贴5-6张青霉素药敏纸 片，，35°C孵育2小时左右，用接种环在纸片周 边盲目刮取培养物（注意不可刮到琼脂)进行涂片， 注意涂片范围小些，尽量涂厚些，涂片固定后进 行GS，可见炭疽杆菌因细胞壁受损，菌体膨大形 成串珠样。
白喉棒状杆菌
• 1、观察白喉棒状杆菌在鸡蛋斜面上的菌落 表现。
• 2、GS • 3、Albert染色：最为常用的异染颗粒染色
法。涂片干燥固定后，滴加甲液染10分钟， 水洗，滴加乙液染5分钟，水洗，吸干水分 后油镜下观察，可见菌体呈草绿色，异染 颗粒呈蓝紫色。
白喉棒状杆菌
小结
蜡样芽孢杆菌
1、GS:+大杆菌,两端钝圆.6小时后可见小于菌体的 圆形芽孢.
2、菌落形态:直接观察在卵黄琼脂平板上的菌落,圆 形突起,表面粗糙有蜡光,不透明。
3、乳光反应：蜡样芽孢杆菌能产生卵磷脂酶，在有 钙离子存在时，能迅速分解培养基中的卵磷脂， 生成甘油酯和水溶性磷脂酰胆碱，在菌落周围出 现乳白色混浊环，称乳光反应或卵黄反应。一般3 小时即可观察结果。
需氧革兰阳性杆菌及检验
鉴定试验
i. 青霉素抑制试验 炭疽芽胞杆菌在含5 IU/ml的青霉素培养基
上能生长，而在含10、100 IU/ml的青霉素培 养基上受到抑制不生长。
鉴定试验
ii. 串珠试验
与类炭疽芽胞杆菌鉴别
炭疽芽胞杆菌受低浓度青霉素作用后，在 形态上发生明显的变化。如将本菌幼稚培养物 接种于含0.05～0.5U/ml青霉素的培养基上， 37℃6h，菌体肿大呈圆珠状，称串珠反应。
第一节 棒状杆菌属
棒状杆菌属的共同特征
1) 革兰阳性多形态杆菌 2) 无荚膜、无鞭毛、无芽胞 3) 细菌呈不规则栅栏状排列 4) 需氧或兼性厌氧 5) 触酶试验阳性 6) 细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝
杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。
一．白喉棒状杆菌
（一）生物学特性
形态与染色 培养特性 菌落特征 生化反应 抗原构造 抵抗力
（四）抗原结构
分为4个血清型，1型主要感染啮齿动物， 各型对人类均可致病，但以1a和lb最为多 见。
本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌 及大肠埃希菌等具有共同抗原。
（五）抵抗力
在土壤、粪便、饲料中能长期存活。 耐盐、耐碱、不耐酸。 对热敏感，对—般消毒剂敏感，70％的
乙醇5min即可杀死本菌。
2．检验程序
3．检验方法
1) 直接镜检：
2)
2) 活菌计数 ： 一般认为蜡样芽胞杆菌的活菌数大于
105 /mL时，即有发生食物中毒的可能。
3) 分离培养 ：
4) 鉴定
第三节 产单核李斯特菌
一．生物学特性
形态与染色 培养特性 生化反应 抗原结构 抵抗力
（一）形态与染色
革兰阳性小杆菌，直或稍弯，常呈V字形成 对排列，有时呈丝状，偶尔可见双球状。
9需氧革兰阳性杆菌
噬菌体裂解试验
+
－
－
李斯特菌属
产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌
一、产单核细胞李斯特菌 生物学性状
革兰阳性短小杆菌成双排列 有鞭毛（18~20℃有动力；
37℃动力缓慢），无芽胞，无 荚膜 4℃可生长 BAP：灰白色菌落，有狭窄的 β溶血环 半固体培养基：倒伞形生长
生化反应
抵抗力
发酵多种糖类 硝酸盐还原试验－ 甲基红+ V－P试验+
荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关
芽胞抗原：
炭疽毒素Anthrax toxin： 由保护性抗原、 致死因子、水肿因子形成。
抵抗力
耐热、耐干燥 对氧化剂敏感 对青霉素、磺胺类抗生素敏感
微生物学检查
标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便、 呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死蓄。
标本的处理：液体标本取沉渣分离培养； 固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死非 芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或直 接分离培养
皮毛、腐败脏器等
血液
以NG制成悬液 经加温或饱和 尿素处理
肉汤增 菌培养
BAP或戊 烷脒平板
2%兔血清肉汤4－8h G染色镜检
菌落特征
动生 力化 观反 察应
串 噬 荚青 毒 珠 菌 膜霉 力 试 体 肿素 试 验 裂 胀抑 验
解 试制 验
确定报告
戊烷脒多粘菌素琼脂
基础培养基 25μg/L戊烷脒: 杀灭利什曼原虫等寄生虫 3000IU/L多粘菌素 2%脱纤维羊血
形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆、 有芽胞、周鞭毛、无荚膜
培养特性：需氧或兼性厌氧，最适 温度30~35℃，营养要求不高。 普通琼脂平板：菌落较大，灰白色， 表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽 BAP 有β溶血 卵黄平板—生长迅速，培养3h后， 虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷 脂而形成白色的混浊环，称乳光反 应或卵黄反应
14第十四章 需氧革兰阳性杆菌检验 (1)
第十四章需氧革兰阳性杆菌检验一、名词解释1.炭疽毒素2.侵袭因子3.BV (bacterial voyinosis)4.串珠试验5.Ascoli试验6.需氧芽胞杆菌属7.PA (protective antigen)8.EF (edema factor)9.线索细胞二、选择题【A1型题】1.下列细菌中不能引起人畜共患病的是A、炭疽芽胞杆菌B、腊样芽胞杆菌C、产单核细胞李斯特菌D、红斑丹毒丝菌E、结核分枝杆菌2.革兰阳性需氧杆菌中致病力最强的是A、腊样芽胞杆菌B、产单核李斯特菌C、炭疽芽胞杆菌D、阴道加特纳菌E、红斑丹毒丝菌3.下列哪种不是人感染炭疽芽胞杆菌的方式A、接触或摄食病畜B、接触或摄食畜产品C、吸入干燥菌粉D、吸入气溶胶E、接触饲料4.炭疽芽胞杆菌引起的炭疽病不会引起哪项并发症A、败血症B、菌血症C、脑膜炎D、内毒素血症E、毒血症5.不是炭疽芽胞杆菌形态特征的是A、两端平切，无鞭毛B、常单个存在或呈短链C、培养后形成长链，呈竹节排列D、在有氧条件下可形成芽胞E、芽胞位于菌体的头部6.炭疽芽胞杆菌的生化反应中不能分解的糖是A、葡萄糖B、半乳糖C、麦芽糖D、蔗糖E、蕈糖7.不是炭疽芽胞杆菌抗原的是A、菌体多糖抗原B、荚膜多肽抗原C、鞭毛抗原D、芽胞抗原E、炭疽芽胞杆菌8.以下细菌可引起败血症，除外的是A、表皮葡萄球菌B、脑膜炎奈瑟菌C、大肠埃希菌D、炭疽杆菌E、痢疾志贺菌9.可用荚膜肿胀试验鉴定的是A、大肠埃希菌B、金黄色葡萄球菌C、奇异变形杆菌D、结核杆菌E、炭疽杆菌10.下列既有荚膜又有芽胞的细菌是A、普通变形杆菌B、铜绿假单胞菌C、炭疽芽胞杆菌D、脂肪芽胞杆菌E、肺炎克雷伯菌11.对炭疽芽胞杆菌鉴定没有意义的实验是A、串珠试验B、毒力试验C、荚膜染色D、噬菌体裂解试验E、亚碲酸钾血平板生长12.炭疽毒素具有A、B片段结构，具有A 片段功能的是A、致死因子（PA）B、保护抗原（LF）C、水肿因子（EF）D、LF+EFE、PA+LF13.在青霉素作用下，可出现串珠现象的细菌是A、枯草芽胞杆菌B、嗜热脂肪芽胞杆菌C、炭疽芽胞杆菌D、腊样芽胞杆菌E、苏云金芽胞杆菌14.均为革兰阳性杆菌的是A、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆菌、产单核细胞李斯特菌B、结核分枝杆菌、鼠疫耶尔森菌、腊样芽胞杆菌C、枯草芽胞杆菌、产气肠杆菌、产单核细胞李斯特菌D、产气荚膜梭菌、百日咳鲍特菌、白喉棒状杆菌E、红斑丹毒丝菌、腊样芽胞杆菌、铜绿假单胞菌15.下列细菌中可用来“冷增菌”的是A、淋病耐瑟菌B、炭疽芽胞杆菌C、产单核李斯特菌D、红斑丹毒丝菌E、流感嗜血杆菌16. 下列细菌中属于需氧芽胞杆菌的是A、破伤风芽胞梭菌B、肉毒梭菌C、炭疽芽胞杆菌D、葡萄球菌E、白喉棒状杆菌17.人类历史上第一个被发现的病原菌是A、破伤风芽胞梭菌B、肉毒梭菌C、炭疽芽胞杆菌D、产气荚膜梭菌E、白喉棒状杆菌18.控制炭疽芽胞杆菌毒力的物质是A、染色体B、噬菌体C、质粒D、侵袭性酶E、毒素19.主要引起食草动物传染病的细菌是A、炭疽芽胞杆菌B、结核分枝杆菌C、鼠疫杆菌D、枯草芽胞杆菌E、小肠结肠炎耶氏杆菌20.关于炭疽芽胞杆菌致病性的叙述，错误的是A、荚膜的抗吞噬作用使该菌易于在体内生长B、水肿因子激活后可独立发挥毒性作用C、炭疽毒素各成分可独立发挥毒性作用D、致死因子可抑制细胞的生长E、炭疽毒素主要损害微血管的内皮细胞21.炭疽毒素毒性作用主要是直接损伤A、白细胞B、红细胞C、微血管内皮细胞D、肝细胞E、脾细胞22.炭疽微生物学检查采集标本,下列方式中不正确的是A、无菌割取兽尸耳朵或舌尖组织B、人皮肤炭疽无菌取病灶渗出液C、人肺炭疽无菌取痰及血液D、人肠炭疽无菌取畜肉及血液E、兽尸剖检并取血液23.结合临床症状可作为炭疽初步诊断的直接镜检结果是A、找到革兰阳性芽胞大杆菌B、找到有荚膜的竹节状革兰阳性大杆菌C、找到有芽胞链状革兰阳性大杆菌D、找到有荚膜的革兰阳性大杆菌E、找到革兰阳性大杆菌24.关于炭疽杆菌的叙述，错误的是A、引起人畜共患病B、主要引起草食动物炭疽病C、对人畜危害最大的病原体D、可传染给肉食动物E、可通过多种途径传染给人25.炭疽杆菌与类炭疽杆菌的鉴别试验中，炭疽杆菌阴性的一项是A、荚膜B、动力C、串珠试验D、噬菌体裂解试验E、动物致病试验【A2型题】26.某女性患者，38岁，喝牛奶后出现食物中毒症状，取剩余牛奶分离培养出革兰阳性小杆菌，37℃无动力，在半固体培养基上生长呈倒立伞状，CAMP试验阳性，触酶阳性，耐盐耐碱，据此判断最可能是何种细菌？A、群链球菌B、鼠伤寒沙门菌C、产单核细胞李斯特菌D、腊样芽胞杆菌E、金黄色葡萄球菌27.某男性患者，32岁，屠宰工，高热，寒战，右臂外侧皮肤有一1×3cm的坏死，初起时为丘疹，后转为水疱，周围组织水肿，继之中心区出血性坏死并有焦痂。