尼美舒利栓药代动力学及相对生物利用度研究

药剂
尼美舒利栓药代动力学及相对生物利用度研究
陈新梅1,高晓黎1,孙卫东2,云　琦2(1.新疆医科大学药学院药剂教研室,新疆乌鲁木齐830054;2.新疆特丰药业股份有限公司,新疆乌鲁木齐830054)
摘要:目的　以市售的尼美舒利普通片为参比制剂,评价自制尼美舒利直肠栓的生物利用度和生物等效性。

方法　采用随机交叉分组实验设计,5只新西兰家兔分别给予剂量50mg kg-1的尼美舒利栓和普通片剂,栓剂直肠给药,片剂口服;按设计采集24h内动态血标本;以HPLC法测定血浆药物浓度;以二室模型计算两种制剂在动物体内的药动学参数和相对生物利用度。

结果　参比制剂和受试制剂的T max分别为(6.96±1.69)h和(2.03±1.07)h,C max分别为(65.51±28.09)m g L-1和(65.99±12.13)mg L-1,A UC0-inf分别为(519.34±151.05)m g h L-1和(440.12±72.89)mg h L-1,t1/2 分别为(0.63±0.13)h和(2.29±0.82)h,t1/2 分别为(1.72±0.95)h和(1.76±0.21)h,MRT分别为(9.00±1.16)h和(6.24±0.62)h,滞后时间分别为(5.42±1.63)h和(0.07±0.09)h,以市售NIM普通片为参比制剂,NIM直肠栓的相对生物利用度为84.75%。

结论　统计结果显示,各主要药动学参数均有显著性差异。

尼美舒利栓具有明显的速释特征,与尼美舒利普通片生物不等效。

关键词:尼美舒利;栓剂;药动学;生物利用度;生物等效性
中图分类号:R945 文献标识码:A 文章编号:1004-2407(2003)03-0116
Study on pharmacokinetics and relative bioavailability of nimesulide sup-positories
CHEN Xin-mei1,GAO Xiao-li1,SUN Wei-dong2,YUN Qi2(1.D ep ar tment of P har maceutics,S chool of Pharmacy,X in-j iang M edcical University,U r umqi,X inj iang830054; 2.X inj iang T ef eng Phar maceutics CO L T D.,U rumq i,X inj iang830054, China)
Abstract:Objective To study the relative bioavailability and bioequivalence of nimesulide suppositories in New Zealand rabbits.Methods A rapid and sensitive HPLC method w as applied for the determ ination of the drug levels in plasma.In a randomized two-w ay crossover desig n,the drugs w ere administrated by rectal and gastric,respec-tively in50mg kg-1sing le dose,to5male New Zealand rabbits.The parameters w ere estimated by tw o-compart-ment model w ith a statistic analysis of PEM s.Results The T max,C max,AUC0-inf,t1/2 ,t1/2 ,MRT,lag time of nime-sulide com mon tablets and suppositories w ere(6.96±1.69)h and(2.03±1.07)h,(65.51±28.09)mg L-1and (65.99±12.13)mg L-1,(519.34±151.05)mg h L-1and(440.12±72.89)
mg h L-1,0.63±0.13)h and(2.29±0.82)h,(1.72±0.95)h and(1.76±0.21)h,9.00±1.16)h and(6.24±0.62)h,(5.42±1.63)h and(0.07±0.09)h,respectiv ely.The mean relative bioavailability of the nimesulide sup-positories vs comm on tablets w as84.75%.C onclution The results suggested that the tw o formulations w ere not bioequivalent and the nimesulide suppositories realeased more quickly than common tablets did.
Key words:nimesulide;suppositories;pharmacokinetics;bioavailability;bioequivalence.
尼美舒利(nimesulide,NIM),化学名称为4-硝基-2-苯氧基-甲磺酰苯胺,是一种新型的非甾类解热镇痛药,是环氧化酶-2(Cy cloox ygenase-2,COX-2)倾向性(Preferential)的抑制剂,由美国Riker Labs Inc公司研制开发,1985年由Boehringer Biochemia公司最先在意大利上市〔1〕。

各国大量临床验证表明:尼美舒利解热作用确切,抗炎镇痛作用广泛,生物利用度高,具有良好的胃肠道及肝、肾耐受性,是新一代高选择性、强效、安全的解热镇痛药〔2～4〕。

临床使用多为片剂,每次100m g,每日2次,将其制成栓剂可避免肝脏首过效应,适合不能口服患者使用,从而扩大了尼美舒利的使用范围。

本实验以自制的尼美舒利直肠栓为受试制剂,以市售的尼美舒利普通片为参比制剂,研究了尼美舒利直肠栓的药代动力学及相对生物利用
度。

1　仪器与材料
1.1　仪器　SCL-10AVP型高效液相色谱仪,SPD-10AVP检测器,Ver5.33色谱工作站(日本岛津); BP211D精密天平(德国Satorious);SK-1型快速漩涡混合器(江苏金坛医疗仪器厂);TGL-16C型台式高速离心机(上海弗鲁克机电设备有限公司);SZ-96自动超纯水制备仪(上海亚荣生化仪器厂);ZK-82B型真空干燥箱(上海市实验仪器总厂);GB11240-80型恒温水浴锅(北京市医疗设备厂)。

1.2　药品试剂　参比制剂:尼美舒利片(商品名:怡美力,100mg,批号020304,广东健力宝药业有限公司);受试制剂:尼美舒利栓剂(100m g,自制,批号20020806);安定对照品(中国药品生物制品检定所);尼美舒利对照品(由新疆维吾尔自治区药检所提供);甲醇为色谱纯;其它试剂均为分析纯;水为超纯试验用水。

1.3　动物　健康雄性新西兰家兔(1.8～
2.2kg),购自新疆医科大学实验动物中心(医动字第16-003号)。

1.4　尼美舒利直肠栓的制备　取36型半合成脂肪酸甘油酯适量,置40℃水浴加热,加入尼美舒利适量,使每粒栓含有尼美舒利100m g,加热搅拌使溶解,趁热注入栓模,待冷却后启模即得。

2　方法
2.1　色谱条件　shim-pack Vp-ODS柱(150mm×4.6);流动相:甲醇-水-冰醋酸(60 40 1);流速:1 mL min-1;柱温:23℃;检测波长:230nm。

2.2　血浆样品处理与测定〔5〕
2.2.1　标准溶液的配制　精密称取干燥至恒重的尼美舒利对照品25mg于50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,即得0.5g L-1的标准溶液。

2.2.2　内标溶液的配制　精密称取干燥至恒重的安定对照品12.5m g于50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,即得0.25g L-1的标准溶液。

2.2.3　血浆样品的处理　精密吸取0.25mL血浆,置洁净干燥的10mL玻璃离心管中,加入内标溶液20 L,用双蒸水补充至0.5mL,加入乙酸乙酯
3.0mL,漩涡震荡2min,3000r min-1离心15m in,吸取上层乙酸乙酯层置另一离心管中,80～85℃水浴蒸干,用500L流动相溶解残渣,漩涡混合1m in, 3000r min-1离心10min,吸取上清液20L进样。

2.2.4　方法专属性考察　按照血浆样品处理项下方法处理空白血浆、空白血浆外加对照品溶液与内标溶液、实验家兔给药后的含药血浆。

2.2.5　标准曲线制备　精密吸取家兔空白血浆0.25 mL置洁净干燥的10mL玻璃离心管中,加入20L 内标溶液,加入尼美舒利标准溶液使血浆含NIM为1,10,20,50,80,100mg L-1,按血浆样品处理方法处理样品,记录尼美舒利和安定峰面积。

以样品与内标峰面积比(f)对浓度(c)回归计算标准曲线,每个分析批(每天)建立一条标准曲线,连续重复3个分析批。

2.2.6　方法的准确度与精密度　按“标准曲线的制备”项下操作,制备尼美舒利低、中、高3个浓度(分别为5,40,90mg L-1)的质控样品(QC),6个样本,重复3个分析批,并与标准曲线同批测定,以当日的标准曲线计算QC样品的测得浓度,与配制的浓度对照,求得方法的准确度与精密度。

2.2.7　方法的提取回收率　按2.2.6项下计算该方法在5,40,90mg L-13个浓度下的血浆样品提取回收率。

2.2.8　血浆样品稳定性　将质控样品置-20℃冰箱冷冻保存,分别于0,5,10d按实验方法测定。

考察处理后的血浆样品在-20℃冰箱冷冻条件下保存的稳定性。

2.3　实验设计与血样采集　采用随机交叉分组自身对照试验,将5只健康雄性新西兰家兔禁食12h,按每kg体质量给尼美舒利直肠栓50mg。

用药后0.25, 0.5,1,2,3,4,6,8,10,12,24h从耳缘静脉采血1mL。

用药后6h内禁食,间隔1周后口服给尼美舒利片,剂量同前。

血样置肝素化离心试管中,3000 r m in-1离心15min,分离血浆后保存于-20℃冰箱待测。

2.4　数据处理　采用中国药理学会数学药理专业委员会编制的3p87药代动力学程序对NIM血药浓度-时间数据进行处理;参考实测值与理论值的相关性、曲线拟合优度、AIC等指标,选择隔室模型和权重,计算药代动力学参数。

AIC为统计矩法求得;对2种制剂的药代动力学参数进行配对t检验。

对A UC0-inf经对数转换后作方差分析,按AUC80%～125%判定标准,考察2种制剂生物等效性〔6～8〕。

3　结果
3.1　测定方法
3.1.1　色谱行为　在选定的色谱条件下,空白血浆及给药后血浆样品色谱图见图1。

结果显示,尼美舒利与内标完全分离,保留时间分别为8.96min和12.23m in。

3.1.2　线性与质控　三条标准曲线分别为:
　f1=0.0312c1-0.0165(r=0.9997)
　f2=0.0311c2-0.0045(r=0.9997)
　f3=0.0323c3+0.0033(r=0.9993)
图1　HPLC 色谱图
1-尼美舒利;2-安定;A -空白血浆;B-空白血浆外加N IM 及内标;C-受试家兔服药后2h 血浆
结果表明,血浆NIM 在1～100mg L -1浓度范围内线性良好。

最低检测浓度为1mg L -1(S/D=3)。

回收率见表1,日内、日间精密度见表2。

表1　血浆药物浓度测定方法的回收率(n =5)加样量/(mg L -1)
回收率(%)
RSD (%)5.0105.80 3.9940.097.55 3.7590.096.89 5.75表2　血浆中药物浓度测定方法的日内、日间精密度(n =6)
浓度/(mg L
-1
)
日内精密度(%)
日间精密度(%)
5.0 3.87 3.9940.0 2.69 3.7590.0
2.49
5.75
3.1.3　血浆样品稳定性　处理后的血浆样品在-20℃冰箱冷冻保存10d,R SD 为
4.58%,表明血浆样品在-20℃冰箱冷冻保存10d 可满足实验需要。

3.2　血药浓度-时间曲线　5只新西兰家兔直肠给尼美舒利栓和口服尼美舒利片剂后的血药浓度-时间曲线见图2。

由图中可以看出,直肠给药的尼美舒利达峰时间T max 显著缩短,峰浓度C max
略高于普通片剂。

图2　家兔单剂量给50mg kg -1尼美舒利栓和普通片的药时
曲线
1-口服给N IM 片剂组;2-直肠给N IM 栓剂组
3.3　药代动力学参数及相对生物利用度　NIM 体内药动学特征符合二室模型,2种不同制剂的药动学
参数见表3。

各主要药动学参数经配对t 检验均有显著性差异。

以市售NIM 普通片为参比制剂,NIM 直肠栓的相对生物利用度为84.75%。

表3　NIM 直肠栓与普通片的药动学参数(x ±s ,n =5)
参数单位栓剂组片剂组混杂参数A mg L -1237.7±143.468.8±43.91*　混杂参数B mg L
-1
240.5±230.31465±1359
吸收速度常数1/h
0.5624±0.14560.8846±0.3950 滞后时间h 0.0723±0.0961 5.4196±1.6309**表观分布容积L 0.6575±0.19500.9114±0.6106 吸收半衰期h 2.2856±0.82090.6342±0.1287*　
消除半衰期h 1.7577±0.2148 1.722±0.9485
二室向一室转运　速度常数1/h 0.2589±0.2003 1.0746±0.2941**一室消除速度　常数
1/h 0.2968±0.14580.5279±0.2339 一室向二室转运　速度常数1/h 0.0158±0.02950.0253±0.0172 清除率
L h
-10.1753±0.0601
0.3848±0.1503
*　
药时曲线下面积(0-inf)
mg h L -1440.1153±72.8923519.3355±151.045峰浓度mg L -165.9937±12.135465.5137±28.0957达峰时h 2.028±1.0697 6.956±1.6889**统计矩(0-inf )h
6.2435±0.6295
9.0043±1.1603*
*
P <0.05;
**
P <0.01
3.4　生物等效性判定　将A UC 0-inf 经对数转换后进行方差分析,双单侧t 检验结果显示:2种制剂
AUC 0-inf 的90%置信区间为70.25%～108.9%,表明2种制剂不具生物等效性。

尼美舒利栓的吸收速度和消除速度明显快于普通片剂。

4　讨论
本实验采用改进的HPLC 法测定家兔血浆中的尼美舒利,简化了样品处理步骤,一次提取回收率>90%,在选定的色谱条件下,NIM 与内标可以完全分离,峰形对称性好,且不受内源性杂质的干扰;低、中、高3种血浆质控样本的RSD <5%,该方法的重现
性与稳定性好,简便、灵敏、专属性强,完全可以满足尼美舒利体内药动学研究的需要。

NIM 直肠栓相对于普通片剂的生物利用度为84.75%。

这是因为药物在直肠中所接触的吸收面积比口服药物在消化道的吸收面积小得多,尤其是小肠
内壁的皱褶和绒毛大大增加了药物在口服时的吸收面积;其次,胃、小肠都有蠕动,使药物与消化道的接触机会增多;而直肠没有蠕动,只能靠浓度差造成的分子扩散运动移向肠壁;此外,小肠中的吸收机制比较多,除了被动扩散之外,还有主动转运、促进扩散等形式,而直肠除被动扩散外,尚未发现其它吸收机制。

统计分析表明,A UC0-inf平均值的90%置信区间为70.25%～108.9%,表明直肠栓与普通片剂生物不等效。

直肠栓的吸收和消除速度显著快于普通片剂,吸收程度略低于普通片剂。

结果与张先洲等〔9〕报道一致。

!2种制剂的药动学参数均有显著差异。

直肠栓的T max和M RT显著缩短;由于在直肠栓中加入了适量的表面活性剂,所以2种制剂的C max无显著差异; t1/2 、 、A、CL均显著缩短,表明直肠栓的吸收和消除过程都快于普通片;由于在片剂中加入了黏合剂,所以直肠栓的滞后时间显著低于普通片。

∀上述结果表明,与普通片剂相比,NIM直肠栓吸收速度和消除速度都显著加快,血药峰浓度变化不大,符合解热镇痛药的使用原则,达到了预期的目的。

参考文献:
〔1〕　程翰节译,姚应鹤校.消炎镇痛药尼美舒利[J].国外药学合成药生化药制剂分册,1988,9(6):363-364.
〔2〕　Senna.GE,Passlacqua.G,A ndr i.G,et al.N imesulide in the treatment of patients into lerant of aspir in and
other N SA IDs[J].D rug-saf,1996,14(2):94-103.
〔3〕　A ndri.L,Senna.G,Bett eli.C,et al.T oler ability of nimesulide in aspir in sensitiv e patients[J].
A nn-A llerg y,1994,72(1):29-32.
〔4〕　T anig uchi.Y,Y okoy am a.K,Znui.K,et al.Inhibit ion of brain cy cloox y genase-2activ ity and t he antipytetic ac-
tion of nimesulide[J].Eur-J-Phar macol,1997,330(2-
3):221-229.
〔5〕　潘细贵,马福旺,鲁建武.高效液相色谱法测定尼美舒利凝胶的含量[J].中国医院药学杂志,1999,19(4):207-
208.
〔6〕　魏树理.生物药剂学与药代动力学[M].北京:北京医科大学/中国协和医科大学联合出版社,1997.
〔7〕　黄圣凯,韩可勤.生物等效性评价的统计方法[J].中国药学杂志,1994,29(5):312-314.
〔8〕　韩可勤,黄圣凯.生物等效性评价中数据对数变换的一些统计学问题[J].中国临床药理学杂志,1994,10(2):
124-128.
〔9〕　张先洲,马福旺,李荣凌,等.尼美舒利3种制剂的药代动力学研究[J].中国药师,1999,2(4):173-174.
(收稿日期:2002-12-20)利巴韦林注射液的细菌内毒素检测研究
马静芬,陈建荣(宁波市药品检验所,浙江宁波315040)
摘要:目的　对利巴韦林注射液进行细菌内毒素检查研究,建立检查利巴韦林注射液中细菌内毒素的试验方法。

方法　采用《中国药典》2000年版附录细菌内毒素检查法。

结果　利巴韦林注射液在稀释至40倍时检查细菌内毒素可完全排除干扰因素的影响。

结论　使用细菌内毒素检查法检查利巴韦林注射液中内毒素是可行的,可用细菌内毒素检查法代替家兔热原检查法。

关键词:利巴韦林注射液;细菌内毒素;干扰试验;
鲎试剂
中图分类号:R927.12 文献标识码:A
文章编号:1004-2407(2003)03-0119
利巴韦林注射液为抗病毒药,临床上主要用于呼吸道合胞病毒(RSV)引起的病毒性肺炎、支气管炎、流行性出血热与拉沙热的预防和治疗。

局部应用可治疗单纯疱疹病毒性角膜炎。

目前,该品种中的污染热原质检查为传统的家兔热原检查法〔1〕,该法费时、费力、干扰因素多,结果重现性差。

细菌内毒素检查法作为替代热原检查法的一种新的检测方法,具有检测灵敏度高、周期短、结果准确等优点,目前已被各国药典所采纳。

为此我们参照《中国药典》2000年版〔2〕及《美国药典》25版〔3〕“细菌内毒素检查法”中干扰试验原理,考察了利巴韦林注射液对细菌内毒素检查的干扰情况,为该品种的细菌内毒素检查方法的建立提供依据。

本实验报道了用细菌内毒素检查法检测利巴韦林注射液中的污染内毒素的可行性研究。

1　实验材料
1.1　鲎试剂　批号010423,标示灵敏度0.25 EU mL-1,规格0.1mL 支-1,厦门鲎试剂厂。

1.2　细菌内毒素工作标准品　批号2001-3,规格70 EU 支-1,中国药品生物制品检定所。

1.3　细菌内毒素检查用水　批号W2001-4,规格10 mL 支-1,中国药品生物制品检定所。

1.4　利巴韦林注射液　批号20021003,20021004, 20021005,20021008,20021009,20021010,规格1mL 100mg,江苏扬州制药厂。

2　方法与结果
2.1　细菌内毒素限值的确定〔4〕　按公式L=K/M, K按规定的给药途径,人用每公斤体质量每小时最。