溶液配制,标准曲线的制作,检测限等

一、定性方法：保留时间或相对保留值
步骤： 溶液配制：：1.准确称取雌酮，雌二醇，雌三醇，黄体酮各2.5mg ，分别置于4个50ml 容
量瓶中，用少量甲醇溶解，定容，得到浓度均为0.05mg/ml 的四种标准性激素液 2.将上述四种性激素的标准溶液和待测物样品溶液，按照标准品，样品，标准品，
样品的进样步骤以此进样，得到四种性激素各自的色谱图和待测物的色谱图进行比对。

二、定量方法：标准曲线的制作
用标准品配制4种性激素的一系列不同浓度溶液，在设定的实验条件下，分别在高效液相色谱仪下测得其保留值和峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，做峰面积-浓度曲线，得出4种性激素的标准工作曲线，求出回归方程(斜率为灵敏度)，作为样品定量测量的依据。

步骤： 1.用移液枪分别移取以上各溶液适量于25ml 容量瓶中，甲醇定容，制成不
同浓度的标准混合溶液
2..分别用上述配好的标准系列溶液在设置好的色谱条件下测定，得出各自对应的峰面积，峰面积-浓度曲线，并求出回归方程
三、检出限（文献记录的四种性激素在该条件下的检出限约为0.2---2.3ng/g ）
以恰好产生三倍噪声信号时的浓度为检测限（课本：2倍信噪比，文献：3倍信噪比） 步骤：1、观察上述标准混合溶液的响应信号，若最低浓度的混合液各激素响应信号均大于三倍信噪比，则将上述1号标准混合液按梯度稀释，分别稀释. 5/ 10/20/100 倍等（依据实际情况确定），再次检测，直到稀释浓度恰好等于三倍信噪比对应的浓度，此为检测限。

四、线性范围
最大进样浓度和检测限浓度的比值
精密度
标准偏差和标准误（测定某一固定浓度的性激素标准混合溶液）
将3号标准混合液平行测定6次，计算相对标准偏差和平均值的标准偏差
%100⨯=x
S
RSD
准确度
样品加标回收率（高中低三个梯度）
取4份体积为10ml 的试样，其中一份为不加标准物质，另外三分分别加入高中低（取上述用于制作标准曲线的1、 3、 5号溶液）三个浓度的高浓度小体积标准混合液，按照以下公式测定加标回收率
加标回收率（%）=(加标样品测定值－样品测定值)/加标量×100%
n
s s x =。