呼吸道九联检sop
呼吸道九联检技术手册
一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、非典型呼吸道病原体已报道的非典型呼吸道病原体有很多，最常见的有嗜肺军团菌、肺炎支原体、肺炎衣原体、Q热立克次体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒等。
嗜肺军团菌嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是一种兼性细胞内致病菌，有鞭毛，革兰氏阴性，军团菌科军团菌属多形态性的短小球杆菌。
其不抗酸，无孢子，无荚膜，类似于杆菌。
不能分解明胶、糖类或是尿素，同时，不可参加酵解反应。
嗜肺军团菌无色，也非自身荧光，氧化酶与过氧化氢酶测试阳性，β-内酰胺酶阳性。
专性需氧，在自然界可长期存活，如在蒸馏水中可存活100d以上，污水中可存活一年，对热和一般消毒剂敏感。
菌落特征为灰白色，有光泽，湿润，圆形，凸起，并有特殊臭味，革兰氏染色不明显，多用镀银法或Giemsa法染色。
广泛分布于天然淡水环境或人工水域中，在阿米巴体内寄生，亦可感染人巨噬细胞，在其胞内繁殖和杀死人巨噬细胞，是引起军团菌病（军团菌肺炎）的重要病原体。
军团菌病在国内外时有爆发流行，中央空调冷凝塔水系统是引起军团菌病的主要传染源，病死率较高。
目前已知军团菌有48个种70多个血清型，其中嗜肺军团菌有15个血清型，血清型-1是引起社区获得性肺炎和院内感染性肺炎的重要病原体。
呼吸道九联检操作规程-SOP
广州市医院检验科免疫室（SOP）文件撰写人：审核人：批准人：批准日期：2011年8月8日启用日期：2011年8月8日二零一一年八月八日制文件编号: HDHY-MYJY-P001-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 1页批准页根据《临床检验操作规程》(2006年,第三版)，九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂盒使用说明书；免疫检验有关试剂盒、质控品的使用操作说明书；《消毒技术规范》以及医院内部有关管理制度、生物安全制度的规定和要求，临床免疫检验操作规程文件NO.2版经实际运行，现予以批准通过，于 2011年 8月8日起生效并开始实施。
免疫室和检验科有关工作人员必须认真学习，严格遵照执行。
（NO.2版依据检验技术和我科工作发展及管理工作的需求进行的补充完善和改进另行通知）。
任何个人不得更改，实际工作中如发现不妥之处，请按程序以文字形式向审核人汇报；在未经批准人同意/批准新文件之前，仍执行此文。
2011年8月8日编写人修改内容及修改人批准人生效日期文件编号: HDHY-MYJY-P003-2011版序：第 2 版第 1 次修订生效日期: 2011年8月8日责任科室: 免疫室页码: 第1页共 2页呼吸道九联检操作规程1.项目中英文名称：九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）2.实验原理与方法：2.1 原理：间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
样本中存在的特异性抗体和抗原反应，未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去。
在下一步骤中，抗原-抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应。
用免疫荧光显微镜观察结果。
2.2 方法：间接免疫荧光法3.标本的要求：需由专业人员无菌静脉穿刺采集血液。
使用消毒或无菌技术能保持样本的完整性。
血清样本采集后如不在8小时内检测应2~8 ºC冷藏，如7天内不检测，则应冷冻（-20ºC）保存。
呼吸道九联检(简单)
数据来源： 《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》
《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》 《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等
常见检测的九种非典型病原体
嗜肺军团菌
腺病毒
肺炎支原体
呼吸道合胞病毒
Q热立克次体 肺炎衣原体
质量管理体系
1999年通过ISO 9002: 1994质量认证； 2009年更新ISO 9001: 2008质量认证；
2003年获得CE认证； 2005年获得ISO 13485: 2005认证；
试剂盒的设计理念
多种病原同时联合检测，节省时间、便于 快速准确诊断；为临床呼吸道病原体鉴别、 诊断提供导向性帮助。
肺炎支原体
（3）真菌性肺炎
如：白色念珠菌、放线菌等。
（4）其他病原体所致肺炎
如：Q热立克次体、衣原体、弓形体、原虫等。
社区获得性肺炎的分类
青霉素问世前： CAP80%以上是由肺炎链球菌所致。 1928年英国科学家弗莱明发现青霉素：
拯救了千百万肺炎患者的生命，肺炎链球菌虽仍是CAP 最常见的病原体，但比例已明显下降。
果快速 5、标本为血清标本，容易采集、容易保存 6、镜下荧光形态清晰，容易判定 7、观察荧光，准确性好 8、准确检测出哪种病原体感染，能为临床诊断、治疗提供强有力的帮助
目前开展著名大三甲医院举例
北京市儿童医院
天津市儿童医院
Байду номын сангаас
北京中国人民解放军306医院 总院
北京中国人民解放军第二炮兵
上海同济医院
非典型的病原体：如：肺炎支原体、肺炎衣原体、病毒、 嗜肺军团菌等，明显上升!
呼吸道九联检
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------呼吸道九联检呼吸道病原体检测探讨1/ 42主要内容? 呼吸道感染的概况? 常见非典型病原体? 实验室检测方法学? 间接免疫荧光法—IgM抗体检测---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 呼吸道病原体感染概况?上呼吸道感染鼻腔、咽、喉部 ----- 常见病因病毒，少数为细菌；?下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。
以社区获得性肺炎(CAP)多见3/ 42呼吸道病原体感染概况一、典型“致病菌”细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有发热，或有脓血痰病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎②重症致死性肺炎很多是细菌性③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报道约在40%左右④肺炎链球菌大约占在60%---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 呼吸道病原体感染概况二、非典型病原体非典型肺炎：泛指所有由某种未知的病原体引起的肺炎。
病原体可能是病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体或军团菌、真菌等1、20世纪60年代首次发现了非典型的病原体——肺炎支原体 2、临床症状差异大 3、在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约占4060%5/ 42（一）最常见的非典型病原体肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌和立克次体等①感染比例高，超过50% ②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏器受累明显。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检SOP
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
二、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检(简单)
检测流程
01
02
03
04
采集样本
医生或护士使用无菌鼻咽拭子 或痰液采集器采集患者呼吸道
样本。
样本送检
将采集的样本送至实验室进行 检测。
实验室检测
实验室工作人员进行免疫荧光 技术或分子生物学检测，对九
种病原体进行检测。
结果报告
根据检测结果，出具相应的报 告，供医生参考。
02 呼吸道九联检的临床应用
在临床诊断中的推广应用
早期诊断
呼吸道九联检能够快速、准确地检测出多种 呼吸道病原体，有助于早期诊断和治疗，减 少并发症的发生。
鉴别诊断
呼吸道九联检能够鉴别出不同病原体感染，有助于 医生制定更加精准的治疗方案，提高治疗效果。
监测病情
呼吸道九联检能够监测病情变化和治疗效果 ，有助于及时调整治疗方案，减少不必要的 抗生素使用。
检测后的注意事项
遵循医生建议
在检测后应遵循医生的建 议，如是否需要进一步检 查、治疗等。
注意身体反应
在检测后应注意身体反应， 如出现异常症状应及时就 医。
保持健康生活方式
在检测后应保持健康的生 活方式，如合理饮食、适 量运动等，以促进身体健 康。
05 呼吸道九联检的发展前景
技术进步与新方法
基因测序技术
呼吸道九联检的仪器和试剂成本较高，增 加了医疗费用，不利于在基层医疗机构推 广。
呼吸道九联检的操作较为复杂，需要专业 的技术人员进行操作和维护，限制了其在 基层医疗机构的应用。
假阳性与假阴性
对新技术接受度不一
呼吸道九联检可能出现假阳性或假阴性的 情况，影响诊断的准确性，需要结合临床 症状和其他检查结果进行综合判断。
目的
呼吸道九联检旨在提高呼吸道疾病的 诊断准确率，缩短确诊时间，为患者 提供及时有效的治疗。
呼吸道九联检简要操作规程
呼吸道九联检简要操作规程一采血要求1. 静脉血，指尖血（儿童）2. 拒收溶血标本。
脂血标本不影响检测。
二所需实验仪器和设备1. 荧光显微镜2. 洗盒，湿盒3. 摇床4. 15微升和150微升量程的移液器5. 1000毫升量筒，1000毫升玻璃容器三准备工作：提前30分钟取出试剂盒恢复至室温，同时将试剂②中的成分加入1L蒸馏水，摇匀直至完全融化。
四试验步骤：25ul血清+25 ul PBS溶液↓混匀取混合后的液体30ul↓加150ul吸附剂[⑦]↓混匀，静置1分钟离心4000转10-15分钟↓在载玻片上每孔加15ul上清液↓放入湿盒37度温育60分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片后，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗↓自然晾干或吹干，每孔加入15ul结合物[⑤]↓放入湿盒37度温育30分钟↓用PBS洗液冲洗载玻片，浸泡在PBS洗液中并放在摇床上摇动10分钟，再用蒸馏水冲洗自然晾干或吹干↓加封闭介质盖上盖玻片观察结果注意事项：1，加样时，移液器不要触碰离心管底部的沉淀和九联检包被孔2，实验结束后，九联检片子最好在2-3小时内观察，第二天观察不影响结果判断。
若需保存，需冷冻避光。
3，结果判断第2,5,6,7,8,9包被孔的阳性细胞为荧光均匀分布在包被细胞上，并且为明显的绿色；阳性细胞数占3%以上时，报阳性，其余阴性。
4，PBS常温放置一星期不影响实验结果，但要保证在此期间不被污染5.若实验室没有摇床，洗涤过程中中间换一次PBS，同样能达到洗涤效果，而不需要震摇郑州安图绿科生物有限公司。
呼吸道九联检
病毒：如腺病毒、呼吸道合胞病毒等
寄生虫：如蛔虫、钩虫等
过敏原：如花粉、尘螨等
其他：如肿瘤标志物、激素等
检测方法
采集样本：采集患者呼吸道分泌物，如痰液、鼻咽拭子等
检测项目：检测呼吸道常见病原体，如流感病毒、肺炎支原体等
检测方法：采用PCR技术，快速、准确检测病原体
结果分析：根据检测结果，为患者提供个性化治疗方案
01
03
02
04
检测意义
呼吸道九联检是一种快速、准确的呼吸道疾病检测方法
检测结果可以帮助医生快速诊断呼吸道疾病，制定治疗方案
检测结果可以帮助患者了解自己的健康状况，及时采取预防措施
检测结果可以帮助公共卫生部门了解呼吸道疾病的流行趋势，制定预防和控制措施
2
呼吸道疾病诊断
3
2
4
1
呼吸道九联检：检测呼吸道疾病的一种方法
04
呼吸道九联检在公共卫生监测中的应用
市场前景
市场需求：随着人们对健康意识的提高，呼吸道九联检的市场需求将不断增加
政策支持：政府对医疗行业的支持力度加大，有利于呼吸道九联检的发展
技术进步：随着科技的发展，呼吸道九联检的技术将更加先进，检测结果更加准确
市场竞争：随着市场竞争的加剧，呼吸道九联检需要不断创新，提高产品质量和品牌影响力
结果解读：根据检测结果，及时采取相应措施，如就医、隔离等
检测结果解读
阴性结果：表示没有呼吸道感染，但需要注意其他疾病
02
临界值：表示检测结果可能存在误差，需要进一步检查和确认
03
阳性结果：表示存在呼吸道感染，需要进一步检查和治疗
01
检测结果与实际病情不符：可能存在其他原因，需要进一步检查和治疗
呼吸道感染IgM九项联检试剂说明书终稿
呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）说明书【产品名称】通用名称：呼吸道感染IgM九项联检试剂盒（间接免疫荧光法）英文名称：PNEUMOSLIDE IgM商品名称：PNEUMOSLIDE IgM【包装规格】10人份/盒【预期用途】采用间接免疫荧光法（IFA），同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的IgM 抗体，可检的病原体包括：嗜肺军团菌血清1型、肺炎支原体、Q热立克次体、肺炎衣原体、腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒和副流感病毒1、2和3型。
已报道的非典型性肺炎的病原体有很多，其中最常见的有：嗜肺军团菌人最易感染的是嗜肺军团菌血清1型，非典型性肺炎常伴随有全身症状。
10%的肺炎是由嗜肺军团菌血清1型引起的。
在血清学诊断中，间接免疫荧光法（IFA）是唯一的标准技术。
肺炎支原体肺炎支原体引起的肺炎在儿童和青少年中最为常见，由于很难将其固定在载玻片上，因此先将肺炎支原体抗原固定在细胞中。
Q热立克次体Q热是由Q热立克次体引起的全身疾病，会造成发热、非典型性肺炎、肝炎或心内膜炎。
血清学诊断中，IFA检测是最灵敏和最具指示性的血清学诊断方法。
肺炎衣原体肺炎衣原体极易造成呼吸系统感染，特别是支气管炎和肺炎。
在老年人中发病率较高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%。
微量免疫荧光法（MIF）是最灵敏和最特异的诊断方法。
腺病毒腺病毒是一种重要的呼吸道病原体，能引起上呼吸道疾病，伴随有急骤发热和轻度呼吸道感染。
呼吸道合胞病毒呼吸道合胞病毒（RSV）是两岁以下幼儿呼吸道感染的主要病原体，在冬季爆发流行。
流感病毒它是流感的病原体，在具有潜在病理学的患者中会产生严重的并发症。
由于它易于与其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期临床诊断很困难。
因此，实验室诊断就显得非常重要。
副流感病毒副流感病毒1、2和3型在2-4岁儿童中能引起喉气管支气管炎（哮吼）。
3型具有流行性，1和2型具有地域性。
【检测原理】间接免疫荧光法（IFA）是基于待测样本中的抗体与吸附在载玻片上的抗原发生的反应。
呼吸道九联检——套餐式组合更高效、特异、全面！
呼吸道九联检——套餐式组合更高效、特异、全面！今年随着我们检验科新的检验项目的陆续开展，在我们检验科同事们的共同努力下，呼吸道九联检终于开始在我院开展了。
套餐式组合让临床呼吸道感染的检测更加高效、特异、全面。
一、呼九简介1、呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
2、呼吸道九联检也叫九项呼吸道病原体IgM抗体联合检测：（嗜肺军团菌血清1型IgM抗体+肺炎支原体IgM抗体+Q热立克次体IgM抗体+肺炎衣原体IgM抗体+腺病毒IgM抗体+呼吸道合胞病毒IgM抗体+甲型流感病毒IgM抗体+乙型流感病毒IgM抗体+副流感病毒1、2和3型IgM抗体）。
3、采用间接免疫荧光法，主要针对九项病原体的IgM检测。
由于机体受到抗原刺激后最早产生的抗体是IgM，但是IgM的半衰期短（约5天）若血清中特异性IgM类抗体含量增高，表明有近期感染，这有助于感染性疾病的早期诊断。
以下是关于九项病原体名称及其潜伏期和产生IgM的时间。
九项病原体IgM抗体产生时间病原体潜伏期IgM产生时间嗜肺军团菌4-10天1周左右肺炎支原体14-21天1周左右Q热立克次体12-19天2周左右肺炎衣原体30天左右2-3周腺病毒2-14天4-7天呼吸道合胞病毒3-7天4-8天流感病毒2-7天4-8天副流感病毒2-7天4-8天二、临床意义1、嗜肺军团菌是社区获得性肺炎的重要致病菌。
在欧洲和北美军团军肺炎占社区获得性肺炎前3,4位，ICU重症社区获得性肺炎的第三位，而医院获得性肺炎的 1～5 %也由嗜肺军团菌所致。
呼吸道九联检sop
呼吸道九联检操作程序一、呼吸道感染概述呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。
分为上呼吸道感染和下呼吸道感染，上呼吸道感染常见的是急性上呼吸道感染（acute upper respir tract infection），指鼻腔、咽或喉部急性炎症的概称，是呼吸道最常见的一种传染病。
常见病因为病毒，少数由细菌引起。
患者不分年龄、性别、职业和地区。
不仅具有较强的传染性，而且可引起严重并发症。
下呼吸道感染是最常见的感染性疾患，包括急性气管——支气管炎、慢性支气管炎、肺炎、支气管扩张等，由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起，其防治应遵循预防为主、准确诊断、及时治疗的原则，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
一、免疫荧光法介绍免疫荧光技术（Immunofluorescence technique）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。
它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。
这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术（fluorescent antibody technique）。
用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
这两种方法总称免疫荧光技术，因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。
用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞（或组织）化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同，还可进一步分做若干种。
呼吸道九联检课件
演讲人
目录
01. 呼吸道九联检介绍 02. 呼吸道九联检内容 03. 呼吸道九联检应用
呼吸道九联检介绍
九联检项目
血常规检查：检查血液 中的红细胞、白细胞、
血小板等指标
尿常规检查：检查尿液 中的蛋白质、葡萄糖、
尿胆原等指标
便常规检查：检查粪便 中的细菌、寄生虫、红
细胞等指标
生化全套检查：检查肝 功能、肾功能、血糖、
02
呼吸道九联 检可以检测 出多种呼吸 道病原体， 包括病毒、 细菌和真菌
03
呼吸道九联 检有助于早 期诊断和治 疗呼吸道感 染性疾病
04
呼吸道九联 检可以减少 抗生素滥用， 降低医疗费 用，提高治 疗效果
呼吸道九联检内容
病原体检测
04
呼吸道九联检的临
床意义是什么？
03
呼吸道九联检的检
测结果如何解读？
断
应用范围：适 用于呼吸道疾 病的早期诊断
和治疗
治疗方案制定
确定病因：根据九联
01 检结果，确定呼吸道
疾病的病因
制定方案：根据药物
03 选择和病情，制定具
体的治疗方案
选择药物：根据病因，
02 选择合适的药物进行
治疗
监测病情：在治疗过
04 程中，定期监测病情，
调 04
01
评估指标：包括症状、体征、 实验室检查等
02
评估方法：根据评估指标进行 综合分析，判断病情严重程度
03
评估结果：根据评估结果，制 定相应的治疗方案和预后预测
04
预后预测：根据评估结果，预 测疾病的发展趋势和预后情况
谢谢
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呼吸道九联检的检
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呼吸道九联检操作程序呼吸道感染概述一、气管和支气管等咽喉呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、、上呼吸道感染常见的分为上呼吸道感染和下呼吸道感染呼吸系统，。
指鼻腔是急性上呼吸道感染、），tract infectionupper（acute respir 常见病因是呼吸道最常见的一种传染病咽或喉部急性炎症的概称。
，不仅性别职业和地区为病毒少数由细菌引起患者不分年龄。
、，、。
下呼吸道感染是最常见具有较强的传染性而且可引起严重并发症。
，肺炎支气管炎慢性支气管炎的感染性疾患包括急性气管——、，、、军团菌等微生物引衣原体由病毒支气管扩张等细菌支原体、、、，、治疗时必及时治疗的原则起其防治应遵循预防为主准确诊断，，、、须明确引起感染的病原体以选择有效的抗生素。
免疫荧光法介绍一、又称荧光抗体免疫荧光技术）technique（Immunofluorescence生物化学是标记免疫技术中发展最早的一种它是在免疫学技术、。
，很早以来就有一些学者和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
利用抗原抗体反应进行组织或试图将抗体分子与一些示踪物质结合，年首次采用荧光素进行标等于细胞内抗原物质的定位1941。
Coons 这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为记而获得成功。
用荧光抗体示踪荧光抗体技术technique）。
fluorescent（antibody 用已或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；这两知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。
因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合种方法总称免疫荧光技术，，用于检测或定也可以与其他蛋白质结合用于检测或定位各种抗原，，位抗体但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用所以人们习惯称，，为荧光抗体技术或称为免疫荧光技术用免疫荧光技术显示和检查。
，细胞或组织内抗原或半抗原物质等方法称为免疫荧光细胞或组织）（化学技术。
荧光免疫法按反应体系及定量方法不同还可进一步分做若干种。
，与放射免疫法相比荧光免疫法无放射性污染并且大多操作简便，，，便于推广该技术的主要特点是特异性强敏感性高速度快主。
：、、。
要缺点是非特异性染色问题尚未完全解决结果判定的客观性不足，，：技术程序也还比较复杂但近年来发展了几种特殊的荧光免疫测定，。
已经很好改善了这些缺点与酶免疫测定和放射免疫分析一样应用，，在临床检验中。
原理．1免疫学的基本反应是抗原抗体反应由于抗原抗体反应具有高-。
度的特异性所以当抗原抗体发生反应时只要知道其中的一个因素，，，就可以查出另一个因素免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的。
荧光色素标记在抗体或抗原上与其相应的抗原或抗体结合））（（，后在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应其根据反应体系的不。
，同可分为直接法将标记的特异性荧光抗体直接加在抗原标本上，：，：经一定的温度和时间的染色用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，，室温下干燥后封片镜检间接法如检查未知抗原先用已知未标，。
、：记的特异抗体第一抗体与抗原标本进行）（反应用水洗去未反应的抗体再用标记的抗抗体第二抗体与抗），（，原标本反应使之形成抗原抗体抗体复合物再用水洗去未反应——，，的标记抗体干燥封片后镜检如果检查未知抗体则表明抗原标，。
、，本是已知的待检血清为第一抗体其它步骤的抗原检查相同根据。
，，抗原抗体反应后定量方法的不同可分为荧光抗体技术荧光显微镜技(：术抗原抗体反应后利用荧光显微镜判定结果的检测方法免疫荧：)。
，光测定技术抗原抗体反应后利用特殊仪器测定荧光强度而推算被，：测物浓度的检测方法。
荧光物质2.许多物质都可产生荧光现象但并非都可用作荧光色素只有那。
，些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料所用荧光物质介绍：。
异硫氰酸荧光素为黄色或：FITC）（fluoresceinisothiocyanate，橙黄色结晶粉末易溶于水或酒精等溶剂分子量为最大吸，。
389.4，收光波长为最大发射光波长呈现明亮，530nm520～495nm，～490的黄绿色荧光有两种同分异结构其中异构体型在效率稳定性、，、，Ⅰ与蛋白质结合能力等方面都更好在冷暗干燥处可保存多年是应用，，最广泛的荧光素其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感通常②：①，。
切片标本中的绿色荧光少于红色。
呼吸道九联检产品介绍一、九项呼吸道感染病原体抗体检测试剂盒采用间接免疫荧光，IgM法同时检测人血清中呼吸道感染主要病原体的抗体，IgM）（IFA，可检的病原体包括嗜肺军团菌血清型肺炎支原体热立克次Q：1、、体、．：0001文件编号红河州第三人民医院检验科版本：第一版2016生效日期：呼吸道感染病原体九联检操作程序主题内容页第乙型流甲型流感病毒腺病毒呼吸道合胞病毒肺炎衣原体、、、、用于呼吸道感染疾病的辅助诊断和型感病毒和副流感病毒。
31、2。
检测原理1.是基于待测样本中的抗体与吸附间接免疫荧光法图）（1（IFA）样本中存在的特异性抗体和抗原反应在载玻片上的抗原发生的反应，。
抗原在下一步骤中未与抗原结合的免疫球蛋白在洗涤步骤中除去，。
用免疫荧光显微镜观抗体复合物与荧光素标记的抗人球蛋白反应-，察结果。
图1抗体检测试剂盒检测原理图九项呼吸道感染病原体1：IgM试剂盒组成及用途 2.组分成分和用途检测的物理载体覆有聚四氟乙烯并包被有针对检测，载玻片包装袋内有一袋硅胶以防潮物的特异性抗原。
，含有人血清及防腐用于证明试剂盒及试验的有效性，质控品剂。
含羊抗人检测用来吸附人避免干扰吸附剂，IgM IgG IgG3.1实验前准备）1操作步骤微量移离心管量筒烧杯实验所需物品准备 3.、、、1000ml：1000ml荧光显微镜盖玻片水平摇床恒温箱液器温育湿盒洗瓶。
、、、、、、蒸馏水中加入瓶粉末倒入烧杯中洗液的准备将PBS2），，：11L PBS备用摇匀直至完全溶解配好后储存在。
2-8oC，将恒温箱调至使用前将所有试剂平衡至室温）3℃。
，37，实验步骤3.2血清加入即样本的稀释按比例稀释血清标本）115μL15μL1:1，：阴阳性对照不需要稀释中PBS。
吸稀释后的血清加入用吸附剂处理稀释后的血清将）2L30μ150μL：处理后的血清彻底混匀阴阳性对照不需吸附剂处理附剂中。
，。
以防干扰检测分钟除去沉淀要离心。
，10-15在一个载玻片的吸附剂处理过的血清在载玻片的每孔中加）3。
15μL在另一个载玻片的每孔中加每孔中加入不稀释的阳性对照，15μL不稀释的阴性对照入。
L15μ分钟温育将载玻片放入湿盒中）4。
90℃37，用洗液的缓慢水流冲洗载玻片避免直接冲入孔内后浸）5，（PBS）泡在中并放置在水平摇床上轻轻摇动分钟将载玻片用蒸。
10PBS馏水缓慢水流冲洗避免直接冲入孔内）。
（载玻片自然晾干）6。
每孔加入结合物溶液不需稀释）7）。
（15μLFITC将载玻片放入湿盒温育分钟）8。
3037℃，重复和的洗涤步骤）9。
76加几小滴封闭介质小心盖上盖玻片）10。
，尽快用荧光显微镜在倍放大率下观察结果如果不能立即观）11。
400察可将其避光放置于不超过小时。
2-8oC，24结果判断．4有效性判断4.1每一次试验都应设立阳性和阴性对照以确认试验和试剂盒的，有效性观察到的荧光模式应为：。
阳性对照腺病毒流感病毒呼吸道合胞病毒或副流感病毒对阳、：、性质控的细胞出现苹果绿细胞核胞浆或胞膜荧、1-15%光在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时观察到着（色的合胞军团菌衣原体或立克次体中所有的细菌、；）呈现出苹果绿荧光支原体对阳性质控在细胞外围呈现；苹果绿色荧光。
阴性对照军团菌肺炎衣原体和立克次体无荧光支原体腺病、、：，毒甲型和乙型流感病毒呼吸道合胞病毒和副流感病、、毒的细胞呈现红色。
．样本结果判断4.2阳性结果可以观察到腺病毒流感病毒呼吸道合胞病毒或副流感、、：病毒对阳性血清的细胞的细胞核胞浆或胞膜出现、1-15%苹果绿色荧光在副流感病毒和呼吸道合胞病毒中能同时（观察到着色的合胞军团菌衣原体或立克次体中所有、；）的细菌呈现出苹果绿色荧光支原体对阳性血清在细胞外；围呈现苹果绿色荧光。
阴性结果可观察到军团菌肺炎衣原体和立克次体无荧光支原体、：，、腺病毒甲型和乙型流感病毒呼吸道合胞病毒和副流感、、病毒的细胞呈现红色。
检验结果的解释4.3每一批产品在放行前都要经过严格的内部质量控制检验1)。
）（Q.C.质控品科溯源到经过内部确认的参考血清盘。
如果所有细胞或第十孔出现荧光表明存在抗核和抗细胞抗体不）2，能判断为阳性应用其他方法进行检验当质控孔中吴荧光时一定要。
，查明原因。
由于非军团菌感染的病人中经常出现交叉抗体军团菌阳性的结）3，果需结合临床症状综合评价建议做较高稀释度的检测来提高阳性预。
测值。
与说明书中所列结果不同不能判为阳性）4。
在初次感染和再次感染的过程中和抗体有不同的表现）5IgM。
IgG方式初次感染时几乎在所有的情况下和均出现早IgM（，IgM IgG：于出现而再次感染时可能会出现在许多疾病中病人。
IgM，；）IgG：0001文件编号红河州第三人民医院检验科版本：第一版生效日期：2016呼吸道感染病原体九联检操作程序主题内容页第个一般情况下在感染后而的一生都可能存在高低度的2-3IgG，IgM是近期感染的有效标志物因此月存在血清中。
IgM，抗体阴性及阳性结果的荧光染色图谱九种病原体）6：IgM阳性结果荧光图谱：阴性结果荧光图谱：在使用本5.产品中所需注意事项如下：本产）1仅限专业人员使用品用于体外诊断。
，严格按照程序进建议用户仔细阅读和理解说明书在使用前）2，，特别是样本和试剂的正确吸行操作才能获得可靠的检测结果。
温育的时间控制对获得准确结果都很重要取以及仔细的洗板。
、载玻片要平衡至室温应将所有试剂平衡至室温另外使用前，，后再打开。
每一次试验都应设立阳性和阴性对照以确认试验和试剂盒的）3，有效性观察到的荧光模式应与说明书要求相符合否则检验，。
无效。
洗涤时注意不要直接对着孔直接冲洗以免冲洗掉已经固化反）4，的应复合物。
单一样本抗体检测结果不能帮助作出近期感染的诊断应采集）5。
双份样本急性期和康复期同时检测来观察血清转化或抗体）（水平的明显升高。
仅使用试剂盒内的组分不要混用不同试剂盒或不同厂家的试）6，剂组分只有吸附剂封闭介质和载玻片可与其他批、。
、PBS次试剂盒通用其它组分同批次可以混用使。
IFA，VIRCELL用时最好在无菌条件下操作试剂以防微生物污染仅使用。
，试验所需量的吸附剂质控血清和结合物剩余的试，、PBS、剂不要倒回瓶中溶解后储存在一般为个月，oC4。
PBS～28使用前需检查如出现浑浊请勿使用。
，每步操作必须使用干净吸头仅使用干净的耗材最好是一）7，，次性使用的耗材。
包装如有损坏请勿使用）8。
切勿用嘴吸移液管加样）9。
本试剂盒中的吸附剂结合物和质控血清含有动物源性物质）10，、质控血清还含有人源性物质尽管本试剂盒中的人血清质控品。