ISSR、RAPD和SRAP分子标记技术在姬松茸菌株鉴定上的应用比较

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基于分子标记的遗传多样性研究

基于分子标记的遗传多样性研究随着生物技术的发展，分子标记成为研究遗传多样性的重要手段之一。

分子标记是指通过分子生物学技术获得的、在DNA水平上区别不同个体间基因类型的DNA片段，如限制性片段长度多态性(RAPD)、随机扩增多态性(DNA)（SRAP）、序列特定放大长度多态性(SSR)（简称微卫星）、单核苷酸多态性(SNP)等。

这些分子标记可以直接或间接地反映不同物种及个体间的遗传变异情况，进而研究物种演化、种间亲缘关系、种群间遗传分化及群体结构等。

从方法学上看，基于分子标记的遗传多样性研究具有优势。

相较于传统的形态分类法，基于分子标记的研究方法不仅具有更高的分类精度和重复性，且能够在区别性弱、难以直观形态分类的物种中发挥作用。

基于SSR标记的遗传多样性研究是目前应用较为广泛的方法之一。

SSR标记是指在基因组DNA序列中间处不断重复出现的富集序列区段，长度一般约为10-20个核苷酸，具有多态性。

SSR标记具有多态性高、遗传信息丰富、重复性好、扩增容易等优点，可用于物种间、种群间遗传差异的检测和分子标记辅助育种等应用。

研究表明，SSR标记具有较高的遗传多样性，因此可以用于评估不同物种及群体间的遗传分化程度。

比如，许多植物物种中，种群间遗传多样性与地理距离呈负相关，因此利用SSR标记分析可以对不同物种的子群间遗传分化进行深入探讨。

此外，SNP是最近发展起来的一种新型分子标记，是单核苷酸的多态性，基于SNP的遗传多样性分析可用于评估不同物种与群体间的遗传分化，并揭示种间亲缘关系的演化过程。

总之，基于分子标记的遗传多样性研究是现代遗传学的重要组成部分，也是物种分类、种群遗传学及育种的重要工具。

未来，随着技术的不断发展以及遗传多样性研究的深入，基于分子标记的研究手段将在遗传多样性研究领域中扮演更加重要的角色，助力生命科学研究的发展和进步。

ISSR分子标记技术在植物种质资源研究中的应用_朱岩芳

[11]Chau D T.Correlati on bet ween lea f stand ,l ea f area i ndex andy ield in the m a ize -hybrids representi ng the l ast 20years[J].N oveny ter m eles ,1993,42(1):1-10.[12]曹靖生.几个玉米株型性状的遗传规律研究[J].黑龙江农业科学,1995(3):16-19.[13]张泽民,贾长柱.玉米株型对遗传增益的影响[J].遗传,1997,19(2):31-34.[14]李玉玲,黄西林,席章营,等.玉米株型与穗粒性状同步改良的数量遗传基础研究[J].河南农业大学学报,1996,30(4):319-323.[15]李玉玲,苏祯禄,孙书库,等.玉米株型性状的配合力及其相关研究[J].河南农业大学学报,1994,28(4):354-360.[16]张彪,陈宛秋,唐继伟,等.玉米自交系株型性状配合力分析及应用[J].四川农业大学学报,1994,12(3):438-442.[17]张彪,张启行,兰发盛.玉米几个自交系组配高产紧凑型杂交种的研究[J].玉米科学,2000,8(3):33-36.[18]M ason L ,Zuber M S .Corn leaf or ientation effects on li ght i n -tercepti on ,i ntraspecific com petition ,and gra i n y i e l ds[J].Jour -na l of Producti on A g ricu lture ,1999,12(3):396-399.[19]温海霞,蔡一林,王久光,等.9个玉米自交系主要株型性状的配合力分析[J].西南农业大学学报,2002,24(3):223-225.[20]陈岭,崔绍平,徐有,等.玉米株型性状的遗传分析[J].华北农学报,1994,9(增刊):11-15.[21]王秀全,陈光明,刘昌明,等.玉米株型育种亲本选配的遗传规律研究[J].西南农业学报,2000,13(1):50-54.[22]王国强,蔡一林,王久光,等.10个玉米自交系株型性状的配合力分析[J].西南农业大学学报,2005,27(3):374-377.[23]张兴端,霍仕平,向振凡,等.玉米重组群体株型性状和生物学特性的遗传潜势与杂种优势研究[J].西南农业学报,2005,18(6):675-679.收稿日期:2009-10-23基金项目:浙江省重大科技专项(优先主题)(No .2008C 12005-1)、农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX 08005-005)和云南省烟草公司项目(09YN 008)资助。

金针菇菌株农艺性状评价与遗传差异分析

金针菇菌株农艺性状评价与遗传差异分析谭艳;王波;赵瑞琳【摘要】利用ISSR技术对29个金针菇菌株进行了遗传多样性和农艺性状分析,建立了遗传相似性聚类图和农艺性状指标.结果表明,29个金针菇菌株遗传相似性水平在0.67～ 0.89,在0.67水平上29个菌株被聚为一个类群,在遗传相似性水平为0.70上,将29个金针菇菌株分为4个大类群;在农艺性状上存在较大差异,产量上分为高产类、中产类和低产类,生育期上分为早熟和晚熟两类,子实体形态特征上分为黄色和白色、粗柄和细柄、基部绒毛分为有和无,建立了金针菇主要农艺性状指标.【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2016(029)012【总页数】6页(P2965-2970)【关键词】金针菇;遗传多样性;分子标记;产量;形态特征【作者】谭艳;王波;赵瑞琳【作者单位】四川省农业科学院土壤肥料研究所,四川成都610066;西南林业大学林学院,云南昆明650224;四川省农业科学院土壤肥料研究所,四川成都610066;西南林业大学林学院,云南昆明650224【正文语种】中文【中图分类】S646.1+5金针菇是中国主要栽培食用菌之一，年生产量达到240万余t(2012)，居栽培食用菌中第4位，生产上使用的金针菇品种分为黄色和白色两大类，工厂化栽培品种为白色、农业栽培品种以黄色为主，因此，开展研究金针菇种质资源遗传背景在金针菇育种和生产上具有重要意义，在金针菇种质资源遗传分析上已开展了研究工作，对金针菇菌株的遗传多样性进行分析，分别开展了RAPD、SRAP、ISSR和酯酶同工酶等[1-5]，分子标记技术已广泛应用在食用菌的遗传多样性分析上，其中利用较多的分子标记为ISSR， ISSR是由Zietkiewicz et al.1994年创建的一种DNA标记技术，与RFLP、RAPD等其它DNA检测技术相比，该技术根据真核生物中广泛存在简单重复序列的特点，利用在真核生物基因组中常出现的简单重复序列本身设计引物，无需预先克隆和测序。

分子标记技术

分子标记技术摘要：分子标记技术就是利用现代分子生物学基础分析DNA分子特性，并借助一些统计工具，将不同物种或同一物种的不同类群区分开来，或者将生物体的某些性状与DNA分子特性建立起来的关联关系，已广泛应用于植物遗传与育种研究的众多领域，包括遗传图谱的构建、遗传多样性分析、物种起源与进化、品种资源与纯度鉴定、分子辅助育种等多个方面，具有重大作用。

关键词：分子标记技术原理RFLP RAPD SSR AFLP EST SNP TRAP 分子标记技术应用引言分子标记是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA 水平遗传多态性的直接的反映。

与其他几种遗传标记——形态学标记、生物化学标记、细胞学标记相比，DNA分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性的性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。

随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。

一．常用分子标记原理分子标记技术的种类根据不同的核心技术基础，DNA分子标记技术大致可分为三类: 第一类以Southern杂交为核心, 其代表性技术为RFLP；第二类以PCR 技术为核心，如RAPD、SSR、AFLP、STS、SRAP、TRAP等；第三类以DNA序列(mRNA 或单核苷酸多态性)为核心，其代表性技术为EST标记、SNP标记等。

理想的分子标记应达到以下的要求：①具有高的多态性；②共显性遗传；③能够明确辨别等位基因；④分布于整个基因组中；⑤选择中性(即无基因多效性)；⑥检测手段简单、快速；⑦开发成本和使用成本尽量低廉；⑧在实验室内和实验室间重复性好。

目前，没有任何一种分子标记均满足以上的要求，它们均具有各自的优点和不足。

DNA条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定

·综述·ＤＮＡ条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定张国林，邢以文，薛满苏州市药品检验检测研究中心，江苏　苏州　２１５０００［摘要］　中药材鉴定是控制中药质量、确保用药安全与效果的首要环节。

ＤＮＡ分子鉴定是从基因层面上进行中药材鉴别的手段，准确率高。

ＤＮＡ分子鉴定包括电泳技术、免疫技术、随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）、简单重复序列（ＩＳＳＲ）及ＤＮＡ条形码等，以ＤＮＡ条形码应用最为广泛。

ＤＮＡ条形码是基因组中相对较短的、可用于物种鉴定的特异性基因片段。

植物类中药材的条形码多选用核基因和叶绿体基因ＤＮＡ片段，如叶绿体ｐｓｂＡｔｒｎＨ基因、内转录间隔区（ＩＴＳ）、叶绿体核酮糖１，５二磷酸羧化酶大亚基（ｒｂｃＬ）和ＲＮＡ转录体Ⅱ型内含子剪切酶基因（ｍａｔＫ）等；动物类中药材的条形码多来自核基因和线粒体基因ＤＮＡ，主要有线粒体细胞色素Ｃ氧化酶亚基１（ＣＯⅠ）、核糖体ＲＮＡ（ｒＲＮＡ）和线粒体细胞色素ｂ基因（ＣｙｔＢ）等。

综述动植物类中药材ＤＮＡ分子标记与鉴定技术应用进展，并探讨ＤＮＡ条形码在药用动植物类中药材鉴定中存在的局限性及发展前景，为中药质量控制提供参考。

［关键词］　条形码；核基因；叶绿体基因；线粒体基因；微条形码；复合条形码［中图分类号］　Ｒ２８２５［文献标识码］　Ａ［文章编号］　１６７３４８９０（２０２１）０２０３８１０８ｄｏｉ：１０１３３１３／ｊｉｓｓｎ１６７３４８９０２０２００２１６００１ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡＢａｒｃｏｄｉｎｇａｎｄＯｔｈｅｒＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｎｉｍａｌａｎｄＰｌａｎｔＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＺＨＡＮＧＧｕｏｌｉｎ，ＸＩＮＧＹｉｗｅｎ，ＸＵＥＭａｎＳｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５０００，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　ＴｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｉｓａｍｅｔｈｏｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＴＣＭｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｅｌｅｖｅｌｂｙｄｉｒｅｃｔｌｙａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍＩｔｈａｓｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｉｓｎｏｔｅａｓｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅ，ｔｉｓｓｕｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｓａｍｐｌｅｓｈａｐｅａｎｄｅｘｔｅｒｎａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｃｌｕｄｅｓｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ（ＲＡＰＤ），ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＲＦＬＰ），ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＡＦＬＰ），ｓｉｍｐｌｅｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＩＳＳＲ）ａｎｄＤＮＡｂａｒｃｏｄｅ，ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＤＮＡｂａｒｃｏｄｅｉｓｍｏｓｔｗｉｄｅｌｙａｄｏｐｔｅｄＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇｉｓａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｈｏｒｔｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｓｅｇｍｅｎｔｉｎｇｅｎｏｍｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎＩｎｔｈｅｂａｒｃｏｄｅｏｆｐｌａｎｔｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅａｎｄｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｅｎｅＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓａｒｅｍｏｓｔｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄ，ｓｕｃｈａｓｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｐｓｂＡｔｒｎＨｇｅｎｅ，ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｉｎｇｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ），ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｒｉｂｏｋｅｔｏｓｅ１，５ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔ（ｒｂｃＬ）ａｎｄＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｒｔｙｐｅⅡｉｎｔｒｏｎｓｈｅａｒｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅ（ｍａｔＫ）ＩｎａｎｉｍａｌｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅｂａｒｃｏｄｅｍｏｓｔｌｙｃｏｍｅｓｆｒｏｍｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｅｎｅＤＮＡ，ｍａｉｎｌｙｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｏｘｉｄａｓｅｓｕｂｕｎｉｔ１（ＣＯⅠ），ｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ（ｒＲＮＡ）ａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂｇｅｎｅ（ＣｙｔＢ）ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｆａｓｔｅｓｔｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｉｎＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｗｈｉｃｈｐｌａｙｓａｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔＴＣＭＩｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　ｂａｒｃｏｄｉｎｇ；ｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅ；ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｅｎｅ；ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｅｎｅ；ｍｉｃｒｏｂａｒｃｏｄｉｎｇ；ｃｏｍｐｏｕｎｄｂａｒｃｏｄｉｎｇ［通信作者］　张国林，副主任药师，研究方向：药品检验及质量控制；Ｔｅｌ：（０５１２）６６０９０２２９，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｇｕｏｌｉｎ２００６＠１６３ｃｏｍ由于中药材种类繁多、来源复杂及市场利益的驱使，中药材品种混淆、掺伪现象时有发生。

分子标记-RAPD和ISSR

二、基于PCR技术的分子标记二、基于PCR技术的分子标记
随机扩增多态性DNA（随机扩增多态性DNA（Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD）、简单重复序列(Simple DNA，RAPD）、简单重复序列(Simple Sequence Repeat，）、简单重复序列 Repeat， SSR) 、扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length 扩增片段长度多态性(Amplified Polymorphism， Polymorphism，AFLP )、ISSR（ inter-simple )、ISSR（ intersequence repeat ）
ISSR DNA-PCR扩增结果（示例）：扩增结果（示例）：扩增结果
ISSR引物 U807对两种铁皮石斛的扩增结果
ISSR引物 U826对两种铁皮石斛的扩增结果
分子标记类型
现在的DNA标记技术已有几十种，主要有一下几大类。现在的DNA标记技术已有几十种，主要有一下几大类。标记技术已有几十种一、基于分子杂交的分子标记这类标记利用限制性内切酶酶切及凝胶电泳分离不同生物体的DNA分子然后用特异探针进行杂交，分子，生物体的DNA分子，然后用特异探针进行杂交，通过放射性自显影或非同位素显色技术揭示DNA的多态性的多态性。射性自显影或非同位素显色技术揭示DNA的多态性。（一）限制性片段长度多态性（Restriction Fragment 限制性片段长度多态性（ Length Polymorphism，RFLP） Polymorphism，RFLP）小卫星DNA（ DNA）（二）小卫星DNA（Minisatellite DNA）
RAPD (random amplified polymorphic DNA））

ISSR和SRAP标记技术在葫芦科植物种质资源研究中的应用

长盂慕（术）学版
一
１３一
ＪＯＵＲＬＯＦＣＨＮＡＡＮＧＪＡＮＶＩＧＥＧＥＡＢＥＴＬＳ
ＤＩ０３６／ｉｎ１０ — ５７２１．．３Ｏ：．８５ｊｓ．０１３４．０２００１．ｓ２０
ＩＳＳＲ和ＳＡ标记技术在葫芦科植物ＲＰ种质资源研究中的应用
出１８条带纹，中多态性带１４条．态比率为８其３多７％。康建坂等嗍用ＩＳ１运ＳＲ分子标记对４８个苦瓜
好、态性高、多无需知道ＳＲ靶标序列信息、复性Ｓ重
好、操作、捷方便、易快成本低等诸多优点。不足之处在于不同引物及不同材料间ＰＲ扩增反应最佳Ｃ
记方法。１１ＩＳ．ＳＲ分子标记
ｐｉｈｓｍ）都是基于ＰＲ标记系统的一种新型的显性Ｃ
基金项目：州省教育厅自然科学研究项目（０７８）贵２００２，
国家自然科学基金项目（９７９３３７００）蹇黎（９８）女，教授，士，究方向为生物化学与１７一，副博研
样品的遗传多样性进行研究，４个ＩＳ引物共扩１ＳＲ增出１１条带纹，中多态性谱带为ｌ３条，态８其１多
性比率为６．２０３％。张爱萍等［用ＳＡ９１采ＲＰ技术对西
条件可能不尽相同，很难区分显性纯杂合基因型。

论文简介模板定稿

大青叶SRAP扩增体系的建立与优化专业名称：制药工程学号：08580208 姓名：王亮指导教师：杨中铎职称：副教授摘要目的：建立并优化大青叶的SRAP-PCR扩增体系。

方法:先对单因素（酶浓度，dNTP浓度，引物浓度，Mg2+浓度）进行筛选，然后用正交实验确立最优体系。

结果：在50μL的反应体系中，,Taq 酶的浓度为 4 U, dNTP的浓度为 0.20mmol/L，引物的浓度为 0.60μmol/L，Mg2+的浓度为1.0 mmol/L 时SRAP-PCR反应体系带型清晰，稳定性好。

本研究建立的反应体系将为大青叶的种质资源鉴定及筛选与4（3H）喹唑酮含量相关的基因奠定基础。

关键词：大青叶；基因组DNA； SRAP分子标记Abstract：Objective: To establish and optimize the SRAP amplification system of Folium . methods : First, to design the single factor experiments ( enzyme concentration , dNTP concentration , primer concentration of Mg2 + concentration) , and then using the orthogonal experiment to establish the optimal system . Results: in total 50μL reaction system , the Taq enzyme concentration is 4 U , dNTP concentration is 0.20mmol / L , the concentration of the Primer is 0.60μmol / L and Mg2 + concentration is 1.0 mmol / L . Under this condition , the amplification pattern with rich polymorphism and clearband is obtained, and have a good stability. Establish the the Folium Optimizational amplification system , and the success of this experiment wil make the foundation for Folium the germplasm and screening and 4 ( 3H) quinazolinone high content related gene.Keywords: Folium Genomic DNA SRAP markers Orthogonal Optimization一、综述1.1 实验研究的背景大青叶是我国的传统中药，其味苦、性寒、归心、胃经。

分子标记技术

CAPACITY
RFLPs
HiSpeed sequ
DArT SNPs Multi-SSRs SRAP, TRAP SSRsAFLPs RAPDs
1985
1990
1995
2000
2 分子标记来源于DNA水平的突变
突变(Mutation)是指DNA水平的可遗传的变异，不
管这种DNA变异能不能导致可检测的表型或生化改变，突变产生的变异是自然选择的基础，可遗传的突变在群体中扩散从而产生多态性。
7. 近10年来，在人类基因组研究计划的推动下，分子标记的研究与应用得到迅速的发展。
分子标记的历史
第一代分子标记技术
RFLP （Restriction Fragment Length Polymorphism，限制性片段长度多态性）
第二代分子标记技术
RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA，
RFLP
原理：
DNA
限制性内切酶酶切
电泳
转移到硝酸纤维素滤膜
同位素或非放射标记（如地高辛等）的探针杂交
胶片放射自显影，显示酶切片段大小
RFLP的应用
1.遗传学图的构建结合RFLP连锁图，任何能用RFLP探针检测出的基因及其 DNA片段都可以通过回交，快速有效地进行转移。
2.基因定位利用RFLP技术能够准确地标记定位种质中的目标基因，结合杂交，回交及组织培养等技术就可以快速有效的将所需目标基因的DNA片段引入栽培品种中，实现品种改良。
都有害； ✓ 探针的制备、保存和发放也很不方便； ✓ 分析程序复杂、技术难度大、费时、成本高。
2.随意扩增多态性DNA标记—RAPD
Random Amplified Polymorphismic DNA

南昌大学植物生物技术期末考试重点

1.组织培养：是指通过无菌操作分离植物体的一部分接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。

继代培养：指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养物枯竭，水分散失，并已经积累了一些代谢产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养或传代培养。

2.单倍体培养：单倍体植物的主要特点是其孢子体细胞的染色体数目和配子体细胞染色体数目一致，因此可以从其“表型”观察“基因型”。

利用这一特点在杂交育种中可以提高选择效率，避免误选和漏选。

对单倍体植物进行染色体人工加倍之后，即可得到同质结合的纯系，使育成的杂种不再分离，缩短育种年限，加快育种速度。

3.悬浮细胞培养定义：将离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养步骤：选择外植体---诱导疏松易碎的愈伤组织---悬浮继代培养---悬浮细胞同步化---细胞计数与活力测定三个条件：分散性良好、均一性好、生长迅速特点：1）细胞可不断增殖，形成高密度的细胞群体，适于大规模培养；2）能够提供大量较为均匀的细胞，为研究细胞的生长、分化创造方法和条件。

4.花粉培养与花药培养一、从概念来看，花药离体培养是把花粉发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花药内花粉粒的发育程序，使其分裂形成细胞团，进而分化成胚状体，形成愈伤组织，由愈伤组织再分化成植株。

花粉离体培养是指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术，由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育而成的植株都是单倍体，且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。

二、从培养层次来看，花药离体培养属器官培养，花粉离体培养属细胞培养，但花药离体培养和花粉离体培养的目的一样，都是要诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。

三、从培养过程来看，花药离体培养相对较容易，技术比较成熟，但最后需要对培养成的植株进行染色体倍数检测；花粉离体培养尽管不受花药壁、药隔等二倍体细胞的干扰，但这种特殊单倍体细胞的培养技术难度较大，目前只在少数植物上获得成功。

ISSR和SRAP在山药遗传多样性分析上的应用比较

方面比较结果及ＳＲＡＰ标记和ＩＳＳＲ标记自身的特点，认为ＳＲＡＰ标记更适合用于山药遗传多样性分析。关键词：山药；ＩＳＳＲ；ＳＲＡＰ；遗传多样性
中图分类号：Ｓ６３２文献标识码：Ａ
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆＩＳＳＲａｎｄＳＲＡＰＭａｒｋｅｒｓＯｉｌｔｈｅＧｅｎｅｔｉｃＤｉｖｅｒｓｉｔｙＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｉｏｓｃｏｒｅａｅＩＩＱｉ — ｘｉａｎｇ～，ＨＵＡＳｈｕ — ｍｅｉ，ＬＥｌＦｕ－ｇｕｉ，ＣＨＥＮＺｈｉ — ｈｕａ，ＨＥＰｅｉ — ｚｈｅｎ，ＣＡＯＹｉ — ｙａｎｇ，ＺＨＯＵＪｉａｎ－ｊｉｎ（１＿ＳａｎｍｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｘｉａｎ，Ｆｕｊｉａｎ３６５０５ｌ；２．ＳａｎｍｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＢｕｒｅａｕ，Ｓａｎｍｉｎｇ，Ｆｕｊｉａｎ３６５０５１，Ｃｈｉｎａ）
个方面对１ＳＳＲ与ＳＲＡＰ揭示山药种质资源遗传多样性的差异进行分析。结果表明：ＳＲＡＰ标记的扩增谱带总数、平均扩增谱带数、平均多态性谱带数都远高于ＩＳＳＲ标记，遗传距离范围也比ＩＳＳＲ标记更广，但多态性比率差异不大；２种标记在检测遗传多样性和种群间的分化程度方面较为相似，二者结果均表明山药种质资源总的

分子标记技术在辣椒种子纯度检测中的应用

分子标记技术在辣椒种子纯度检测中的应用作者：杨中周来源：《中国瓜菜》2015年第03期摘要：种子的纯度是种子质量的重要指标，其对产量及品质均有直接而明显的影响。

辣椒种子纯度鉴定技术也由传统的主要依赖形态鉴定逐步发展形成集形态学鉴定、细胞学鉴定、蛋白及同工酶电泳鉴定和遗传标记鉴定等技术的鉴定技术体系，特别是基于DNA水平的分子标记技术为种子纯度鉴定提供了一个新的途径。

对用于辣椒纯度鉴定的几种分子标记技术的基本原理及应用进行了概述，并全面阐述了各自的优缺点，主要包括RFLP、RAPD、SCAR、SSR、ISSR、SRAP、SNP，旨在为辣椒分子纯度鉴定提供参考。

关键词：辣椒；纯度检测；SSR；ISSR；SNP近年我国辣椒种植面积有130万hm2之多，仅次于白菜类蔬菜；每年辣椒产量高达2800万t，总产值居蔬菜之首。

在当今辣椒生产中广泛使用杂交种，而在实际的制种过程中，由于父母本混杂、母本自交、外来花粉干扰等均影响到种子纯度进而影响辣椒的品质与产量。

传统的种子纯度鉴定主要以田间植株的叶形、长势、幼果鉴定为主，辅以苗期真叶POD同工酶电泳等方式。

前者耗时较长，投入成本较高，而且还常受天气等因素制约；后者虽然受外界因素影响小，鉴定准确可靠，但其谱带少，差异有限，不能够显示出不同品种基因型间的差异。

自1974年，Grodzicker等发明了RFLP（Re—striction Fragment Length Polymorphism，限带性内切酶片段长度多态性）技术以来，迄今已有20多种分子标记技术相继问世，部分已应用于农作物纯度的检测中。

1.限制性酶结合使用分子杂交技术的标记1.1RELP（Restriction fragment length polymor-phism，限制性内切酶片段长度多态性）技术这种基于酶切最早用于品种鉴定的第一代分子标记技术，主要通过DNA提取、限制性内切酶切割、琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳、southerri印迹杂交、放射自显影、与标准RFLP指纹比较分析等几个步骤对品种进行验杂。

SRAP和ISSR分子标记研究进展

SRAP与ISSR分子标记的研究进展摘要：SRAP与ISSR等分子标记技术已广泛应用到科研工作中。

本文简单的介绍SRAP与ISSR的原理、功能、应用以及对使用分子标记技术揭示生物菌的作用机理进行了展望。

DNA分子标记是指能反映生物个体或种群间基因组中某种差异特征的DNA片段，它能直接反映基因组DNA间的差异，是继形态学标记、细胞学标记及生化标记之后，近年来广泛应用的一种新的遗传标记。

近年来,随着DNA 标记技术的研究日渐成熟,其应用也日益广泛。

目前,各种分子遗传标记技术在科研中的应用已深入开展，为种质资源的鉴定、基因的定位与克隆、数量性状位点的遗传分析、遗传多样性评估、物种起源和分子标记辅助育种等遗传研究提供了有价值的工具。

目前常用的分子标记有RFLP、AFLP、RAPD、SSR、ISSR 、SRAP等。

1 SRAP分子标记的发展与应用1.1 SRAP分子标记的发展SRAP(Sequence-Related Amplified Polymorphism)即相关序列扩增多态性是一种基于PCR 的新型标记，由美国加州大学作物系Li和Quiros博士提出的序列相关扩增多态性(sequence-related amplifiedpolymorphism, SRAP)。

SRAP 技术是与RAPD 技术相似的一种标记技术，即SRAP 可用一对引物，但所用的引物是在SSR 的基础上设计的。

SRAP 标记原理是利用基因外显子里G、C 含量丰富，而启动子和内含子里A、T含量丰富的特点设计两套引物，对开放阅读框架进行扩增。

SRAP 技术是一种无需任何序列信息即可直接PCR 扩增的新型分子标记技术。

SRAP分子标记技术具有重复性强、简便、易于分离条带和测序、中等产量高、高共显性、便于克隆测序目标片段等特点,目前SRAP 标记已在植物遗传多样性检测、遗传图谱构建、重要基因定位、品种鉴定和种子纯度检测上得到了广泛应用，而在真菌界的应用相对较少。

利用RAPD和ISSR标记探讨我国茶树遗传多样性

利用RAPD和ISSR标记探讨我国茶树遗传多样性陈荣冰，林郑和，陈常颂，游小妹(福建省农业科学院茶叶研究所，福建福安 355000)摘要：利用RAPD和ISSR两种标记技术，分别对我国12个省(区)39个茶树种质资源进行遗传多样性检测和亲缘关系分析。

从供试的引物中筛选出具有多态性良好的RAPD引物20条，ISSR引物15条，对其39份茶树种质资源进行扩增。

结果表明：(1)20条RAPD引物共扩增出196条清晰的多态性条带，多态性条带比率为87.2%；15条ISSR引物共扩增到143条清晰的多态性条带，多态性条带比率为91.6%，ISSR检测出的多态性条带的能力优于RAPD。

(2) 基于RAPD分析的条带大小在300bp一3000bp之间，而ISSR条带大小在200bp一3000bp之间，故ISSR能检测到比RAPD 更多的遗传变异。

(3)虽然ISSR和RAPD的聚类分析结果存在一定的差异，对两种标记结果进行UPGMA聚类分析，还是呈极显著的正相关(r=0.842 )。

两种标记均能准确地把属原始类型的崇庆枇杷茶与英红1号与其它较原始类型与进化类型茶树种质资源区分开，聚类结果与传统经典分类相符，并揭示不同省区或同一省区不同地域的茶树种质资源的遗传差异与亲缘关系。

关键词：茶树；RAPD；ISSR；遗传多样性；亲缘关系Assessment of Genetic Diversity of Tea Detected byRAPD and ISSRCHEN Rong-bing LIN Zheng-he CHEN Chang-song YOU Xiao-mei(Tea Research Institute,Fujian Acaedemy of Agricultrual Sciences, Fu’an Fujian 355014,China)Abstract：RAPD and ISSR were used to detect the genetic diversity and relationships of thirty-nine tea germplasms from twelve provinces in china . A total of 20 RAPD primers and 15 ISSR primers were indentified with polymorphism among the primers. For RAPD markers, 196 polymorphic bands were produced and percentage of polymorphic bands(PPB) were (87. 2%). For ISSR marker, 143 polymorphic bands were generated, and PPB were 91.6%. Appearance,ISSR detection (91.6%) was higher than that in RAPD(87. 2%).Although the differences between the RAPD and ISSR dendrograms were observed. The significantly high correlation between RAPDs and ISSRs among 39 accessions was observed (r=0.842). Two kind of markers can accurately separate the primitive type Chongqingpipa and Yinhong 1 with other more primitive type and the evolution type tea. Molecular cluster results were obtained from RAPD and ISSR analysis, and they also matched well with the results of typical classification,and promulgated different provincial area or the identical provincial area but different region tea tree Genetic Variation and the relationship.Key words: tea tree；RAPD；ISSR；genetic diversity；relationships本研究采用RAPD和ISSR标记对我国12个省(区)39份茶树种质资源进行遗传多样性分析，其目的：(1)对比RAPD和ISSR在检测茶树种质资源遗传多样性时的效率和分辨力，评价它们在应用茶树居群遗传学和保护遗传学研究中的前景；(2)研究茶树种质资源DNA水平的遗传多样性的基础上，讨论我国茶树起源与进化。

具有拮抗关系的18个香灰菌株遗传差异性分析

具有拮抗关系的18个香灰菌株遗传差异性分析香灰菌（xianghuijun）是银耳（Tremella fuciformis）的伴生菌，对银耳的生长、发育具有至关重要的作用。

采用RAPD、SRAP和ISSR三种分子标记对具有拮抗关系的18个香灰菌菌株进行遗传差异性分析。

结果表明：8对RAPD引物共扩增出59个位点片段，多态性条带总共为49条，占总片段条数的比率为83%；7对SRAP引物共扩增出49个位点片段，多态性条带总共为47条，占总片段条数的比率为96%；6对ISSR引物共扩增出60个位点片段，多态性条带总共为50条，占总片段条数的比率为83%。

聚类分析表明，当以相异系数0.48为阈值时，可将这些香灰菌株分成7个类群：Hp.sp0006、TR柏溪、瓦坑野生、TR 枫树和TR8801枫树分别自成一个类群，Hp.sp0052和69为一个类群，其余11个（Hp.sp0004、Hp.sp0010、T0050、T0048、T0036、TR23、TR5、TR95、71、TR03和TR86）菌株归为一个类群。

香灰菌；RAPD；SRAP；ISSR在银耳（Tremella fuciformis）生长过程中，有一种真菌与其相伴生长，它与银耳的产量密切相关。

据杨新美描述，有一种灰绿色的淡色线菌及一种球壳菌经常与银耳伴随生长，认为它们和银耳产量有极其重要的关系[1]。

徐碧如在1966年分离获得香灰菌（xianghuijun）纯种，在研究银耳与香灰菌的关系时发现：银耳单独接种于木屑培养基中或段木上，均不出耳，而把银耳与香灰菌混合接种在上述两种培养基上，均可出耳[26]。

杨新美等通过分别测定银耳和其伴生菌的胞外纤维素酶的活性，认为银耳与伴生菌的一些胞外酶具有显著的协同作用[7]，黄年来的研究发现银耳菌丝几乎没有分解纤维素和木质素的能力，基本上也不能利用淀粉[89]。

由此可知，香灰菌在银耳的生产过程中起着重要作用。

黄年来认为香灰菌菌种可能有3～4个种[89]；谢宝贵等[10]和温文婷等[11]通过对国内主栽香灰菌的ITS分析，认为这些香灰菌都属于Hypoxylon stygium （2005年更名为Annulohypoxylon stygium[12]）。

作物遗传育种论文题目选题参考

作物遗传育种论文题目一、最新作物遗传育种论文选题参考1、分子标记及其在作物遗传育种研究中的应用2、RAPD分子标记及其在作物遗传育种中的应用3、分子标记在作物遗传育种中的应用4、SRAP标记在蔬菜作物遗传育种中的应用5、硝酸还原酶与氮素利用的关系及其在作物遗传育种中的应用(综述)6、染色体片段导入系在作物遗传育种研究中的应用7、分子标记在作物遗传育种中的应用进展8、激光在农作物遗传育种上的应用9、RNAi技术及其在作物遗传育种中的应用10、同工酶电泳技术在作物遗传育种中的应用11、孤雌生殖及其在作物遗传育种中的应用12、植物14-3-3蛋白的功能及在作物遗传育种中的应用展望13、遗传标记的发展及分子标记在农作物遗传育种中的运用:Ⅰ遗传标记的…14、单倍体的产生途径及其在作物遗传育种中的应用15、分子标记在作物遗传育种中的应用16、一般配合力的遗传实质——个体遗传力及其在作物遗传育种中的应用17、DNA分子标记及其在作物遗传育种中的应用18、单核苷酸多态性及其在作物遗传育种中的应用19、生物技术在农作物遗传育种中应用的进展20、作物遗传育种中多元遗传分析的研究与应用二、作物遗传育种论文题目大全1、激光在作物遗传育种中的运用2、QTL定位在作物遗传育种上的应用3、作物遗传育种硕士学位论文引文分析4、染色体片段导入系在作物遗传育种中的应用5、荧光原位杂交在作物遗传育种研究中的应用6、二项分布在作物遗传育种上的一些应用7、AFLP技术的改进及其在热带作物遗传育种中的应用8、相关序列扩增多态(SRAP)及其在农作物遗传育种中的应用9、分子标记在茄科蔬菜作物遗传育种研究中的应用10、作物遗传育种工程技术11、作物遗传育种理论发展与前景展望12、相关序列扩增多态(SRAP)在农作物遗传育种中的应用13、近15年国家自然科学基金稻、麦类作物遗传育种领域项目申请情况分析14、遗传标记的发展及分子标记在农作物遗传育种中的运用:Ⅱ分子标记在农…15、RAPD技术及其在农作物遗传育种中的应用16、双列杂交在作物遗传育种中的应用17、科研与教学相互促进,全面提高作物遗传育种学教学质量18、遗传标记技术研究进展及在农作物遗传育种中的应用19、湖南农业大学作物遗传育种专业研究生学位论文分析20、CRISPR/Cas9基因组定向编辑技术的发展与在作物遗传育种中的应用三、热门作物遗传育种专业论文题目推荐1、差异蛋白质组学在作物遗传育种中的应用前景2、作物遗传育种研究进展Ⅱ.作物有利基因鉴定和等位基因发掘3、作物遗传育种研究进展Ⅲ.作物基因工程与基因组编辑4、作物遗传育种研究进展Ⅴ.表型选择与基因型选择5、作物遗传育种研究进展Ⅳ.双单倍体育种与反向育种6、作物遗传育种研究进展Ⅰ.作物驯化7、作物遗传育种研究进展 I.作物驯化8、单核苷酸多态性在作物遗传育种中的研究9、同工酶在作物遗传育种中的应用10、生物技术在作物遗传育种中的应用11、《作物遗传育种原理》教学改革与建设12、欧洲牧草、草坪草与饲料作物遗传育种研究进展13、Single Nuleotide Polymorphism (SNP) and its Applications in Crop Genetics and Breeding植物的单核苷酸多态性及其在作物遗传育种中的应用14、国内外作物遗传育种动向15、内蒙古大青沟残遗森林植物群落与西辽河流域造林问题的初步探讨16、积极开展作物遗传育种理论研究17、作物遗传育种视野下的我国循环农业发展研究18、遗传学及作物遗传育种系列课程综合性改革与实践19、农学专业作物遗传育种类课程教学改革初探20、无融合生殖在作物遗传育种中的应用问题探讨四、关于作物遗传育种毕业论文题目1、作物遗传育种2、作物遗传育种3、作物遗传育种4、ISSR标记技术及其在作物遗传育种中的应用5、遗传标记的发展及分子标记在农作物遗传育种中的运用Ⅰ遗传标记的发展及分子标记的检测技术(续)6、分子标记及其在作物遗传育种中的应用7、SSR标记及其在作物遗传育种中的应用8、植物的单核苷酸多态性及其在作物遗传育种中的应用9、AFLP分子标记及其在作物遗传育种中的应用与前景10、SSR分子标记在作物遗传育种中的应用11、SSR分子标记在作物遗传育种中的应用12、作物遗传育种研究进展及发展趋向13、DNA分子标记及其在作物遗传育种中的应用14、遗传标记的发展及分子标记在农作物遗传育种中的运用Ⅱ分子标记在农作物遗传育种中的运用及原理15、AFLP技术在蔬菜作物遗传育种研究上的应用16、DNA分子标记及其在作物遗传育种中的应用17、分子标记的种类及其在作物遗传育种中的应用18、反转录转座子标记及在作物遗传育种中的应用19、分子标记技术及其在作物遗传育种研究上的应用20、分子标记及其在作物遗传育种中的应用五、比较好写的作物遗传育种论文题目1、ISSR分子标记技术在作物遗传育种中的应用2、农林高校园艺作物遗传育种学教学的实践与思考3、印度禾谷类作物遗传育种研究4、SNP的检测方法及其在农作物遗传育种中的应用5、RAPD技术及其在热带作物遗传育种研究中的应用6、作物遗传育种重点学科建设的探索与思考7、矮化水稻培育的先驱中国科学院院士作物遗传育种和教育学家卢永根8、AFLP分子标记技术及其在园艺作物遗传育种中的应用9、DNA分子标记在瓜类作物遗传育种中的应用10、农科研究生教育管理的新尝试——作物遗传育种专业研究生教育和学位授予质量检查评估初步实践11、高职院校《作物遗传育种》课程教学改革的研究12、怎样教好作物遗传育种精品课13、关于召开2007年全国作物遗传育种学术研讨会的预备通知14、基因自组织与作物遗传育种15、Tilling技术及其在作物遗传育种学中的应用16、我国作物遗传育种学科的发展现状与“十三五”发展重点17、多元遗传在作物遗传育种中的应用18、2003年全国作物遗传育种学术研讨会在安徽合肥举行19、关于设置农作物遗传育种专业的几个问题20、地方高校重点学科建设的探索与实践——以宜春学院作物遗传育种学科为例。

89_份香蕉种质资源SRAP_分子标记亲缘关系分析

热带作物学报2024, 45(4): 703 711Chinese Journal of Tropical Crops89份香蕉种质资源SRAP分子标记亲缘关系分析周海琪，夏玲*，吕顺，曾莉莎，王芳**，黄晓彦，陈东仪，刘文清，梁少丽，刘丽琴东莞市农业科学研究中心，广东东莞 523000摘要：香蕉分类是一个难题，利用形态学特征进行分类已无法满足需要。

分子标记技术逐渐被应用到香蕉品种（系）的种群鉴定与分类、亲缘关系分析和遗传多样性研究等方面。

本研究采用SRAP分子标记技术对89份香蕉种质资源的亲缘关系进行分析。

利用10对正反引物两两组合成100对引物组合，从中筛选出扩增条带易于识别、带型清晰、多态性高的13对SRAP引物，共扩增出170条可辨认条带，平均每对引物扩增13.08条，其中表现出多态性的条带有140条，多态性比率为79.00%。

89份香蕉种质资源的相似系数的变化范围在0.241~1.000之间，遗传多样性非常丰富，来源于同一个地方或者来源不同地方的同一类型的野生蕉的相似性系数较高。

当相似性系数为0.49时可以将这89份香蕉资源分成六大类，包括香牙蕉、贡蕉和龙牙蕉为主的第一大类（AAA、AA、AAB基因型），粉大蕉、粉蕉和BB类野蕉为主的第二大类（ABB、BB基因型），大蕉、阿宽蕉类野蕉为主的第三大类，以及红花蕉、地涌金莲、蝎尾蕉分别所属的第四、五、六类群。

其结果与现行的经典分类结论基本一致，只有部分香蕉种质分类地位有差异，说明用SRAP 标记对香蕉种质资源进行分类是可行的。

同时，栽培类香牙蕉、贡蕉和龙牙蕉具有相同的祖先，与AA基因型野蕉亲缘关系近，粉蕉、粉大蕉与BB基因型的野蕉亲缘关系较近，不同基因组的香蕉种质资源聚到一起，说明香蕉种质资源的起源影响后代的亲缘关系，单一的分类方法无法将香蕉种质资源完全区分。

此外，大蕉与阿宽蕉亲缘关系较近，但是无法分辨大蕉是否含有A和B基因组，因此大蕉基因型和遗传背景有待进一步研究。

山核桃SRAP体系的建立及与RAPD和ISSR标记的比较

３１３０，Ｚｈｊａｇ，Ｃｉａ０１ｅｉｎｈｎ）
ＡｂｔａｔＩｒｅｏｈｖｏｄｍｏｅｕａｒｅｏｒｆｃｎｅｅｔｇｎｔｃａａｔｒｔｓｏｉ ’ ｎｓｒｃ：ｎｏｄｒｔａｅａｇｏｌｃｌｒｍａｋｒｔｅｅｔｉｈｒｎｅｅｉｈｒｃｅｉｉｆＬｎａｌｃｓｃ
（江农林大学亚热带森林培育同家重点实验室培育基地，浙江临安３１０）浙１３ｏ
摘要：以山核桃Ｃｃｔａｅｓ叭ｎａｙｎｉ因组Ｄｈ基ＮＡ为模板，对聚合酶链式反应（Ｃ体系各组分进行了梯度实验，优化ＰＲ）
３．４ｎａ３３ｋｔＤＮＡ聚合酶．０８．０ｍｇ．基因纽ＤＮＡ（上均为终浓度）反应条件为９Ｉ以。４℃预变性５ｍｉｎ；９ ℃ 变性４
３，３退火３，７０ｓ５０ｓ２℃ 延伸２ｍｉ，５个循环；９ｎ４℃ 变性３，５ ℃退火３，７０ｓ００ｓ２℃ 延伸２ｍｉ，３ｎ０个循环；７延伸８ｍｉ．４℃ 保存．反应时间比其他体系缩短了一半。从１０对引物中筛选出了适用于山核桃的引物１２ｃＣＩ１０５
中图分类号：￥６．；Ｓｌ．３６４１７８４文献标志码：Ａ文章编号：２９ —７６２１）３００ — ８０５０５（０１０ —５５０