乙肝疫苗的生产工艺精选ppt

无菌过滤
收取到的HBsAg除菌过滤， 即为纯品
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀，在共沉淀时，抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存 12个月，但当温度升高后，效力很快降低 。在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者 几个小时，非常不利于在室温下运输。为
了使疫苗的稳定性提高，可用冻干的方法 使之干燥。
乙肝疫苗的制备
• 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝 病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清 除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
阴离子交换柱层析 介质：DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液，使缓冲盐系 统的PH、离子强度和IEC平衡液一致 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱 再生程序层析
凝胶过滤柱层析 介质：Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。粗 细胞裂解物用0.2um中空纤维柱进行微滤。抗 原和大部分低分子量宿主细胞内含物通过滤 膜，细胞碎片被膜拦截。
滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分 子量宿主细胞内含物通过滤膜除去。
疏水柱层析 介质： Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析平衡液电导率相 等 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓 度解析、清柱再生程序层析
• 所有工艺设备可自动清洗、自动灭菌，有效地减 少了种种人为因素的干扰，确保生产稳定和质量 一致性。
蛋白质的分离ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ化
细胞破碎 微滤 超滤
发酵结束后，通过过滤或离心，使酵母与发酵 液分离，然后细胞通过高压匀浆机破碎，释放 出抗原。酵母的细胞壁较厚，比大肠杆菌难破 碎，可在高压匀浆机内施加几千个大气压力， 通过针形阀突然降压到零，使细胞破碎。在细 胞破碎前加入蛋白酶抑制剂以防抗原被分解。
再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上。
乙肝疫苗的制造工艺
• 1.目的基因的获取 • 2.工程菌的构建 • 3.目的基因的表达 • 4. 蛋白质的分离纯化
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点
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• 基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原 （HbsAg）亚单位疫苗，它系采用现代生 物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进 行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO 细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养 这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表 面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一
系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，
临床应用
• 乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规 模应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严 重不良反应的报道，只有少数人出现接种部位红 肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、 乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反 应，多于1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血 源性的，在制备过程中纯化与灭活程序十分严密， 故不会产生像破伤风等动物血清疫苗可能造成的 过敏反应，也不会感染上乙肝、艾滋病及其他传 染性疾病。与其他疫苗同时接种亦未出现相互干 扰作用。因此，可以说，乙肝疫苗是安全可靠的 预防疫苗，注射前也不必皮试。
①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子
②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化;
③具有重组基因的高效 扩增和表达能力;
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进 行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工
生产工艺控制
• 基因工程乙肝疫苗的生产工艺包括发酵、提取、 纯化、吸附、配制、分装等工序。
• 生产工艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动 控制，提供酵母菌最优生长条件，发酵后经过细 胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等 工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上