乙肝疫苗的生产工艺精选ppt
疫苗生产流程(ppt文档)
疫苗生产项目简介
一. 生产过程举例１：
发酵
纯化Ⅰ
纯化Ⅱ
灭活吸附
疫苗生产项目简介
二、生产过程举例２：
发酵 收集/灭活
加工
配制和灌装
安全/抑制有效病原体
安全/尤其产生不稳定病毒
去除杂质及所需产物特性相近 的外来物质
在辅助剂帮助下完成对大疫苗颗粒 的灭菌过滤滤
疫苗生产项目简介
• 无论一种疫苗在试验阶段是多么有效，但
点位布置:
理瓶1#；
B
灌装头2#
压塞3#；
冻干机4~5#；
0.5μ+5μ二通道, 28.3L/min,激光在线粒子计数.
采样头的安装方式
空调自控原理图
1.房间温度控制 2.房间湿度控制 3.房间压差监测 4.系统风量控制 5.高效压差报警 6.灭菌器\分装烘
洗线运行状态
FFU控制(群控方式)
连接方式：1台FFU控制器，分路网线连接现场FFU。 工作站在值班室实现控制每组FFU的启/停，无级调速，显示FFU的 运行状态及故障报警
疫苗车间自控组成
• 洁净空调自控系统 • 冷冻站自控系统 • 纯水自控系统 • 注射用水自控系统 • 在线粒子检测系统 • FFU控制系统 • 门禁监控系统 • 系统集成
自控框架图
自控网络结构
• INTERNET互联网 • 企业管理网(局域网LAN) • 工业控制网(单环工业以太网) • 现场总线(双DP,RS485 总线等型式)
如果其最终产品悬液不能稳定地储存和运 输，那么它的商业价值就会受限，面对这 一问题，人们开发了各种剂型，但目前常 用的，也是最有效的方法还是冻干，制药 企业可以将其运用到那些昂贵的、不稳定 的疫苗生物制品的生产中。
乙肝疫苗的制备工艺
乙肝疫苗的制备工艺嗨，朋友们！今天咱们来聊聊乙肝疫苗的制备工艺，这可真是个超级有趣又特别重要的事儿呢！咱们先得知道乙肝是个啥玩意儿。
乙肝啊，就像一个隐藏在身体里的小恶魔，悄咪咪地搞破坏，能让肝脏生病呢。
那为了把这个小恶魔赶走，乙肝疫苗就闪亮登场啦。
那乙肝疫苗是怎么来的呢？这就像是一场神奇的魔法之旅。
首先啊，要找到乙肝病毒这个“大反派”的关键部分。
你想啊，如果要打败敌人，得先了解敌人最厉害的武器是什么吧。
对于乙肝病毒来说，它表面有一种特殊的蛋白质，就像是它的“招牌”一样。
科学家们就像聪明的侦探，专门盯着这个“招牌”。
然后呢，就要想办法大量制造这个特殊的蛋白质。
这可不容易啊，就像你要复制一个超级复杂的艺术品一样。
科学家们有一种办法，就是利用基因工程技术。
这技术可牛啦，就好比是一个神奇的复印机，但是它复印的不是普通的纸张，而是生命的密码。
他们把含有乙肝病毒表面蛋白基因的片段取出来，然后放到一个小细胞里面。
这个小细胞就像一个小小的工厂，接到这个特殊的任务之后，就开始马不停蹄地生产乙肝病毒表面蛋白啦。
我有个朋友叫小李，他对这个特别好奇。
他就问我：“那这个小细胞怎么就这么听话呢？”我就跟他说啊，这就像是你给了小机器人一个指令，这个指令就是基因，小细胞就按照这个指令去做啦。
而且啊，科学家们还得像精心照顾小婴儿一样照顾这些小细胞，给它们合适的温度、营养啥的，这样它们才能好好工作，生产出足够多的乙肝病毒表面蛋白。
有了这些蛋白质之后呢，还不能直接就当疫苗用。
这就好比你做了一堆零件，还得把它们组装成一个完整的东西才行。
这个时候啊，要对这些蛋白质进行纯化处理。
纯化就像是一场大筛选，把那些杂质都去掉，只留下纯净的乙肝病毒表面蛋白。
这就像从一堆沙子里挑出金子一样，得特别仔细。
纯化之后的蛋白质啊，还得再加工一下，让它变得更稳定、更安全。
这就像是给一件珍贵的宝物加上一个保护罩一样。
这个过程需要用到一些特殊的化学物质，但是这些化学物质都是经过严格筛选的，就像选拔最优秀的士兵来保护这个宝物一样。
乙肝疫苗生物制品产品制备工艺流程
乙肝疫苗生物制品产品制备工艺流程英文回答：Production Process of Hepatitis B Vaccine Biologics.The production process of hepatitis B vaccine biologics involves several key steps to ensure the safety, efficacy, and quality of the final product.1. Cell Culture:Yeast cells (Saccharomyces cerevisiae) are used to produce the hepatitis B surface antigen (HBsAg), which is the main component of the vaccine.The yeast cells are genetically engineered to express the HBsAg protein.The cells are cultured in a bioreactor under controlled conditions to optimize HBsAg production.2. Purification:The culture broth containing HBsAg is harvested and purified through various steps, such as:Centrifugation to remove impurities.Ultrafiltration to concentrate the HBsAg.Chromatography to separate HBsAg from other proteins.3. Inactivation (for Inactivated Vaccines):For inactivated vaccines, the purified HBsAg is chemically inactivated using formaldehyde.Inactivation ensures that the virus is not capable of causing infection while retaining its immunogenic properties.4. Adjuvantion (Optional):Adjuvants can be added to enhance the immuneresponse to the vaccine.Common adjuvants used in hepatitis B vaccinesinclude aluminum hydroxide or AS04.5. Formulation:The purified HBsAg or inactivated HBsAg isformulated into the final vaccine product.Other components, such as preservatives, stabilizers, and buffers, are added to maintain the stability andefficacy of the vaccine.6. Filling and Packaging:The formulated vaccine is filled into sterile vials, prefilled syringes, or other appropriate containers.The containers are sealed and labeled with product information.7. Quality Control:Extensive quality control tests are performed throughout the production process to ensure that the vaccine meets the required standards of safety and potency.Tests include sterility testing, potency assays, and evaluation of physical and chemical properties.中文回答：乙肝疫苗生物制品生产工艺流程。
乙肝疫苗生产发展简介PPT
基因工程技术
01
利用基因工程技术，提高疫苗的产量和纯度。
新型佐剂的研发
02
开发新型佐剂，增强疫苗的免疫原性。
细胞培养技术
03
利用细胞培养技术，实现疫苗的连续生产。
疫苗生产的国际化合作与交流
国际合作项目
参与国际合作项目，共 同研发和推广乙肝疫苗 。
技术交流与转让
加强技术交流与转让， 促进疫苗生产的国际合 作。
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
新疫苗的研发方向
1 2
新型疫苗的研发
针对乙肝病毒变异株，研发更有效、更安全的疫 苗。
联合疫苗的研发
将乙肝疫苗与其他疫苗结合，减少接种次数，提 高接种率。
3
免疫策略的优化
研究更合理的免疫接种程序，提高疫苗的保护效 果。
疫苗生产技术的创新与突破
乙肝疫苗的重要性
控制乙肝传播
乙肝疫苗是预防HBV感染的最有 效方法，通过接种疫苗可以降低 感染风险，控制乙肝的传播。
预防慢性肝炎
接种乙肝疫苗可以预防慢性肝炎 的发生，避免因感染HBV而导致 的长期健康问题。
提高人口素质
乙肝疫苗的接种可以保护广大人 群，特别是儿童和青少年，提高 人口素质和健康水平。
乙肝疫苗生产发展简介
BIG DATA EMPOWERS TO CREATE A NEW
ERA
汇报人：可编辑 2024-01-11
• 乙肝疫苗的起源与背景 • 乙肝疫苗的生产技术 • 乙肝疫苗的生产现状 • 乙肝疫苗的未来发展 • 乙肝疫苗的安全性与监管
目录
CONTENTS
01
乙肝疫苗的起源与背景
中国疫苗生产现状
乙肝疫苗的生产工艺
市场需求与前景展望
01
随着人们对乙型肝炎认识的不断提高，乙肝疫苗的市场需求不 断增加。
02
同时，随着全球卫生事业的发展，乙肝疫苗的市场前景广阔，
具有巨大的发展潜力。
未来，乙肝疫苗将继续发挥重要作用，为人类健康事业做出更
03
大贡献。
02 生产工艺流程概述
原料选择与预处理
原料种类
选用高纯度、高效价的乙肝病毒表 面抗原（HBsAg）基因工程细胞株 或酵母菌作为生产原料。
数据统计与分析
对稳定性研究过程中产生的数据进行统计和分析， 评估成品的稳定性表现，为制定成品的储存和运 输方案提供依据。
05 设备选型和操作优化建议
关键设备选型依据和建议
疫苗生产工艺需求
根据乙肝疫苗的生产工艺流程，选 择能够满足工艺需求的设备，如发
酵罐、离心机、纯化设备等。
设备性能参数
考虑设备的生产能力、处理效率、 操作便捷性、自动化程度等性能参 数，确保设备能够满足生产要求。
开展资源回收利用
对生产过程中产生的可再生资源进行回收利 用，提高资源利用效率。
法规符合性检查清单
遵守国家法律法规和标准
确保乙肝疫苗生产过程符合国家相关法律法规和标准要求。
定期开展法规符合性检查
对生产过程进行全面检查，确保各项法规要求得到有效执行 。
及时整改不符合项
针对检查中发现的不符合项，制定整改措施并及时进行整改 ，确保生产过程的法规符合性。
原材料检验
对每批次的原材料进行检验，包括外观、纯度、微生物限度等指标， 确保原材料符合生产要求。
储存条件控制
对原材料的储存条件进行严格控制，避免潮湿、高温等不利因素对 原材料质量的影响。
生产过程监控指标设置
基因工程乙肝疫苗ppt课件
接种第三针。为达到最佳的效果，应按时全程接种。
接种乙肝疫苗的人群
• 处于HBV感染高度危险状态的易感者（未 感染过HBV的人）应接种乙肝疫苗。主要 包括： ①全部新生儿及幼儿园未接种过 乙肝疫苗的孩子； ②传染科、口腔科、 血液室、透析室和经常接触血液的工作 人员； ③新加入某一群体的人员，如新 入伍的战士、新入学的大学生； ④从事 食品服务行业者及保育工作人员； ⑤发 育障碍者，收容所中的患者和工作人员 ； ⑥血液透析患者； ⑦使用血液制品 者； ⑧器官移植前的患者；需长期应用 免疫抑制剂者； ⑨乙肝病毒携带者的家 庭接触者； ⑩注射毒品成瘾者；长期教 养机构中的犯人。
Bye bye~
部专门下发57号文件，具体部署用基因工程乙肝疫苗取代血源乙肝疫
苗事宜。
乙肝疫苗的制备
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点 ①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子 ②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化; ③具有重组基因的高效 扩增和表达能力; ④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进行 悬浮培养 ,表达fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利 于外源蛋白的后分离
自身无法克服的缺点：
•
其一，乙肝表面抗原携带者由于已感染乙肝病毒，在此情况下，
再抽取其血浆作为乙肝疫苗原料，对携带者的身体健康有损害；
•
其二，疫苗的生产受到乙肝病毒表面抗原携带者血浆来源和质量
乙肝疫苗制备.
1、发酵液的预处理连续高速离心，除去细胞残片，再超滤浓缩
2、疏水柱层析介质： Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析平衡液电导率相等按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓度解析、清柱再生程序层析
3、阴离子交换柱层析介质：DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液，使缓冲盐系统的PH、离子强度和 IEC平衡液一致按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱再生程序层析
4、凝胶过滤柱层析介质：Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
5、除菌收取到的HBsAg除菌过滤，即为纯品。
乙肝疫苗的制备工艺流程
乙肝疫苗的制备工艺流程
1、质量控制：检查原料的质量，购买进口原料和其他原料，确保都达到相应的标准和质量要求。
2、清洁和预处理：用冷水和乙醚清洗原料，确保每个原料进行灭菌消毒处理，以防止细菌污染。
3、蛋白合成：将原料分装，添加酵母质粒表达质粒，加入细胞培养基，在细胞中表达疫苗细胞抗原蛋白。
4、纯化：使用柱色谱技术、亲和层析技术和离子交换技术纯化所表达的疫苗细胞抗原蛋白，并中和疫苗以确保其安全性。
5、测试：对纯化后的疫苗进行完整性测试，药理学和生物学活性测试，以确保其质量和有效性。
6、制备：将疫苗粉碎，滤过，并加入合适的稀释剂，灌装成小瓶或注射剂，并加入象征性标签。
二、稳定性试验：
1、疫苗储存试验：将制备的疫苗存放在冰箱或冷冻库中，定期检查疫苗的有效性，确保其有效的储存寿命。
2、热稳定性试验：将疫苗置于特定的温度和时间内，确保其热稳定性，以验证疫苗的质量和安全性。
3、光稳定性试验：将疫苗放置于特定的光照频率和时间内，确保其光稳定性，以验证疫苗的质量和安全性。
三、打包：
将疫苗补充剂或稀释剂和疫苗注射剂装入专用容器内，并将疫
苗封入纸袋或封口瓶中，封口瓶应装有特殊标签，按照规定装入箱中，并装运到目的地。
乙肝疫苗的生产工艺讲解学习
临床应用
• 乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规 模应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严 重不良反应的报道，只有少数人出现接种部位红 肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、 乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反 应，多于1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血 源性的，在制备过程中纯化与灭活程序十分严密， 故不会产生像破伤风等动物血清疫苗可能造成的 过敏反应，也不会感染上乙肝、艾滋病及其他传 染性疾病。与其他疫苗同时接种亦未出现相互干 扰作用。因此，可以说，乙肝疫苗是安全可靠的 预防疫苗，注射前也不必皮试。
• 基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原 （HbsAg）亚单位疫苗，它系采用现代生 物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进 行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO 细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养 这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表 面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一
系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，
乙肝疫苗的制备ຫໍສະໝຸດ • 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝 病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清 除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
目的基因的表达
蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工
生产工艺控制
• 基因工程乙肝疫苗的生产工艺包括发酵、提取、 纯化、吸附、配制、分装等工序。
• 生产工艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动 控制，提供酵母菌最优生长条件，发酵后经过细 胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等 工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上
乙肝疫苗课件
免疫效果
母婴阻断
未同时使用HBIG，保护效果为95% 同时使用HBIG，保护效果达98%
青少年和成人
大于95%受种者
无应答和低应答 是否加强免疫 是否要筛查 孕妇 早产儿 意外暴露后
参考文献
夏宪照 罗会明. 《实用预防接种手册》.
谢谢！
接种部位为上臂三角肌肌内注射 不同国家生产的疫苗对注射对象的年龄要求不同
接种对象
免疫程序
3剂（第0、1、6个月） 血液透析者4剂（第0、1、2、6个月） 16岁以上人群有HepB接种史
≤10mlIU/ml 全程基础免疫 10~100mlIU/ml 加强1剂20ug ≥100mlIU/ml 不接种
国产HepB 啤酒酵母 CHO 汉逊酵母
进口HepB 啤酒酵母（安在时） 汉逊酵母（益可欣）
剂量和用法
啤酒酵母 CHO 汉逊酵母 进口HepB
新生儿和＜19岁 ≥19岁每次1.0ml 每次0.5ml（5ug） （10ug） ≤15岁每次1ml ＞15岁每次1ml （10ug） （20ug） 婴儿和成人每次均为0.5ml（10ug） ≤15岁每次0.5ml （10ug） ＞15岁每次1.0ml （20ug）
禁忌症
患急性或慢性严重疾病者 对疫苗已知的任何成分过敏者 发热暂缓接种
接种反应
一过性疼痛10%-20% 低热1.8% 上呼吸道症状1-2% 胃肠道症状1% 偶合晚发性维生素K缺乏 症（2周-3月龄新生儿）
注意事项
HepB不应皮下或皮内注射 HIV感染、血透和免疫缺陷的患者，初种后要 追加接种
乙肝疫苗生产发展简介 PPT
n80年代中期----基因工程乙肝疫苗（第二代乙肝
疫苗）。包括：
• 重组酿酒酵母乙肝疫苗，表达水平不理想—
50mg/L。5ug/0,5ml的成人剂量偏低，抗体滴度 偏低。
• 重组CHO细胞乙肝疫苗，表达水平低，2-5mg/L，
母婴阻断效果不理想
• 重组牛痘病毒乙肝疫苗。表达水平低，1-3mg/L，
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
9
• 10, 大连高新（汉信）生物制药有
限 公 司 从 1998 年 开 始 重 组 汉 逊 酵 母 乙 肝 疫 苗 的 研 制 工 作 ， 在 2002 年6月获得了国家药品监督管理局 颁 发 的 “ 新 药 证 书 ” ， 在 2003 年 开始商业化生产。
母总蛋白）
• 纯化收率：20% • 发酵罐工作体积：500L • 一次发酵所得抗原量：
50mg/Lх500L=25g
• 纯化后所得抗原量25gх20%=5g • 可生产疫苗量
5,000,000/5=1,000,000支
北京天坛和新乡华兰表达 水平和抗原产量的比较
汉逊酵母和啤酒酵母的比较
重组汉逊酵母的特点 （甲基营养型酵母）
无法实现工业化生产。
n90年代初期---重组汉逊酵母乙肝疫苗。更先进的
基因工程乙肝疫苗。
国外主要的乙肝疫苗生产厂家
国内主要的乙肝疫苗生产厂家
国内乙肝疫苗生产厂家工艺比较
• 华兰：菌种好，表达水平高，纯化
收率高，所以，总体而言，华兰公 司的技术更为先进。
• 基本技术资料： • 菌种：重组酿酒酵母 • 表达水平：50mg/L • 表达效率：1,35%(表面抗原蛋白/酵
• 8, 1989 年 北 京 生 物 制 品 研 究 所 与
基因工程法生产乙肝疫苗
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8
基因的表达
这是指宿主细胞在大量繁殖过程中外源DNA在 宿主细胞中的转录和翻译，表达生成的产物(蛋白 质)，最好在细胞内不被分解，而分泌到细胞外面 。表达产物若为较小的多肽，或是对细菌蛋白酶 极为敏感的蛋白质，形成后，通常即被迅速降解 。为了保证外源基因表达产物能分泌到细胞外而 不被降解，通常可以把外源基因插入在载体的某 些结构基因中间，在这种情况下，表达产物是融 合蛋白质，融合蛋白质可以抵抗内源蛋白酶的降 解，又可以在细胞信号肽的引导下分泌到细胞外 。最后，利用发酵工程培养重组与乙肝疫苗的工 程菌
目的基因克隆的筛选
即从大量携带有乙肝疫苗的重组体DNA分子的细胞中
分离出带目的基因的细胞。因为不是所有的细胞都能获得 重组体DNA分子，为了获得摄取了重组体DNA分子细胞，需 经筛选，才能将其与未摄取重组体DNA分子的细胞区别开 来，并作进一步鉴定。筛选含有重组体DNA分子细胞的方 法，一般都是以载体DNA及目的基因的遗传标记及分子特 征为依据，并结合受体细胞的基因表型而建立起来的。由 于许多质粒都具有抗生素等药物的抗性标记，因此，在含 有一定浓度抗生素的选择培养基上，可以很容易地把摄取 了重组体DNA分子，因同时也获得了抗生素抗性的细胞辨 认出来。但药物筛选只是一个方面，依据它只能判断质粒 载体是否进入了受体细胞，还不能确定受体细胞是否摄取 了含有目的基因的重组体DNA分子。
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目的基因克隆鉴定
对于乙肝疫苗的重组体DNA分子的鉴别，通常 是在抽提出重组质粒DNA后，用凝胶电泳法或电镜 观察其分子大小，用限制酶酶解，观察其酶切图 谱进行。还可采用菌落原位杂交法来进行鉴定， 即将菌落从最初生长的平板上转移到硝酸纤维素 滤膜上，用碱裂解滤膜上的菌落，使DNA分子游离 ，变性，并固定在滤膜上，随即用同位素标记的 与目的基因互补的DNA或RNA探针杂交，最后通过 滤膜的放射自显影鉴定菌落，并从最初生长的平 皿上挑选出放射自显影呈阳性的菌落。
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蛋白质的分离纯化
细胞破碎→固液分离→浓缩与初步纯化→高度纯化→成品加工
生产工艺控制
• 基因工程乙肝疫苗的生产工艺包括发酵、提取、 纯化、吸附、配制、分装等工序。
• 生产工艺中采用世界一流的发酵罐，通过全自动 控制，提供酵母菌最优生长条件，发酵后经过细 胞破碎和一系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等 工序，再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上
临床应用
• 乙肝疫苗自1979年问世以来，经过20多年的大规 模应用和观察，至今尚未见到有关注射后引起严 重不良反应的报道，只有少数人出现接种部位红 肿、硬结、疼痛、手臂酸重或发热、恶心、呕吐、 乏力、皮疹等与一般疫苗接种大致相仿的轻微反 应，多于1-3天内不治自愈。 由于乙肝疫苗属血 源性的，在制备过程中纯化与灭活程序十分严密， 故不会产生像破伤风等动物血清疫苗可能造成的 过敏反应，也不会感染上乙肝、艾滋病及其他传 染性疾病。与其他疫苗同时接种亦未出现相互干 扰作用。因此，可以说，乙肝疫苗是安全可靠的 预防疫苗，注射前也不必皮试。
无菌过滤
收取到的HBsAg除菌过滤， 即为纯品
氢氧化铝共沉淀
纯化后的抗原再与氢氧化铝共 沉淀，在共沉淀时，抗原吸附 在氢氧化铝上。
分装
疫苗的稳定性较差，一般在2~8℃下能保存 12个月，但当温度升高后，效力很快降低 。在37℃下，许多疫苗只能稳定几天或者 几个小时，非常不利于在室温下运输。为
了使疫苗的稳定性提高，可用冻干的方法 使之干燥。
细胞破碎后加入表面活性剂使抗原溶解。粗 细胞裂解物用0.2um中空纤维柱进行微滤。抗 原和大部分低分子量宿主细胞内含物通过滤 膜，细胞碎片被膜拦截。
滤液再进行超滤，此时抗原被膜拦截而低分 子量宿主细胞内含物通过滤膜除去。
疏水柱层析 介质： Butyl S Sepharose FF 加入适量硫酸铵，调节电导率与柱层析平衡液电导率相 等 按照平衡柱床、上样吸附、平衡液洗柱、降低硫酸铵浓 度解析、清柱再生程序层析
再经过疏水层析，可使产品抗原蛋白纯度 达99%以上。
乙肝疫苗的制造工艺
• 1.目的基因的获取 • 2.工程菌的构建 • 3.目的基因的表达 • 4. 蛋白质的分离纯化
目的基因的获取
编码乙型肝炎表面抗原的基因的获取
一般的目的基因的获取方法有：
反转录法 化学合成法
反转录—聚合酶链反应法
工程菌的构建
CHO(中国仓鼠卵巢）细胞的特点
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①具有准确的转录后修饰功能 ,表达的糖基化药 物蛋白在分子结构、 理化特性和生物学功能方面最 接近于天然蛋白分子
②具有产物胞外分泌功 能 ,便于下游产物分离纯化;
③具有重组基因的高效 扩增和表达能力;
④具有贴壁生长特性 ,且有较高的 耐受剪切力和渗透压能力 ,可以进 行悬浮培养 ,表达 水平较高;
⑤CHO 细胞属于成纤维细胞 (fibrob2last) ,很少分泌自身的内源蛋白 ,利于外源蛋白的后分离
• 基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原 （HbsAg）亚单位疫苗，它系采用现代生 物技术将乙肝病毒表达表面抗原的基因进 行质粒构建，克隆进入啤酒酵母菌或CHO 细胞（中国仓鼠卵巢细胞）中，通过培养 这种重组酵母菌或CHO细胞来表达乙肝表 面抗原亚单位。发酵后经过细胞破碎和一
系列微滤、超滤、硅胶吸附、洗脱等工序，
乙肝疫苗的制备
• 乙肝疫苗是用于预防乙肝的特殊药物。疫 苗接种后，可刺激免疫系统产生保护性抗 体，这种抗体存在于人的体液之中，乙肝 病毒一旦出现，抗体会立即作用，将其清 除，阻止感染，并不会伤害肝脏，从而使 人体具有了预防乙肝的免疫力，从而达到 预防乙肝感染的目的。接种乙肝疫苗是预 防乙肝病毒感染的最有效方法。
阴离子交换柱层析 介质：DEAE Sepharose FF HBsAg活性蛋白经Sephadex G-25柱脱盐换液，使缓冲盐系 统的PH、离子强度和IEC平衡液一致 按照平衡柱床、丄样吸附、氯化钠浓度梯度分段洗脱、清柱 再生程序层析
凝胶过滤柱层析 介质：Sepharose 4 FF 超滤浓缩到适当体积 按照平衡柱床、丄样、洗脱程序层析
• 所有工艺设备可自动清洗、自动灭菌，有效地减 少了种种人为因素的干扰， 微滤 超滤
发酵结束后，通过过滤或离心，使酵母与发酵 液分离，然后细胞通过高压匀浆机破碎，释放 出抗原。酵母的细胞壁较厚，比大肠杆菌难破 碎，可在高压匀浆机内施加几千个大气压力， 通过针形阀突然降压到零，使细胞破碎。在细 胞破碎前加入蛋白酶抑制剂以防抗原被分解。