生物物理3

normalized absorbance
wavelength of light fluorescence intensity spFRET data for reversible interactions
time
Weiss S. Science, 283(1999)1676
SPR传感器技术
质谱技术鉴定蛋白质相互作用复合物
生物信息学研究蛋白质相互作用网络
第一部分习题：
1. 为什么说蛋白质是生命活动最重要的物质基础？蛋白质元素组 成有何特点？ 什么是肽、肽链和肽键？ 什么是蛋白质等电点（pI）？聚赖氨酸（poly Lys）在pH 7时 呈无规则线团，在pH 10时则呈α-螺旋；聚谷氨酸（poly Glu）， 在pH 7时呈无规则线团，在pH 4时则呈α-螺旋，为什么？ 举例说明几个主要分离纯化蛋白质方法的原理？ 超速离心机的转速为58000 r/min时，（1）计算角速度，以 每秒的弧度表示，（2）计算距离旋转中心6.2 cm处的离心力。 （3）此离心力相当于重力“g”的多少倍？ 蛋白质的一级结构包含哪些内容？了解蛋白质一级结构对于认 识其高级结构有什么意义？ 蛋白质的二级结构是如何产生的？研究二级结构的意义？ 说明X射线用于解析蛋白质空间结构的原理。 简述Anfinsen实验主要内容及说明的问题。 蛋白质折叠问题为什么受到重视？它与疾病有什么关系？ 生物分子间的作用力主要有哪些，各有什么特点?蛋白质相互 作用的主要特点?
Koff 解离常数
=
Kon Koff
= K = 平衡常数（亲和力）
每个大分子上结合配体的平均数目：
= [PA] [P]+[PA]
=
K[P][A]
[P]+K[P][A]
=
K[A] 1+K[A]
二、一个大分子有2个配体结合点 每个大分子上结合配体的平均数目：
结合
[P] + [A]
结合 [PA] + [A] 结合 [P] + 2 [A]
物理化学角度
——反应原理
热力学平衡
热力学平衡
一、一个大分子有1个配体结合点
结合 [P] + [A] 解离 [PA] [P] + [A] 解离速率 = Koff [PA] 平衡时： Kon[P][A] = Koff [PA] [PA] [P][A] [PA] 结合速率 = Kon [P][A] Kon 结合常数
2. 3.
4. 5. 6.
7. 8. 9. 10. 11.
（二）DNA-蛋白质相互作用中的序列特异性 1、序列特异识别的结合能：依赖两种类型的相 互作用。一是多肽链与DNA大沟暴露的碱基之 间通过氢键和范德华力建立的联系；二是多肽链 中的碱性氨基酸与戊糖-磷酸骨架之间 的电荷联 系。 2、序列特异结合的结构基元：螺旋-转角-螺旋 （helix-turn-helix，HTH），锌指结构（zinc finger motif）
[PA] [PA2] [PA2]
K1 = 2 = K2 =
[PA] [P][A]
[PA2]
[PA][A]
[PA2]
[P][A]2
=
[PA]+2[PA2]来自百度文库
[P]+[PA]+[PA2]
=
K1[A]+2K2[A]2 1+K1[A]+K2[A]2
三、一个大分子有n个配体结合点
i Ki [A]i
i=1 n
蛋白质分子的运动—— 功能、相互作用
§10
蛋白质的相互作用
• 生物大分子发挥生理功能所需的三个条件：分子 结构、分子运动和变化以及分子间的相互作用。 • 一、生物大分子相互作用的力： • 1. 非共价键的作用；离子键、氢键、范德华力、疏水
键。信息的传递及利用极大地依赖弱的非共价键。它们 不仅决定着生物大分子的三维结构，还决定着这些结构 如何与其它结构相互作用。
• 基本原理：在靶蛋白与目标蛋白质经过特 异性相互作用后，用质谱技术对得到的蛋 白质复合体进行鉴定。 质谱技术：MALDI-TOF-MS LC-ESI-MS/MS
蛋白质芯片技术
蛋白质芯片, 又称蛋白质阵
列或蛋白质微阵列，是指以蛋白
质分子作为配基,将其有序地固
定在固相载体的表面形成微阵列； 用标记了荧光的蛋白质或其他它 分子与之作用，洗去未结合的成 分，经荧光扫描等检测方式测定 芯片上各点的荧光强度，来分析 蛋白之间或蛋白与其它分子之间 的相互作用关系。
HTH
HTH模体：最初 发现于λ噬菌体的阻 遏蛋白中，现发现 在很多原核及真核 DNA结合蛋白中存 在。由两个较短的α 螺旋与其间含Gly残 基的绞链组成。如 大肠杆菌的CAP蛋 白含一HTH结构域， HTH通过DNA双螺 旋大沟识别、结合 反向重复序列 TGTG/CACA
蛋白质相互作用的研究
——动态、直观
跟踪定位: 激光共聚焦显微术
荧光共振能量转移技术 （FRET）
energy transfer acceptor dye donor dye
donor dye acceptor dye absorbance emission absorbance emission
~2 to ~8 nm
i=0 n
=
Ki [A]i
其中 K0 = 1
生物学角度
——功能
酵母双杂交技术（1989）
酵母双杂交技术的基本原理
DNA结合结 构域(DNA binding domain, 简称 为BD) 转录激活结构域 (transcriptionactivating domain，简称 AD区)
生物物理角度
• 2. 作用力特点：分子的结合与解离；
二、蛋白质—蛋白质相互作用： 1、蛋白质之间相互作用的结构模式：通 过蛋白质的模体或基元（motif）或结 构域而发生相互作用 α螺旋和β片层参与的特定组合 β发夹 β拱形 β-α-β模体 α-α模体
三、DNA—蛋白质相互作用：
（一） DNA-蛋白质相互作用的化学键 1、氢键:具有识别功能蛋白质的螺旋结构常 与DNA的大沟相互作用。 2、疏水键：暴露于大沟侧缘的T-CH3基团 是疏水性的，可与疏水氨基酸残基侧链相互 作用。 3、离子键：