高效液相色谱法测定葡萄酒中的白藜芦醇
高效液相色谱法测定红葡萄酒中白藜芦醇的四种异构体
收稿日期： !""& )"’ )() 作者简介： 孙 * 狄， 男， 博士， 副教授， 主要从事微生物次生代谢产物及中草药化学成分研究， +),-.# ： /"01.)12#3-4205 ()& ’ 023’ 通讯联系人： 时卫萍， 62# ： （ "(" ） )!’*!")! ’
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孙 " 狄等： 高效液相色谱法测定红葡萄酒中白藜芦醇的四种异构体
! ! -液 （ 工 作 液） ： 用 吸 管 取 ? 液 ., ) (, 置 于 另 一个 .) (, 容 量 瓶 中， 放在户外阳光直射处 （ 如阴 ， 照射 $) (&* （ 注： 照 天也可用 %(. *( 紫外灯照射） 射时间不宜过长， 以防止光解副产物产生） ， 用甲醇 定容至刻度。立即将该工作液放入暗盒中供当天使 用。此液即为顺、 反异构体混合液。 ! ! $液 （ 缓冲液） ： 称取 柠 檬 酸 #. = ， 加 水 *) (, ， 用 A)B+ 调 至 7+ #%, ) ， 冷 却 后 用 水 定 容 至 #)) (, ， 备用。 ! $ %" 测定方法和步骤 ! ! （#） 用洗脱液 将 分 析 柱 充 分 平 衡。 （$） 取 @液 . ! , 进样， 平行进样两次。两 次得到 的反式 白藜 芦 醇的积分面积取平均值再乘 以 ! ， 即 为 # != 反 式 白 （%） 取 - 液 . !, 进 藜芦醇的积 分 面 积， 记 作 (! 。 样， 平行进样两 次。 两 次 得 到 的 反 式 白 藜 芦 醇 和 顺 式白 藜 芦 醇 的 积 分 面 积 分 别 取 平 均 值 再 乘 以 ! ， 分 别记作 ( ) 和 ( * 。 ! ! - 液 中 反 式 白 藜 芦 醇 的 相 对 含 量 为 () + (! C #)) : ， 顺式白藜 芦 醇 的 相 对 含 量 为（ # 1 ( ) + ( ! ）C #)) : ； # != 顺 式 白 藜 芦 醇 的 积 分 面 积 为 (* （ + #1 () + (! ） ， 记作 ( & 。 ! $ &" 样品测定 ! ! （#） 吸 取 # (, 葡 萄 酒 （ 汁） 置 于 #, . (, 27"
不同产地中试生产葡萄酒中白藜芦醇的含量测定
图１ 中试葡萄酒生产线图
1.3.2 中试生产葡萄酒含量测定
（1）色谱条件：Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm× 250 mm，5 µm），流动相为甲醇-水（40∶60），检查波长306 nm，体积流量1 mL/min，柱温30 ℃，进样量10 µL。
在上述色谱条件下按白藜芦醇计算理论塔
A
B
图２ 对照品（Ａ）和样品（Ｂ）的ＨＰＬＣ谱图
（2）对照品溶液的制备：精密称取白藜芦醇对照品适量，加甲醇制成1 mL/μg的溶液。
（3）供试品溶液制备：取本品10 mL，精密量定，滤过，滤液过微孔滤膜，作为供试品。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各l0 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件，以外标法计算含量。
（4）线性关系考察：精密量取白藜芦醇对照溶液配制成0.271 3、0.542 5、1.085、2.17、4.34 μg/mL，分别取10 μL注入高效液相色谱仪，进行白藜芦醇含量测定，以白藜芦醇酸峰面积A对白藜芦醇浓度C进行线性回归，线性回归方程：Y=78 520x+2 720.7，线性范围：0.271 3～4.340 0 μg ，相关系数r=0.999 9。
根据实验结果，白藜芦醇在0.2713～4.3400 μg范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
（5）精密度考察：取白藜芦醇对照品溶液 （1.085 μg/mL）10 μL注入高效液相色谱仪，连续进样6次，以白藜芦醇的峰面积计算，RSD为0.27%。
综述白藜芦醇
不同砧木葡萄组织中白藜芦醇含量的差异摘要：用HPLC 法测定由不同砧木嫁接的葡萄果肉、叶柄、种籽、叶片、果皮及果穗轴中白藜芦醇的含量, 发现葡萄各组织中白藜芦醇含量的差异很大。
其中葡萄果穗轴和果皮中的含量较高，其次是叶片、种子和叶柄，葡萄果肉中白藜芦醇含量最低，这一发现从而为应用优选砧木制作高白藜芦醇含量的葡萄酒, 进行为葡萄皮渣的综合利用提供了依据。
关键字:白藜芦醇、葡萄皮渣、果穗轴、高效液相色谱法、毛细管电泳法、气质联用法、薄层扫描法、示波分析法一、白藜芦醇的简介：目前，已知白藜芦醇及其衍生物存在于葡萄属、蓼属、桑树、花生、买麻藤、朝鲜槐等12科、31个属的72种植物中，然而就其含量而言，葡萄属、蓼属最高，并且人类日常生活中摄入白藜芦醇的方式主要有两种：一是饮用红葡萄酒、服药片和保健品等药用方式，二是来自于葡萄皮和葡萄籽以及中药虎杖等。
白藜芦醇（resveratrol, 3,4’,5-三羟基二苯乙烯），存在于葡萄、虎杖、花生、桑葚等许多植物中，其中葡萄，尤其是葡萄皮中含量较高，分子式为C14H12O3，相对分子量为228.25 。
它是葡萄属植物在抵御真菌侵染、机械、紫外线和臭氧等伤害时产生的植保素次生代谢产物，对人类健康特别是预防心血管疾病等方面具有显著功效。
白藜芦醇是一类在多种植物中存在的天然有机化合物，多以单体和其糖苷形式存在，每一种形式又存在顺、反两种异构体，故一般有4 种存在形式：顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇、顺式白藜芦醇苷和反式白藜芦醇苷,在自然界中主要以反式存在，为无色针状结晶，熔点为256℃~257℃，升华温度为261℃，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂。
从大量的研究结果发现，白藜芦醇及其糖苷异构体是生物活性物质，对人体具有保健作用[1] ，它是一种对人类健康有显著作用的天然活性物质，在国际上已引起了广泛的关注。
由于其特殊的保健功能而备受消费者的青睐。
据报道，白黎芦醇除了可以治疗皮炎、癣等过敏性急病外，还能降低血清和肝脏的脂质、减少血小板凝聚、预防动脉硬化、防止冠心病、保护肝脏。
高效液相色谱法测定葡萄酒中白藜芦醇的含量
２ ． ２方法精密度测量 对浓度为 １ ０ ￣／ ｍ Ｌ的标准溶液平行测定 ６次， 其相对标准偏差 为０ ． ０ ０ １ ７ ７ ９ ， 变异系数为 ０ ． １ ８％。说明本方法有较好的测量精度。 ２ － ３方法回收率 向葡萄酒样 品中加入 白藜芦醇， 加入后形成相当于 ２ ５ ｐ ￣ ｇ ／ ｍ Ｌ 和５ ０ ｇ ／ ｍＬ的两个 级别浓度 的样 品， 用 本法进 行测定 ，结果其 ８ ． ５ ％以上 。 ・ 量 的研究 ，国内相关报道 较少。本实验采用高效液相 色谱 法来测 回收率均达到 ９ 定 葡萄酒 中 白藜芦 醇的含量 。 表１ 白藜芦醇在葡萄酒中的回收 率 １ 实 验 部 分 １ ． １ 仪 器 及 试 剂 岛津 Ｌ Ｃ 一 ２ ０ １ ０ Ａ型高效液相色谱仪 ， 配紫外检测器 ， 色谱 工作
２ － ４ 白藜芦醇标准品及样 品测定 的色谱 图
撕 ＾ １ 盘 ● 芦 ■ 标 准 置 的 色 膏 舶
取上 述试 样，进高效液相色谱 仪进行分析 ，根据其峰 面积在
标 准 工 作 曲线 上 查 出 白藜 芦 醇 含 量 。 １ ． ３ ． ２ 结果计算 ：
Ａ
ｙ
—
一
Ｃ × Ｖ
站， 电子 天 平 （ ０ ． ０ ０ ０ １ ｇ ） 白藜芦醇标准溶液 ：白藜 芦醇为 中国药 品生物制 品检定 所标
准物 质 ， 准确称取 ０ ． １ ０ ０ ０ ｇ （ 精确 至 ０ ． ０ ０ ０ １ ｇ ） 白藜 芦 醇标 准 品于 １ ０ ０ ｍ Ｌ容量瓶 中，用 甲醇定 容至刻度，此标准 品浓度为 ｈ ｎ ｇ ／ ｍＬ ， 甲醇 、乙睛均为色谱纯； 水应 符合 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ６ ６ ８ ２一级水的标 准。 １ ． ２ 仪器条件
酿酒酵母对葡萄酒中白藜芦醇含量的影响研究_崔艳
生物工程白藜芦醇（Resveratrol），属多酚类物质，是用来抑制有害微生物及其在植物中的积累的小分子抗毒素[1]。
常以低聚物和高聚物的形式存在（如ε-Viniferin、α-viniferin和白蔹素ampelopsin A），具有抗癌、抗氧化、防衰老等作用[2]。
它有顺、反式糖苷和顺、反式醇4种形式[3]，研究发现在葡萄果实中它主要以糖苷及反式白藜芦醇存在[4]。
在葡萄酒中4种形式都有，含量受葡萄品种、酵母和工艺条件等影响[5-6]。
葡萄酒中白藜芦醇有3个来源：一是发酵期经果胶酶诱导和乙醇的浸出由果皮转移到酒体中的；二是由酿酒酵母代谢产生，如图1酵母通过盐酸苯丙醇胺途径合成了香豆酰辅酶A（可少量存在于果汁中，多在酿酒酵母中积累），它可以和存在于酿酒酵母中的丙二酸单酰辅酶A一起在白藜芦醇合成酶的作用下生成白藜芦醇[7]；三是苹-乳发酵过程中由一些白藜芦醇低聚物及黄烷和白藜芦醇的缩合单宁在β-葡萄糖苷酶作用下分解而来的[3]，Steynberg等发现葡萄科植物中并没有此类缩合物，说明不是由果浆而来，是酵母代谢积累的结果[8]。
故筛选具有合成香豆酰辅酶A和β-葡萄糖苷酶能力的酿酒酵母，研究酵母对葡萄酒中白藜芦醇的含量得影响是必要的。
苯丙氨酸↓解氨酶肉桂酸↓肉桂酸4-羟化酶对羟基肉桂酸↓辅酶A连接酶香豆酰辅酶A↓白藜芦醇合成酶丙二酸单酰辅酶A→白藜芦醇+4CoASH乙酰辅酶+4CO21材料与方法1.1材料与仪器1.1.1材料葡萄原料：产于天津宝坻葡萄基地的赤霞珠、梅鹿酿酒酵母对葡萄酒中白藜芦醇含量的影响研究崔艳，吕文，王娜，刘昱，刘金福（天津农学院食品科学系，天津300384）摘要：为了检测酵母菌对于葡萄酒中白藜芦醇含量的影响，以天津产区的不同葡萄品种为原料，分别用两种筛选出的本土酵母CS18、GS10和商用酵母QA23进行红、白葡萄酒的发酵。
采用高效液相色谱（HPLC）对酒中的四种白藜芦醇异构体进行了检测分析。
山葡萄酒中白藜芦醇含量的测定
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葡萄酒中白藜芦醇的分析
（ｃｏｌ ｉｔｃｎｌ ｙ ｓ Ｕｎｖｔｉ Ｌｉ ｔ ｕｔｙＷｕｉ ０６Ｃｈｎ） Ｓｈｏ ｏＢｏｅｈｏｏ ． （ ｉ ｓｔｏ ｇ Ｉｄｓｒ， ｘ ２４ ３， ａ ｆ ｇ Ｗａ ｅ ｙ ｆ ｈ ｎ １ ｉ
从 市场 卜 买来 １ ３种国产干红 ４种 十白葡萄酒 的测定结果 ， 如表 １－ －３所示 。
反式 顺式
Ａ ｀ １ ｅ
瓢
（） ３ 可看 出， 同产地葡 萄品种 酿造 ４ 从表 还 不 表 １ 不 同干 白葡萄酒 中 说 白攀芦醇的含量 的的干红葡萄酒 白黎芦 醇含量差 异显著 ， 明葡萄 （ ｇ． ｍ ／） １ 酒 中白黎芦醇的含量与产地之间的关系较大。这可 干 白２ 千自 ３ 干白 ４
表 ３ 不同产地 千红葡萄酒中
白慕 芦 醉 含 量
反式 ｛ 顷式
． 兑量
（ ｉ） ｍａｌ
戈 Ｊ 今
惠 ； ： ；
论
干红 ８ ０３８ ．１ ０ １４ ．２ ０４２ ．４
干红 ９ 下红 １ １红 １ ０ １十红 １ ２千红 １ ３ ４０
〔 ２ ） ４４
００ １ ０４７ ．５４ ．０
０２ ５ ．１
ｃｒｌｉ ｔｔ ｓ ｃｓ ｒ ｓ ｅ ｃｓ ｅ ｔ ｔ ｒｒ ｗｎ ｗｓ ｔ ｔｔｅ ｐｇｏ ｉ ａ ａ ｔｅ ｏ ｅｔｅ ｈ ｐ ｉ ． ｔ ａ ｓ ｉ ， ｃ ｅ ｉｄ ｅ ｉ ａ ｒａ ｄ ｈ ｇａｅ ｗｎ ｒ ａｄ ｒａｖ ｏ ｅｅ Ｆ ｈ ｍ ｐ ｅ ｔ ｏ ｎ ｎ ｄ ｅ ｅ ｅ ｏ ｒ ｒ ｇ ｎ ｈ ｅ ｏ ｅ ｅ ｈ ｎ ｙ ｌ ｅ
０ ４ ０ ３ ７ ０ ０ ５ ．３ ６ ０ ０ ９ ．１ ０
高效液相色谱同时测定葡萄酒中12种酚含量的研究
DOI ：10.13746/j.njkj.2018062基金项目：山西农业大学横向课题。
收稿日期：2018-03-18作者简介：田超（1987-），在读硕士，研究方向：葡萄酒酿造工艺。
通讯作者：侯红萍（1965-），教授，研究方向：食品与发酵工程。
优先数字出版时间：2018-05-29；地址：/kcms/detail/52.1051.TS.20180529.0839.003.html 。
高效液相色谱同时测定葡萄酒中12种酚含量的研究田超，侯红萍（山西农业大学食品科学与工程学院山西太谷030801）摘要：采用乙酸化水配合乙腈为流动相，建立一种能同时测定葡萄酒中包括白藜芦醇苷在内的12种单体酚的检测方法。
结果表明，在250×4.6mm ，5μm 色谱柱下，使用水-乙酸-乙腈为流动相。
进样量10μL ，柱温30℃，流速1.0μL/min 。
并采用梯度洗脱程序，在280nm 及320nm 检测波长下，单体酚分离有效，结果满意。
并以此方法对山西省内不同小产区出产的商品葡萄酒进行了单体酚检测。
关键词：葡萄酒；高效液相色谱；单体酚中图分类号：TS262.6；TS261.7；TS261.4文献标识码：A文章编号：1001-9286（2018）07-0065-05Simultaneous Determination of 12Kinds ofMonophenols in Grape Wine by HPLCTIAN Chao and HOU Hongping(College of Food Science and Engineering,Shanxi Agricultural University,Taigu,Shanxi 030801,China)Abstract :A new HPLC method for detecting the content of 12kinds of monophenols including polydatin had been developed.Satis-factory experimental results were obtained under the following conditions:250mm×4.6mm,5μm column used,gradient elution with acetonitrile-acid water as the mobile phase at 30℃,the flow rate was 1.0μL/min,the injection was 10μL,and the determina-tion wavelength was 280nm/320nm.In the experiment,the method was used for the determination of monophenols in grape wine produced in different regions in Shanxi.Key words :grape wine;HPLC;monophenols多酚类物质是葡萄酒的重要功能成分。
HPLC法测定葡萄酒中白藜芦醇的含量
HPLC法测定葡萄酒中白藜芦醇的含量柴菊华;孙晓伟;崔彦志;侍朋宝;朱凤妹【摘要】The content of resveratrol in 29 kinds of wines was determined by HPLC. The results showed that there was much cis-resveratrol in wines,the average content of eight dry red wine of single variety was 8.04 mg/L,the range of total resveratrol was between 1.29 mg/L-34.52 mg/L, and the content of dry red wine in Merlot was the highest. The average content of eleven dry white wine of single variety was 0.26 mg/L,the range of total resveratrol was between 0 mg/L-0.83 mg/L,and the content of dry white wine was obviously lower than dry red wines. The average content of 6 kinds of dry red wine made with flash release technology was 9.59mg/L,but the average content of control( traditional technology) was 4.39 mg/L,the content of resveratrol was increased by 118.45%.%利用HPLC法测定29种葡萄酒的顺反式白藜芦醇含量和总量，为研究开发高白藜芦醇葡萄酒提供理论依据。
葡萄酒中白藜芦醇含量的测定研究
落叶果树㊀２０２０ꎬ５２(４):２０－２２ＤｅｃｉｄｕｏｕｓＦｒｕｉｔｓ㊀㊀试验研究 ㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀ＤＯＩ:㊀１０.１３８５５/ｊ.ｃｎｋｉ.ｌｙｇｓ.２０２０.０４.００７㊀㊀葡萄酒中白藜芦醇含量的测定研究张庆田１ꎬ李清锋２ꎬ王延书３ꎬ毛福建４ꎬ刘雪丽５(１.山东省果树研究所ꎬ山东泰安２７１０００ꎻ２.东营市广饶街道农业综合服务中心ꎻ３.临沂市果茶技术推广服务中心ꎻ４.泰山景区红门管理区ꎻ５.泰山科学技术研究院)㊀㊀摘㊀要:采用高效液相色谱法分别测定了毛葡萄－１㊁毛葡萄－２㊁北国蓝㊁北国红㊁法国蓝５个葡萄品种(系)酿制酒中的白藜芦醇及其醇苷的含量ꎮ结果表明ꎬ葡萄酒中白藜芦醇主要以醇苷的形式存在ꎮ可能因气候原因ꎬ２０１７年的葡萄酒白藜芦醇总含量均高于２０１８年ꎻ适时晚采的酒样白藜芦醇总含量高ꎬ北国蓝葡萄酒的白藜芦醇总含量达到１０.９２ｍｇ/Ｌꎮ㊀㊀关键词:葡萄酒ꎻ白藜芦醇ꎻ白藜芦醇苷ꎻ高效液相色谱㊀㊀中图分类号:㊀Ｓ６６３.１㊀㊀文献标识码:㊀Ａ㊀㊀㊀文章编号:㊀１００２－２９１０(２０２０)０４－００２０－０３ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｇｒａｐｅｗｉｎｅｓＺｈａｎｇＱｉｎｇｔｉａｎ１ꎬＬｉＱｉｎｇｆｅｎｇ２ꎬＷａｎｇＹａｎｓｈｕ３ꎬＭａｏＦｕｊｉａｎ４ꎬＬｉｕＸｕｅｌｉ５(１.ＳｈａｎｄｏｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｏｍｏｌｏｇｙꎬＴａｉ ａｎꎬＳｈａｎｄｏｎｇ２７１０００ꎬＣｈｉｎａꎻ２.ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅＳｅｒｖｉｃｅＣｅｎｔｅｒｏｆＧｕａｎｇｒａｏꎬＤｏｎｇｙｉｎｇＣｉｔｙꎻ３.ＴｅａａｎｄＦｒｕｉｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＳｅｒｖｉｃｅＣｅｎｔｒｅｏｆＬｉｎｙｉꎻ４.ＨｏｎｇｍｅｎＭａｎａｇｅｍｅｎｔＡｒｅａｏｆＭｏｕｎｔａｉｎＴａｉꎻ５.ＴａｉｓｈａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ)㊀㊀Ａｂｓｔｒａｃｔ:ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌａｎｄｐｏｌｙｄａｔｉｎｉｎｆｉｖｅｋｉｎｄｓｏｆｇｒａｐｅｗｉｎｅｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ.Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｍａｉｎｌｙｅｘｉｓｔｅｄｉｎｔｈｅｆｏｒｍｏｆｐｏｌｙｄａｔｉｎ.Ｔｈｅｔｏｔａｌｃｏｎ￣ｔｅｎｔｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎ２０１７ｗａｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎ２０１８ꎬｐｏｓｓｉｂｌｙｂｅｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｃｌｉｍａｔｅ.ＴｈｅｔｏｔａｌｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｌａｔｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｗｅｒｅｈｉｇｈꎬａｍｏｎｇｗｈｉｃｈｔｈｅｔｏｔａｌｃｏｎｔｅｎｔｏｆＢｅｉｇｕｏ￣ｌａｎｗｉｎｅｒｅａｃｈｅｄ１０.９２ｍｇ/Ｌ.㊀㊀Ｋｅｙｗｏｒｄｓ:ｗｉｎｅꎻｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌꎻｐｏｌｙｄａｔｉｎꎻｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ收稿日期:２０１９－０２－２５基金项目:山东省重点研发计划(２０１９ＪＺＺＹ０１０７２７)ꎻ山东省农业科学院农业科技创新工程(ＣＸＧＣ２０１６Ａ０３)ꎻ泰安市农业良种工程(２０１７ＬＺ００６)ꎻ泰安市科技发展计划(２０１７ＮＳ００９７)ꎻ山东省重大科技创新工程项目(２０１８ＣＸＧＣ０２０８)ꎮ作者简介:张庆田(１９８１－)ꎬ男ꎬ山东新泰人ꎬ助理研究员ꎬ研究方向为果树资源评价与育种ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｚｑｔ１２３＿１９８１＠１２６.ｃｏｍ㊀㊀白藜芦醇(Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ)化学名称为芪三酚(３ꎬ４ꎬ５－ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙｓｔｉｌｂｅｎｅ)ꎬ有正式㊁反式白藜芦醇和正式㊁反式白藜芦醇苷[１－３]ꎬ在葡萄上主要积聚在叶片和果皮中ꎬ具有同样的生物活性ꎬ能抵御霉菌侵染㊁紫外线辐射以及化学损伤[４]ꎮ在肠道糖苷酶的作用下ꎬ白藜芦醇苷可分解为白藜芦醇[５]ꎮ现代药理实验证明ꎬ白藜芦醇具有抗炎㊁抗肿瘤㊁抗氧化㊁抗心血管疾病㊁抗血小板聚集㊁调节免疫㊁保护肝脏等药理作用[６－１０]ꎮ葡萄酒是人类摄入白藜芦醇及白藜芦醇衍生物的途径之一ꎮ白藜芦醇是检测葡萄酒品质的一个指标ꎬ葡萄酒中白藜芦醇主要以稳定的白藜芦醇苷形式存在ꎮ２０１７㊁２０１８年笔者采用高效液相色谱法分析了毛葡萄－１㊁毛葡萄－２㊁北国蓝㊁北国红㊁法国蓝５个葡萄品种(系)酿制酒中的白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量ꎬ为进一步对葡萄品种进行开发利用奠定基础ꎮ０２第４期张庆田等:葡萄酒中白藜芦醇含量的测定研究１㊀材料与方法１.１㊀试验材料葡萄酒:山东省果树研究所资源圃中毛葡萄－１㊁毛葡萄－２㊁北国蓝(图１)㊁北国红㊁法国蓝５个品种(系)分别自酿的葡萄酒ꎮ图１㊀北国蓝结果状㊀㊀试剂:无水乙醇㊁甲醇㊁石油醚(天津市光复科技发展有限公司ꎬ分析纯)ꎻ乙腈(天津市光复科技发展有限公司ꎬ色谱纯)ꎻ白藜芦醇标准样品(天津尖峰ꎬ纯度９９％)ꎻ反式白藜芦醇苷标样(贵州迪大ꎬ纯度９８％)ꎮ仪器:高效液相色谱仪(美国Ａｇｌｉｅｎｔ１２６０系列)ꎻＳＰ－ＫＱ－３００ＤＥ数控型超声波清洗器ꎮ１.２㊀白藜芦醇与白藜芦醇苷含量的测定酒样过滤进样ꎬ梯度洗脱ꎬ由Ａ相(超纯水)与Ｂ相(乙腈)混合过程中Ｂ相所占比例确定ꎮ梯度洗脱条件为:０~１０分钟内Ｂ相从５％线性增至１５％ꎬ１０~２０分钟增至３０％ꎬ２０~３０分钟增至５０％ꎬ３０~３５分钟增至１００％ꎬ３５~４０分钟降至５％ꎬ保持１０分钟ꎬ二极管阵列检测器(ＤＡＤ)检测波长为３０６ｎｍꎬ２８８ｎｍꎬ进样量１０μＬꎮ总白藜芦醇含量(ｍｇ/Ｌ)＝白藜芦醇含量ˑ２２８.２４/３９０.３８＋白藜芦醇含量(其中ꎬ白藜芦醇分子量为２２８.２４ꎬ白藜芦醇苷分子含量为３９０.３８)ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀白藜芦醇及醇苷的色谱曲线及其定量关系白藜芦醇及醇苷中存在双键ꎬ故存在正㊁反式异构体ꎮ在紫外线照射下反式白藜芦醇及醇苷可以等摩尔量地转化为正式异构体ꎬ并无其它产物ꎮ液相色谱采用时间定性ꎬ由标准品的出峰时间判定样品中目标物质的出峰时间ꎮ含量由峰面积通过线性关系计算而来ꎮ采用反式白藜芦醇及醇苷色谱峰面积减少的方法来定量研究正式白藜芦醇及醇苷的含量ꎮ吸取葡萄酒样１０μＬꎬ按色谱条件测定(图２㊁图３)ꎮ两图说明该色谱条件下标准品和样品中的目标物质可以得到很好地分离ꎬ从而较精确地计算含量ꎮ图２只展示北国蓝葡萄酿制酒的色谱图ꎬ另外４个品种毛葡萄－１㊁毛葡萄－２㊁北国红㊁法国蓝的都有各自的色谱图ꎬ都在同色谱条件下ꎬ标准品和样品中的目标物质可以得到很好的分离和精确的计算含量ꎮ图２㊀白藜芦醇及醇苷标准品色谱图图３㊀２０１７北国蓝酒样色谱图２.２㊀葡萄酒中白藜芦醇含量葡萄酒中白藜芦醇的含量受酿造品种㊁葡萄生长发育的地理环境和酿酒工艺等多种因素影响ꎮ如表１ꎬ供试５个葡萄品种酿制酒中的白藜芦醇苷含量均高于白藜芦醇含量ꎮ同一葡萄品种不同采收期酿制酒中的白藜芦醇含量不同ꎬ２０１７年晚采收１个月的北国蓝其酒样含量高达１０.９２ｍｇ/Ｌꎬ采收年份不同白藜芦醇含量也不同ꎬ所有品种均以２０１７年含量较高ꎬ这或许与该年度园区干旱有关ꎮ２０１８年的４个样品未检测到正式白藜芦醇ꎬ可能是因为正式白藜芦醇异构体光敏性强㊁极不稳定ꎬ会等量转换成反式白藜芦醇ꎮ１２落㊀叶㊀果㊀树第５２卷表１㊀葡萄酒样白藜芦醇与白藜芦醇苷含量测定结果年度酒样反式白藜芦醇苷(ｍｇ/Ｌ)正式白藜芦醇苷(ｍｇ/Ｌ)反式白藜芦醇(ｍｇ/Ｌ)正式白藜芦醇(ｍｇ/Ｌ)总白藜芦醇(ｍｇ/Ｌ)２０１７晚采北国蓝７.４５１０.７６０.１２０.１５１０.９２２０１７晚采毛葡萄－１５.６３７.４５０.１３０.１２７.９０２０１７北国蓝４.７７２.１４０.９５０.１１５.１０２０１７北国红３.６４２.７６０.３８０.１８４.３０２０１７毛葡萄－１３.０７２.８４０.１８０.２５３.８９２０１７毛葡萄－２３.９５１.８９１.０４０.１２４.５７２０１７法国蓝０.６４０.７９０.３９０.１３１.３６２０１８北国蓝１.６９１.６９９０.４７０.１６２.６１２０１８北国红１.０１２.２８０.２２－２.１４２０１８毛葡萄－１１.７２１.１９０.２３－１.９３２０１８毛葡萄－２１.６２０.９５０.１８－１.６８２０１８法国蓝０.８７０.９８０.２５－１.３３３㊀小结与讨论在自然界中ꎬ白藜芦醇存在于葡萄㊁虎杖㊁花生㊁桑椹等植物中ꎬ其中葡萄和葡萄加工品被认为是人类食品中白藜芦醇的最重要来源ꎮ白藜芦醇作为葡萄与葡萄酒一种重要的活性成分ꎬ是评价葡萄和葡萄酒的重要保健指标之一[１１ꎬ１２]ꎮ白藜芦醇主要以稳定的醇苷形式存在ꎮ大部分研究证明ꎬ白藜芦醇是植物对外界不良环境产生的一种应激物质ꎮ因此ꎬ葡萄酒白藜芦醇的含量高低与葡萄的生长环境㊁气候条件㊁采收年份㊁真菌感染等多种因素密切相关[１３ꎬ１４]ꎮ试验结果也验证了采收时期和年份对白藜芦醇含量有较大的影响ꎬ有必要进一步开展不同采收期对酒样品质及白藜芦醇含量的影响研究ꎬ确定最佳采收时期以提高酿酒品质ꎮ参考文献:[１]㊀冯永红ꎬ许实波.白黎芦醇药理作用研究进展[Ｊ].国外医药(植物药分册)ꎬ１９９６ꎬ１１(４):１５５－１５７.[２]㊀杨莹ꎬ管敬喜ꎬ谢太理ꎬ等.不同单品种葡萄酒中白藜芦醇以及白藜芦醇苷含量的研究[Ｊ].酿酒科技ꎬ２０１２(３):３０－３３.[３]㊀ＳｏｌｅａｓＧＬꎬＤｉａｍａｎｄｉｓＥＰꎬＧｏｌｄｈｃｒｙＤＭ.Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ:Ａｍｏｌｅｃｕｌｅｗｈｏｓｅｔｉｍｅｈａｓｃｏｍｅ?ａｎｄｇｏｎｅ?[Ｊ].ＣｌｉｎｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ１９９７ꎬ３０(２):９１－１１３.[４]㊀ＭｏｒｅｎｏＡꎬＣａｓｔｒｏＭꎬＦａｌｑｕｅＥ.Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆｔｒａｎｓ－ａｎｄｃｉｓ－ｒｅｓ￣ｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｒｅｄｇｒａｐｅｓｄｕｒｉｎｇｒｉｐｅｎｉｎｇ[Ｊ].ＥｕｒＦｏｏｄＲｅｓＴｅｃｈｎｏ１ꎬ２００８ꎬ２２７:６６７－６７４.[５]㊀舒友琴.葡萄酒中白藜芦醇及其糖苷异构体的快速测定方法研究[Ｄ].北京:中国农业大学ꎬ２００４.[６]㊀ＡｇｇａｒｗａｌＢＢꎬＢｈａｒｄｗａｊＡꎬＡｇｇａｒｗａｌＲＳꎬｅｔａｌ.Ｒｏｌｅｏｆｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌｉｎｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｈｅｒａｐｙｏｆｃａｎｃｅｒ:ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓ[Ｊ].ＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈꎬ２００４(２４):２７８３－２８４０.[７]㊀ＳｏｌｅａｓＧＪꎬＧｒａｓｓＬꎬＪｏｓｅｐｈｙＰＤꎬｅｔａｌ.Ａｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅａｎｔｉ￣ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｆｏｕｒｒｅｄｗｉｎｅｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ[Ｊ].ＣｌｉｎＢｉｏ￣ｃｈｅｍꎬ２００２(３５):１１９－１２４.[８]㊀ＷｈｉｔｓｅｔｔＴꎬＣａｒｐｅｎｔｅｒＭꎬＬａｍａｒｔｉｎｉｅｒｅＣＡ.ＲｅｓｖｅｒａｔｒｏｌꎬｂｕｔｎｏｔＥＧＣＧꎬｉｎｔｈｅｄｉｅｔｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓＤＭＢＡ－ｉｎｄｕｃｅｄｍａｍｍａｒｙｃａｎｃｅｒｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＪＣａｒｃｉｎｏｇꎬ２００６(５):１５.[９]㊀肖本熙ꎬ黄忆明.白藜芦醇对去卵巢大鼠骨密度的影响[Ｊ].营养学报ꎬ２００５(２７):５１０－５１３.[１０]㊀黄瑞民ꎬ张娟ꎬ李凯ꎬ等.宁夏干红葡萄酒中反式白藜芦醇的含量测定[Ｊ].华中师范大学学报(自然科学版)ꎬ２０１８ꎬ５２(５):６７３－６７７.[１１]㊀张静ꎬ范永ꎬ王振平.贺兰山东麓不同酿酒葡萄品种成熟期白藜芦醇含量的差异[Ｊ].北方园艺ꎬ２０１７(２２):３２－３６.[１２]㊀郑先波ꎬ申炎龙ꎬ史江莉ꎬ等.中国野生葡萄果皮和叶片白藜芦醇含量测定[Ｊ].果树学报ꎬ２０１６ꎬ３３(９):１０９２－１１０２.[１３]㊀段朝辉.中国葡萄野生种白藜芦醇含量分析的研究[Ｄ].陕西杨凌:西北农林科技大学ꎬ２００２.[１４]㊀柴菊华ꎬ孙晓伟ꎬ崔彦志ꎬ等.ＨＰＬＣ法测定葡萄酒中白藜芦醇的含量[Ｊ].食品研究与开发ꎬ２０１４ꎬ３５(２２):１０６－１１０.２２。
高效液相色谱_电化学检测测定红葡萄酒中白藜芦醇含量
I]IO O 线性范围 ’ 回收率 ’重现性和检测限 在 .J’[JJJO?F_D= 的浓度范 围内具有良 好 的 线 性 # 回 归 方 程 分 别 为 l 顺 m.[X.].n6 ...+*](#l 反 m[(\]Ino\*XX\].#l 为峰面积 #n 为 浓度 & 相关系 数
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高效液相色谱仪为 P$, (Q 系列 R日本 S
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宁夏葡萄酒中白藜芦醇含量的高效液相色谱快速测定_冯愈钦
宁夏葡萄酒中白藜芦醇含量的高效液相色谱快速测定冯愈钦，郭红艳，刘贵珊*，何建国，王松磊，贺晓光（宁夏大学农学院，宁夏银川750021）摘要：建立高效液相色谱法测定葡萄酒中白藜芦醇的方法，考察直接进样法的检测波长、洗脱强度、流动相pH 值、柱温、样品pH 值等因素对酒样分离的影响，建立HPLC 检测葡萄酒中白藜芦醇的方法，相关系数r 为0.9999，线性范围为1mg/L ~20mg/L ，精密度、稳定性、回收率试验的RSD 分别为1.16%、2.9%和1.25%，酒样检测发现白藜芦醇的含量随酒的年份和品种变化，品种间比较结果为：蛇龙珠最优，梅鹿辄、赤霞珠、霞多丽次之，贵人香最低，其中蛇龙珠含量高达6mg/L 。
关键词：白藜芦醇；高效液相色谱；回收率；葡萄酒Rapid Determination of Resveratrol in Ningxia Wine by High Performance Liquid ChromatographyFENG Yu-qin ，GUO Hong-yan ，LIU Gui-shan *，HE Jian-guo ，WANG Song-lei ，HE Xiao-guang（Agricultural College ，Ningxia University ，Yinchuan 750021，Ningxia ，China ）Abstract ：The effects of detection wavelength ，solvent strength ，mobile phase pH ，column temperature ，sample pH and other factors on the separation of wines were examined.A direct injection HPLC method for determina －tion of resveratrol in wine was established.The correlation coefficient r was 0.9999，linear range was 1mg /L-20mg/L ，RSD of precision experiment ，stability experiment and recovery experiment were 1.16%，2.9%and 1.25%respectively.It was found that resveratrol content of wines varied with years and varieties ，its changing law was ：Cabernet Gernischt was the best chioce ，Merlot and Cabernet Sauvignon and Chardonnay took second ，the last was Riesling.Resveratrol content in Cabernet Gernischt was up to 6mg /L.Key words ：resveratrol ；HPLC ；rate of recovery ；wine食品研究与开发F ood Research And Development2017年3月第38卷第5期DOI ：10.3969/j.issn.1005-6521.2017.05.033基金项目：国家自然科学基金项目（31401480）作者简介：冯愈钦（1992—），男（汉），硕士研究生，研究方向：食品加工与安全。
不同产地中试生产葡萄酒中白藜芦醇的含量测定
不同产地中试生产葡萄酒中白藜芦醇的含量测定作者：王娟黄洪媛王力王仕梅来源：《现代食品·下》2017年第05期摘要：目的是建立中试生产葡萄酒中白藜芦醇的含量测定方法。
方法系采用高效液相色谱法测定了白藜芦醇的含量，C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇∶水=40∶60，流速1 mL/min，检测波长306 nm，柱温30 ℃。
结果显示白藜芦醇与样品中其他组分分离效果较好，白藜芦醇在0.271 3～4.340 0 μg范围具有良好线性关系，相关系数r=0.999 9；平均回收率为94.6%，RSD为1.97%（n=6）。
结论为采用此法准确可靠，可用于该葡萄酒的质量控制。
关键词：葡萄酒；中试生产；不同产地；白藜芦醇；高效液相Abstract：To establish the method of determination of resveratrolin wines by pilot production. The content of resveratrol inwines were determined by HPLC. The separation was performed on C18 column with Methanol-Water （40：60） as the mobile phase. The flow rate was 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 306 nm and the column temperature was at 30 ℃. A satisfactory separation between resveratrol and impurity was obtained. The calibration curve was linear over the range from 0.271 3 μg to 4.340 0 μg， r=0.999 9；The average recovery was 94.6% ， and RSD was 1.97%（n=6）. The method was accurate and can be used for the quality control for those wines.Key words：Wine； Pilot production； Different producing areas； Resveratrol； HPLC中图分类号：TS262.6葡萄酒的质量与其各种风味物质有关，而它的风味物质即化学成分则来源于葡萄浆果，不同年份、不同地域等都会对葡萄酒的质量造成影响。
高效液相色谱法检测葡萄酒中的白藜芦醇及其糖苷异构体
２ ０ ｍ ｇ Ｌ 、 ０．０ ｍ ｇ Ｌ、 ． ０ ｍ ｇ Ｌ、８ ． ０ ｇ Ｌ 、 Ｏ．００ ／ ４ ００ ／ ６０ Ｏ ０ ／ ０Ｏ０ ｍ ／
检测 波长 ３６ｎ ０ ｍ。进 样量 ２ Ｌ ０ 。
２ ８
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商 品化标 样 出售 。反式样 品在 紫外 线照射 下几 乎能
够等摩尔转化为顺式样品 【 ４ 】 ，所以将反式标样溶液
置 于 紫外 线下照射 ，以产生 顺式异 构体 用于 实验 。 配 制浓 度 分 别 为 １０ ／ ０ｍｇＬ的反 式 白藜芦 醇和 反 式 白藜芦 醇 苷溶 液 ，在 其他 条 件 不变 的前提 下 ， 分 别 置 于 ２４ ｍ 和 ３ ６ｍ 紫外 灯 下 照射 ，于 不 同 ５ｎ ０ｎ 的 时 刻取 样 进 行 ＨＰ Ｃ分 析 ，测 定 顺 式异 构体 峰 Ｌ 面积 。发 现 无 论 是 白藜 芦 醇 还 是 白藜 芦 醇 苷 ，在 ２ ４ ｍ 下 的 转 化 速 度 均 高 于 ３ ６ｍ 时 的。 所 以 ， ５ｎ ０ｎ
检 测 葡萄 酒 中反 式 白藜 芦醇 、顺 式 白藜芦 醇、反 式 白藜 芦 醇苷和顺 式 白藜芦醇 苷 ４种 化
合物 。方 法 准确 、快捷 。
关键 词 高效 液相 色谱 白藜 芦醇 葡 萄酒 白藜芦 醇是一 类在 多种植 物 中存在 的天然 有机
２ 结果与讨论
２ １ 转 化波长 的选 择 ．
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现代仪器 （ ｗｗｗ． ｄ ｒ ｉｓｒ．ｒ ．ｎ ｍｏ ｅ ｎｎ ｔ ｏ ｇｃ ） ｓ
高效液相色谱法检测葡萄酒中 的白藜芦醇及其糖苷异构体
吴 迪 穆 怡 然 刘志 华 郭玲 玲 俞 然 吕宪 禹
葡萄酒中顺反式白藜芦醇异构体的反相高效液相色谱法测定
准偏 差在３ ６ ５ ２ 之间。采 本方 ． ％一 ． ％ ０ ４ 用 法测定国 龙 干红 萄 产“ 徽” 葡 酒中白 芦 葵 醇总量 达到６６ｍ － ， ． ｇ 一 其 ４ Ｌ’
中 ８％以上为反式异构体成分。 葡萄酒开启 ４ 和 ８ 后白葵芦醇总量分别减少了 １％和 ３％， ０ ｈ ｈ ８ ８ 其中反式白黎 芦醇糖昔的损失尤为严重。 本实验建立的 Ｒ 一 ＰＣ Ｐ Ｈ Ｌ 方法能够简便、 有效地检测葡萄酒中４ 种白黎芦醇异构体
１ 实验部分
１１ 仪器与试剂 ．
Ｚ一 型三用紫外分析仪， Ｆ工 上海顾村电光仪器厂， 工作波长分别为２ 和 ３６ 高效液相色谱仪 ５ ４ ６ ｎ。 （ ａ。公司６０ 型） 配备二极管阵列检测器（Ｄ ， ｅ Ｗｔ ｅ ０Ｅ ， ＰＡ Ｗ ｔ ａ二公司 ９６ ，Ｍｌｎｉ ３ 色谱工作站。 ９型） ｉ ｎ ｍ ２ ｌ ｕ ｅ
ｍｎｔ等人最早采用乙酸乙醋等有机溶剂萃取葡萄酒中 ａ ’ ｎ 白葵芦醇用于 ＨＬ 分析， ｉ ａｎ 的方法还曾经一度 ＰＣ Ｓｍｎ ［ ｅ ＇ ’ 被视为经典方法， 因此随后围绕白黎芦醇开展的大量研 究中都常常采用相类似的提取方法。但由于此方法溶剂
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葡萄酒萃取白藜芦醇高效液相色谱分离法论文
葡萄酒萃取白藜芦醇高效液相色谱分离法论文摘要：白藜芦醇的浓度应该在2.50-255.00μg/mL的时候和峰面积呈现出最佳的线性关系，其中体现出的精密度、稳定性和重复性的标准偏差都在0.76%本文。
由此判断，高效液相色谱分离分析法在葡萄酒萃取白藜芦醇中的应用效果显著，体现出广阔的发展前景。
中草药在国家已经拥有数千年的历史，属于民族的瑰宝，但是仍需要经过大量的研究推动中药产业的进一步发展。
白藜芦醇的化学分子式是C14H12O3，是非黄酮类多酚化合物，其相对分子质量是228.25，这是葡萄酒中的重要组成部分，因此有益于人体的健康。
野生刺葡萄中的白藜芦醇含量很高，同时这样的物质还具有良好的抗癌抗菌效能，发挥出优质的药理作用，受到了国内外学者的广泛关注。
白藜芦醇的化学结构具备反式和顺式两种构象，在自然界中的白藜芦醇主要是以反式构象为标准，这两种构象能够在一定条件下实现相互的转化，例如反式构象白藜芦醇经过紫外光照射之后可以及时转化为顺式异构体，这种顺式异构体的化学构象如图1所示。
高效液相色谱技术就是在液相和气相色谱法发展的基础上，诞生出的具有分离和检测能力的技术，发挥出简便、快速、灵敏的特点，推动了这项技术的应用与发展，逐渐在生物工程、食品监测、医疗制药等多种领域投入使用。
1 材料和方法1.1 仪器和试剂1.1.1 仪器Agilent1100系列的高效液相色谱仪器的色谱柱全部是从美国安捷伦科学技术公司引进，MILLI-Q超纯水纯化系统主要是从美国的Millipore公司引进，CSF-3A超声洗清器是从上海的超声波仪器厂购进。
1.1.2 试剂白藜芦醇对照品、甲醇、冰醋酸、双蒸水、Triton X-100、氯化钠、硫酸钠、碳酸钠、葡萄酒。
1.2 方法1.2.1 样品制备1.2.1.1 白藜芦醇对照品的配制称取50g的白藜芦醇对照品，然后适当的加入100毫升的甲醇溶液，经过配制成500毫克每毫升的标准储备液，然后运用百分之五十的甲醇溶液和标准的储备液不同比例进行混合，配制为不同浓度的对照品溶液。
高效液相色谱法测定葡萄酒中白藜芦醇含量的研究
图1 样品中白藜芦醇的色谱图
2.3 线性关系
分别精密吸取不同质量浓度的储备液注入液相色谱仪内，于上述色谱条件下分析、测定峰面积。
其中纵坐标、横坐标分别为峰面积、对照品溶液含量，分析后得到回归方程[3]：Y（葡萄酒白藜芦醇峰面积）=19970.67X-1182.13（X为葡萄酒白藜芦醇含量），线性相关系数r=0.9998。
葡萄酒中白藜芦醇在0.227～45.003μg范围内峰面积与各自含量保持着良好线性关系，其中分别利用3倍、10倍信噪比进行检测，结果检测限、定量限分别为0.0747、0.228μg/mL。
2.4 稳定性及加样回收率试验
取标准品溶液7.5μg/mL，参照2.1方法分别于0、1、3、5、8、12 h各进样10μL进行含量测量，共测量6次，分别记录峰面积[4]，结果显示白藜芦醇峰面积的相对标准偏差（RSD）值为2.25%，其在12 h内的稳定性均较好。
另取标准品溶液5份，分别加入7.5μg/mL 白藜芦醇标准品，参照2.1方法每次进样10μL，结
现代食品
XIANDAISHIPIN95
/
爱惜粮食，
颗粒归仓。
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韩雅珊
提 要
陈
雷
北京
戴蕴青
１０ ９） ００４
（ 中国农业大学食品学院
采用 －ｏｄｐｋ ８３９ｍ Ｂ ｎａａ Ｃ （． ｍ ３０ｍ ） １ ０ ｍ 色谱 柱， 体积分数 为 ４％的乙腈为流动 相 ， ０ 紫外 ３６ｎ ０ ｍ检
测，－ ｔ白藜芦醇和 ｃ白 － 藜芦醇的保留时间分别为７７ ｉ和８９ ｉ 回收率 ９．％ ７８ 最小检出限１ ． ｍｎ ． ｍｎ ， ０ ～９．％， ０ ０ μ／ 。 ｇＬ 检测 １种国产葡萄酒， 藜芦醇 １ 白 的质量浓 度从 １． 到 ９００ ｇＬ ００ ２． ／ 不等。 关键词 高效液相色谱法， 藜芦醇， 白 葡萄酒
Ｖ（ｃｔｎｔｉ ）： ｗａｅ ）＝４ ６ ．Ｔｈ ｒｔｎｉｎ ｓ ｔ ｎ －ｎ ｃ －ｅｖｒｔｏ ｗ ｒ ７ ７ｍｉ ａ ｄ ９ ａｅｏ ｉ ｌ ｒ ｅ Ｖ（ ｔｒ ０： ０ ｅ ｅ ｔ ｔ ｅ ｏ ｉ ｍｅ ｏ ｒ ｓ ｄ ｒｓｅａｒ ｌ ｅ ｆ ａ ａ ｉ ｓ ｅ ． ｎ ８ ｎ ．
（ ｅａｔｅｔ ｏ Ｆ ｏ Ｓｉ ｃ， ｈｎ Ａ ｒ ｕ ｕａ Ｕ ｉ ｒｉ ， ｅ ｉ ， ００４ Ｄ ｐ ｒ ｎ． ｆ ｄ ｅ ｅ Ｃ ｉ ｇｉ ｌ ｒｌ ｖ ｓｙ Ｂ ｉｎ １０９） ｍ ｏ ｃｎ ａ ｃ ｔ ｎｅ ｔ ｊｇ Ａ ｓ ａｔ ｅｖｒｔ ｌ ｍ ｃ ａｔ ｅ ｔｒ ｐｅｅｔ ｇ ｍ ｎ ｃｒ ｂｔ ｃ Ｒ ｓｅ ｒ ｉ ａ ｒ ｃｉ ｆ ｏ ｆ ｒ ｎｉ ｈ ａ ｃｎｅ．Ａ ｖｒ ｄ ａ ｈｇ ｐｒ ｒ ｒ ａ ｏ ｓ ｉ ｏ ｖ ａ ｃ ｏ ｒ ｖ ｎ ｕ ａ ｒ ｅ ｅ ｐ ｓ ｉ ｅ ｏ－ ｅ ｓ ｈ ｅ ｈ ｆ ｍ ｎｅ ｉ ｃｒｍ ｔｇａｈ ｍ ｔｏ ｆ ｔｅ ｅｍｎｔ ｎ ｒｓｅ ｔ ｌ ｒｐ ｗｎ ｗ ｓ ｅ ｐｄ Ｓｍ ａｃ ｌｕ ｈｏ ａｏｒ ｉ ｅ ｄ ｈ ｄｔ ｉ ｉ ｏ ｅｖｒ ｒ ｉｇａｅ ｅ ｄｖｌ ｅ． ａ － ｉ ｄ ｑ ｐ ｃ ｈ ｏ ｒ ｅ ｒ ａ ｏ ｆ ａ ｏ ｎ ｉ ａ ｅ ｏ ｐ ｓ ｒ ｅｔ ｔ ｂ ｅ ｙ ａｅ ｔ ａｄ ｓｅ ｗｔ ３ Ｎ Ｈ Ｏ ； ｆ ｒ ｙｒｔ ｗｔ Ｎ ２Ｏ ａｄ ｅ ｉ ｌ ｗ ｅ ｒ ｅ ｙ ｌ ｔ ｅ ｗ ｈｄ ｈ ａ Ｃ ３ ａｔ ｄｈｄａ ｄ ｈ Ｓ ４ ｄｉ ｎ ｅ ｅ ｘ ａ ｄ ｔ ｃ ａ ｎ ａ ｈ ｉ ％ ｅ ｅ ｅ ｉ ａ ｎ ｒ ｄ ｖｃｎ ａ ４ ａｕｍ ０℃， ｉ ｏｌ ｉ ａｅ ｎ ｒｅ ｔｅ ｄ ｉ ｓ Ｈ Ｌ ａａ ｓ ｗ ｒ ａ ｆｌ ｗ ： ｈ ｍ ｘ ｍ ｔ ｄ ｓｖ ｄ ｃｔ ｉｉ． ｈ ｃｎｉｏ ｏ Ｐ Ｃ ｌ ｉ ｅｅ ｏ ｏ ｓ ｔｅ ｉ ｓ ｅ ｎ ｏ ｔｌ ｏ ｔ ｎ ｆ ｎ ｙ ｓ ｓ ｌ ａ ｍｕ ａｓｒｔ ｎ ｏ ｔ ｎ－ ｓｅａ ｏ ａｄ － ｓｅａ ｏ ｗ ｒ ａ ３６ ａｄ ０ ｒｓｅｔ ｅ ． ｅａａ ｏ ｗ ｓ ｂｏｐｉ ｓ ｒ ｓ ｅｖｒｔ ｌ ｃ ｒ ｖｒｔ ｌ ｅ ０ ｎ ｎ ２ ｎ ｅｐｃ ｖｌ Ｓｐｒｔ ｎ ｏ ｆ ｒ ａ ｒ ｎ ｌ ｅ ｓ ｒ ｅ ｔ ｍ ８ ｍ ｉ ｙ ｉ ａ ａｈ ｖｄ ｔｅ ｅ －ｏ ｄｐｋ １ ｃｌ ｎ （ ．９ ｍｍ × ３ ０ ｍ ） Ｔ ｅ ｏ ｉ ｐ ａｅ ａ ｃｉ ｅ ｂ ｈ ｕ ｏ ｅ ｙ ｓ ｆ Ｂ ｎａａ Ｃ８ ｕ ｏｍ ３ ０ ｍ ． ｈ ｍ ｂｅ ｓ ｗ ｓ ｌ ｈ
１９ ７
Ｄ ｒｅｍｉａｉｎ Ｒ ｓｅａｒｌ Ｇ ａ ｅ ｉｅ ｅｔｒ ｎ ｔ ｏ ｅｖｒｔｏ ｉ ｒｐ Ｗ ｎ ｂ ｏ ｆ ｎ ｙ
Ｈ ｇ Ｐ ｒｏｍ ｎｅ ｕｄ ｒｍａ ｇａ ｈ ｉ ｅｆｒ ａ ｃ Ｌｑ ｉ Ｃ ｏ ｔ ｒｐ ｙ ｈ ｉ ｈ ｏ
Ｈａ Ｙａｈ ｎ Ｃ ｅｇ ｉ Ｄａ Ｙｕ ｑｎ ｎ ｓａ ， ｈ ｎ Ｌ ａ ｄ ｉ ｎ ｉｇ ｅ ｎ
太明显。 最后采用Ｊａｄｔ ３ ｅｎｅ等［的方法， 并加以修正。
取葡萄酒 １０ Ｌ 用 １０ Ｌ乙醇乙酯提取 ， ０ ｍ ， ５ｍ 用体积
Ｆｇ１ ｔ ｃ ｒ ｏ ｔ ｐ－ｅｖｒｔ ｌ ｉ ． Ｓｒ ｔ ｅ ｒ ｓｒ ｅａｒ ｕ ｕ ｆ ａ ｓ ｏ
分质 数
（ ）： ９ ５ １ ４ －２
量浓度进行了测定， 其质量浓度为１．～９００ ｇ ００ ２． ／ Ｌ差异较大， ， 但大部分在 １．～２． ｇＬ之间。 ００ ００ ／ 白
藜芦醇 的质量 浓度不 仅可能 与葡萄 的品种 、 葡萄 生 长环境 有关 ， 而且可能与酿酒技术有关 。 如红葡 萄酒 采用 带皮葡 萄发 酵 ， 白黎芦 醇在葡 萄皮 中的质量 而
分 离较 好 ， 与杂质有效地分离 。 并 ３２ ． 吸收 光谱 的选择
少血小板的凝集。Ｍｅｈ ｎ ｉ ｉ ｇ等１ ｃｎｅ ｓａ 在Ｓｉ ｃ 杂志中 ｅ 指出白藜芦醇的生物活性使其有希望成为人类预防
癌症 的一种天 然物 质 ， 它可 以抑制环 氧 合酶 及过氧 化氢酶催化合成 的产物诱导 的癌症 。 近年来 ， 白藜芦
为
３ ％サ
的
Ｎ
ａ Ｈ Ｃ Ｏ
溶
液
洗 吹 涤 樱
重 卣
蒸
馏
水
洗 吹 涤
至
Ｓ ｍｎ ２ ｉ ａｎ等［报道白藜芦醇可治疗皮炎、 ｅ 癣等
过敏性 病症 。Ｊａｄｔ ３ ｅｎｅ 等 则发 现它能 降低血 脂 ， 减
溶 液为 中性 ， 无水硫 酸钠脱水 ，０℃旋转 蒸干 ， 留 ４ 残
物用５０ ． ｍＬ乙腈溶解。此方法能使白藜芦醇的峰
３ ｅｎｅ Ｐ Ｂｓ ｓ ｅ ａ．Ａ Ｊ ｏ Ｖｔ ， ９５ ４ Ｊａｄｔ ｅｉ Ｒ ｌ ｍ Ｅ ｌ ｉ １９ ，６ ， ｓ ｔ ｎ ｉｃ
（ ） １４ １ ：－
４ ｅｅ Ｒ， ｏｔ ｔ Ｃ ｒｍ ｔｇ，１９ ，６：９－ Ｐ ｚｔ Ｐ ｎ Ｖ ａ ｅ ｌ ．Ｊ ｏ ａ ｒ ９４６３ １１ ｈ ｏ
浓度较 高 ， 因而 红葡 萄酒 中白藜芦 醇的质量浓度 普 遍 高于仅 以葡萄 肉汁发酵制成 的 白葡萄酒。此外 还
发 现 ， 葡 萄酒开 瓶后 白藜芦 醇的质量 浓度右逐 步 当
为３５ 另取样品５ 分别加入２２０ｇＬ标样 ．％。 份， ０． ／
１０ Ｌ 处理 同前 。其 回收率在 ９． ％～９． ％之 ．ｍ ， ００ァ ７８ 间， 准差 为 ３８ ， 标 ．８变异系数 为 ３１ ． ％。 ３５ ． 质量浓度与 峰高的线 性关系及检 出限 以 白藜 芦醇不 同质量浓 度标 准溶液进样 ， 到 得
下 降的趋势 ， 能与 白 芦醇易氧化的性质有关 。 这可 藜
综 上 所 述 ， 验 成 功 地 研 究 了用 ＨＰ Ｃ 测 定 葡 试 Ｌ 萄 酒 中 白藜 芦 醇 的 方 法 ， 对 我 国 生 产 的 红 、 并 臁 白葡 萄
酒 中的 白藜芦醇 的质量浓度进行 了测定 。试验为进 一步 提取 纯 白藜 芦醇 ， 制备 预 防癌 症和心血 管疾病 的天然 保健食 品打下 了基 础。 致谢 本课题承 蒙阎隆飞院士 的指教， 不胜感谢。
２ 实验部分
２１ ． 材料 与试 剂 、 器 仪
材料 红、 白葡萄酒共 １ 种， １ 均购自 北京市场。
试剂 乙酸 乙酯 、 乙腈 、 碳酸氢钠均 为 国产 分析
及反式白藜芦醇的蜂形大小相称且分离较好。
３３ ． 流动相 的选择 实 验开 始选 用 体积 分数 为 ５ ％的 乙腈 水溶 液 ５ 为流动相 ， 洗脱 时虽能出现 白藜芦醇 的峰 ， 分离效 但
ｍｉ ｒ ｐｃｖｌ Ｔ ｅ ｏｅｙ ｅ ｗ ｒ ９． ％－７８ ａｄ Ｃ ｗ ｓ ３ Ｄ ｔｃｏ ｌ ｉｗ ｓ ｇ ｎ ｅｔ ｅ ． ｈ ｒ ｖｒ ｒｔ ｅｅ ０ ９． ％ ｔｅ ａ ３ ％． ｅｅｔｎ ｔ １ ／ ｅ ｓ ｉ ｙ ｅ ｃ ａ ｓ ０ ｎ ｈ Ｖ ． ｉ ｉ ｍ ａ ０ Ｌ Ｅｅｅ ｋ ｄ ｏ ｒｄ ｗ ｉ ｇａｅ ｅ ｄ ｉ Ｃ ｉ ｗ ｒ ｄｔ ｔ ． ｌｏ ｔｅ ｃｎａ ｅ ｒｓｅａ ｏ， ． ｌ ｎ ｓ ｅ ａｄ ｔ ｒｐ ｗｎ ｍ ｅ ｈ ａ ｅ ｅ ｅ Ａｌ ｈｍ ｔｎｄ ｖｒｔ ｌ ｖ ｉ ｎ ｆ ｎ ｈ ｅ ｉ ａ ｎ ｎ ｅ ｅ ｃ ｄ ｆ ｏ ｉ ｅ ｒ ｂｔ ｑａｔｙ ｆ ｍ ． ｔ ９００ ｇＬ ｗ ｒ ｑｉ ｄ ｆ ｅｔ ｕ ｔｅ ｎｉ ，ｒ １ ０ ２． ／ ， ｅｅ ｔ ｉｅ ｎ． ｈ ｕ ｔ ｏ ０ ｏ ｕ ｅ ｒ ｆ Ｋ ｙ ｒｓ ｉ ｐｒ ｒ ａｃ ｌｕ ｃｒｍ ｔｇａｈ ， ｅｖｒ ｒｌ ｇａｅ ｅ ｅ ｗ ｄ ｈｇ ｅｆ ｍ ｎｅ ｉ ｈｏ ａ ｒｐ ｙ ｒ ｅ ｔ ， ｒ ｗｎ ｏ ｈ ｏ ｉ ｄ ｑ ｏ ｓ ａｏ ｐ ｉ
纯， 白藜芦醇标准品（ｉ ａ。 Ｓｍ） 仪器 高效液相色谱仪（Ｋ Ｌ Ｂ公司，１０型） ２５ ， 旋转蒸发仪。 ２２ ． 色谱条件
色谱柱为 －ｏｄｐｋ ８ ０ｍ Ｂ ｎａａ Ｃ ３０ ｍ ３ ９ ｍ） １ ．ｍ ，
本文收稿 日期 ：９８０－９修 回 日期 ：９８０－４ １９－５１ ， 掌 １９－７２
３ 结果与讨论
３１ 品的前 处理 ． 样 首先将 葡萄 酒过滤 后直 接进样 ， 由于杂质的 但 干扰而几乎无法检测 出白藜芦 醇 。然后 减压浓缩除 去 １％的酒液 ， 氯仿 萃取 除去 杂 质 ， 乙 酸乙酯 ０ 用 用 萃取出 白藜芦醇 ， 减压至干 ， 测结 果表 明峰形仍不 检
萄酒中的方法， ｅｅ４ ［ 采用体积分数为
４ ％的 乙腈 水溶液时分离较好 ， ０ 峰形 明显 ， 反式和顺 式 白藜芦 醇 的保 留 时间分别 为 ７７ ｉ ８ ９ ｉ ． ｍｎ和 ． ｍｎ
图 ２ 反式 白藜 芦醇标准的 色谱 图
图 ３ 葡萄酒 中白藜 芦醇 的色谱图 红
３４ 复性及 回收率试验 ． 重 取 中国红 葡萄酒 （ 京龙 徽 葡萄酒 公 司） 北 为样 品， 进行 ５ 次重复试验 ， 其标 准差为 ０８ ， ．４变异系数
参
２ ８２ ０ １ －２
考
文
献