【推荐下载】关于半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

关于半夏种质资源的随机扩增多态性DNA 技术分析2012-12-24【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。

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关于半夏种质资源的随机扩增多态性DNA 技术分析作者：杨俊宝,朱秀志,罗成科,李俊,魏会廷,彭正松【摘要】目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。

方法应用随机扩增多态性DNA 技术(RAPD)对21 份半夏种质资源进行检测。

结果29 个引物共得到162 条扩增DNA 片段,其中123 条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。

利用UPGMA 法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3 类,根据RAPD 遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。

结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。

RAPD 标记可作为构建半夏DNA 指纹图谱的有效工具。

【关键词】半夏;随机扩增多态性DNA 技术;遗传多样性;DNA 指纹图谱Abstract：Objective To discuss the genetic diversity of the germplasm resources ofPinellia ternata on molecular level. Methods The genetic diversity of P. ternata 21 differentpopulations were tested by RAPD markers. Results A total of 162 products were amplified by29 10-mer arbitrary primers, 123 (75.9%) products were found to be polymorphic. The resultsrevealed the abundant genetic diversity in P. ternata 21 different populations. The clusteranalysis using UPGMA method showed that 21 populations were classified as 3 groups, andthe genetic diversity in P. ternata based on RAPD GS was correlated with geographicdistribution. Conclusion There actually existed much genetic diversity on molecular levelamong the germplasm resources of P. ternata. RAPD markers could be effective tools toconstruct DNA fingerprintings of P. ternata.Key words：Pinellia ternata;RAPD;genetic diversity;DNA fingerprintings此间的遗传关系尚不清楚。

因此,有必要运用分子生物学方面的新技术手段加强其种质资源遗传多样性研究,并开展半夏野生种质资源的保护工作,从而为进一步选育优良种质2提供理论指导和依据。

随机扩增多态性DNA 技术(random amplified polymorphism DNA,RAPD)是以PCR 为基础的快速简便的分子标记技术,因其费用不高,DNA 用量少、不需预知研究对象的基因组序列、PCR 引物无种属限制等优点,目前已应用于人参[2]、石斛[3]等药用植物的遗传多样性研究。

本研究选取了21 个野生半夏居群进行了RAPD-PCR 扩增分析,构建遗传聚类树状图对半夏居群间的遗传关系进行了研究,旨在探讨其居群间的遗传关系,为半夏种质资源的保护、合理开发利用和新品种选育提供有价值的资料,也为半夏药材DNA指纹图谱的构建奠定一定的基础。

1 材料与方法1.1 药材采自四川、重庆及陕西等地不同地点,共21 份。

来源详见表1。

1.2 DNA 的提取取每一居群10～15 不同单株新鲜叶片约0.3 g,经消毒和洗净后,放在乳钵中加入600L 氯仿于室温下研磨成匀浆,然后加入1.5 mL SDS 抽提液[100 mmoL/L Tris-HCl(pH 8.0);100 mmol/L EDTA(pH 8.0);0.5 mol/L NaCl;1.5%(W/V) SDS]混匀。

将1.2 mL 匀浆转移至1.5 mL 离心管,室温( 15 ℃)静置10 min。

室温下12 000 r/min 离心10 min,取上层水相于另一干净1.5 mL 离心管,加入等体积氯仿-异戊醇(24∶1)进行抽提,重复抽提2～3 次,直到界面清晰为止。

取上清液加入到500 L 预冷(4 ℃)无水乙醇中沉淀DNA,此时可见絮状DNA 沉淀下来。

去上清液,沉淀经70%乙醇洗涤3 次,空气中干燥后用TE 溶解备用。

用紫外分光光度计检测样品DNA 浓度,通过计算,稀释到终浓度为50 ng/ L 备用。

1.3 RAPD 反应用Sangon 公司生产的S 系列的100 个十聚体随机引物对材料进行扩增筛选,从中共筛选出谱带清晰的引物29 个用于试验和统计分析,反应在BIO-RAD 的MyCyclerTM PCR 仪上进行。

反应总体积25 L,内含1 PCR buffer,1.5 mmol/L MgCl2,1 U Taq 酶,0.25 mol/L 引物;100 ng 模板DNA,dNTPs 各0.2 mmol/L。

扩增前94 ℃预变性3 min,每循环在94 ℃变性1 min,36 ℃退火1 min,72 ℃延伸2 min,共45 个循环,完成最后一个循环后,在72 ℃保温10 min,然后在4 ℃保存。

扩增产物在1.5%琼脂糖凝胶上电泳分离。

溴化乙锭染色,凝胶成像仪上观察照像、记录。

1.4 统计学方法RAPD 扩增产物按条带有无分别赋值,有带记为1,无带记为0。

利用软件POPGENE处理得到遗传相似系数(Genetic Similarities, GS)[4]。

利用GS 按不加权成对群算术平均法(unweighted pair group method with arithmetic average, UPGMA)进行聚类。

统计分析在NTSYS pc[5]软件系统下进行。

表1 供试的半夏来源(略)2 结果与讨论2.1 扩增片段多态性RAPD 扩增结果表明：29 个引物中有28 个(96.6%)引物的扩增产物具多态性。

图1为引物S20 的扩增结果。

29 个引物共得到162 条扩增DNA 片段,平均每个引物可获得5.6 个DNA 片段, 其中123 条具有多态性,占75.9%。

表明半夏种质资源多态性水平较高,充分体现了半夏不同居群间的遗传多样性。

2.2 遗传相似系数半夏21 个不同居群的遗传相似系数值见表2。

从中可见,半夏不同居群间的GS 分布较广,范围为0.592 6～0.895 1,说明其遗传背景较复杂,表明其遗传多样性相对较丰富。

PT0002 居群的半夏与PT0009 居群的半夏相似系数最大,高达0.895 1,说明它们的亲缘关系最近。

另外,PT0002 居群的半夏与PT0054 居群的半夏相似系数最小,为0.592 6,说明它们的亲缘关系较远。

表2 21 个半夏居群遗传相似系数值(略)2.3 供试材料的聚类分析结果tips:感谢大家的阅读，本文由我司收集整编。

仅供参阅！2012-12-24【编者按】：医药论文是科技论文的一种是用来进行医药科学研究和描述研究成果的论说性文章。

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浅谈中药的特点及其药学服务作者：李忠林,李小川,宋文惠,徐智【关键词】中药;药学服务随着医院药学从传统的药品供应模式向以患者为中心的药学技术服务模式的转变,以合理用药为核心的临床药学工作逐步开展起来,药学服务便成为热门话题见诸报刊,然而, 涉及内容基本上都是有关西药药学服务。

为此,笔者就中药的特点及其临床药师服务作一探讨。

1 影响中药疗效的因素较多,决定了中药应用需要更广泛的药学服务影响中药疗效的因素有诸多方面,除了生物和环境因素外,中药的品种、产地、采收、储藏、炮制、配伍、剂型、剂量、煎服等本身因素则是影响其疗效的主要方面。

1.1 保证中药饮片质量,提高临床疗效1.1.1 适时采收因不同药用植物的根、茎、叶、花、果实、种子或全草都有一定的生长期和成熟期, 而其有效成分含量的高低,将随其不同入药部位和植物各部分的不同生长期而异,故采药时间应随着中药的品种和入药部位的不同而有所区别。

如丹参的有效成分丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ的含量,第4 季度收获的丹参比其他季节收获者高2～3 倍;薄荷在开花盛期采收者,挥发油含量最高;青蒿中所含抗癌成分青蒿素在7-8 月花前盛叶期含量高达0.6%, 开花后含量逐渐下降[1]。

作为中药师可指导药农适时采收,从源头上把握药材质量。

1.1.2 合理贮藏中药贮存、保管条件直接影响其质量。

不同的贮藏时间、温度、湿度和方法对药物所含成分有明显影响。

有人曾做过实验,三棵针中的小檗碱随贮存时间的延长其含量逐渐降低,贮存3 年在见光、避光两种条件下,小檗碱含量分别降低54.1%和39.88%。

又如刺五加贮存时间超过3 年或在高温(40～60 ℃)、高湿(相对湿度74%以上)、日光照射等条件下贮存6 个月,其中所含丁香苷几乎丧失殆尽[1]。

中药颗粒剂﹑散剂易吸潮发粘, 注射剂的澄明度易受温度﹑pH 值的影响,故要指导中药保管人员结合每种药物特点合理贮藏,防止中药发霉、变色、虫蛀、泛油等,保证中药质量,从而发挥其应有疗效,减少不良反应的产生。

1.2 协助医师针对病情选择恰当的中药这一点是临床药师发挥药学服务的关键所在,要求药师必须具备较扎实的中医药知识和一定的临床经验,笔者认为,可从以下几点协助医师,提高临床治疗效果。

1.2.1 必须按照中医药理论辨证用药科学技术的发展促进了多学科的渗透、交叉,用现代药学理论来研究传统中药也取得了可喜成绩。

然而,与易理解的西药理论相比,中医药理论博深难明,以至于有人对中医持怀疑态度,也出现了用西医药理论指导中药应用的误区。

现代医药学和传统医药学两者建立的基础不同,理论体系、思维模式都存在差异,临床中药师应坚持宣传,提高他们对中医药理论的认识。

应用中药只有在中医药理论的指导下辨证施治,才能取得应有的治疗效果。