gentleMACS实验操作步骤中文
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
迁移试验（cell migration assay）之马矢奏春创作试验介绍细胞迁移与侵袭试验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,凹凸层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,因为聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不合孔径和经由不合处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究.试验步调：1材料准备：可摄影显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶的(Coster和Corning公司的也较经常应用),Transwell迁移试验的细胞培养板24孔板.细胞培养板应当与采办的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,无血清DMEM,(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基,DMEM 完全培养基,1640完全培养基（也可加到20%血清）,无菌PBS,棉签,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步调和流程 2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（按照细胞产生mmp的量来决定）稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶.应用提高行基底膜水化.2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h,进一步去除血清的影响.但这一步其实不是必须的.②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,（用PBS洗1－2遍）,用含BSA的无血清培养基重悬.调解细胞密度至5×105/ml.2.3接种细胞①取细胞悬液100µl参加Transwell小室.②24孔板下室一般参加600µl含20%FBS的培养基,特别留心的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产朝气泡,下层培养液的趋化传染感动就减弱甚至消掉落了,在种板的时刻要特别留心,一旦消掉气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板.③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭才能而定）.24h较罕有,时间点的选择除了要推敲到细胞细胞侵袭力外,处理成分对细胞数目标影响也不成忽视.2.4成果统计直接计数法,“贴壁”细胞计数,这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉落落到下室里面去,经由进程给细胞染色,可在镜下计数细胞.掏出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干.0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉落落上层未迁移细胞,用PBS洗3遍.400倍显微镜下随即五个视野不雅察细胞,记数.试验材料（1）Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning)（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基,10％血清培养基,PBS,0.02％EDTA（3）固定液：甲醇（4）染色液：Giemsa染液（5）封片剂：中性树胶（6）其他：小镊子,棉棒,载玻片,盖玻片操纵步调（1）所有细胞培养试剂和Transwell chamber 放在37℃温育；（2）待测细胞培养至对数成长期,消化细胞,用PBS和无血清培养基先后洗涤一次,用无血清培养基悬浮细胞,计数,调解浓度为2×105 /ml；（3）鄙人室（即24孔板底部）参加600－800μl 含10％血清的培养基,上室参加100－150μl细胞悬液,中断在孵箱培养24小时；（4）用镊子当心掏出chamber,吸干上室液体,移到预先参加约800μl甲醇的孔中,室温固定30分钟；（5）掏出chamber,吸干上室固定液,移到预先参加约800μl Giemsa染液的孔中,室温染色15－30分钟；（6）轻轻用清水冲洗浸泡数次,掏出chamber,吸去上室液体,用湿棉棒当心擦去上室底部膜概略上的细胞；（7）用小镊子当心揭下膜,底面朝上晾干,移至载玻片上用中性树胶封片；（8）显微镜下取9个随机视野计数,统计成果.留心事项（1）按照待测细胞体积大小选择合适孔径的chamber.经常应用的为8.0-μm孔径（如AGS细胞）,假如细胞体积较大可以推敲用10-μm孔径；（2）按照待测细胞的迁移才能强弱调解细胞数和迁移时间.常规24-well chamber接种细胞数约为2≈5×104/well,迁移时间12≈36小时；（3）因为Corning公司的24-Transwell内含12个自力的chamber,为了避免操纵污染,每次试验可预先另准备一块24孔通俗培养板（Corning）；（4）假如细胞迁移才能较弱,下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50μg/ml FN（Fibronectin）,具体可查阅相关文献；（5）细胞悬液参加膜中间,尽量包管液面程度；（6）固定染色擦洗时动作当心,避免擦去膜底面的细胞.但必定要充分擦净膜概略上未迁移的细胞,以免影响读数.尤其是膜周边上可用细牙签或小镊子缠上湿棉花擦洗,但要当心避免将膜戳破；（7）Chamber和膜上都无法标识表记标帜,操纵时应当心避免混淆试验组和比较组；（8）充分晾干,避免残留水分导致镜下聚焦不一致.细胞侵袭试验（cell invasion assay）试验材料（1）Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保管（2）其余材料同迁移试验操纵步调（1）Matrigel在4℃住宿融化；（2）用4℃预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度1mg/ml,冰上操纵；（3）在chamber上室底部中间垂直参加100μl稀释后的Matrigel,37℃温育4－5小时使其干成胶状；（4）后续步调同迁移试验（1-8）.留心事项（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固,是以操纵所需枪头和离心管应提前在4℃预冷；（2）铺胶时包管液面程度,胶的厚度平均一致,切勿产朝气泡；（3）其他留心事项同迁移试验.其他Transwell做肿瘤侵袭试验的具体步调(1) 基质胶准备：将冻存于－80度冰箱的BD matrigel 4渡住宿（24h）,变成液态；（2）取300ul无血清培养基,参加60ul（或50ug/每室）Matrigel ,混匀,（4℃操纵,最好在冰浴上）,参加上室各100ul（3个室）；放入37℃培养箱中,孵育4-5h （>5h）；此间经常不雅察,当消掉“白色层”时,说明已经变成固态.注释：无血清培养基和基质胶按1：5稀释,每孔加50ul,在37℃培养箱中1-2h.（3）消化细胞,无血清培养基洗3次,计数,配成细胞悬液；（4）用无血清培养基洗 Matrigel洗1次；每孔参加100ul细胞悬液；（5）下腔室中参加500ul含有20％FBS前提培养基；（6）37℃培养箱中,孵育20-24h；（7）掏出transwell用PBS洗2遍, 5%戊二醛固定,4℃；（8）参加结晶紫（0.1%）染色或Giemsa染色（5－10min）,室温0.5h,PBS洗2遍,用棉球擦去上概略细胞,显微镜下不雅察.迁移试验transwell在24孔板中浸泡1小时；消化细胞,无血清培养基洗 2 次,计数,配成细胞悬液,每孔参加100ul细胞悬液；加药刺激；下腔室中参加前提培养基或其他刺激因子；37℃培养箱中,孵育 20-24h；掏出 transwell用 PBS洗2遍,5% 戊二醛固定, 4℃；PBS洗2遍,参加结晶紫（0.1%）染色,室温0.5h,PBS 洗 2 遍,用棉球擦去上概略细胞,显微镜下不雅察计数10 摄影,记录.侵袭试验取 300ul 无血清培养基 ,参加 30ul （或 50ug/ 每室） Matrigel ,混匀,（ 4 ℃ 操纵,最好在冰浴上）,参加上室各 100ul （ 3 个室）；放入37 ℃ 培养箱中,孵育 4-5h （ >5h ）；消化细胞,无血清培养基洗 3 次,计数,配成细胞悬液；用无血清培养基洗 Matrigel 洗 1 次；每孔参加 100ul 细胞悬液；下腔室中参加 600ul 无血清前提培养基；37 ℃ 培养箱中,孵育 20-24h；掏出 transwell 用 PBS 洗 2 遍, 5% 戊二醛固定, 4 ℃ ；PBS 洗 2 遍,参加结晶紫（ 0.1% ）染色,室温 0.5h , PBS 洗 2 遍,用棉球擦去上概略细胞,显微镜下不雅察transwell小室是否可以频频应用,该若何消毒用棉签轻轻擦去胶和背面细胞,清水冲洗,超声清洗,低挡,30min,清水3×5min,蒸馏水3×5min,室温凉干,用前紫外线小室正面3h,背面6h,微波,低火10min×2,效果很好.。
瑞士-染色方法
瑞士-吉姆萨染色液使用方法
磷酸缓冲液1ml,蒸馏水9ml混匀即可使用。
工作液一般临时配置。
1：玻片上血膜下面过酒精灯几次干透后，加染色液2-3滴覆盖全膜；
2：约30-120秒钟，滴加缓冲液（染液与缓冲液的比例，血片为1:1.5）；
3：混匀后染色3-5分钟；
4：自来水冲洗数秒钟，静置待玻片干后滴香柏油镜检。
检查标准：
淋巴母细胞的形态：胞体比正常细胞大3～4倍，呈圆形或椭圆形，胞浆常有伪足突出，染色淡蓝，常有空泡，泡核增大，核质疏松，常呈细丝网状结构，可见核分裂现象；过渡型淋巴细胞的形态：介于上述母细胞与正常淋巴细胞之间，体积稍大，多在12～15μm，胞浆稍多，淡蓝色，核大于正常细胞，核质疏松。
注意和正常淋巴细胞的区别：淋巴细胞呈球形，平均直径10μm。
小淋巴细胞核大，呈圆形或卵圆形，有时核的一侧有缺陷，呈豆形，染色质粗大，细胞质很少，嗜碱性，核周围的细胞质常有淡染晕。
试验数据处理淋巴细胞的转化率以百分率计算，即：
转化率=活化细胞数/（活化细胞数+未转化细胞数）×100%。
gentlemacs octo with heaters 组织处理器使用说明书
gentlemacs octo with heaters 组织处理器使用说明书GentleMACS八孔加热组织处理器使用说明书一、产品概述GentleMACS八孔加热组织处理器是一款用于组织样本的细胞分离和处理的设备。
本使用说明书旨在向用户提供详细的操作指导，以确保正确使用该设备，并充分发挥其功能。
二、产品特点1. 八孔设计：设备拥有八个处理孔，可同时处理多个组织样本，提高工作效率。
2. 加热功能：内置加热装置，可对样本进行温度控制，提供最佳的组织处理效果。
3. 精确控制：设备配备精确的控制面板和操作按钮，可方便用户进行操作设置。
4. 安全可靠：设备采用高品质材料和先进技术，确保产品的安全性和可靠性。
三、安全注意事项1. 请确保设备与电源连接牢固，工作环境通风良好。
2. 在使用设备前，请仔细阅读使用说明书，并按照要求正确操作。
3. 使用设备时，请佩戴个人防护装备，如手套、护目镜等。
4. 请勿将设备暴露于水或其他液体中，以免引起故障或损坏。
四、操作步骤1. 准备组织样本：根据实验设计的需要，准备适量的组织样本并将其置于处理孔中。
2. 设置温度：通过控制面板上的温度调节按钮，设置所需的样本处理温度。
注意：温度设置应根据实验要求进行调整。
3. 启动设备：按下设备控制面板上的启动按钮，设备即可开始工作。
4. 监测处理过程：设备将自动完成细胞分离和处理过程，在此过程中，您可以监测处理孔中的样本状态。
5. 停止设备：根据实验要求或处理完成后，按下设备控制面板上的停止按钮，设备将停止工作并降温。
6. 清洁和维护：在使用完毕后，关闭设备电源，并按照使用说明书中的清洁和维护指南进行设备的日常维护。
五、故障排除在使用设备时，可能会遇到以下问题：1. 设备无法启动：请检查设备是否接通电源，电源插头是否牢固连接，以及电源电压是否符合要求。
2. 控制面板无法操作：请确保设备电源正常，检查面板连接线是否损坏，并按照说明书中的操作指南进行操作。
人体成份分析仪使用流程
人体成份分析仪使用流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor. I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!人体成分分析仪的使用流程。
准备。
1. 确保秤体平稳放置在坚硬平坦的地面或平台上。
「THSMS实验指导书----西亚斯」
目录第一章可编程控制器的概述 (1)第二章可编程控制器基本指令简介 (5)第三章 STEP7-Micro/WIN软件的使用及编程规则 (6)第四章 MCGS组态软件的介绍及使用 (8)第五章 S7-200的自动化通信网络 (11)实验一PPI点对点网络通信 (13)实验二MPI多点网络通信（CP5611专业网卡用户选配） (15)第六章实验内容 (20)实验一可编程控制器的基本指令编程练习 (20)实验二 LED数码显示控制 (24)实验三天塔之光模拟控制 (31)实验四运料小车控制模拟 (36)实验五十字路口交通灯控制 (45)实验六三层电梯控制系统的模拟 (48)实验七水塔水位控制模拟 (50)实验八装配流水线的模拟控制 (52)实验九液体混合装置控制的模拟 (55)实验十机械手动作的模拟 (59)实验十一四节传送带的模拟 (62)实验十二自动配料系统控制的模拟 (67)实验十三轧钢机控制系统模拟 (71)实验十四邮件分拣系统模拟 (75)实验十五自动售货机的模拟控制 (80)实验十六加工中心的模拟控制 (86)实验十七三相鼠笼式异步电动机点动控制和自锁控制（实物） (96)实验十八三相鼠笼式异步电动机联锁正反转控制（实物） (98)实验十九三相鼠笼式异步电动机带延时正反转控制（实物） (100)实验二十三相鼠笼式异步电动机星/三角换接启动控制（实物） (102)实验二十一步进电机运动控制（实物） (104)实验二十二直线运动控制（实物） (00106)实验二十三温度PID实验（实物） (112)实验二十四直流电机调速实验（实物） (114)附录一 THSMS-A型可编程控制器实验装置使用说明书 (119)附录二 THSMS-B型网络型可编程控制器实验装置使用说明书 (121)附录三 THSMS-1型可编程控制器实验箱使用说明书 (123)附录四 THSMS-2型网络型可编程控制器实验箱使用说明书 (125)附录五 D65S、D66、D67、D68S、D69可编程控制器实验挂箱使用说明书 (127)附录六霓虹灯饰的模拟控制实验 (129)附录七五相步进电动机的模拟控制实验 (130)附录八喷泉的模拟控制实验 (131)附录九十字路口交通灯控制（带倒计时显示） (132)附录十四层电梯控制系统的模拟 (134)第一章 可编程控制器的概述可编程序控制器，英文称Programmable Logical Controller ，简称PLC 。
人体成分分析仪操作流程
人体成分分析仪操作流程一、准备工作。
1. 确认人体成分分析仪的电源是否正常，插头是否牢固连接。
2. 确认仪器表面是否干净整洁，无损坏或者污渍。
3. 准备好测试者的相关信息，包括姓名、年龄、性别等。
二、测试者准备。
1. 测试者应该在测试前保持空腹状态，至少4小时内不进食或饮水。
2. 测试者应该穿着轻便，便于测试时脱衣服。
3. 测试者应该保持放松状态，不要进行剧烈运动或者情绪激动的活动。
三、测试操作步骤。
1. 测试者站立于人体成分分析仪上，双脚平行站立在测试仪的脚踏上。
2. 测试者双手握住测试仪的手柄，双手自然下垂，身体保持直立。
3. 测试者保持不动，等待仪器进行测试。
4. 仪器测试完成后，测试者可以离开测试仪，等待结果显示。
四、结果解读。
1. 根据仪器显示的结果，可以了解到测试者的体脂率、肌肉量、骨量等相关成分的数据。
2. 结果显示后，可以根据专业人员的解读，了解到测试者的身体成分状况，以及是否存在偏高或者偏低的情况。
3. 根据结果，可以制定合理的饮食和运动计划，来调整身体成分的比例，达到健康的状态。
五、注意事项。
1. 使用人体成分分析仪时，应该遵循仪器的操作说明，不得随意更改设置或者操作。
2. 测试者在测试前应该咨询专业医生或者健身教练的建议，以便得到更准确的测试结果和解读。
3. 测试者在测试时应该保持放松状态，不要紧张或者过度运动，以免影响测试结果的准确性。
六、维护保养。
1. 每次使用人体成分分析仪后，应该将仪器表面进行清洁和消毒，保持仪器的卫生和整洁。
2. 定期对仪器进行维护保养，包括检查电源线是否完好，仪器表面是否有损坏，以及仪器功能是否正常等。
3. 如发现仪器有异常情况，应该及时联系售后服务人员进行维修处理，不得私自拆卸或者修理。
七、结束语。
人体成分分析仪是一项非常有用的健康检测设备，通过正确的操作流程和准确的结果解读，可以帮助测试者了解自己的身体状况，以及制定合理的健康管理计划。
希望大家在使用人体成分分析仪时，能够严格按照操作流程进行操作，以确保测试结果的准确性和可靠性。
全自动温和组织处理器GentleMACS介绍
GentleMACS全自动组织处理器介绍产品概述目前将组织分离为单个细胞的传统方法有机械法、酶消化法及两者组合等，这些方法没有统一的标准，且非常浪费时间，获得的细胞的活性和得率相对低很多。
gentleMACS 全自动组织温和处理器，可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织（脾脏，肝脏，肺部，肿瘤，表皮，神经组织....）中分离单个细胞悬液，也可将组织块制备成匀浆（如蛋白提取，核酸提取）。
GentleMACS自2009上市后，即得到广大科学家的热烈欢迎，在欧美地区十分畅销，广受赞誉的gentleMACS技术已经在不同领域得到广泛的关注和应用，发表的文献近几百篇之多主要用途免疫学小鼠的脾脏、大鼠脾脏、人类组织的扁桃腺以及肿瘤免疫和肿瘤干细胞研究用的实体瘤组织神经科学胚胎、成体动物的大脑（大鼠或小鼠）。
联合使用gentleMACS和MACS神经组织分离试剂盒，可以快速方便地从脑组织中分离样品，避免了传统机械分离方法的繁琐操作干细胞和组织再生使用一些小鼠和人组织（脑，肝脏，肾，皮肤，肌肉，心脏，实体瘤等）研究组织和组织再生相关标本来源的非造血干细胞细胞生物学内皮细胞和表皮分子生物学配合M管，可以分离亚细胞物质，如核酸和蛋白质。
从新鲜或冷冻样本中提取RNA，进行细菌或病毒载量测定。
M管可以处理不同体积的标本，最多达10ml目前gentleMACS的自定义程序也提供了更多组织处理的可能性，欢迎咨询和索取文献资料产品优点1 温和有效：gentleMACS使用专门的一次性分离管（C管和M管），管盖上带有特殊设计的转子和定子，对样本减少损伤，保证了细胞活性，同时得到了高回收率2 一个机器支持多种用途：生成单细胞悬液和制备亚细胞物质。
C管可以得到单细胞悬液，用于细胞分选，分析或者是培养。
M管可以将组织和细胞匀浆，用于分离亚细胞物质（如蛋白，核酸）3 无菌分离：C管和M管的中心都有一个用隔膜封闭的小孔，能保证在无菌条件下，在封闭系统中安全地处理样品4 用户安全：针对一些感染性样本处理采用封闭系统处理，比如细菌病原感染的样本，完全不需要打开试管盖，即可添加酶以及其他溶液，或者取出分离出来的细胞或者匀浆溶液，保护实验室操作人员安全5 全自动和标准化：自动标准化程序已经设置好时间，速度和操作方向，只要将样本材料和适合的溶液（如缓冲液，培养基等等）加入试管内，把试管头朝下安装即可运行程序6 结果可靠：标准化流程操作，减少人为操作误差，使结果有高度可重复性7 省时省力：一次可同时处理2个标本，分离时间只需要180秒8 便捷灵活：超净台上即可操作，方便安装。
贝克曼生化仪操作规程[1]
![贝克曼生化仪操作规程[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/10385aef941ea76e58fa04dc.png)
贝克曼生化仪操作规程1、编工作表：主屏幕---Fisample Program---F1 Program Sector----输入架子号---回车---选择实验项目---F7NEXT CUP继续输入---输入完毕---按PRE Screen键返回2、样本类型的选择主屏幕---Fisample Program---F5sample Type---输入样本类型号---回车3、清除样本主屏幕---Fisample Program---间光标移到Cup(s)处，输入要清除的杯号（当前杯架）---按Clear键清除---输入“y”---间主屏幕4、批量输入主屏幕---Fisample Program---F2 Program Batch---输入杯架子号（连续的用“—”连接，不连续的用逗号隔开）---回车---输入总的样本数（小于10倍杯架数）---回车---选择实验项目---F7NEXT CUP---回主屏幕5、清除整个杯架主屏幕---Fisample Program---F5clear Sector---输入杯架号（连续的用“—”连接，不连续的用逗号隔开）---回车---输入“y”---回主屏幕6、查看各个杯架项目主屏幕---Fisample rogram---F3clear Sector---输入架号---回车Page Down/up翻看---回主屏幕7、打印设置主屏幕---F4special Functions---输入“4”---回车---输入“5”---回车---F3Print option---输入“1可打”或“2不可打”---回车---回主屏幕8、单位选择主屏幕---F4special Functions---输入“4”---回车---输入“7”---回车---将光标移到目标项目处用Select重复选择直到正确的单位---回主屏幕9、结果查看主屏幕---F4special Functions---输入“2”---回车---输入查询条件---回车---输入号码---回车---选择输出形式---回车10、参数设置A进入参数界面主屏幕--- F4special Functions---输入“5”---回车---Fidefine/Review---输入项目号---回车---输入具体参数（两页）---回主屏幕B 新项目的登陆主屏幕--- F4special Functions---输入“4”---回车---选择一个位置输入新项目名称C 具体参数Test Name:最多输入4位Reaction Type: Endpiont1、Rate1、Endpiont2、Rate2 (1代表没减试剂空白，2代表减掉了试剂空白)Units:单位（Select重复按选择）Decimal Precision:小数位（Select重复按选择）Reaction Direction:反应方向（Select重复按选择）Calculation Fator:计算因数Math Model:拟合方式（Linear 线性拟合，Math Model1 四参数Log-logit,Math Model2 五参数Logit, Math Model3五参数指数拟合）Numrer of calibrators:标准液个数（0—6，输0时必须输入因数，并输入相应的浓度）包括空白Calibrators Values:Calibration Time Limit:校准时限（0.0—336.0，一般输入336.0）Wavelength (primary and secondary):主副波长Primary Inject Reagent1:第一试剂（A或B）V olume:加入体积（125—327）Primary inject reagent2：第二试剂（None 、A、B、或C）Add Time:试剂二加入时间（自己设定）Sample V olume:样品加入体积（其固定加入时间为330秒时）Reagent Black:试剂空白读点时间（以R1为0时）Reaction:反应读点时间（以R2为起始点）Usable Range:线性范围Error detection limits:错误限制（一般都设为-1.500到1.500）Surstrate depletion:底物消耗Initial rate:一般正反应设为99.999负反应设为-99.999Delta ABS：一般设为1.500D清除参数主屏幕---F4special Functions---输入“5”---回车---F1define/review---F3clear chemistry---输入要清除的号码---回车---输入“Y”---回主屏幕11、试剂登陆1) 卸掉要调整参数的试剂主屏幕---F2reagent load---按选择键选择试剂名select键选择---F2manual load---输入“3”---回车---回到主屏幕2）装载上试剂主屏幕---F2reagent load---选择刚卸载的试剂位置select键选择---F2manual load---输入“2”---回车---输入项目名称---回车---打开试剂舱盖把试剂装入---关门舱盖---F1continue---等仪器检查完以后回到主屏幕12、定标设置主屏幕---F3cal---移动光标导要进行定标的项目用select键选择fical cup assfnmnt---输入可用的杯价号---回车---F2cal load list ---按照仪器的提示显示顺序装定标液---回到主屏幕---按“开始”开机13、检查试剂状况主屏幕---F2reagent load---F5reagent statua---page up/down---回主屏幕14 关机主屏幕---Idle---F4---等仪器左上角出现“Please wait…”消失后---关主电源15清洗灌注主屏幕---F1---1回车---选择须灌注项目---F1等仪器工作完后回到主屏幕16、查看仪器状态主屏幕---F8---F7---有红色的表示此处异常---回主屏幕17、查看比色情况主屏幕---F8---F6---按-Page up/down查看结果---回主屏幕18、急诊标本输入主屏幕---F1---F1---选择架子号---回车---选择项目---F7---回到主屏幕校准点的个数可以把水这一点不要，只做浓度点，另一点为坐标原点。
mngs湿实验技术流程及规范
mngs湿实验技术流程及规范Experimental technique and procedures are essential in scientific research, particularly in the field of biology. 实验技术和流程对于科学研究至关重要，特别是在生物学领域。
A well-designed experimental procedure ensures the accuracy and reliability of the results. 一个良好设计的实验流程可以确保实验结果的准确性和可靠性。
It also helps to minimize errors and enables the reproducibility of the experimental findings. 它还有助于最小化错误，并确保实验结果可复制。
Therefore, it is crucial for researchers to follow standardized protocols and guidelines when conducting experiments. 因此，研究人员在进行实验时遵循标准化的实验方案和指南至关重要。
One of the key aspects of a standardized experimental procedure is the use of proper sample collection and handling techniques. 标准化实验流程的一个关键方面是使用适当的样本收集和处理技术。
This includes ensuring the samples are collected in a sterile manner to prevent contamination, and are properly labeled and stored to maintain their integrity. 这包括确保样本以无菌方式收集，以防污染，并且适当标记和储存，以维持其完整性。
gentlemacs全自动组织处理器说明书
gentlemacs全自动组织处理器说明书Gentlemacs全自动组织处理器是一种先进的生物医学设备，用于快速、高效地处理组织样本。
本说明书将详细介绍Gentlemacs的工作原理、操作步骤以及其在生物医学研究和临床实践中的应用。
一、工作原理Gentlemacs全自动组织处理器采用了先进的磁珠技术和液体处理系统，能够快速、准确地分离和纯化组织样本中的细胞。
其工作原理如下：1. 样本准备：将组织样本放入特制的离心管中，并加入适量的缓冲液。
离心管中的样本将通过旋转和震荡的方式充分混合。
2. 磁珠分离：Gentlemacs系统中的磁珠将与样本中的目标细胞特异性结合。
通过磁力作用，目标细胞与磁珠结合的复合物将被吸附到离心管壁上。
3. 液体处理：系统将自动注入适量的洗涤缓冲液，用于去除非目标细胞和杂质。
洗涤过程中，离心管会自动旋转和震荡，以确保彻底清洗。
4. 细胞纯化：通过再次施加磁力，目标细胞与磁珠结合的复合物将被吸附到离心管壁上。
此时，非目标细胞和杂质已被完全去除。
5. 细胞收集：最后，系统将注入适量的收集缓冲液，用于将目标细胞从离心管壁上解离。
收集缓冲液中的目标细胞可用于后续的实验或分析。
二、操作步骤使用Gentlemacs全自动组织处理器非常简便，只需按照以下步骤进行操作：1. 样本准备：将组织样本切割成适当大小，并放入离心管中。
加入适量的缓冲液，确保样本充分浸润。
2. 系统设置：将离心管放入Gentlemacs系统中，并根据实验需求选择相应的程序和参数。
3. 开始处理：按下启动按钮，系统将自动进行样本处理。
在处理过程中，可以实时监控处理进度和参数。
4. 细胞收集：处理完成后，取出离心管，将收集缓冲液中的目标细胞转移到新的离心管或培养皿中。
5. 清洁和维护：处理完毕后，及时清洁Gentlemacs系统，以确保下次使用时的准确性和可靠性。
三、应用领域Gentlemacs全自动组织处理器在生物医学研究和临床实践中具有广泛的应用价值。
gentle macs组织解离系统使用的注意事项
gentle macs组织解离系统使用的注意事项
使用Gentle MACS组织解离系统时，需要注意以下几点：
1. 安全操作：操作时确保戴上适当的个人防护装备，包括手套、护目镜和实验室外套。
避免直接接触有毒或刺激性的试剂或样品。
2. 仪器准备：确保Gentle MACS组织解离系统已正确设置和
准备。
检查设备的所有部件是否正确连接，如转子是否安装正确，并根据操作手册进行需要的预准备步骤。
3. 样品处理：根据实验要求，使用适当的缓冲液和试剂来处理样品。
确保样品质量良好，没有污染或受损。
4. 操作步骤：按照操作手册中的步骤进行操作。
注意正确设置和调整相关参数，如转速、温度和时间等。
遵循所有操作的时间和温度要求。
5. 清洁和维护：在使用Gentle MACS组织解离系统之前和之后，对设备进行适当的清洁和维护。
清洁仪器和配件可以减少污染和故障的风险。
6. 数据记录和分析：在操作过程中记录所有关键数据和观察结果。
对实验结果进行分析和解释，并根据需要采取进一步的实验步骤。
7. 符合法规：遵循实验室的所有安全和伦理规定，确保获得适
当的许可证和证书，并严格遵循相关法规和指南。
总之，使用Gentle MACS组织解离系统需要仔细阅读并遵循操作手册中的指导，注意安全操作，保证样品质量，并进行适当的清洁和维护。
gentle cell dissociation reagent使用方法
gentlecelldissociationreagent使用方法一、前言GentleCellDissociationReagent是一款专为细胞研究者设计的试剂，它能够帮助您轻松地从细胞样本中提取出完整的细胞群，为后续的实验和研究提供必要的细胞基础。
以下是我们为您提供的详细使用方法，涵盖了准备试剂、样本处理以及后续分析等步骤。
二、实验原理GentleCellDissociationReagent采用独特的化学反应机制，通过特定的细胞分解成分散小分子，从而实现对细胞的温和分离。
该试剂适用于多种类型的细胞，如骨髓细胞、皮肤细胞、神经元细胞等，具有操作简便、分离效果好、对细胞损伤小等优点。
三、实验步骤1.准备试剂：确保试剂在保质期内，按照所需量从原装瓶中取出。
将试剂置于适当的容器中，如EP管或PCR管。
2.样本处理：根据您的实验需求，选择适当的细胞样本。
确保样本处于无菌状态，并按照实验要求进行适当的预处理。
3.细胞悬液制备：将样本加入到准备好的试剂中，用适当的离心或震荡设备使细胞分散。
注意调整离心速度或震荡强度以适应不同类型的细胞。
4.温和分离：将混合后的溶液转移到另一个容器中，静置片刻后轻轻上提。
注意观察并记录分离效果，如有需要可适当调整试剂比例或处理时间。
5.收集细胞：分离后的细胞应被收集在一个新的容器中，并进行必要的清洗和过滤，以去除残留的试剂和杂质。
6.分组和储存：根据您的实验需求，将收集到的细胞进行分组并储存于适当的条件下（如液氮或冰箱）。
四、注意事项1.在使用任何细胞分离试剂时，确保遵守实验室安全规定和操作流程，以防止对细胞的损伤和对实验人员的潜在危害。
2.实验过程中要密切关注细胞的形态和活力，确保在温和的条件下进行分离，避免对细胞造成过度的伤害。
3.不要将分离后的残留物随意丢弃，应按照实验室废物处理规定进行妥善处理。
4.试剂使用完毕后，请及时关闭瓶盖，并将试剂瓶放置在阴凉、干燥处保存。
gentleMACS实验操作步骤中文
gentleMACS™操作步骤1.背景信息在许多实验中，需要用到单细胞悬液，如用MACS®技术分选细胞时，要想获得高纯度和回收率的话，单细胞悬液就很重要。
德国美天旎生物技术有限公司开发的gentleMACS™分离器能够提供优化的程序，用于从不同的组织中获取单细胞悬液。
这些组织包括小鼠脾脏，肝脏，肺脏，脑组织等。
使用C管，能够在一个密闭的系统中进行全自动的组织分离，可以保证组织操作的无菌，以及能够同时处理2个组织样本。
2. 分离小鼠脾脏的操作步骤2.1 需要的试剂和仪器●gentleMACS 分离器●细胞滤器，如30 μm n尼龙滤网（Pre-Separation Filters# 130-041-407)●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)2.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠脾脏的重量约为80–120 mg (BALB母鼠, 6–7 周龄).1. 将小鼠脾脏转移到gentleMACS C 管中，按照脾脏的数量加入缓冲液:1–2 个小鼠脾脏: 3 mL3–4个小鼠脾脏: 6 mL5–6 个小鼠脾脏: 9 mL2. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域3. 开机，选择合适的分离程序：1–2 个小鼠脾脏: m_spleen_01.3–6个小鼠脾脏: m_spleen_04.4. 运行gentleMACS 程序m_spleen_01. 或m_spleen_04.5. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管6. (可选) 以300×g 室温下离心2分钟。
7. 去除分离的组织块，将细胞悬液通过一个预分选滤器（1-2个脾脏），该预分选滤器放置于15mL管子中。
或者将细胞悬液通过一个细胞过滤网（3-6个小鼠脾脏），该滤网放置于50mL试管中。
全自动温和组织处理器GentleMACS介绍
GentleMACS全自动组织处理器介绍产品概述目前将组织分离为单个细胞的传统方法有机械法、酶消化法及两者组合等，这些方法没有统一的标准，且非常浪费时间，获得的细胞的活性和得率相对低很多。
gentleMACS 全自动组织温和处理器，可以快速温和、安全、省时、标准化、便捷、自动化的从组织（脾脏，肝脏，肺部，肿瘤，表皮，神经组织....）中分离单个细胞悬液，也可将组织块制备成匀浆（如蛋白提取，核酸提取）。
GentleMACS自2009上市后，即得到广大科学家的热烈欢迎，在欧美地区十分畅销，广受赞誉的gentleMACS技术已经在不同领域得到广泛的关注和应用，发表的文献近几百篇之多主要用途免疫学小鼠的脾脏、大鼠脾脏、人类组织的扁桃腺以及肿瘤免疫和肿瘤干细胞研究用的实体瘤组织神经科学胚胎、成体动物的大脑（大鼠或小鼠）。
联合使用gentleMACS和MACS神经组织分离试剂盒，可以快速方便地从脑组织中分离样品，避免了传统机械分离方法的繁琐操作干细胞和组织再生使用一些小鼠和人组织（脑，肝脏，肾，皮肤，肌肉，心脏，实体瘤等）研究组织和组织再生相关标本来源的非造血干细胞细胞生物学内皮细胞和表皮分子生物学配合M管，可以分离亚细胞物质，如核酸和蛋白质。
从新鲜或冷冻样本中提取RNA，进行细菌或病毒载量测定。
M管可以处理不同体积的标本，最多达10ml目前gentleMACS的自定义程序也提供了更多组织处理的可能性，欢迎咨询和索取文献资料产品优点1 温和有效：gentleMACS使用专门的一次性分离管（C管和M管），管盖上带有特殊设计的转子和定子，对样本减少损伤，保证了细胞活性，同时得到了高回收率2 一个机器支持多种用途：生成单细胞悬液和制备亚细胞物质。
C管可以得到单细胞悬液，用于细胞分选，分析或者是培养。
M管可以将组织和细胞匀浆，用于分离亚细胞物质（如蛋白，核酸）3 无菌分离：C管和M管的中心都有一个用隔膜封闭的小孔，能保证在无菌条件下，在封闭系统中安全地处理样品4 用户安全：针对一些感染性样本处理采用封闭系统处理，比如细菌病原感染的样本，完全不需要打开试管盖，即可添加酶以及其他溶液，或者取出分离出来的细胞或者匀浆溶液，保护实验室操作人员安全5 全自动和标准化：自动标准化程序已经设置好时间，速度和操作方向，只要将样本材料和适合的溶液（如缓冲液，培养基等等）加入试管内，把试管头朝下安装即可运行程序6 结果可靠：标准化流程操作，减少人为操作误差，使结果有高度可重复性7 省时省力：一次可同时处理2个标本，分离时间只需要180秒8 便捷灵活：超净台上即可操作，方便安装。
Miltenyi Biotec组织匀浆仪操作步骤
gentleMACS 组织处理器操作规程1.确保gentleMACS 组织处理器接通电源。
2.预定义的程序是由内部存储器提供的。
另一种方法是：插入HyralACS程序卡，直接运行程序卡程序。
或复制程序卡中程序到仪器内部存储器，再运行程序。
通用的gentleMACS 程序A、B 、C、D 、E依次用于坚硬程度递增的样本，即A程序处理柔软组织，E程序处理最坚硬的组织。
3.将样品转移到特定型号的Tube管中，确保管盖盖紧。
样本使用量：推荐样本体积为300 µL -10 mL ，重量为10 mg –4000 mg，gentleMACS Protocols推荐为准。
根据组织类型确定最大投入量，对于特别坚硬的组织先切成小片(5x5 mm)再放入Tube管中。
Tube管的选择：C Tubes主要用于制备单细胞悬浮制备，M Tubes主要用于分子分离。
4.确保正确安装Tube管，将其垂直、倒置放入套管中。
正确的放入Tube管确保证Tube管保持在旋转和轴向力的位置。
5. gentleMACS 组织处理器通过显示器完成程序的复制、编辑、删除等操作。
6.选择一个由仪器存储器提供的程序或程序卡中的程序。
运行程序:•使用箭头图标选择程序显示：Program name and tube name•开始运行程序运行期间会显示Program name andremaining time•运行结束后,程序可以继续使用•(准备运行) 运行期间，绿色指示灯亮7.按下开始按钮启动程序。
8.显示器指示当前程序的程序名称和剩余时间（s）。
9.程序结束显示5秒。
随后，显示器指示刚刚使用过的程序，若按下开始按钮，程序可以立即被应用来处理下一个样本。
10.程序结束后，从套管垂直拔出含有样品的Tube管。
GROMACS使用教程.
GROMACS教程一Gromacs基本模拟流程 (3)1 下载pdb文件 (3)2 用pdb2gmx 处理pdb 文件 (3)3 建立盒子 (3)5 设置能量最小化 (4)6 用grompp程序进行文件处理 (6)7 使用genion 和tpr文件添加离子 (6)8 用fws_ion.pdb来产生能量最小化的输入文件 (6)9 在后台运行能量最小化（在命令后加&） (7)二设置位置限制性动力学模拟 (7)三设置非限制性动力学模拟 (9)1 如何重启一个计算 (11)2 如何延长一个计算 (11)3 如何设置并行计算 (11)五模拟结果分析 (12)1 如何将特定帧的轨迹保存成*.pdb文件 (12)2 用ngmx观察轨迹文件（也可以用VMD观察轨迹文件) (12)3 比较常用的分析工具 (14)3.3 g_covar 计算斜方差 (16)3.4 g_energy 能量数据作图，如压力、体积、密度等 (16)3.5 g_gyrate 测量回旋半径 (17)3.6 g_rms 与g_rmsdist 计算结构的RMSD 值 (17)3.7 g_rmsf 计算原子位置的根均方波动（rmsf ） (18)3.8 do_dssp 计算模型的二级结构 (20)3.9 g_hbond 计算模拟过程中分子间的氢键的数目、距离或角度 (21)3.10 g_saltbr 分析模拟中残基间的盐桥 (21)GROMACS 是一个使用经典分子动力学理论研究蛋白质动力学的高端的高效的工具。
GROMACS是遵守GNU许可的免费软件，可以从以下站点下载：，并且可以在linux和Windows上使用。
在本教程中，将研究一个从漏斗形蜘蛛的毒液中分离的毒素。
我们将使用显性溶剂动力学的方法来进行研究。
首先比较真空中和溶解的模型。
我们将把毒素肽溶在水盒子里，紧接着用牛顿运动定律加以平衡。
我们还将比较偿离子在显性溶剂动力学中的影响。
考马斯亮蓝试剂使用的具体操作
蛋白质含量测定具体操作——考马斯亮蓝法（南京建成，货号：A045-2）一、实验目的：样品蛋白质的含量测定（本实验为小鼠肝组织10%的组织匀浆上清液样本）二、测定的原理：蛋白质中有-NH3+基团，当棕红色的考马斯亮蓝显色剂加入蛋白质样品中，会发生络合反应，使溶液变成蓝色，通过吸光度的测定来计算蛋白质的含量。
三、实验材料a)仪器：紫外分光光度计、涡旋混匀器、比色皿、2mlEP管、5mlEP管、标记笔、b)试剂：考马斯亮蓝试剂盒、待测样品、双蒸水四、实验步骤a)将考马斯亮蓝试剂一贮备液：双蒸水=1:4进行配置，本实验需要75ml,即取出贮备液15ml和60ml的双蒸水进行试剂一应用液的配制，备用；b)蛋白质标准品从20℃冰箱中取出，融冻，暂时放在4℃冰箱保存；c)标记好25个2ml的EP管、5mlEP管，按顺序放好；准备好200ul和1000ul的移液器枪头d)将各10%的肝组织匀浆上清液从冰箱中取出，融冻，备用；e)将10%的肝组织匀浆上清配制成1%的肝组织匀浆上清，即使用移液器移取0.1ml放于对应的2mlEP管中，分别加入0.9ml的生理盐水，使用涡旋混匀器适当混匀各个组织匀浆；f)将处理后的样品按照下面的操作表，将200ul量程的移液器调至50ul,1000ul量程的调至1000ulg)待样品和标准品加完以后，使用涡旋混匀器混匀，静置10minh)准备好比色皿，和纸i)将紫外分光光度计的波长调至595nm，双蒸水调零，测定各管的吸光度。
j)根据公式：待测样品蛋白=测定管OD值−空白管OD值标准管OD值−空白管OD值∗标准品蛋白浓度五、注意事项a)此法灵敏度高，反应后的显色液可以在2个小时之内是稳定的；b)样本的蛋白浓度必须使用生理盐水稀释至1.3g/l以下，在该范围内呈线性关系；c)考马斯亮蓝法测定组织蛋白的组织匀浆的浓度一般在0.5%-2%；d)不可用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，测完成后立即用 95%乙醇冲洗使用完比色皿，使用95乙醇立马清洗比色皿，洗去显色剂；。
gentle cell dissociation reagent使用方法 -回复
gentle cell dissociation reagent使用方法-回复Gentle Cell Dissociation Reagent (GCDS) 是一种用于细胞分离和单细胞悬浮的试剂。
它能够高效地解离细胞，同时避免对细胞膜和表面分子的不可逆损伤。
这篇文章将介绍GCDS的使用方法，包括材料准备、操作步骤和相关注意事项。
一、材料准备在开始使用GCDS之前，需要准备以下材料：1. Gentle Cell Dissociation Reagent：GCDS试剂。
2. 细胞培养物：包含要溶解的细胞的培养物。
3. 离心管：用于离心细胞。
4. 显微镜片和载玻片：用于检查细胞的解离效果。
5. 离心机：用于旋转离心。
6. 细胞培养基：用于培养解离后的细胞。
二、操作步骤1. 将细胞培养物分装至离心管中：根据实验需要，将含有要溶解的细胞的培养物转移到离心管中。
建议使用含有GCDS试剂的细胞培养基来最大程度保持细胞的完整性。
2. 加入GCDS试剂：向每个离心管中加入适量的GCDS试剂。
具体用量应根据实验的要求和试剂厂家的建议进行调整。
一般来说，加入的试剂体积应为细胞培养物体积的10-15。
3. 轻轻混合：将离心管轻轻颠倒几次，使GCDS试剂均匀分布。
注意不要产生气泡。
4. 孵育：将离心管放置在37摄氏度的培养箱中，孵育一定时间（通常为5到10分钟，可以根据细胞类型和实验需求进行调整）。
在孵育过程中，GCDS试剂会与细胞表面分子发生作用，促使细胞解离。
5. 离心：将离心管放入离心机，并设置适当的干燥条件和离心速度（一般为1000-1500rpm）。
离心的目的是分离细胞溶液和细胞团块。
6. 去除上清：轻轻倾倒离心管，使上清液排出。
注意不要将溶解的细胞等物质带出离心管。
7. 重悬细胞：向离心管中加入足够的细胞培养基，用移液管轻轻上下混合，使细胞完全重悬。
8. 考察细胞存活率：使用显微镜检查解离后的细胞的形态和存活率。
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gentleMACS™操作步骤1.背景信息在许多实验中，需要用到单细胞悬液，如用MACS®技术分选细胞时，要想获得高纯度和回收率的话，单细胞悬液就很重要。
德国美天旎生物技术有限公司开发的gentleMACS™分离器能够提供优化的程序，用于从不同的组织中获取单细胞悬液。
这些组织包括小鼠脾脏，肝脏，肺脏，脑组织等。
使用C管，能够在一个密闭的系统中进行全自动的组织分离，可以保证组织操作的无菌，以及能够同时处理2个组织样本。
2. 分离小鼠脾脏的操作步骤2.1 需要的试剂和仪器●gentleMACS 分离器●gentleMACS C 管(# 130-093-237)●细胞滤器，如30 μm n尼龙滤网（Pre-Separation Filters# 130-041-407)●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)2.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠脾脏的重量约为80–120 mg (BALB母鼠, 6–7 周龄).1. 将小鼠脾脏转移到gentleMACS C 管中，按照脾脏的数量加入缓冲液:1–2 个小鼠脾脏: 3 mL3–4个小鼠脾脏: 6 mL5–6 个小鼠脾脏: 9 mL2. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域3. 开机，选择合适的分离程序：1–2 个小鼠脾脏: m_spleen_01.3–6个小鼠脾脏: m_spleen_04.4. 运行gentleMACS 程序m_spleen_01. 或m_spleen_04.5. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管6. (可选) 以300×g 室温下离心2分钟。
7. 去除分离的组织块，将细胞悬液通过一个预分选滤器（1-2个脾脏），该预分选滤器放置于15mL管子中。
或者将细胞悬液通过一个细胞过滤网（3-6个小鼠脾脏），该滤网放置于50mL试管中。
8.用5 mL 缓冲液洗涤预分选滤器（Pre-Separation Filter）或者细胞滤器9. 弃去预选滤器或细胞滤器，室温下以300g离心10分钟，完全去上清。
10.用合适体积的缓冲液重悬细胞，用于后续应用。
3.用胶原酶分离小鼠脾脏的操作步骤3.1需要的仪器和试剂●gentleMACS 分离器●gentleMACS C 管(# 130-093-237)●细胞滤器，如30 μm n尼龙滤网（Pre-Separation Filters# 130-041-407)●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)，4度保存。
●HEPES缓冲液：10mM HEPES-NaOH pH7.4,150mM NaCl,5mM KCl, 1mM MgCl2, 1.8mM CaCl2.●胶原酶D溶液：用HEPES液配置终浓度为100mg/mL的胶原酶D溶液。
●DNase I溶液：准备终浓度为20000U/mL的DNase I溶液3.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠脾脏的重量约为80–120 mg (BALB母鼠, 6–7 周龄).1. 将1-2个小鼠脾脏转移到gentleMACS C 管中，在C管中加入4.9mL HEPES缓冲液，同时加入100uL胶原酶D溶液（终浓度为2mg/mL）2. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域3. 开机，选择合适的分离程序: m_spleen_02.4. 运行gentleMACS 程序m_spleen_02.5. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管6. 37°C孵育30分钟7. 在C管中加入12.5-25uL的DNaseI溶液（终浓度为50-100U/mL）8. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上9. 选择和运行gentleMACS 程序m_spleen_03.10. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管11. (可选) 以300×g 室温下短暂离心。
12. 去除分离的组织块，将细胞悬液通过一个预分选滤器，该预分选滤器放置于15mL管子中。
13.用5 mL HEPES缓冲液洗涤预分选滤器（Pre-Separation Filter）或者细胞滤器14. 弃去预选滤器或细胞滤器，室温下以300g离心10分钟，完全去上清。
15.用合适体积的缓冲液重悬细胞，用于后续应用。
4.用胶原酶分离小鼠肺组织的操作步骤4.1需要的仪器和试剂●gentleMACS 分离器●gentleMACS C 管(# 130-093-237)●MACSmix 试管混悬器（# 130-093-753)●细胞过滤网，70 μm筛网●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)，4度保存。
●HEPES缓冲液：10mM HEPES-NaOH pH7.4,150mM NaCl,5mM KCl, 1mM MgCl2, 1.8mM CaCl2.●胶原酶D溶液：用HEPES液配置终浓度为100mg/mL的胶原酶D溶液。
●DNase I溶液：准备终浓度为20000U/mL的DNase I溶液4.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠脾脏的重量约为110–150 mg (BALB母鼠, 6–7 周龄).1.在一个含有PBS(ph7.2)的培养皿中解剖小鼠肺组织并清洗之。
注:确保从小鼠肺组织中去除胸腺，心肌，输出神经，血管，气管，结缔组织等。
2. 将1个小鼠肺，最多3个小鼠肺组织转移到gentleMACS C 管中，在C管中加入4.9mL HEPES缓冲液，同时加入100uL胶原酶D溶液（终浓度为2mg/mL），以及10uL DNase I溶液（1个小鼠肺组织）或者20uL DNase I溶液（2-3个肺组织）（DNase I终浓度：1个肺：40U/mL;2-3个肺：80U/mL）3. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域4. 开机，选择合适的分离程序: m_lung_01.5. 运行gentleMACS 程序m_lung_01.6. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管7. 将C管放置在MACSmix试管旋转仪上，37°C孵育30分钟。
或者每隔5分钟，手工摇匀C管，重悬沉淀的组织块。
8. 反应结束后，将C管倒置在gentleMACS 分离器上9. 选择和运行gentleMACS 程序m_lung_02.10. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管11. (可选) 以300×g 室温下短暂离心。
12. 去除分离的组织块，将细胞悬液通过一个70 μm的细胞过滤网，该过滤网放置于50mL管子中。
13.用5 mL HEPES缓冲液洗涤预分选滤器（Pre-Separation Filter）或者细胞滤器14. 弃去预选滤器或细胞滤器，室温下以300g离心10分钟，完全去上清。
15.用合适体积的缓冲液重悬细胞，用于后续应用。
5.用胶原酶IV分离小鼠肝脏的操作步骤5.1需要的仪器和试剂●gentleMACS 分离器●gentleMACS C 管(# 130-093-237)●MACSmix 试管混悬器（# 130-093-753)、●红细胞裂解液（130-094-183）●细胞过滤网，70 μm筛网●缓冲液: PBS缓冲液, pH 7.2,含0.5% 牛血清白蛋白(BSA), 和2 mMEDTA (不推荐使用含Ca2+ or Mg2+的缓冲液)，4度保存。
●HEPES缓冲液：10mM HEPES-NaOH pH7.4,150mM NaCl,5mM KCl, 1mM MgCl2, 1.8mM CaCl2.●胶原酶IV溶液：用KRB溶液制备含5000U的胶原酶IV溶液。
（如胶原酶IVC5138,Sigma-Aldrich）●DNase I溶液：用KRB溶液制备终浓度为30000U/mL的DNase I溶液●0.5M CaCl2溶液●0.2M MgCl2溶液●Krebs-Ringer-Buffer(KRB)溶液：154mM NaCl, 5.6mM KCl,5.5mM葡萄糖，20.1mM HEPES,25mM NaHCO3,用NaOH调节PH值至7.45.2 步骤▲如制备的单细胞悬液用于细胞培养，所有的步骤必须在无菌条件下获得。
▲一只小鼠肝脏的重量约为750–1200 mg (CD1鼠, 8周龄).▲每C管能够处理一只小鼠肝脏1.在C管中加入4.4mL KRB溶液，20uL CaCl2，50uL MgCl2,500uL 胶原酶IV和25uL DNase I溶液，制成酶解液▲注：为了保证胶原酶的效果，建议实验当天配置酶解液。
2．在37°C下孵育酶解液30分钟3. 用KRB溶液漂洗小鼠肝脏注:确保从小鼠肺组织中去除胸腺，心肌，输出神经，血管，气管，结缔组织等。
4. 将小鼠肝脏转移到gentleMACS C 管中5. 拧紧C管盖子，倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域6. 开机，选择合适的分离程序: m_lLiver_01.027. 运行gentleMACS 程序m_liver_01.028. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管9. 将C管放置在MACSmix试管旋转仪上，37°C孵育30分钟。
10. 反应结束后，将C管倒置在gentleMACS 分离器上▲注意: 必须确保组织块在转子区域11. 选择和运行gentleMACS 程序m_liver_02.0212. 程序结束后，从gentleMACS 分离器中取出C管13. (可选) 以300×g 室温下短暂离心，收集管底的细胞标本。
14.用PEB缓冲液清洗50mL试管和100um筛网的细胞过滤网，弃去PEB缓冲液，将预湿的细胞过滤网放置在试管上。
15.重悬细胞，将细胞通过细胞过滤网。
用5mLPEB缓冲液洗涤C管后通过细胞过滤网。
最后用10mLPEB缓冲液洗涤细胞过滤网。
16.弃去细胞过滤网，并在细胞标本中再加入10mLPEB缓冲液。
17.在4°C，以17-21g离心4分钟，去除污染的肝细胞。