凝结芽孢杆菌中β-半乳糖苷酶基因的克隆及表达
名词解释——精选推荐
名词解释同裂酶:识别相同序列的限制性内切酶称为～。
它们的切割位点可能不同同尾酶（Isocaudarner）:不同的限制性内切酶切割DNA产生的末端是相同的，切是对称的，即相同的粘性末端星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称为～（star activity)。
klenow片段：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ，经枯草杆菌蛋白酶处理后，分割成两个片段，其中大片段称为～。
具有5′-3′聚合酶和3′-5′外切酶活性核酸外切酶：核酸外切酶（exonucleases）是一类从多核苷酸链的一头开始按顺序降解核苷酸的酶。
质粒的不亲和性：也称不相容性，是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定共存的现象。
α-互补：LacZ′基因编码的α-肽链是β-半乳糖苷酶的氨基末端的短片段，它同失去了正常氨基末端的β-半乳糖苷酶突变体互补时，便会产生有功能活性的β-半乳糖苷酶分子。
于是便可以应用X-gal和IPTG显色技术检测转化子。
重组子为白斑，非重组子为蓝斑。
穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体基因文库：来自于某种生物的不同DNA序列的集合基因组文库：用于构建文库的DNA来源于基因组DNAcDNA文库：用于构建文库的DNA是mRNA群体的拷贝（cDNA）基因治疗：A.对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达到治疗疾病的目的B.把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的C.运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常D.运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的低拷贝数的质粒：每个寄主细胞中仅有1-3份拷贝，这类质粒为严谨型复制控制的质粒（stringent plasmid）高拷贝数的质粒：每个寄主细胞中可高达10-60份拷贝，这类质粒为松弛型复制控制的质粒（relaxed plasmid）回文结构：DNA局部双螺旋以某一对称轴旋转180度后，与另一侧的互补片段的顺序完全的DNA结构粘性末端（cohesive end）识别位点为回文对称结构的序列经限制性内切酶切割后，产生的末端为粘性末端，形成的两个末端是相同的，也是互补的同序同切酶: 识别序列和切割位置都相同同序异切酶（Isoschizomer) 识别序列相同，但切割位点不同. 结合型质粒（conjugative plasmid），又叫自我转移质粒，除了具有自主复制所必需的遗传信息之外，还带有一套控制细菌配对和质粒结合转移的基因非结合型质粒（non-conjugative plasmid），又称非自我转移的质粒，具有自主复制的遗传信息，但失去了控制细胞配对和结合转移的基因，因此，不能从一个细胞自我转移到另一个细胞质粒的迁移（mobilization），由共存的结合型质粒引发的非结合型质粒的转移过程，叫做质粒的迁移作用。
华中农业大学生物化学本科试题库第18章基因工程基础
第 18 章基因工程根底单元自测题(一) 名词解释1. 遗传工程2.生物技术3.基因工程4.细胞工程5.蛋白质工程6.分子克隆7.载体8.转化和转染9.基因文库10. cDNA 文库(二) 填空1.自然界的常见基因转移方式有、、、。
2.不同DNA分子间发生的共价连接称为，有、两种方式。
3.基因工程的载体必需具备的条件有、、。
4.基因工程常用的载体DNA分子有、、和。
5.一个完整的DNA克隆过程应包括、、、、。
6.目的基因猎取的途径或来源有、、、。
7.基因工程过程中重组体直接筛选法的方式有、、。
8.基因克隆真核生物表达体系常见的有、、表达体系。
9.依据重组体DNA的性质不同，将重组体DNA导入受体细胞的方式有、、等。
10.假设M13的外源基因被插入到lac Z 基因内，则在含有X-gal 的培育基上生长时会消灭色菌落，假设在lac Z基因内无外源基因插入，在同样的条件下呈现色菌落。
11.当细胞与细胞或细菌通过菌毛相互接触时，就可以从一个细胞(细菌)转移到另一细胞(细菌)，这种类型的DNA转移称为作用。
12.重组DNA 技术中常用的工具酶有、、、。
(三) 选择题1.以下那种方式保证了免疫球蛋白的多样性?A.转化B. 转染C. 转位D. 转导2.微切割技术使目的基因可来源于以下那种物质?A.真核细胞染色体DNAB.人工合成DNAC. cDNAD. G-文库3．重组DNA 技术中常用的工具酶以下那项不是：A.限制性核酸内切酶B. DNA 连接酶C. DNA 聚合酶ID. RNA 聚合酶4．DNA 致癌病毒感染宿主细胞后，使之发生癌变是由于发生了：A. 转化B. 转导C. 接合D. 转座5.关于基因工程的表达，以下哪项是错误的?A.基因工程也称基因克隆B . 只有质粒DNA 可作为载体C . 重组体DNA 转化或转染宿主细胞D. 需获得目的基因6.有关质粒的表达，以下哪项是错误的?A.pB R322 含有β-半乳糖苷酶的α片段基因B.质粒较易转化C.质粒的遗传表型可作为转化子的筛选依据D.pB R322 的分子中仅有一个E.co R I 内切酶位点7.以下哪项不是重组DNA的连接方式?A.粘性末端与粘性末端的连接 B ．平端与平端的连接C . 粘性末端与平端的连接D . 人工接头连接8.有关噬菌体的表达哪项不符合?A.感染大肠杆菌时仅把D NA注入大肠杆菌内B.只有裂解一种生活方式C . 溶源和裂解两种生活方式可以相互转变D. 噬菌体是由外壳蛋白和D NA 组装而成9．D NA 克隆不包括以下哪项步骤?A. 选择一个适合的载体B . 重组体用融合法导入细胞C . 用连接酶连接载体D NA 和目的D NA，形成重组体D . 用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌10.以下哪项不能作为表达载体导人真核细胞的方法?A.磷酸钙转染 B . 电穿孔 C . 脂质体转染 D . 氯化钙转染11.以下哪项不能作为基因工程重组体的筛选方法?A.PC R 技术B. 宿主菌的养分缺陷标志补救C . 抗药性标志选择 D. Southern 印迹12.关于转化错误的选项是：A.受体细胞获得的遗传表型B.外源D NA确定整合进受体细胞基因组C.自然界中较大的外源D NA转化几率较低D.自然界中较大的外源DNA 转化几率较高13．以下哪种酶是重组DNA 技术中最重要的?A. 反转录酶B. 碱性磷酸酶C. DNA 连接酶D. DNA 聚合酶I14．在分子生物学中，基因克隆主要指：A. DNA 的复制B. DNA 的转录C. DNA 的剪切D. RNA 的转录15．在分子生物学中，重组DNA 又称为：A. 酶工程B. 蛋白质工程C. 细胞工程D. 基因工程16.cDNA 是指：A.在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB.在体外经反转录合成的与DNA 互补的DNAC . 在体外经反转录合成的与RNA 互补的RNAD. 在体内经反转录合成的与RNA 互补的RNA17．聚合酶链式反响常常缩写为：A. PRCB. PERC. PC RD. B C R18.在DNA序列的状况下，猎取目的基因的最便利的方法是：A.人工化学合成B. 基因组文库法C. cDNA 文库法D. PCR 法19.用于PC R 反响的酶是：A.DNA 连接酶B. TaqDNA 聚合酶C. 逆转录酶D. 碱性磷酸酶20.在cDNA 技术中，所形成的发夹环可用A.限制性内切核酸酶切除B. 用3′外切核酸酶切除C. 用S1 核酸酶切除D. 用5′外切核酸酶切除21，cDNA 文库包括该种生物的A. 某些蛋白质的构造基因B. 全部蛋白质的构造基因C. 全部构造基因D. 内含子和调控区22.关于感受态细胞性质的描述，下面哪一种说法不正确?A.具有可诱导性B. 具有可转移性C. 细菌生长的任何时期都可以消灭D. 不同细菌消灭感受态的比例是不同的23.在简并引物的3′端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是由于A.Taq 酶具有确定的不准确性B. 便于排解错误碱基的掺人C. 易于退火D. 易于重组连接24.变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分别，缘由主要是A.氧化物会转变pH 值B.氧化物可使DNA 的磷酸二酯键断裂C. 氧化物同DNA 形成复合物D. 氧化物在DNA 分别后不易除去(四) 是非题1. 基因表达的最终产物都是蛋白质。
半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中过量表达及IPTG诱导条件
文 章 编 号 ：０ ９ ３ Ｘ（０ ２ ０ １ ０ —０ ８ ２ ０ ） ５—０ ９ —０ ４２ ４
半 乳 糖 苷 酶 基 因 在 大 肠 杆 菌 中 过 量 表 达 及 ＩＴＧ诱 导 条 件 Ｐ
陈 卫 ， 葛佳 佳 ， 张 灏 ， 丁 霄 霖
（ 南大学 食 品学院， 苏 无锡 ２４３ ） 江 江 １ ０ ６ 摘 要 ：从 嗜 热 脂 肪 芽抱 杆 菌（ＡＭ１ ０ １ 中 克 隆 出编码 热 稳 定 的 半 乳 糖 苷 酶 蛋 白 基 因 ｂ ａ Ｂ 构 Ｉ １０ ） ｇ ，
Ａｂｔａ ｔ ｓｒｃ ：Ａ ｅｍｏ ｔｈｅＢｇ ｌｃｏｉａｅｇ ｎ ｇ ｒｍ ａ ｉ ｕ ｔ ｒｔ ｅｍｏ ｈ ｌｓ（ ＡＭ １ ０ １ ｔ ｒ ｓａ ｌ —ａａ ｔｓ ｓ ｅ ｅｂ ａ Ｂ ｆ ｈ ｄ ｏ Ｂ ｃｌ ｓ ｅ ｏｈ ｒ ｐ ｉ ｌ ｓａ ｕ Ｉ ０） １ ｗａ ｌｎ ｄｉｔ ＥＴ ２ （ ）ｖ ｃ ｒ ｎ ｘ ｒｓｅ ｓｈ ｒｃ ｉ ｏｉＢ ２ （ ３ ． ｐ ｅｓ ｎｗａ — ｓｃ ｅ ｎｏｐ 一０ ｂ ｅｔ ｄｅ ｐ ｅｓｄｉ Ｅ ｃ ｅｉ ａｃｌ Ｌ １ ＤＥ ） Ｅｘ ｒｓｉ ｓｉ ｏ ｏ ａ ｎ ｈ ｏ ｎ
Ｅ ｓｈｅ ｉｈｉ ｏ ｉ： ｉ ｕｃ ｉ ｎ ｃ ｎｄｉｉ ｎｓ ｃ ｒｃ ａ ｃ ｌ ｎｄ ｔｏ ｏ ｔｏ
口半 乳 糖 苷 酶 （ ｌ ｔｓ ａｅ Ｅ ． ． ． ３ 一 ＢＧａａ ｏｉ ｓ ， Ｃ ２ ３ １ ２ ） ｃ ｄ 俗称 乳 糖 酶 ， 其 能 催 化 Ｂ半 乳 糖 苷 键 水 解 而 具 有 因 ． 重 要 的工 业 用 途 ， 乳 品 加 工 中 常 用 Ｂ半 乳 糖 苷 酶 如 一 催化 牛乳 中乳 糖 的 水 解 ， 生 产 低 乳 糖 牛 奶 ． 以 嗜 热 脂 肪 芽 孢 杆 菌 （Ｂ ｃ ｌｓ ｔ ｒｔｅ — ａ ｉ ｕ ｓｅ ｏ ｒ ｌ ａ ｈ ｍｏ ｈ ｌｓ 能 合 成 Ｂ半 乳 糖 苷 酶 ． Ｈａｕ ｉ ｐｉ ） ｕ 一 据 ｒ ｈｓ ［］ ａ等 报
耐热β—半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达
中图分类号 ： ８ Ｑ ７
文献标 识码 ： Ａ
Ｅｘ ｅ ｓ ｏ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｏｆＴｈｅ ｍ ｏ ｔ ｂ ｅ ・ ａ ａ ｔ ｓｄａ ｅ Ｇ ｅ ｅ ｉ ． ｏ ｉ ｒ ｓ ａ ｌ ｇ ｌ ｃ ｏ ｉ ｓ ｎ ｎ Ｅ ｃ ｌ
ＧＥ ｉ—ｉ， Ｃ Ｊａｉ ＨＥＮＧ ｅ， Ｚ ａ Ｗ ｉ ＨＡＮＧ ｏ Ｈａ
乳糖酶 ， 日 乳 糖 苷 酶 （ Ｃ．２ ３ １ ２ ） 即 一 半 Ｅ． ． ． ３ 是
一
酶． 据报道 ， 嗜热脂 肪芽 孢杆 菌 Ｉ ＭＩ ０ １中含有 ３ Ａ １０ 种乳 糖 酶 基 固， 中 乳 糖 酶 Ⅱ和 Ⅲ 由 同 一 基 因 其 ｂａ 编 码 ， 糖 酶 Ｉ由 ｂ ａ 编 码 ， ｇＡ 乳 ｇＢ 并且 是 ３种 乳
ｔ ． ｖ ｃ ｏ ＫＫ一 ２ — ｏ Ｅ ∞Ｚ ｅ ｔ ｒ ｐ ２ ３ ３．Ｔｈ ｅ ｏ ｂｎ ｎ ｒ ｔｉ Ｓ ｐ ｏ ｕ ｅ ｆ ｒ ｉ ｄ ｃ ｄ ｂ Ｐ ｅ ｒ ｃ ｍ ｉ ａ ｔ ｐ ｏ ｅｎ ｗａ ｒ ｄ ｃ ｄ ａ ｔ ｎ ｕ ｅ ｙ Ｉ ＴＧ． ａ ｄ ｅ ｎ ｓ ｏ ｄ ｔ ｅ ｓ ｍｅ ｔ ｅ ｍｏ ｓａ ｉ ｔ ｎ ｈ ｗｅ ｈ ， ｈ ｒ — ｔ ｂ ｌ ｙ ａ ｄ ｍｏｅ ｕ ａ ｓ ｓ ｔ ｅ ｏ ｉ ｎ ｌ ｅ ｚ ｍｅ Ｔｈ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｌｖ ｌ ｓ ｉ ｌｃ ｌｒ ｍａ ｓ ａ ｈ ｒ ａ ｎ ｙ ． ｇ ｅ ｅ ｐｅ ｓ ｅ ｅ ｏ
来 ＿ ・ ， 中源 自嗜热 脂 肪 芽 孢杆 菌 的 乳糖 酶 的 ｌ 其 一 最适温度 为 ５ ５℃ ， 适 合工 业 化 生 产 的 一 种 乳 糖 是
究 尚未 见报 道 ， 目前仅 有 ４种 耐 热酶 基 固被 克 隆 出
１ 材 料 与方 法
分子实验复习题
简述基因的克隆和表达的步骤1）获得目的基因和质粒载体；2）形成重组质粒；3）制备感受态细胞，用重组质粒转化大肠杆菌细胞；4）培养大肠杆菌，让重组质粒及外源目的基因形成大量拷贝；5）筛选含重组质粒的大肠杆菌细胞，进行检查或鉴定；6）表达目的蛋白。
实验一：质粒DNA的提取及鉴定1.分子生物学实验常用载体有哪些?它们的特点是什么?常用载体：大肠杆菌中的质粒、λ噬菌体、M13噬菌体、噬菌粒、酵母人工染色体载体、动植物病毒载体。
特点：具有复制子（一段具特殊结构的DNA序列，使与之结合的外源基因复制）、可检测的遗传表型、限制性内切酶单一识别位点（便于外源基因插入）、适合的拷贝数（有利于载体制备；使细胞中克隆基因的剂量增加）2.分离基因组DNA和质粒DNA有哪些异同点？相同：提取的步骤基本上都属DNA的提取步骤，包括细胞裂解，DNA释放，纯化，最后沉淀溶解。
不同：质粒提取过程中，有一个DNA变性、复性的过程，这个与基因组提取完全不同，这是利用质粒是以超螺旋结构存在于大肠杆菌中的特殊状态，分离纯化质粒时总是会利用这个特点来分离基因组DNA与质粒DNA。
3.核酸分离过程中，酚、氯仿、异戊醇的作用是什么？1）酚、氯仿作用是变性蛋白质。
酞与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。
所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
基因工程考试题目整理
1.如何区分重组DNA和空载体自连：（一）检测方法（1）双抗性筛选：具有四环素和氨苄青霉素两种抗生素抗性基因作为选择标记，一种抗性标记用来正选择转化子，另一种通过插入失活而可以鉴定重组子。
Ori位于Amp+和tet+这两个基因之间，在四环素平板上出现的菌落一定是获得了质粒的转化子，在此基础上，如果四环素抗性转化子对氨苄青霉素敏感，则说明在载体中有外源片段的插入而使氨苄青霉素抗性失活，即重组子；若对氨苄青霉素有抗性，则此转化子的质粒是空载体。
（2)抗生素插入失活法：如BamHI可以从四环素位点切开，使该基因不能表达，但仍能表达氨苄抗性基因，对四环素是敏感的。
筛选重组pBR322 按照以下方法进行，将转化细胞培养于氨苄培养基中，只有转化细胞可以生长形成克隆，影印到四环素培养基上，不能在该培养基上生长的菌落可能就是目的克隆。
（3）限制性内切酶法：外源片段通过特定的酶切位点插入到载体上，因此，可以通过这些限制性酶酶切重组质粒，电泳分析插入片段长度是否正确。
（抗生素+酶切检测+测序）（4）蓝白斑筛选：多克隆位点存在于编码β-半乳糖苷酶的N端的DNA序列中，与pUC载体一起使用的宿主菌携带编码β-半乳糖苷酶的C端序列的基因片段。
通过α互补机制，两个片段在体内相互弥补，产生一个有活性的β-半乳糖苷酶。
以X-gal作为指示剂。
若通过插入外源DNA到多克隆位点中而打断了β-半乳糖苷酶的部分基因，不能产生有活性的β-半乳糖苷酶，X-gal不会反应，重组子菌落为白色，而自连空载体转化的菌落则是蓝色的。
（5）PCR法：如果已知插入DNA片段的某些序列，就可以通过PCR的方法进行鉴定（6）菌落原位杂交：把菌落或噬菌斑转移到硝酸纤维素膜上，然后溶菌，变性并固定DNA，最后用标记的DNA或RNA探针进行杂交来检测这些被转移的菌落或噬菌斑。
（7）测序法：若通过前面这些方法鉴定之后还是有疑虑，不知道是否阳性者确为真阳性而不是空载体自连，可以将其送到生物公司进行测序以最终确定之。
乳糖酶
乳糖酶的研究现状及应用进展摘要：本文主要介绍了乳糖酶的理化性质及分类，分离纯化方法，酶活力测定方法，还介绍了乳糖酶在食品﹑医药上的应用及其最新研究进展。
ABSTRACT: This article mainly introduced physical and chemical properties, classification,the methods of separation and purification,the determination method of the enzyme activity,and also introduced application and the latest research progress of β-galactosidase in food and pharmaceutical field.关键词：乳糖酶分离纯化研究现状应用KEY WORD:β-galactosidase Separation and purification Research status Application前言：乳糖酶(lactase)也称为β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
乳糖酶分布广泛，理化性质稳定，催化能力强，使得它在食品和医药领域有着广泛的应用，特别是在医药领域中，乳糖酶能够水解乳糖成半乳糖和葡萄糖，促进牛奶的被人体更好的吸收和利用以治疗“乳糖不耐症”。
当前，乳糖酶的固定化和基因方面的研究也相当热且研究成果显著。
这里介绍乳糖酶一些基本的理化性质，分离纯化和酶活力测定方法，还有乳糖酶在食品﹑医药上的应用及其最新研究进展，通过这些介绍使得人们对乳糖酶有更加清晰和全面的认识。
1乳糖酶概述1.1乳糖酶分布乳糖酶(lactase)称为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactohydrolase)，简称β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)。
Paenibacillus sp.K1 β-半乳糖苷酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
ｌ Ｐａ ｎｂ ｃ／ ｐ．Ｋ１ ｙ １ ＤＮＡ ｎ ｌｓｓ．Ｔ ｅ ｏ ｃ ＤＮＡ ｉｒ ｒ ｆ Ｐ ｅ ／ａ ／／ｓ ｓ ｆ ｄ ａ ｅ ／ａ ／／ｓ ｓ ｅ ｓ ｕ ｂ ６Ｓ ｒ ａ ａｙ ｉ ｈｅｇ ｎ ｍｉ ｌ ａ ｙ ｏ ａ ｎｂ ｃ／ｕ ｐ．Ｋ１ Ｗａ ｏ ｓｒ ｃｅ ｎ ｂ ｓ ｃ ｎ ｔｕ ｔｄ ｉ Ｅｓ —
文 章 编 号 ：６ １ ３２ ２０ ）６０６ －５ １７－ ５ （０８ ０ ．０９０ ９
Ｐ ｅｉ ｃ ｌｓｓ ．Ｋ 一 乳 糖 苷 酶 基 因 的 ａｎｂ ｉｕ ｐ １Ｉ半 ａｌ ３ 克 隆及 在 大肠 杆 菌 中 的表 达
陆文伟 ， 孔文涛 ， 孙芝 兰 ， 孔健 ，季明杰
（ 东 大 学 微 生 物 技 术 国 家重 点 实 验 室 ， 山 山东 济 南 ２０ ０ ） ５ １０
ｓ ｐ．Ｋ１ ｈ ｉ ｎ ｙ ａ ｕｉ ｅ ｓｎ ｆ ｎｔ ｈ ｏ ｔｇ ａ ｈ ． ．Ｔ ｓｅ ｚｍｅ Ｗ ｐ ｒ ｄ ｕ ｉ ａ ｉ ｙ ｃ ｒ ｍａｏ ｒｐ ｙ ｓ ｉ ｆ ｇ ｉ
６个蓝 色菌落； 对阳性克隆 中插入 的 Ｄ Ａ片段序 列测定 ， 定 出 １ Ｎ 鉴 个编 码全 长为 ２ ２ ｐ并携 带有组成 型启动 子 ０ ８ｂ
的 ｐ半乳糖苷酶基 因。将该基 因导入 大肠杆 菌 Ｂ ２ （ Ｅ ） 实现 了 ｐ半乳糖 苷酶 高效表 达 ， Ｌ １ Ｄ ３ 中， 其酶 活为 ２ ．６Ｕ ５ ０ ／ ｍ， Ｌ 高于原始菌株的 ４ ５ ／ Ｌ 并进一步 用亲和层 析将 该酶进行 了纯化 。 ．５ ｍ ， Ｕ
基因工程作业题及答案
基因工程作业题及答案作业一：一、名词解释：1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。
2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。
这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。
这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。
4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。
在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。
有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。
5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。
增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。
6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。
二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,…等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
解淀粉芽孢杆菌中性植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达
钙 ， 放 出肌 醇 、 机 磷 和 被植 酸螯 合 的 一些 微 量 元 素 ， 加 机 体 的正 常 代 谢从 而提 高 饲 料 的 营养 价 释 无 参 值 Ｊ 目前 ， 。 真菌来 源 的酸 性植 酸 酶 已经在 饲 料 中广 泛应 用 ， 催化 反应 的有效 ｐ 酶 Ｈ值 在 ４ ５～６ ０之 ． ． 间， 但这 种酶不 适合 消化 道呈 中性 的鲤鱼科 鱼 类 ， 限制 了酸 性 植 酸酶 的应 用范 围 。研 究 表 明 ： 源 来
第 ３ 卷 第 ２期 １
２１ ０ ０年 ４月
河 南 科 技 大 学 学 报 ：自 然 科 学 版
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｎ ｎ Ｕａｕ ａ ｃｅ ｃ ｏ ｒ ａ ｆＨｅ ａ ｉｅ ｓ ｙ ｏ ｃｅ ｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ： ｔ ｒ ｌＳ ｉｎ ｅ ｔ
宿 主细胞 Ｇ １ ５实现 了分 泌性 表达 ， Ｓ１ 为利 用异 源表 达系统 进 行 中性 植 酸酶 的大 规模 发 酵生 产 进行 了有
益 的探索 。
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ． 一
（） １ 质粒 与菌株 。大肠杆 菌 （ ｓ ｅ ｃ ｉ ｃｌ Ｄ ５ 由本 实 验 室保 存 ， 赤 酵母 Ｇ １５和 表 达载 体 Ｅｃ ｎ ｈａ ｏｉ Ｈ ａ ｈ ） 毕 Ｓ１ ｐ Ｉ９ ＰＣ Ｋ为 Ｉｖｔ ｇｎ公 司产 品 。解 淀 粉芽孢 杆菌 Ｂ １ ｎ ｉｏｅ ｒ Ａ １由本 实验室 保存 。
Ｖｏ ． Ｎｏ． １ ３１ ２
Ａｐ ． ｒ ２０１ ０
文章编 号 ：６ ２— ８ １ ２ １ ）２— ０ ９— ４ １７ ６ ７ （０ ０ ０ ０ ６ ０
解 淀 粉 芽 孢杆 菌 中性植 酸酶 基 因 的 克 隆及 其在 毕 赤酵 母 中的表 达
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆与表达
分子生物学综合实验论文题目:绿色荧光蛋白(GFP)的基因克隆及表达中国·黄石2010年12月绿色荧光蛋白（GFP）基因的克隆与表达胡丽丹（湖北师范学院生命科学院0803班湖北黄石 43500）摘要：绿色荧光蛋白（GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
用碱裂解法提取的的质粒pEGFP-N3和pET-28α经过Bam HI和Not I双酶切连接后，得到pET-28α-pEGFP-N3重组质粒。
取部分的重组质粒做酶切实验，验证重组质粒的存在性，剩下的重组质粒导入表达菌 E. coLi BL-21大肠杆菌感受态细胞中。
重组有GFP基因的E. coLi BL-21，在含有1μL/mL的卡纳霉素的LB培养基上培养。
当A600达到0.7时，用终浓度为0.8mM 的异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养3小时，离心得到下层绿蓝色沉淀物即可。
关键词：绿色荧光蛋白 GFP 基因的克隆荧光蛋白水母CLoning and Expression of Green FLuorescent Protein GeneHU Li-Dan( Class three Grade eight,College of Life Sciences department,Hubei Normal university ,Huangshi 435000)Abstract：Green fluorescent protein（GFP）,one kind of bioluminenscent proteins ,hasbeen found existing in the internal of Coelenterates,such as fellyfish,polyp and coral pEGFP-N3 and pET-28αwas harvested by sodium dodecylsulfate(SDS) alkaline process extraction and Agarose Gel Electrophoresis.After treating the two targeted plasmids with Bam HI and Not I,the recombinant plasmid,namely pET-28α-pEGFP-N3, can be retrieved by furthermore Agarose Gel Electrophoresis. Taking slight recombinant plasmid proves that recombinant plasmid does exist by dienzyme cutting(Bam H I and Not I).The recombinant plasmid lefting would be transported to E. coLi BL-21the competent cells. E. coLi BL-21containing recombinant GFP gene was grown overnight in LB solid medium containing kanamycin (Final concentration: 1 μL/mL). When absorbance at 600 nm value was 0.7, isopropyL β-D-thiogalactopyranoside was added to 0.8 mM and the incubation was continued an addition 3 h.Key words:Green fluorescent protein Fellyfish Genetic Cloning Fluorescin目录1.前言：01.1绿色荧光蛋白（GREEN FLUORESCENT PROTEIN，GFP）01.1.1 GFP研究背景01.1.2 GFP研究应用11.2基因的克隆与表达22.实验试剂及实验仪器：42.1实验试剂与材料：52.2实验仪器：63.实验方法63.1质粒提取方法:63.2琼脂糖凝胶电泳及回收:83.3酶切及连接：93.4E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入：113.5酶切验证重组质粒：123.6GFP基因的表达133.6.1活化菌种133.6.2扩大培养133.6.3 IPTG诱导GFP基因的表达134.结果与分析134.1质粒提取过程中现象与结果：134.2琼脂糖凝胶电泳144.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入结果：154.4酶切验证重组质粒154.5GFP基因的表达结果：165.讨论：165.1提取质粒出现图六的原因是：165.2琼脂糖凝胶电泳出现图七、图八原因：175.3E. CO L I DH5Α或E. CO L I BL21感受态制备及转入出现图九、十原因:17 5.4酶切验证重组质粒出现图十一原因：195.5GFP基因的表达结果如图十二、十三原因：196.参考文献20前言：1.1绿色荧光蛋白（green fluorescent protein ，GFP ）1.1.1 GFP 研究背景绿色荧光蛋白是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
凝结芽孢杆菌的特性及研究进展
凝结芽孢杆菌的特性及研究进展赵树平;包维臣;高鹏飞;姚国强;郭霄;张和平【摘要】论文主要对凝结芽孢杆菌的一般特性、益生作用机理及其在动物和人体方面的研究进展进行了阐述,旨在为凝结芽杆菌的进一步研究提供一定的理论基础.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2014(035)002【总页数】6页(P6-10,20)【关键词】凝结芽孢杆菌;特性;作用机理;研究进展【作者】赵树平;包维臣;高鹏飞;姚国强;郭霄;张和平【作者单位】内蒙古和美科盛生物技术有限公司,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古和美科盛生物技术有限公司,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古和美科盛生物技术有限公司,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特010018;内蒙古和美科盛生物技术有限公司,内蒙古呼和浩特010010;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特010018;内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室,内蒙古呼和浩特010018【正文语种】中文【中图分类】S811.619世纪初，凝结芽孢杆菌因导致炼乳出现大规模的凝结现象及番茄、土豆等制品的酸败变质被深入的研究，而于1932年被首次分离并对其进行了详细描述[1-3]。
发展至今，诸多研究表明凝结芽孢杆菌作为一种独特的新型芽孢益生菌，其既具有乳酸菌的产乳酸特性，又具有芽孢杆菌的丰富的酶系统及抗逆性强、耐高温高压、稳定的储存特性。
作为益生菌家族的后起之秀，被广泛地应用于医药、食品、保健、畜牧和水产等行业，并能产生多种健康的影响：调整肠道微生态平衡、提高机体免疫、产生抑菌物质及促进动物生长，成为益生菌中研究的热点。
本文对国内外关于凝结芽孢杆菌特性、益生作用、益生机理及在动物中的应用总结和概括。
1.1 凝结芽孢杆菌的一般特性随着对凝结芽孢杆菌研究的不断深入，其特性也逐渐被人熟知。
乳糖操纵子的正负调控机制
1.乳糖操纵子的正负调控机制2.⑴乳糖操纵子lac是由调节基因lac I、启动子lac P、操纵基因lac O和结构基因lac Z、lac Y、lac A组成的;lac I 编码阻遏蛋白,lac Z、lac Y、lac A分别编码β-半乳糖苷酶,β-半乳糖苷透性酶和β-半乳糖苷转乙酰基酶;3.⑵阻遏蛋白的负性调控：当培养基中没有乳糖时,阻遏蛋白结合到操纵子中的操纵基因上,阻止了结构基因的表达；当培养基中有乳糖时,乳糖真正是异乳糖分子和阻遏蛋白结合,引起阻遏蛋白构象改变,不能结合到操纵基因上,使RNA聚合酶能正常催化转录操纵子上的结构基因,即操纵子被诱导表达;4.⑶cAMP-CAP是一个重要的正调节物质,可以与操纵上的启动子区结合,启动基因转录;培养基中葡萄糖含量下降,cAMP合成增加,cAMP与CAP形成复合物并与启动子结合,促进乳糖操纵子的表达;5.⑷协调调节：乳糖操纵子调节基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控两种机制,互相协调,互相制约;6.详述大肠杆菌色氨酸操纵子的调控机理;7.答：大肠杆菌色氨酸操纵子的转录受阻遏和衰减两种机制的控制,前者通过阻遏蛋白和操纵基因的作用控制转录的起始,后者通过前导序列形成特殊的空间结构控制转录起始后是否进行下去;8.⑴色氨酸操纵子的可阻遏系统：9.在阻遏系统中,起负调控的调节基因的产物是一个无活性的阻遏蛋白,色氨酸是辅阻遏物；当色氨酸不足时,阻遏蛋白无活性,不能和操纵基因结合,色氨酸操纵子能够转录；当色氨酸充足时,阻遏蛋白和它结合而被激活,从而结合到操纵基因上,而色氨酸操纵子的操纵基因位于启动基因内,因此,活性阻遏物的结合排斥了RNA聚合酶的结合,从而抑制了结构基因的表达;10.⑵色氨酸操纵子的衰减调控11.在色氨酸操纵子的操纵基因和第一个结构基因之间有一段前导序列,在前导序列上游部分有一个核糖体结合位点,后面是以起始密码AUG开头的14个氨基酸的编码区,编码区有两个紧密相连的色氨酸密码子,后面是一个终止密码子UGA,在开放阅读框下游有一个不依赖ρ因子的终止子,是一段富含G/C的回文序列,可以形成发夹结构,因此可以在此处终止转录;另外前导序列包含4个能进行碱基互补配对的片断1区、2区、3区和4区;它们能以1、2和3、4或2、3的方式进行配对,从而使前导序列形成二级结构的变化;在细菌中,翻译与转录偶连,一旦RNA聚合酶转录出trp mRNA中的前导肽编码区,核糖体便立即结合上去翻译这一序列;当细胞中缺乏色氨酸时,Trp-tRNA Trp的浓度很低,核糖体翻译前导肽至两个连续的色氨酸密码子处就陷入停顿,这时核糖体只占据1区,由RNA聚合酶转录的2区和3区便可配对,4区游离在外,这样就不能形成终止子结构,RNA聚合酶就可以一直转录下去,最后完成trp全部结构基因的转录,得到完整的mRNA分子;当细胞中存在色氨酸时,就有一定浓度的Trp-tRNATrp,核糖体便能顺利通过两个连续的色氨酸密码子而翻译出整个前导肽,直到前导肽序列后面的终止密码子UGA处停止;此时,核糖体占据了1区和2区,结果3区和4区配对,形成转录终止子结构,使RNA聚合酶终止转录;实现衰减调控的关键在于时间和空间上的巧妙安排;在空间上,两个色氨酸密码子的位置很重要,不可随意更改；在时间上,核糖体停顿于两个色氨酸密码子上时,序列4应当还未转录出来;12.基因组文库与cDNA文库的区别：①材料不同;基因组文库以DNA为材料,而cDNA文库以mRNA为材料;②基因结构不同;基因组文库中包含了所有的基因,而cDNA文库只包含需要表达的基因;对真核细胞来说,基因组文库中所含的是带有内含子和外显子的基因组基因,而cDNA文库中则是已剪接去除了内含子的cDNA;③文库内容不同;cDNA文库所包含的遗传信息远少于基因组文库,并且受细胞来源或发育时期的影响;④载体不同;构建基因组文库常用λ噬菌体和柯斯质粒等高容量克隆载体,而构建cDNA文库的载体选择要根据该文库的用途来确定;⑤使用范围不同;基因组文库常用于分离特定的基因片段、分析特定的基因结构以及研究基因表达调控等,而cDNA文库可用于某些RNA病毒等的基因组结构研究及有关基因的克隆分离;。
乳酸菌与乳糖酶
乳酸菌与乳糖酶
何熹;王彦宁;李超;王艳萍
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2016(037)016
【摘要】介绍了β-半乳糖苷酶的来源分布、基因组成差异、工业中的用途以及生产制备方法；并以乳酸菌为例，阐述了不同来源乳酸菌中乳糖酶的种类，乳酸菌中乳糖酶基因的克隆，相关的表达体系，以及利用乳酸菌生产β-半乳糖苷酶的方法以及发展前景。
【总页数】4页(P202-205)
【作者】何熹;王彦宁;李超;王艳萍
【作者单位】天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457;天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津300457
【正文语种】中文
【相关文献】
1.乳酸菌产乳糖酶的培养条件研究 [J], 付金衡;许杨;孙红斌
2.复合乳酸菌胶囊治疗轮状病毒肠炎继发乳糖酶缺乏疗效观察 [J], 张文祥;何素丽
3.乳糖酶水解牛乳的乳酸菌发酵研究 [J], 陈小真;陈惠萍
4.帝斯曼乳糖酶助力爱宝牛奶伴侣乳糖酶系列荣获2010年老百姓最喜爱妇幼健康用品 [J],
5.帝斯曼乳糖酶助力爱宝牛奶伴侣乳糖酶系列荣获2010年老百姓最喜爱妇幼健康用品 [J],
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》考试试卷(319)
河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、分析题（5分，每题5分）1. 写出从组织中抽取RNA的关键步骤，并解释如何判断RNA质量。
答案：（1）从组织中提取RNA的步骤如下：①将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol 裂解液溶解样品，充分吹打混匀。
②每1ml TRIzol加入2.0ml氯仿，剧烈震荡15s，室温放置5min。
③4℃，10000g离心15min，此时RNA主要集中在水相中。
④将水相转移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，室温放置10min。
⑤4℃，10000g离心10min，此时可在离心管底部观察到通过观察白色沉淀，即为RNA。
⑥用75温热的乙醇洗涤沉淀，4℃，7500g以下，离心5min，弃上清。
⑦超净台中吹干，加入无RNase的水溶解。
（2）检测RNA质量的方法如下：①凝胶成像：取适量RNA溶液加入电泳缓冲液后，跑琼脂糖凝胶电泳，如果28S和18S条带明亮、清晰，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则认为RNA的质量是好的。
②吸光度检测：使用紫外分光光度计检测RNA样品在260nm、280nm处的吸光度，若两者的比值在1.8～2.0时，可认为RNA纯度良好，蛋白质等其他有机物的污染可以接受。
解析：2、判断题（55分，每题5分）1. 肿瘤通常是抑癌基因和原癌基因两者都突变后才发生的（）。
答案：正确解析：恶性肿瘤的形成往往涉及多个数个基因的改变，与原癌基因、抑癌基因突变的逐渐积累有关。
肿瘤的发生归根到底是因为原癌基因的激活和抑癌基因的功能丧失，往往涉及多个基因的改变。
2. 叶绿体的rRNA核糖体是由16S、5S、23S、5.8S组成的。
（）答案：错误解析：叶绿体蛋白合成所有的核糖体的沉降系数为70S，由鞭叶的两个亚基（50S和30S）组成，和原核生物的核糖体十分相似。
蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析
蜡样芽孢杆菌启动子片段克隆及转录活性分析
张婷婷;马磊
【期刊名称】《江苏农业科学》
【年(卷),期】2014(42)4
【摘要】为研究蜡样芽孢杆菌基因的转录调控特征，通过鸟枪法和蓝白斑筛选，获得57个蜡样芽孢杆菌启动子片段，并以β-半乳糖苷酶为报告基因，比较了这些启动子片段在大肠埃希菌中的转录活性。
对转录活性较高的4个启动子克隆片断进行测序、序列比对、特征分析，发现这4个克隆序列具有启动子元件、核糖体结合序列特征，其中2个克隆序列在枯草芽孢杆菌也表现出活性，表明兼有蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌RNA聚合酶σ因子序列识别特征。
【总页数】3页(P25-27)
【作者】张婷婷;马磊
【作者单位】石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000;石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000
【正文语种】中文
【中图分类】Q933
【相关文献】
1.t（6；11）染色体易位肾细胞癌中Alpha基因片段的克隆及启动子活性分析
2.蜡样芽孢杆菌ATCC14579核黄素操纵子的克隆及在枯草芽孢杆菌中的表达
3.蜡梅CpEXP1基因启动子的克隆及活性分析
4.厚藤脱水素基因IpDHN启动子
IpDHN-Pro的克隆和调控转录活性分析5.橡胶树白粉菌(HO-73)启动子WY172不同长度片段的克隆及表达活性分析
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
pMD18-T使用说明书(附序列)
-4-
MEMO
-5-
技术咨询热线：
0411-87641685，87641686 8008909508，4006518769
宝生物工程（大连）有限公司
Page
1 1 1 1 1 1 2 2 2 3 4 4
●制品说明
pMD®18-T Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning）的专用载体。本载体由pUC18 载体改建而成， 在pUC18 载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点，用EcoR V进行酶切 反应后，再在两侧的 3＇端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物 的 3＇末端添加一个“A”的特性，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的连接、克隆效率。 由于本载体以 pUC18 载体为基础构建而成，所以它具有同 pUC18 载体相同的功能。此外，本制品中的高 效连接液 Solution I 可以在短时间内（约 30 分钟）完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化，大 大方便了实验操作。本制品中的 Control Insert（500 bp）还可以用于 Control 反应。
2）加入 5 μl（等量）的 Solution I。 3）16℃反应 30 分钟。
注） ① 室温（25℃）也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低。 ② 5 分钟也能正常进行连接反应，但反应效率稍微降低。 ③ 长片段 PCR 产物（2 kbp 以上）进行 DNA 克隆时，连接反应时间请延长至数小时。
●使用注意
1. Solution I 请于冰中融解。 2. 克隆时使用的 Insert DNA 片段（PCR 产物）建议进行切胶回收纯化，否则 PCR 产物中的短片段
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
半乳糖苷 酶。
关键词 ： 凝结芽孢杆 菌； ３ － 半乳糖苷 酶； 表达纯化 ； 乳糖水解
中图 分 类 号 ： Ｑ ８ １ ５ ； Ｔ Ｑ ９ ３ 文 献 标 志码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ０ — ２ ０ ０ ６ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ６ — ０ ０ ３ ５ — ０ ５
（ 南 京 林 业 大 学 化 学工 程 学 院 ， 江 苏 省 生 物 质 绿 色 燃 料 与 化 学 品重 点实 验 室 ， 江 苏 南 京 ２ １ ０ ０ ３ ７ ）
摘要 ： 从 １株快速水解乳 糖发 酵产酸 的凝 结芽孢 杆菌 Ｎ Ｌ ０ １的基 因组 上克 隆获 得 了 １ 个新的 Ｂ 一 半 乳糖苷 酶基 因， 该基 因长度 为 １ ９ ９ ８ ｂ ｐ ， 其编码 的氨基酸序列 与已经报道 的 ｐ 一 半乳糖苷酶相似度低于 ４ ０ ％。将该 ｐ 一 半 乳糖
第３ ９卷
第 ６期
南 京 林 业 大 学 学 报 （自然 科 学 版 ）
Ｖｏ １ ． ３ ９，Ｎｏ ． ６ ＮＯ Ｖ ． ，２ ０１ ５
２ ０ １ ５年 １ １ 月
Ｊ ｏ ｕ ｎａ ｒ ｌ ｏ ｆ Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ（ Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ Ｅ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ）
苷酶基 因整合到表达载体 ｐ Ｅ Ｔ Ｄ ｕ ｅ ｔ － １上 ， 并在 大肠 杆菌 Ｂ Ｌ ２ １ （ Ｄ Ｅ ３ ） 中进 行重组表 达， Ｂ 一 半乳糖苷酶粗酶酶 活为
１ １ ９ ． ０ Ｉ ￣ ｍｏ ｌ ／（ ｍｉ ｎ ・ ｍｇ ） ， 经镍柱纯化获得 的重组 ｐ 一 半乳糖苷酶酶活为 ６ ６ ６ ． ４ Ｉ ｘ ｍｏ ｌ ／ （ ｍ ｉ ｎ ・ ｍ ｇ ） 。利用该重组 Ｂ 一 半 乳糖苷酶 水解乳糖 ， 经Ｔ Ｌ Ｃ和 ＨＰ Ｌ Ｃ分析 显示该 酶具有将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖 的活力 ， 是一种新型 的 Ｂ 一
ｉ ｎ ｔ ｏ ｇ ｌ ｕ ｃ ｏ ｓ ｅ ａ ｎ ｄ ｇ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｓ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ｉ ｓ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｂ —ｇ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｓ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｓ １ ９ ９ ８ ｂ ｐ，ａ ｎ ｄ ｉ ｔ ｓ ｃ ｏ ｄ ｉ ｎ ｇ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ
Ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ａ ｎ ｏ ｖ ｅ ｌ Ｉ ￣ － ｇ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｓ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｂ ａ ｃ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｃ ｏ ａ ｇ ｕ ｌ ａ ｎ ｓ
ｗ ａ ｓ ６ ６ ６ ． ４ Ｉ ｘ ｍｏ ｌ ／ （ ｍｉ ｎ ・ ｍ ｇ ）ａ ｆ ｔ ｅ ｒ Ｎ ｉ — Ｎ Ｔ Ａ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ． Ｉ ｔ ｗ ａ ｓ ｉ ｎ ｄ ｉ ｃ ａ ｔ ｅ ｄ ｒ ｆ ｏ ｍ ｔ ｈ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｐ ｒ ｏ ｄ —
ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｖ ｅ ｒ ｙ ｌ ｏ ｗ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｔ ｙ ｗｉ ｔ ｈ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｒ ｅ ｐ ｏ ａ ｅ ｄ Ｂ— ｇ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｏ ｓ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ． Ｔ ｈ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗ ａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｉ ｎ ｔ ｏ ｐ Ｅ Ｔ Ｄｕ ｅ ｔ 一１ ａ ｎ ｄ ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ
Ｅ ｓ ｃ ｈ ｅ ｒ ｉ ｃ ｈ ｉ ａ ｃ ｏ ｌ ｉ Ｂ Ｌ ２ １ （ Ｄ Ｅ ３ ） ． Ｔ ｈ ｅ ｃ ｒ ｕ ｄ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｗ ａ ｓ １ １ ９ ． ０ ， ｉ Ｌ ｍ ｏ ｌ ／ （ ｍ ｉ ｎ ・ ｍ ｇ ） ， ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｐ ｕ ｉ ｒ ｉ ｆ ｅ ｄ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ０ — ２ ０ ０ ６ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ６ ． ０ ０ ７
凝 结芽 孢 杆 菌 中 １ ３ 一 半 乳 糖 苷 酶 基 因 的 克 隆 及 表 达
郑 兆娟 ， 徐 颖 ， 石 磊 ， 欧 阳嘉
Ｚ ＨＥ Ｎ Ｇ Ｚ ｈ ａ ｏ ｊ ｕ ａ ｎ ， ＸＵ Ｙ ｉ ｎ ｇ ，Ｓ Ｈ Ｉ Ｌ ｅ ｉ ，Ｏ Ｕ Ｙ Ａ Ｎ Ｇ Ｊ ｉ ａ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ Ｅ ｎ ｇ ｉ ｎ ｅ ｅ ｉ ｒ ｎ ｇ ，Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｋ ｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｆ Ｂ ｉ ｏ ｍ ａ ｓ ｓ — Ｂ ａ ｓ ｅ ｄ Ｇ ｒ ｅ ｅ ｎ Ｆ ｕ ｅ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ Ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｓ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ３ ７ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）