人全血DNA的提取实验步骤
提dna步骤及原理
提dna步骤及原理DNA提取是一种分离纯化DNA的过程，它可以用于分子生物学的各种实验和研究。
以下是DNA提取的步骤及原理：步骤1：细胞破碎首先，需要将目标细胞破碎以释放DNA。
这可以通过机械方式（如刮取细胞）或者化学方式（如孵育细胞在酶溶液中）来完成。
破碎细胞的目的是破坏细胞膜和核膜，释放DNA。
步骤2：细胞溶解接下来，要将破碎细胞中的蛋白质和其他细胞组分溶解。
这可以通过加入表面活性剂（如SDS）来破坏蛋白质的结构，使其变为可溶解状态。
细胞溶解的目的是除去蛋白质和其他细胞成分，保留DNA。
步骤3：蛋白质沉淀通过加入盐类，可以使DNA溶液中的蛋白质形成沉淀。
盐类中的离子与蛋白质形成复合物，使其聚集在一起并沉淀到溶液底部。
这一步的目的是除去大部分蛋白质，净化DNA溶液。
步骤4：DNA沉淀将溶液中的DNA沉淀到管壁上，可以通过加入酒精或其他有机溶剂来实现。
这些溶剂改变了DNA溶液的物理性质，使DNA变得不溶于水而沉淀。
这一步的目的是分离纯化DNA。
步骤5：洗涤和纯化DNA最后，通过洗涤沉淀的DNA，可以除去残留的盐类和其他杂质。
洗涤可以使用乙醇或其他缓冲液。
洗涤后，可以用缓冲液溶解DNA并进一步纯化。
DNA提取的原理是基于DNA和其他细胞成分的物理和化学特性的差异。
其中，细胞破碎和溶解步骤破坏了细胞膜和核膜，并释放了DNA。
蛋白质沉淀和DNA沉淀步骤利用了盐类和有机溶剂对不同分子的溶解性差异，将蛋白质和DNA分离。
洗涤步骤则进一步清洁和纯化DNA。
整个过程旨在从复杂的细胞混合物中分离纯化出DNA，以便在后续实验中进行分析和应用。
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
全血基因组DNA提取试剂盒使用说明一、试剂盒组成及存储条件：1.试剂盒包括蛋白酶K、缓冲液、洗涤缓冲液、脱水溶液等。
2.试剂盒应存放在4℃以下避光干燥处，避免冻结。
二、实验前准备：1.准备所需的实验耗材和设备，如离心管、恒温振荡器、离心机等。
2.取出全血样品，可以是新鲜全血或已离心制备的全血细胞。
三、DNA提取步骤：1.取出全血样品，用洗涤液洗涤细胞沉淀并离心收集，去除红细胞。
2.加入蛋白酶K将细胞裂解，释放DNA。
3.加入缓冲液和脱水溶液，沉淀DNA并洗涤。
4.最终稀释DNA并保存在适当的条件下。
四、实验注意事项：1.操作过程中需注意无菌操作，避免污染。
2.加入蛋白酶K的量应准确控制，不要过多或过少。
3.混合溶液时需轻轻摇匀，避免气泡的产生。
4.稀释保存DNA时，需使用无核酸酶的载体溶液，如TE缓冲液。
五、质控及结果分析：1.可以通过琼脂糖凝胶电泳或比色法检测提取的DNA质量。
2.检测DNA浓度和纯度，确保提取的DNA适用于后续实验。
3.可以保存提取好的DNA样品，以备后续实验使用。
六、应用领域：1.该试剂盒适用于从全血样品中提取DNA，可用于基因分析、疾病诊断、遗传研究等领域。
2.可以用于个体基因检测、种群遗传学研究、药物反应性研究等。
总结：全血基因组DNA提取试剂盒是用于从全血样品中提取DNA的重要工具，操作简便、提取效率高。
在实验中需注意操作规范，保证提取的DNA质量和纯度。
该试剂盒广泛应用于科研领域，为基因研究和临床诊断提供了有力支持。
希望上述使用说明能够帮助用户正确、高效地使用全血基因组DNA提取试剂盒。
全血DNA抽提步骤
人淋巴细胞分离液分离血液中单个核细胞1、取新鲜抗凝血1ml，与生理盐水或PBS 1:1混匀后，小心加于1ml的细胞分离液之液面上，以2000rpm，离心20min。
2、分四层，第一层为血浆或组织匀浆液层，第二层为环状乳白色淋巴细胞或单核细胞层，第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层。
3、收集第二层细胞（淋巴细胞），沉淀反复洗二次即得单个核细胞。
全血提取DNA开始前准备：1、所有的离心步骤均在室温下进行。
2、使AL和ATL中的沉淀溶解。
3、向AW1和AW2溶液中加无水乙醇。
4、将冰冻组织或细胞沉淀平衡的室温。
5、预热孵育器到56℃。
哺乳动物血液（人）：吸取20ul蛋白酶K到1.5ml或者2ml离心管中，加50-100ul抗凝血。
将总体积用PBS补到220ul。
细胞：离心收集5x106个细胞，用200ulPBS重悬，加20ul蛋白酶K。
2、加200ulAL（提前预热到56℃），vortex充分混匀，56℃孵育10min。
3、加200ul无水乙醇，vortex充分混匀。
4、将混合物吸到装有2ml收集管的DNeasy mini旋转柱中，最大速离心1min，弃去收集管及管中液体。
5、将旋转柱装到一个新的2ml收集管中，加500ul AW1，最大速离心1min，弃去收集管及管中液体。
6、将旋转柱装到一个新的2ml收集管中，加500ul AW2，大于14000rpm离心3min，弃去收集管及管中液体。
7、将旋转柱移到一个新的1.5ml微量离心管上。
8、加100ul AE buffer到旋转柱薄膜中央溶解DNA,室温孵育1min，最大速离心1min。
9、可选：重复步骤8增加DNA沉淀的产量。
全血中提取DNA方法
从全血中提取DNA步骤及其注意问题1.血样预处理1.1 血样入库编码每一个样品准备3只15ml带帽刻度管，而且每只刻度管和盖帽都要编号，确保每组刻度管与样品一一对应，另外还要1只5ml圆底刻度管，，5ml圆底刻度管装血清，用作它用。
1.2 血样离心 1000-2000转/分，10min，若玻管则900转/分（确保分层，血清在上）1.3 血清移入5ml圆底刻度管，-20度保存；剩余的血液先倒入（1），然后用移液枪分别向（2），（3）移取2ml，或3ml，视血液多少而定。
并在相应的刻度管上标记血液体积。
并注意移取不同的血液时换枪头（注： 1-3 分离血清移液枪移取，放入15ml刻度离心管，标签处贴上胶带，-20度冻存；1-4 取300ul或1ml血细胞单独放入15ml刻度离心管，裂解RBC，做成WBC备份，-80度冻存；1-5 其余血样细胞平均分成两管，放入15ml刻度离心管，管上注意标明里面的血样的体积，提取DNA）２. 裂解红细胞２.1 按1:3的比例加入ＲＢＣ裂解液，混合均匀，可摇匀，放置１０min，３６００转／分。
［１（最初血液量，就是上刻度管外面的数值）：３（ＲＢＣ裂解液）］２.2 在桌面上铺一层纸巾，去掉上清夜（倒入水池），离心管倒扣在纸巾上，１０分钟。
注意防止不同刻度管之间的血泽污染。
２.3 重复操作２-1,2-2操作一次。
此时可见到血红色基本消失，剩下白细胞彼此粘缠在一起。
３. 裂解白细胞3.1 按1:1的比例加入ＷＢＣ裂解液，剧烈震荡（２-2得到的沉淀要求完全溶解，用振荡器），45-60度温育直至溶液澄清，不再有沉淀。
（注3.1按１：１的比例加入ＷＢＣ裂解液，剧烈震荡，沉淀要求完全溶解，45-60度温育大约30min）3.2 再震荡至完全溶解。
继续温育３０分钟以上，直至溶液澄清透明）４. 沉淀蛋白质4.1 将裂解好的溶液至于４度冰箱预冷１０分钟4.2 按３：１的比例加入ＰＰＳ（醋酸钾缓冲液），４度离心，３６００转／分，３０分钟4.3 如有少量的蛋白质还没有沉淀下来，转移到新离心管，重复离心一次。
实验一、血液标本提取DNA(蛋白酶K-酚抽提法)
实验一、血液标本提取DNA（蛋白酶K-酚抽提法）一、实验原理离心分离到外周血的白细胞层；用细胞裂解液溶解细胞膜、核膜，使组蛋白与DNA分离，再用酚、三氯甲烷/异戊醇抽提去除蛋白质，最后经乙醇沉淀即可得到基因组DNA片段。
二、实验步骤：1、血液标本处理 1.0ml抗凝全血(ACD、EDTA抗凝均可)2000rpm离心10min（1.5mlEP管）。
轻轻去上清液（血浆），吸出淡黄色悬浮液（白细胞层）置于另一2.0mlEP管中。
（约50μl）2、细胞裂解加入10倍体积组织细胞裂解液，37℃1h，3、加入蛋白酶K消化加入蛋白酶K至终浓度100μg/ml（约4μl），充分混匀，37℃震荡12-24h或37℃1h后，56℃水浴3h。
保温过程中不时摇动，混匀反应液。
液体逐渐变粘稠，表明已有DNA释放出来，操作应轻柔。
4、酚抽提：将上述溶液冷却至室温，加等体积的Tris饱和酚（pH8.0）溶液，温和缓慢颠倒离心管10min，混匀两相成乳液。
12000rpm 5分钟，两相分层。
用宽口径移液管小心吸出上层粘稠的水相，移至一新的2.0mlEP管中。
（小心一点，不要吸入蛋白层。
如交界处有白色沉淀，需重新抽提有机相，用酚重新抽提两次，合并水相）5、三氯甲烷/异戊醇抽提上清液加等体积三氯甲烷：异戊醇（24：1），倒转混匀10分钟，12000rpm5分钟，取上层水相0.5ml入另一新的2.0mlEP管；6、DNA沉淀上清液中加0.2倍体积3.0mol/L 醋酸钠，再加2倍体积的4℃冰箱冷却后的无水乙醇，轻柔振摇，充分混匀；应可看到白色絮状物（DNA）。
12000rpm 5分钟，弃上清液；7、纯化：加1ml 70%乙醇洗涤，12000rpm 离心5分钟，去上清夜，重复1次；（此过程不得振荡摇动）8、溶解：弃上清液后，自然干燥（挥发痕量乙醇）后，用30μl pH8.0TE完全溶解，保存在-20℃备用。
三、注意事项1、加样准确，操作轻柔；微量加样器绝对不能超过最大量程；2、加酚试剂时，不要接触到皮肤上，有腐蚀性；如不小心弄到，立即用清水冲洗；3、取上清液时，不可吸到下层溶液；4、加TE液后轻摇10min溶解DNA或-4˚C保存待用。
全血 DNA 抽提(QIAGEN,德国)
全血DNA 抽提(QIAGEN，德国)
采用血液基因组DNA 提取试剂盒按说明书进行操作，简述如下：
(1)先将无水乙醇加到漂洗液PW 和缓冲液GD 中，并将血液标本置于室温下平衡至标本完全溶解。
(2)取经RNaseA 酶处理过的离心管，按顺序编号后加入500μl 混匀的标本，随后
加入细胞裂解液CL lml，充分混匀后10000rpm 离心1min。
弃去上清，留下细胞
核沉淀。
(3)加入200μ1 缓冲液GS，振荡混匀。
随后加入20μ1 蛋白酶K 溶液，充分混匀。
加缓冲液GB 200μ1，充分混匀后，56℃水浴10min 至溶液变清亮。
取出后，加
无水乙醇200μl，混匀。
(4)上部物质转移到吸附柱内，12000rpm 离心30s。
弃去液体，并将吸附柱CB3 套在收集管上。
(5)加入500 μl 缓冲液GD，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(6)加入700μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体，将吸附柱CB3 放入收集管中。
(7)加入500μl 漂洗液PW，12000rpm 离心30s，弃去液体。
12000rpm 继续离心2min，弃去液体。
并把吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干吸附材料中的漂洗液。
(8)将吸附柱套上一个干净的离心管中。
向吸附膜中间位置悬空滴加80μl 洗脱缓冲液TB，室温放置5min，12000rpm 离心2min。
将溶液收集到离心管中并标号，置于-20℃冰箱中冻存备用。
DNA提取-SOP
全血DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取应在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪四．样本要求1．1 mL EDTA抗凝外周血，采集后轻轻混匀。
样本应尽快送检，保存运输温度为2-8 ℃。
建议2-8℃保存不超过24小时；-20 ℃保存不超过1个月；-70 ℃保存不超过2个月。
避免反复冻融（仅限1次）；如长期保存，建议提取样本DNA后-80 ℃保存。
2.样本中存在的干扰物质在一定范围内不影响检测，当干扰物质超出以下范围时不能保证检测结果的准确性：胆红素480 μmol/L，甘油三酯30 mmol/L，血红蛋白≤600 g/L，抗凝剂浓度0.1875-3 mg/mL。
五．核酸提取操作步骤：1.采集EDTA抗凝全血2.取200 μL EDTA抗凝血至1.5 mL新的无菌EP管中。
3.加入600 μL双蒸水，漩涡振荡混匀，室温放置10 min，期间漩涡振荡混匀2-3次，12000 rpm离心5 min，弃上清。
4.加入200 μL DNA提取液（使用前充分混匀，使颗粒悬浮），100 ℃水浴8 min。
5.12000 rpm离心5 min，取上清用于检测。
血片DNA提取操作规程一．生物安全要求：DNA提取在生物安全二级实验室的生物安全柜里完成。
二．试剂盒组分及规格：DNA提取液（含chelex-100等）三．其它实验设备及耗材双蒸水；1.5 mL 无菌离心管；0.5-10 μL、20-200 μL、100-1000 μL加样器及枪头；PCR反应管；可调14K微型离心机；漩涡振荡仪；打孔器四．样本要求1.每个样本至少3个血斑，且每个血斑直径大于8 mm。
2.血滴自然渗透，滤纸正反面血斑一致。
全血DNA提取步骤
全血DNA提取步骤提取全血DNA是常见的分子生物学实验步骤之一，可以用于基因测序、PCR等一系列实验。
下面将详细介绍全血DNA提取的步骤，供参考：1.样本准备首先，需要准备采集血液的材料，如采血管、细胞裂解缓冲液、蛋白溶解缓冲液、蛋白酶K等。
此外，还需要一些实验所需的试剂和器材，如离心管、离心机、恒温器等。
确保仪器和试剂的清洁和消毒。
2.血液采集使用专业的血液采集器具，从被试者的静脉中采集血液样本。
建议使用EDTA抗凝管收集血液，以防止血液凝固。
3.预处理将采集的全血样本通过轻轻倾斜管子，使其混合均匀。
根据实验需要，可选择不同的预处理方式。
如果需要分离血浆或血细胞，可将全血离心，离心速度通常为1000-2000g，离心时间为15-20分钟。
4.细胞裂解将离心后的血细胞沉淀取出，加入适量的细胞裂解缓冲液。
裂解缓冲液的成分通常包括盐溶液、蛋白酶K、非离子型洗涤剂等。
裂解缓冲液的选择可根据实验的目的和所需的DNA纯度来确定。
将裂解缓冲液和血细胞沉淀充分混合，可使用移液器轻轻上下翻动。
5.DNA沉淀将混合好的血细胞裂解液加入离心管中。
在室温下离心10-15分钟，以除去细胞残渣和细胞膜的碎片。
离心完成后，将上清液转移到新的离心管中。
6.蛋白溶解将血细胞裂解液中的蛋白质通过加入蛋白溶解缓冲液沉淀下来。
蛋白溶解缓冲液通常包含盐溶液和蛋白酶K。
将蛋白溶解缓冲液加入上一步的上清液中，轻轻混合，并在室温下静置一段时间。
然后再次进行离心，使蛋白质沉淀到离心管的底部。
7.除去上清液将离心管取出，将上清液倒出，只保留蛋白质沉淀在离心管底部的沉淀。
8.水洗将离心管中的蛋白质沉淀用去离子水洗涤一次，以去除余留的盐溶液和杂质。
将去离子水加入离心管中，轻轻混合后离心，然后将上清液倒出。
9.DNA溶解将沉淀的蛋白质用适量的DNA溶解缓冲液重新溶解。
DNA溶解缓冲液通常包含盐溶液和螯合剂，以便稳定DNA的结构。
将DNA溶解缓冲液加入离心管中，轻轻混合使蛋白质沉淀溶解。
全血DNA提取步骤
从全血中抽提基因组DNA的方法1、取全血700µL离心，5000rpm，5min，弃去上清液。
2、沉淀物用1mL的红细胞裂解液洗涤3次，5000rpm，5min，弃去上清液，倒干。
3、加入450µL细胞裂解液和6µL蛋白酶K（20mg/mL），55℃～66℃水浴4小时。
4、用等体积的酚、氯仿、异戊醇（25︰24︰1）抽提2次，12000rpm，5min。
5、用2倍体积冰预冷的无水乙醇沉淀（无水乙醇），有絮状沉淀后置于―20℃，沉淀30min。
6、沉淀结束后，12000rpm，5min，弃上清液。
7、用800µlL70%的乙醇洗涤沉淀，12000rpm，3min。
8、弃上清液，干燥。
9、加入50µL 1×TE缓冲液溶解，―20℃保存备用。
附：DNA提取相关试剂配制1、红细胞裂解液（PH 7.4）配制量：1L配制方法：（1）、称量NH4CL 0.802g、NaHCO3 0.84g、Na2EDTA·2H2O37.22g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约800ml的去离子水，充分搅拌溶解。
（3）、加去离子水将溶液定容至1L后，高压灭菌。
（4）、室温保存。
2、细胞裂解液（PH 8.0）配制量：500Ml配制方法：（1）、称量NaCL 2.92g、SDS 5g、Tris 0.61g，置于1L烧杯中。
（2）、向烧杯中加入约300ml的去离子水，搅拌溶解，在溶解过程中用1mL移液器加入10mL的TriTon-100。
（3）、溶解后加入20mg/mL的蛋白酶K 3µL.（4）、加去离子水将溶液定容至500mL后，高压灭菌。
（5）、室温保存。
血液dna提取方法
血液dna提取方法
血液DNA提取方法一般包括以下步骤：
1. 血液收集：收集抽取一定量的血液样本，一般使用采血针或者其他采血装置。
2. 血细胞分离：利用离心、负压抽滤等方法将血液中的红细胞、白细胞和血小板等不同成分分离开来。
3. 细胞裂解：将分离后的白细胞等血液细胞用裂解液或者其他溶解剂进行细胞裂解，使细胞膜破裂，释放出细胞内的DNA。
4. DNA纯化：通过离心、过滤或柱层析等方法将裂解后的细胞中的DNA纯化出来，去除其他残留物质。
5. 检测DNA浓度和纯度：利用紫外吸收分光光度计等设备检测提取得到的DNA的浓度和纯度。
以上是一般常用的血液DNA提取方法，不同的实验目的和要求可能会有所不同，因此在实际操作中需要根据具体情况选择合适的方法。
DNA采血操作流程
DNA采血操作流程
简介
DNA采血是提取人体DNA样本的常用方法之一，其操作流程
需要仔细、规范地进行，以确保样本的质量和准确性。
操作步骤
1. 仪器准备：准备好采血器、采血针、采血管、无菌盐水和消
毒用品等。
2. 环境准备：选择一个干净、光线明亮的地方进行操作，并进
行必要的消毒。
3. 采血器消毒：用无菌酒精棉球擦拭采血器的外部以及采血针
的接口处，保证其无菌。
4. 采血管准备：选择适当规格的采血管，打开管盖并将管装入
采血器中。
5. 采血部位消毒：选择好采血部位，用无菌酒精棉球进行消毒。
6. 采血：穿刺采血部位，找到静脉后，推入采血针采血，并确
定血流畅通。
7. 采完血：将采血针从采血部位拔出后，立即用消毒棉球按压
采血部位，避免出血。
8. 马上封管：将采血管里面的血单向进样至试剂盒中，如果无
菌样本，还要使用PVC粘封帽，将采血管封口。
9. 活性炭处理废液：处理采取后的血液和采血后产生的垃圾和
污染过渡物，用活性炭处理废液，以防有害物质造成污染。
注意事项
1. 操作前先了解患者的病史和采血的一些特殊要求。
2. 在任何情况下都要使用一次性无菌的采血器和采血管，避免
交叉感染。
3. 采血后要立即对采血器和患者进行处理。
4. 采取表面及根状茎样品时要避免皮肤接触，避免污染。
5. 操作完成后，把所有消耗材料放在标准垃圾袋中。
以上为DNA采血操作流程及注意事项，希望能对您有所帮助。
全血DNA提取
全血DNA提取
丁洁 2014.10.24
• 实验目的：
1.掌握全血基因组DNA的一种提取方法(饱和食盐水法)。 2.学习使用紫外分光光度法鉴定DNA的纯度，估计相对含量 （蛋白核酸定量仪）。
• 实验原理：
1.利用高渗溶液裂解红细胞，利用高渗溶液、蛋白酶K溶解白 细胞细胞膜，释放核内基因组DNA。 2.利用DNA不溶于三氯甲烷和乙醇，但其他杂质多溶于此2 种溶液，纯化DNA
2. 裂解过夜：
向上面步骤1的管子中依次加入：STE 500μl + 10% SDS150μl + 蛋白酶K 10μl 。 【SDS用之前65℃水浴】 加裂解液后颠倒混匀，沉淀要弹起来，使白细胞沉淀充分与裂解 混合液接触以使裂解更加充分，65℃水浴步EP管中加入饱和Nacl溶液300ul，颠倒混匀轻摇3min。 【NaCl饱和溶液配制时下面要有一定的未溶解的固体】 4. 再加三氯甲烷400ul，轻轻混匀轻摇5分钟，离心。 【12000rpm，20min，4℃】
• 实验仪器
高速冷冻离心机、制冰机、核酸定量仪、冰箱、移液 枪、EP管、水浴锅、电子天平、玻璃仪器等
• 实验试剂
红细胞裂解液、STE、10% SDS、蛋白酶K、饱和 Nacl溶液、三氯甲烷、异丙醇、70%乙醇、双蒸水
• 实验步骤：
1. 裂红细胞：
向2mlEP管中加入：红细胞裂解液 1ml + 全血400μl ，反复颠倒混 匀，静置2min，超速冷冻离心机，离心12000rpm，5min。弃上清。 【注意不要把下面的白细胞也倒掉】
5. 用移液枪吸取上清至2ml新EP管，加异丙醇沉淀DNA，离心 【 12000rpm，20min，4 ℃ 】 。弃上清。 注：此步骤中新EP管、异丙醇须4 ℃预冷。 上清：异丙醇=1：0.6（上清约1ml，异丙醇约600ul） 【取上清时要注意不要把下面的也吸上来，可稍微留下一些】
如何从全血中提取DNA
如何从全血中提取DNA从血液中提取DNA的方法有很多，有最传统的酚-氯仿法，也有后来改良的试剂盒方法。
选择合适的提取方法，要综合考虑操作时间、提取效率以及性价比。
我们收集了常见的全血DNA提取方法，并对它们的性能做出一个简单的评估。
01氛-氯仿法1. 加入5倍红细胞裂解液去除红细胞，此步骤一般需要15-30分钟；2. 加入细胞裂解液、蛋白酶K，混匀，置于50℃水浴3小时；3. 将消化好的液体移入1.5 ml EP管中，加入等体积饱和酚，混匀，14000 rpm离心5分钟；4. 吸取上清转入另一EP管中，加入等体积的酚氯仿（饱和酚和氯仿醇1：1），混匀，14000 rpm离心5分钟；5. 将上清液转入另一EP管中，加入1/10体积的NaAC(醋酸钠)和等体积的异丙醇（或2倍体积的乙醇），混匀，置于-20℃冰箱中3小时；6. 14000 rpm，10分钟，弃去上清；7. 加入1 ml 70%乙醇，温和摇晃几次，14000 rpm，10分钟，弃去上清；8. 用70%乙醇重复洗涤1次；9. 将洗涤好的DNA置于超净工作台干燥10分钟；10. 加入50-80 μl TE或去离子水溶解沉淀DNA，置于-20℃保存。
酚-氯仿法抽提DNA的原理是通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质，再加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。
其优点是不限制初始样本量，缺点是其试剂对人体有毒害作用，且操作繁琐，耗时很长，所以酚-氯仿法基本被现在的试剂盒方法取代。
02Qiagen QIAamp DNA BloodMini Kit法(适用于200μl全血）1. 在1.5 ml离心管底部加入20 μl蛋白酶k，加入200 μl全血样本；2. 加入200 μl的Buffer AL，旋涡震荡15 秒；3. 56℃水浴10分钟；4. 短暂离心收集离心管盖上的液体；5. 添加200 μl无水乙醇，旋涡震荡15秒混匀，短暂离心收集离心管盖上的液体；6. 过吸附柱，8000 rpm离心1分钟，弃滤液；7. 加入500 μl Buffer AW1，8000 rpm离心1分钟，弃滤液；8. 加入500 μl Buffer AW2，14000 rpm离心3分钟，弃滤液；9. 最高速离心1分钟；10. 加入100-200 μl洗脱液，室温静置1分钟，8000 rpm离心1分钟，将DNA洗脱下来。
全血dna提取实验报告
全血dna提取实验报告
全血DNA提取是DNA分子生物学中用来分析遗传多态性与染色体研究或突变检测等方
面研究的重要手段之一。
本研究采用厌氧通过脱水-水解提取法进行全血中DNA提取实验，以获取质量更高的DNA分子，并分析每个样本的提取效果。
本实验利用贴片加压技术收集被试全血样本，分别收集200 µl，800 µl和1200 µl。
200µl的血液按比例加入800µl PBS做血浆样本做先行DNA提取实验。
在实验中，利用固相萃取（SPE）技术对全血样品进行基因组DNA提取。
提取进程主
要分为三部分：提取液，洗脱液和上液等步骤，经历细胞消化、碱解、洗脱和上液后可以
完成基因组DNA的提取。
实验结果显示，200µl血液在添加PBS之后，对提取的DNA进行了质量检查，通过两
次PCR检测其纯度，结果表明提取的DNA纯度达到2.2，合格率在99.8%以上，按靶点克
隆法或者qwtPCR法测序可以有效验证实验结果。
800µl和1200µl血液提取的DNA，通过PCR测序，得到了较高质量的DNA，结果表明
提取的DNA纯度经进行质检测无污染物，合格率超过99.9%。
经上述实验，我们可以验证厌氧脱水-水解法可以从血液中高效提取DNA，提取的DNA
纯度高，DNA的片段可以用PCR技术进行扩增，继而用于基因组学分析等研究。
人全血DNA的提取实验步骤
人全血DNA的提取实验步骤
取2ml抗凝血于无菌15ml离心管
↓3000r/min 离心5min
弃上清，加入适量生理盐水
↓上下颠倒混匀
3000r/min 离心5min
↓
弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O
↓上下颠倒混匀
室温静置5分钟，4000r/min 离心10min
↓
弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O重悬白细胞沉淀
↓上下颠倒混匀
4000r/min 离心10min
↓
弃上清，加入STE至2毫升
↓上下颠倒混匀
再加10%SDS 200μl和10mg/ml 蛋白酶K 20μl 混匀
↓置56℃水浴震荡3h
取出观察白细胞消化情况（无可见沉淀），冷却至室温
↓
加入等体积饱和酚，缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
↓
加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
↓
向上清中加入1/10体积的3M NaAC（pH5.2），混匀
↓
再加入2倍体积的无水乙醇，缓慢摇动即可见DNA丝状体
↓
用无菌吸管吸出DNA丝状体移至装有1ml70%乙醇的Epp管内
↓
12000r/min 离心3~5min，弃上清。
沉淀用1ml 70%乙醇洗涤1~2次
↓
12000 r/min 离心3~5min，弃上清。
↓
室温风干或DNA风干机抽干
↓
用100μl TE溶解DNA 沉淀。
人类基因组DNA的提取_2014
人类基因组DNA的提取【实验目的】1.学习和掌握从人全血中提取基因组DNA的方法。
【实验原理】全血中含有白细胞，可从白细胞中获得基因组DNA。
非离子去污剂如Triton X-100可直接破裂血中红细胞和白细胞的细胞膜，释出血红蛋白及细胞核，反应体系中含一定浓度蔗糖，维护核膜内外的渗透压，以防止核膜破裂，通过离心等手段即可获得白细胞的细胞核。
核悬液中加入核裂解液破坏核膜，并使DNA从核蛋白中解离，裂解液中的EDTA能抑制细胞中DNase的活性，保护DNA暂时不被降解。
再经异丙醇沉淀即可获得基因组DNA。
基因组DNA提取应遵循以下原则，1、尽量保证核酸一级结构的完整性。
2、排除其它分子(如蛋白质、多糖、脂类、有机溶剂等)的污染，使下游试验顺利进行。
【实验用品】1.材料：外周血2.器材：水浴锅、离心机、微量移液器、Tip头、Eppendorf管3.试剂：（1）细胞裂解液：（2）核裂解液（3）蛋白沉淀液（4）DNA溶解液（5）RNA酶（6）异丙醇（7）70%乙醇（8）TE缓冲液【实验步骤】1. 1.5ml离心管中加入300ul经抗凝处理的人全血，加入900ul细胞裂解液翻转5-6次混匀。
2.室温保存10分钟（其间翻转2-3次）裂解红细胞。
室温13000*g离心20秒，弃上清（会有约20ul残留液）。
3.涡旋震荡10-15秒（使细胞核充分重悬）。
加入300ul核裂解液，移液器抽吸5-6次混匀（此时溶液会变粘稠）。
37℃温浴10分钟。
4.加入100ul 蛋白沉淀液，涡旋震荡10-20秒。
5.室温13000*g离心3分钟。
可见到深褐色的蛋白沉淀。
6.将上清转移至1.5ml离心管中，加入300ul室温异丙醇。
7.轻柔翻转离心管，可观察到白色丝状物（即DNA）8.室温13000*g离心1分钟。
可见离心管底部有DNA白色沉淀物。
弃上清。
9.加入300ul 70%乙醇，轻柔翻转清洗DNA，室温13000*g离心1分钟。
全血提取DNA分离纯化
全血提取DNA分离纯化，利用PCR扩增检测回收，并用得到的DNA片段做等温吸附曲线实验目的：以人类纯血为材料利用磁分离方法提取并分离提纯。
以DN A为模版扩征600bp片段，电泳检测纯化回收，最终以此片段作为羧基磁球在PEG/nacl吸附下的材料。
实验步骤：（一）全血基因组DNA提取流程1取20ul新鲜,冷冻或抗凝全血加入到1.5ml离心管中（提取超过20%的样本时，可按比例调节加入各缓冲液体积）2加入600ullysis/binding Buffer和20ul Magnetic Beads，涡旋混合器上混匀20s室温放置10min，期间涡旋混匀3次，每次10s。
3. 将离心管置于磁分离架上吸附磁珠2min，移除上清。
4. 加入800ulWashing BufferⅠ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清。
5. 加入800ulWashing BufferⅡ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清。
6. 加入800ulWashing BufferⅢ，涡旋混合器上混匀10s。
离心管置于磁分离架上待磁珠完全吸附后（约30s）移除上清，重复一次（注：尽量移除残留液体，减少洗涤液对后续实验影响）。
7. 将离心管置于磁分离架上（保持磁分离状态），56℃烘箱中干燥3min以除去乙醇。
8. 加入100ulElution Buffer，在涡旋混合器上混匀20s，56℃烘箱中温育5min（温育期间每隔2min涡旋一次）。
9. 取出温育后的离心管，涡旋混合器上混匀10s后离心管置于磁分离架上吸附磁珠（约60s），收集上清液于新的离心管中，约20℃下保存备用。
（二）利用PCR扩增并进行电泳和定性检测（1）取2个1.5ml的离心管，分别向其中加入20ul磁性颗粒，再向1ngDNA,加TE（pH8.0）至总体积为40ul，（2）室温下结合10分钟（期间涡旋振荡20次），（3）9000rpm离心10s，并收集上清液，（4）加入80ul TE（pH8.0）缓冲液涡旋振荡洗涤一次，12000rpm离心10分钟离心除上清，（5）加入40ul1M的磷酸buffer于离心管中，涡旋振荡混匀与80℃脱附40min，将脱附液用TE（pH8.0）稀释10倍，（6）取各实验组上清液和稀释10倍的脱附液各2ul为模板加入PCR扩增体系。
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人全血DNA的提取实验步骤
取2ml抗凝血于无菌15ml离心管
↓3000r/min 离心5min
弃上清，加入适量生理盐水
↓上下颠倒混匀
3000r/min 离心5min
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弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O
↓上下颠倒混匀
室温静置5分钟，4000r/min 离心10min
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弃上清，加入约5倍体积的无菌ddH2O重悬白细胞沉淀
↓上下颠倒混匀
4000r/min 离心10min
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弃上清，加入STE至2毫升
↓上下颠倒混匀
再加10%SDS 200μl和10mg/ml 蛋白酶K 20μl 混匀
↓置56℃水浴震荡3h
取出观察白细胞消化情况（无可见沉淀），冷却至室温
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加入等体积饱和酚，缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
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加入等体积氯仿：异戊醇（24：1）缓慢摇动20min
↓4000r/min 离心10min
小心吸出上清转于另一无菌15ml离心管中
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向上清中加入1/10体积的3M NaAC（pH5.2），混匀
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再加入2倍体积的无水乙醇，缓慢摇动即可见DNA丝状体
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用无菌吸管吸出DNA丝状体移至装有1ml70%乙醇的Epp管内
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12000r/min 离心3~5min，弃上清。
沉淀用1ml 70%乙醇洗涤1~2次
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12000 r/min 离心3~5min，弃上清。
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室温风干或DNA风干机抽干
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用100μl TE溶解DNA 沉淀。