HE Masson染色

4.2肺组织病理学观察

4.2.1石蜡切片的制作方法

(1)取材与固定:取各组小鼠左肺叶迅速用10%中性甲醛溶液固定24小时;

(2)脱水:将标本放入PBS缓冲液(PH7.4)内12小时，中间更换两次，先

后入70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精11各

30分钟，用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水分;

(3)二甲苯透明:二甲苯I、11透明，用以替换出组织块中的酒精;

(4)常规石蜡包埋:将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温，

石蜡I 15分钟、石蜡II25分钟、石蜡III 30分钟，待石蜡完全浸入组织块中后时

行包埋，常温凝固成块;

(5)用石蜡切片机进行连续石蜡切片，厚5微米，切下的薄片放在45℃水中，

要尽量展开，再贴在载玻片上，放在45℃恒温箱中烘干，防水密封，低温保存

备用，用于HE染色、Masson染色、及IL一17A免疫组化。

4.2.2HE染色

(1)将切片分别置于二甲苯I、二甲苯II、100%酒精I、100%酒精II、95%

酒精、90%酒精、80%酒精、70%酒精各10分钟脱蜡，再浸入流动自来水中洗去

酒精;

(2)苏木精染色1分钟，自来水冲洗;

(3)1%盐酸分化10秒，褪去胞浆中的苏木精染色;

(4)1%的氨水蓝化5秒，伊红染色2分钟;

(5)梯度酒精脱水:70%酒精，80%酒精，90%酒精，95%酒精，各2分钟，

100%酒精I，100%酒精11，各10分钟;

(6)二甲苯透明:二甲苯I 2分钟，二甲苯II 5分钟，二甲苯III 10分钟;

(7)中性树胶封片。

4.2.3MaSSon染色

(l)切片常规脱蜡至蒸馏水;

(2)将切片置于丽春红酸性品红液中染2分钟;

(3)入0.2%冰醋酸水溶液2分钟;

(4)5%磷铝酸水溶液酶染2分钟;

(5)0.2%冰醋酸水溶液洗2分钟;

(6)甲基绿染色3分钟，自来水冲洗;

(7)95%酒精分色，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

4.2.4小鼠肺组织的形态学分级标准

左肺石蜡切片进行染色后，由病理科医师在光学显微镜下观察肺组织病理

学改变。采用szapiel[25]等建立的方法评价肺泡炎(o一m级)和肺纤维化(0一111级) 程度。

(1)肺泡炎分级:

①O级:无炎症表现:

②工级:轻度肺泡炎，有少量炎症细胞浸润，肺泡间隔稍增宽;

③H级:中度肺泡炎，炎症细胞较前增多，肺泡形态更紊乱;

④111级:重度肺泡炎，大量炎症细胞浸润，病变呈弥漫性，肺泡结构完全破

坏。

(2)肺纤维化分级:

①0级(1分):正常肺组织，无或极少量细丝状胶原纤维;

②I级(2分):胶原纤维稍增多，呈细束状;

③11级(3分):胶原纤维中度增多，融合成带状，肺泡结构紊乱;

④m级(4分):胶原纤维明显增多，成宽带状或片状，肺泡塌陷融合，结构紊乱。