FISH 法染色体诊断病种介绍(一)
FISH检测：助力精准医疗发展
FISH检测：助力精准医疗发展FISH检测，即荧光原位杂交技术，是一种分子生物学检测方法。
它通过使用特定的荧光探针，检测基因、染色体异常以及基因表达水平。
在精准医疗领域，FISH检测为医生提供了强大的工具，帮助他们做出更准确的诊断和治疗决策。
在肿瘤精准医疗中，FISH检测发挥着重要作用。
例如，在非小细胞肺癌中，ALK基因重排是一种常见的分子遗传学改变。
通过FISH检测，医生可以准确地判断ALK基因是否存在重排，从而选择合适的靶向药物治疗。
一项研究表明，使用FISH检测筛选出ALK阳性的非小细胞肺癌患者，接受靶向药物治疗后的无进展生存期显著延长。
另一个例子是乳腺癌患者中的HER2基因扩增。
FISH检测可以帮助医生判断HER2基因是否扩增，从而选择是否使用HER2靶向药物治疗。
研究显示，HER2阳性的乳腺癌患者使用HER2靶向药物治疗后，无进展生存期和总生存期均显著改善。
除了在肿瘤精准医疗中的应用，FISH检测还在遗传性疾病诊断中发挥重要作用。
例如，囊性纤维化是一种常见的遗传性疾病，其发病机制与CFTR基因突变有关。
通过FISH检测，医生可以准确地判断CFTR基因是否存在突变，从而为患者提供合适的治疗方案。
然而，FISH检测在精准医疗中的应用也面临一些挑战。
例如，检测成本较高、操作复杂，且需要专业的技术人员。
FISH检测的标准化和质量控制也是亟待解决的问题。
尽管如此，随着技术的不断发展，FISH检测在精准医疗中的应用将越来越广泛。
FISH检测作为一项重要的分子生物学检测技术，在精准医疗中发挥着重要作用。
通过实际案例可以看出，FISH检测为医生提供了准确的诊断和治疗信息，从而提高了患者的生存率和生活质量。
面对挑战，我们期待未来能有更多的研究和创新，以推动FISH检测在精准医疗中的应用。
重点和难点解析：FISH检测技术在精准医疗中的应用及其价值。
FISH检测作为一种分子生物学检测方法，可以提供关于基因、染色体异常以及基因表达水平的精确信息。
血液肿瘤FISH检测判读建议（一）：基因融合
血液肿瘤FISH检测判读建议（一）：基因融合导读：血液肿瘤诊断需要综合形态学、免疫学、遗传学和分子生物学等检测技术，FISH（荧光原位杂交技术）作为一项很重要的遗传学检测技术，在血液肿瘤的诊断中有很大的作用，得到了NCCN等国内外各大血液肿瘤诊疗指南的认可和建议。
FISH可用于血液肿瘤相关的基因融合、断裂、缺失、扩增以及染色体整体数量异常的检测，本材料主要跟大家分享血液肿瘤FISH检测的判读。
血液肿瘤可能会出现某些基因融合（可能原因有基因断裂后互相易位融合、染色体倒位等），如CML（慢性粒细胞白血病）可能出现BCR/ABL等基因融合，CLL（慢性淋巴细胞白血病）可能出现BCL2/IGH等基因融合，AML（急性粒细胞白血病）可能出现AML1/ETO，PML/RARA，CBFB/MYH11等基因融合，ALL（急性淋巴细胞白血病）可能出现ETV6（TEL）/AML、E2A/PBX1、BCR/ABLL等基因融合，MM（多发性骨髓瘤）可能出现CCND1/IGH、MAF/IGH、CCND3/IGH等基因融合等等。
这基因的融合，FISH检测探针为一个基因标记绿色，另外一个基因标记红色。
以BCR/ABL （DF）融合基因检测探针（用于BCR/ABL基因融合的检测，含GSP BCR和GSP ABL两个探针，BCR标记绿色，ABL标记红色）为例。
BCR/ABL（DF）融合基因检测探针（判读可类推其余双色双融合探针）①探针设计：ABL基因标记红色，BCR基因标记绿色②正常信号细胞：2O2G典型异常（阳性）信号细胞：1红1绿2融合，可能出现n红m 绿k融合（n、m和k均≥1）的阳性信号情况※示意图标出的大小红绿信号点是理论上的，实际情况不一定能如此明显观察到。
对于1红1绿1融合的异常信号，因可能是空间构象（信号单纯重叠）导致，所以一般单独计数，且阳性阈值明显高于其他异常情况。
③阈值设定：随机选取10 例以上的人外周血细胞或骨髓细胞，按照样本处理要求进行处理，制备阴性阈值参考片。
染色体FISH杂交
综述：FISH杂交技术和r-DNA
染色体FISH杂交
荧光原位杂交（FISH）是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种原位杂交方法。
探针首先与某种标记分子（如生物素或高地辛等）结合，杂交后通过免疫细胞化学过程连接上荧光染料，在荧光显微镜下观察，这种方法具有高度特异性，有与放射性探针同样甚至更高的分辨率。
目前中期染色体FISH的最大分辨率为几个Mb，若用前中期染色体，分辨率可达1Kb，人体染色体的DNA线性长度平均为5cm，经多级螺旋化和折叠形成的中期染色体长度大为缩短，因此原位杂交对对高度螺旋化的中期和前中期染色体不能得到分辨率的制图。
要获得高分辨率可通过两种方式：一是通过延长前中期染色体，人为拉长DNA的纤维。
即在载玻片上的一端用清洁剂溶解的细胞，倾斜载玻片，是溶剂中的DNA沿玻片流下，可使分辨率达到1Kb到几个Kb；二是通过培养细胞的同步化，是大量细胞处于有丝分裂前期来获得高分辨率，如将间期核用于杂交提高分辨率。
间期FISH技术能对间隔只有50Kb的探针排序，新近应用的精卵系统能使FISH技术的分辨率达到不小于50Kb的范围FISH技术是一种重要的非放射性原位杂交技术，它的基本原理：如果被检测的染色体或DNA纤维切片上的靶细胞与所用的核酸探针是同源互补的，二者经变形—退火—复性，即可形成靶DNA与核酸探针的杂交体。
将核酸探针的某一种核苷酸标记上报告分子如生物素、地高辛，可利用报告分子与荧光素。
FISH简介
荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization, 简称FISH)由于其直观, 快速, 敏感性高和方便灵活越来越得到广泛应用, 尤其是在血液学领域中. 因为白血病标本比较容易取得和制备, 不同类型的白血病又往往有其特异的染色体异常, FISH在白血病诊断, 治疗监测, 预后估计和微小残留病检测等诸方面都正成为不可缺少的重要手段.FISH的基本原理很简单, 就是标记了荧光的单链DNA(探针)和与其互补的DNA(玻片上的标本)退火杂交, 通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况.FISH探针按标记方法可分为直接标记和间接标记: 用生物素(biotin)或地高辛(digoxingenin)标记称为间接标记, 杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号, 因而步骤较多, 操作麻烦, 其优点是在信号较弱或较小时可经抗原抗体反应扩大; 直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记. 由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号, 省去了烦琐的免疫荧光反应, 不再需要购买荧光抗体, 也由于近年来荧光互的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高, 直接标记的荧光探针越来越成为首选, 采用多种不同颜色的荧光, 方便在同一标本上同时检测多钟异常. 其荧光强度和信号大小都易于在普通荧光显微镜下观察, 操作过程中也不需要严格避光, 使FISH过程变得简便而易于操作. FISH并不能取代传统的白血病MCI诊断, 但它却能使MIC分型更为准确和深入. , MIC即细胞形态学(M), 免疫学和细胞遗传学(C), 三者结合对白血病进行分型诊断, 对不同类型的白血病采用不同治疗方案手段. 随着人们对白血病的不断认识, 仅进行MIC分型不够全面, 还要加上对白血病的分子(M)诊断, 成为MICM分型. FISH就是连接细胞遗传学和分子生物学的桥梁.FISH流程仪器设备1、医用微波炉；2、水浴锅；3、OLYMPUS BX51荧光显微镜；4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。
FISH检测基因异常的原理及结果判读
FISH检测基因异常的原理及结果判读FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测基因或染色体异常的分子遗传学技术。
它利用DNA或RNA探针与待测细胞中特定序列的互补配对，通过荧光显微镜观察和分析，可以提供关于基因或染色体结构和数量的信息。
FISH的原理FISH的原理基于互补配对原则和荧光探针技术。
首先，选择一个特定的DNA或RNA探针，该探针具有与待测细胞中一些特定序列互补的序列。
这个探针可以是单链DNA或RNA分子，也可以是由DNA或RNA分子构成的染色体或基因库。
然后，将探针标记上荧光染料。
常用的标记方法包括直接标记（直接将荧光染料与探针反应）和间接标记（使用一些中间物质，例如生物素-亲和素结合体系统或抗原-抗体结合体系来标记探针）。
接下来，将标记后的探针与待测细胞样品的DNA或RNA进行杂交。
杂交的条件会因实验目的和探针性质不同而有所变化，通常在适当的温度下进行。
最后，使用荧光显微镜来观察和分析待测细胞中的荧光信号。
荧光信号的形状、数量和位置可以提供有关待测基因或染色体的结构和数量的信息。
FISH的结果判读FISH的结果基于荧光信号的形状、数量和位置进行判读。
根据待测细胞中的荧光信号情况，可以得出以下几种结果：1.正常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的正常特征相符，那么可以确定基因或染色体的结构和数量是正常的。
2.异常结果：如果待测细胞中的荧光信号与已知的异常特征相符，那么可以确定基因或染色体存在其中一种异常。
例如，荧光信号的形状缺失、数量增加或位置改变等都可能说明基因或染色体存在缺失、复制或重排的异常。
3.无结果：有时，无法得到明确的结果。
可能是由于实验条件不合适，荧光信号过弱或过强，或者细胞的特定位置缺乏目标序列等原因。
在这种情况下，可能需要重新进行实验或使用其他技术来进一步分析。
需要注意的是，FISH是一种定位性技术，它只能提供有关特定基因或染色体的信息。
分子病理fish技术
分子病理fish技术
分子病理FISH技术是一种重要的分子生物学技术，其通过荧光染色技术检测染色体的异常及其染色体上特定序列的分布情况，从而为疾病的分子诊断提供有力的支持。
FISH技术的原理是利用DNA探针与样本的靶DNA序列的高度互补性结合，形成荧光标记的探针-靶DNA杂交体，在荧光显微镜下进行检测。
根据探针的不同种类和荧光染色物的不同组合，可以检测到染色体的不同缺失、增多、重排和散在分布等染色体异常，也可以对某些特定基因的扩增、突变、融合等变异进行检测。
FISH技术的应用范围非常广泛，涉及到多种疾病的分子诊断和预后评估。
例如，在肿瘤的分子诊断中，FISH技术可以同时检测多种基因的扩增、融合或重排，如HER2、BCL2、BCL6等，在血液病学中，FISH技术可以用来检测染色体异常及其亚克隆性，如慢性髓细胞性白血病、多发性骨髓瘤等。
FISH技术还可以应用于基因组、转录组和蛋白质组的分析。
在基因组水平，FISH技术可以用来确定基因组的大小和组织结构等；在转录组水平，FISH技术可以进行定量分析和空间分布的研究；在蛋白质组水平，FISH技术可以用来研究细胞核和染色体的空间分布和相互作用。
除了以上应用，FISH技术还可以用于辅助生殖医学，如评估胚胎染色体异常和性染色体异常等。
此外，FISH技术还可以用于动植物的基因组研究，如基因定位、染色体序列组装等。
总的来说，FISH技术在现代医学和生命科学中的应用范围非常广泛，可以为疾病的分子诊断、基因组学研究和辅助生殖医学等领域提供有力的支持。
未来，随着技术的不断发展和完善，FISH技术将会在越来越多的领域得到应用，为人类的健康和生命科学的发展贡献更大的力量。
FISH的基本原理及应用
FISH的基本原理及应用1. 引言FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种基于分子生物学技术的方法，用于检测染色体或细胞核酸序列的存在和位置。
本文将介绍FISH的基本原理和其在生命科学研究、临床诊断和基因组学等领域的应用。
2. FISH的基本原理FISH的基本原理是将一系列标记有荧光染料或放射性同位素的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列发生靶向杂交反应，从而实现对目标序列的检测和定位。
3. FISH的步骤FISH一般包括以下步骤：•取样：从样品中获取细胞或组织。
•固定：使用适当的方法固定细胞或组织，以保持其形态和结构。
•裂解：通过使用酶解等方法，将细胞或组织中的核酸释放出来。
•杂交：将标记有荧光染料的DNA或RNA探针与待测样品中的互补序列进行杂交，形成稳定的杂交复合体。
•洗涤：通过洗涤的步骤，去除未发生杂交的探针。
•显微镜观察：使用荧光显微镜等设备观察杂交信号，并记录图像。
4. FISH的应用领域FISH在多个领域中广泛应用，下面将重点介绍其在以下几个方面的应用。
4.1 生命科学研究FISH在生命科学研究中发挥重要作用，它可以帮助科学家研究染色体的结构和功能，揭示基因组的复杂性和变异性。
通过对细胞核酸序列的定位，FISH可以帮助研究者探索基因型与表型之间的关系，从而理解基因的功能和表达调控机制。
4.2 临床诊断FISH在临床诊断中应用广泛，尤其在肿瘤诊断中具有重要意义。
通过对肿瘤细胞进行FISH检测，可以鉴定染色体异常和基因突变，帮助确定诊断和预后评估。
例如，FISH可以用于检测BCR-ABL融合基因，在慢性髓系白血病的诊断和治疗方案制定中起到重要作用。
4.3 遗传学研究FISH在遗传学研究中也被广泛应用。
通过FISH技术，可以对染色体进行直接观察，从而帮助研究者了解染色体结构异常和数目异常对个体遗传特征的影响。
此外，FISH还可以帮助研究者进行染色体定位测序，从而进一步揭示基因组的组织和结构。
FISH检测在临床上的应用
FISH检测在临床上的应用FISH检测在临床上的应用一、简介- FISH（Fluorescence in situ hybridization）即原位荧光杂交技术，是一种用于研究基因组和染色体结构的分子生物学技术。
- FISH检测在临床应用中可以提供重要的染色体遗传学信息，用于诊断和监测某些疾病。
二、FISH检测的原理- FISH技术基于荧光标记的核酸探针与细胞或组织标本中的特定DNA序列发生互补杂交，通过荧光显微镜观察以检测特定基因组或染色体的异常。
- FISH检测可以提供高度准确的定量和定位信息，特别适用于检测具有微小或亚显性突变的染色体异常。
三、临床应用领域1、适用于癌症诊断和分型- FISH检测可以检测染色体上的特定基因重排，从而辅助癌症的诊断、分型和治疗方案的选择。
- 例如，FISH检测可以用于检测BCR-ABL融合基因以确认慢性髓性白血病的诊断。
2、适用于先天性遗传病的筛选和诊断- FISH检测可用于检测染色体异常，如唐氏综合征（21三体综合征）、爱德华氏综合征（18三体综合征）和智商障碍相关的染色体异常，用于婴儿和先天性遗传病的筛选和诊断。
3、适用于遗传性肿瘤相关基因的检测- FISH检测可以用于检测和定位遗传性肿瘤相关基因的异常，如BRCA1和BRCA2基因异常与乳腺癌和卵巢癌的遗传风险相关。
4、适用于感染性疾病的诊断和追踪- FISH检测可以用于检测和定位细菌、和寄生虫等感染性病原体的核酸序列，辅助感染性疾病的诊断和追踪。
四、技术要点和注意事项1、样本处理- 对于固定的细胞或组织标本，需要进行脱脂、脱水等预处理步骤。
- 不同类型的标本可能需要不同的处理方法，如骨髓涂片、组织切片等。
- 样本处理过程中需注意保持核酸完整性和避免污染。
2、探针设计与标记- 根据要检测的目标基因或染色体序列设计特异性的核酸探针。
- 核酸探针需要选择适当的荧光染料进行标记，以便在荧光显微镜中观察到。
- 标记的探针需要存储在适当的条件下，以保持标记稳定性和活性。
临床诊断中的FISH检测
临床诊断中的FISH检测FISH（即荧光原位杂交）技术作为分子诊断的重要工具，在科研和临床诊断领域都有着广泛的应用。
FISH 检测是利用荧光基团标记DNA探针，再将标记的DNA探针与样本DNA进行原位杂交，最后在荧光显微镜下对荧光信号进行计数，以此作为诊断的依据。
FISH的操作简便快捷，结果直观准确，因此FISH成了许多疾病诊断的首选工具。
下面我们将从探针的设计，样本的制备，原位杂交和检测结果的观察等几个方面简单介绍FISH的操作。
探针是FISH检测灵敏度和准确性的关键。
FISH检测的准确性来源于探针的设计。
FISH能否应用于某一领域也取决于是否具有相应的探针。
用于FISH检测的探针必须具备很高的特异性，能特异性地识别特定的基因或染色体上特定的片断。
而且FISH的探针必须能经受原位杂交的处理而不变性。
荧光基团的标记也直接影响了检测的灵敏度和原位杂交结果的检测方式。
以著名的探针生产商Vysis公司的LSI系列探针为例：LSI系列探针来源于BAC大片断基因组文库，探针所覆盖的染色体片断总长可达100Kb-400Kb，保证了探针的高特异性和极强的荧光信号；荧光基团采用直接标记法标记，不同波长的荧光基团使探针在荧光显微镜下呈现多种荧光信号，借此我们可以一次检测多个染色体或基因的异常；由于探针具有极强的荧光信号因而对FISH结果的检测也采用直接检测法，即在荧光显微镜下直接观察FISH的信号，而无需抗原-抗体反应对荧光信号进行放大。
Vysis探针的设计既确保了探针的特异性和灵敏度，同时直接的镜检也使FISH检测更简便。
FISH检测对被测样本没有特殊的要求。
可以是来自骨髓的细胞，也可以是来自羊水的细胞；可以是冰冻切片的样本，也可以是经过石蜡包埋的样本。
甚至可以利用尿液样本进行膀胱癌复发的预后。
获取的样本细胞也无需经过培养扩增，FISH检测可以显示单个细胞核内染色体的异常情况。
我们以Vysis公司的AneuVysion多色DNA探针试剂盒为例，简要介绍FISH的原位杂交过程。
fish技术在血液疾病诊断中的应用
展望
01
技术改进与创新
未来需要不断改进FISH技术，提高检测的灵敏度和特异性，降低假阳性
或假阴性的发生率，以满足临床对精准诊断的需求。
02 03
多学科交叉与融合
加强FISH技术与病理学、分子生物学、遗传学等学科的交叉与融合，深 入探讨血液疾病的发病机制和分子诊断标准，为临床提供更加全面和深 入的诊疗方案。
荧光标记
图像分析系统
使用高分辨率显微镜和图像分析系统， 可以捕捉并分析荧光信号，从而对染 色体结构和数目进行精确评估。
探针通常被荧光物质标记，以便在显 微镜下观察和计数。通过不同的荧光 颜色，可以区分不同的染色体或基因。
Fish技术的分类
染色体FISH（Chromosome FISH, CGH-FISH）：用于检测 染色体数目异常，如染色体拷贝
04
Fish技术在血液疾病诊断中的研究进
展
Fish技术在血液肿瘤基因诊断中的应用
总结词
FISH技术能够快速、准确地检测血液肿瘤基因变异，为临床诊断和治疗提供重要依据。
详细描述
FISH技术通过标记特异性探针，能够检测血液肿瘤细胞中染色体数目和结构的异常， 以及基因扩增、缺失等变异。在急性髓系白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴瘤等血液肿 瘤中，FISH技术可用于检测基因变异，如BCR-ABL融合基因、MYC扩增等，从而协助
淋巴瘤
淋巴瘤是一种起源于淋巴系统的肿瘤，分为霍奇金淋巴瘤 和非霍奇金淋巴瘤两大类。FISH技术可以检测淋巴瘤患者 淋巴结或骨髓样本中特定基因异常，如MYC、BCL2、 BCL6等基因的重排或扩增。
fish技术在病理诊断中的应用
fish技术在病理诊断中的应用病理诊断是医学领域中重要的一环，通过观察和分析组织及细胞的形态、结构和功能来确定疾病的类型和特征。
近年来，一种新的分子生物学技术——fish技术（Fluorescence in situ hybridization）逐渐应用于病理诊断中，为病理医师提供了更加准确和有效的诊断手段。
fish技术是一种基于DNA或RNA的分子探针与细胞或组织中特定序列的互补配对而发生的荧光信号的检测技术。
fish技术可以用于检测染色体异常、基因扩增、基因融合等分子水平的变化，从而帮助病理医师确定疾病的诊断和预后。
fish技术在肿瘤病理学中具有广泛的应用。
例如，在肺癌中，fish 技术可以检测EGFR基因突变、ALK基因融合等特定基因的异常，从而为选择靶向治疗提供重要依据。
此外，fish技术还可用于乳腺癌、胃癌、卵巢癌等肿瘤的分子诊断，提高了对肿瘤类型和预后的判断准确性。
fish技术在遗传病的诊断中也有重要作用。
遗传病是由基因突变引起的疾病，fish技术可以帮助病理医师确定染色体异常和基因突变，进而诊断遗传病。
例如，在唐氏综合征的诊断中，fish技术可以检测21号染色体上的三体，确认疾病的存在。
此外，fish技术还可以用于先天性心脏病、遗传性肾病等遗传病的诊断。
fish技术还在微生物学领域有着重要应用。
传统的微生物学诊断方法需要进行细菌培养和鉴定，耗时且存在一定的假阴性结果。
而fish技术可以直接检测细菌、病毒等微生物的核酸序列，提高了微生物学诊断的准确性和迅速性。
例如，在结核病的诊断中，fish技术可以检测结核分枝杆菌的核酸序列，快速确定病原体，缩短了诊断时间。
fish技术还可用于研究染色体结构和功能。
通过fish技术，可以观察和分析染色体的形态和变异，探究染色体异常与疾病发生的关系。
fish技术作为一种新的分子生物学技术，在病理诊断中的应用前景广阔。
它可以帮助病理医师准确定位和诊断疾病的分子变化，提高了病理诊断的准确性和敏感性。
荧光原位杂交(FISH)检测
从遗传学角度检测染色体和基因的异常
02
辅助血液疾病的诊断，判断预后，疗效检测及微小残留检测
03
应用：
骨髓移植术后（性别不同的移植献者）、 性别鉴定、CMPD和ALL初诊、CML末次化 疗结束两周以上、AML-M3/M2等疾病
பைடு நூலகம்技术特点
1
可分析间期细胞，不需培养；操作简单、检测快速重复性好、空间定位精确；灵敏性和特异性高
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荧光原位杂交（FISH）检测
康圣环球医学特检集团
概述 FISH-目前新兴的分子遗传学技术，原理是采用荧光标记的DNA探针，利用探针与检测样本中DNA碱基对的互补性，在探针与标本的DNA杂交后，通过荧光显微镜检测荧光信号而得出结果，从而检测细胞、组织样本中的染色体和基因异常。
临床意义
2
当染色体核型分析不成功或不明确时，可利用FISH检测弥补不足，并可发现复杂易位
探针种类
01
双色单融合探针 双色分离探针
01
ES探针 双色双融合探针 每类探针的检测和适用范围不同，决定其用处不同
01
标本要求 送检标本：骨髓3ml（CML和CLL患者可直接用外周血2ml） 保存条件：肝素钠抗凝，4摄氏度，24h送检 禁忌：冰冻或凝块 注意：建议做FISH的同时做常规细胞遗传学分析。若只要求做FISH，请转交一份近期的细胞遗传学报告。如果无细胞形态学或遗传学的检查，建议作进一步检查！！
报告时间：周一至周五，7个工作日
报告示例：略 结果判读：每个探针检测镜下分析200个细胞核。20例没有造血系统疾病且核型正常的骨髓标本作为正常对照，以此计算分裂信号的平均数和标准差。如果有异常杂交信号的细胞百分比超过正常标准差的3倍，结果将被认为异常。
荧光原位杂交(FISH)检测
目
CONTENCT
录
• 荧光原位杂交(fish)检测概述 • FISH检测的基本原理与技术流程 • FISH检测在临床诊断中的应用 • FISH检测的优势与局限性 • FISH检测的实际案例分析
01
荧光原位杂交(fish)检测概述
定义与特点
定义
荧光原位杂交（FISH）是一种基于荧光标记的DNA探针与目标DNA 结合，通过荧光显微镜观察并检测细胞内特定基因或染色体异常的 技术。
FISH技术可以应用于各种样本类型，如细胞、 组织切片、石蜡包埋组织等。
直接观察
FISH技术可以直接在细胞或组织的显微镜下观 察杂交信号，无需进行额外的染色或标记。
灵敏度高
FISH技术能够检测单个基因拷贝数的变化，灵 敏度较高。
局限性
成本高
FISH技术需要使用特殊的探针和 荧光染料，因此成本较高。
80%
基因突变
FISH技术可以检测基因突变，如 抑癌基因突变、致癌基因突变等 。
基因表达分析
基因表达水平
FISH技术可以检测基因表达水 平，了解基因在细胞中的表达 情况。
基因定位
FISH技术可以确定基因在染色 体上的位置，了解基因的染色 体定位。
基因互作
FISH技术可以检测基因间的相 互作用，了解基因间的关系。
细胞或组织的通透性处理
使用适当的试剂使细胞或组织的膜通透性增加，以便探针能 够进入。
杂交反应
探针与靶DNA的杂交
将制备好的探针与固定在样本上的靶 DNA进行杂交，形成探针-靶DNA复 合物。
去除未结合的探针
通过洗涤去除未结合的游离探针，提 高杂交信号的特异性。
信号检测与图像分析
FISH在血液病诊断中的新应用.
自20世纪80年代,FISH(荧光原位杂交技术一经出现,便成为众多科学家,尤其是细胞遗传学家们关注的焦点。
所谓的FISH(荧光原位杂交,它是利用已知核酸序列作为探针并直接以荧光素标记或先以生物素或地高辛等半抗原标记后再与靶DNA进行杂交,然后通过免疫细胞化学过程连接上荧光素标记物,最后在荧光显微镜下观察杂交信号,从而对标本中待测核酸进行定性、定位和定量分析的技术。
由于利用FISH技术,可在显微镜下直接观察到基因组的异常状况,因而大大地提高了染色体分析的敏感性、准确性和可靠性;随着探针的设计与制作技术的发展,再加上荧光标记手段的强化,使得FISH技术渐渐受到临床学者们的关注,越来越多临床学者们利用FISH(荧光原位杂交技术进行临床诊断或作为辅助诊断的手段。
在我国,最早引入FISH技术进行临床检验的方法的是进行白血病分析的血液学家们,他们通过利用文献上已知的各种与血液疾病相关的基因作为检测的目标,通过这类基因或特殊区段在细胞染色体上的不同表现,从而分析、判断患者的患病情况与病因,并以此作为辅助决定后续治疗方案或监控患者预后情况的依据。
由于FISH在临床诊断的应用,是基于一些已知与疾病确切关联的基因序列设计探针进行检测的,过去,由于对疾病的生理现象与基因组的异常情况的了解不足,使得以FISH为基础开展的诊断项目只能局限于一些为人所熟知的易变基因的检测中,如最常见的BCR/ ABL 两对基因易位检测常被用于作为CML白血病分型判别标准之一(见图1,随着学者们对各种临床疾症起因的研究的渐渐深入,科学家们发现,越来越多的疾病与基因组水平的变异相关,此外,由于学者们对FISH 技术的了解与普及,现时,很多临床学家们除了沿用FISH在血液病诊断中的新应用图1. Vysis血液病四种特殊探针类型Dual Color, Single Fusion,双色单融合探针用于检测细胞内发生的高百分比的特异性染色体易位,DNA杂交靶位点位于两个遗传断裂点之间。
fish技术在临床上应用
fish技术在临床上应用近年来，随着科技的不断发展，人们在医疗领域也开始尝试运用各种先进的技术手段来提高诊疗水平。
其中，fish技术作为一种新型的遗传学技术，正在逐渐在临床上得到应用。
本文将对fish技术在临床上的应用进行探讨。
fish技术全称为荧光原位杂交技术（Fluorescence In Situ Hybridization），是一种能够在细胞或组织中定位、检测和鉴定染色体的技术手段。
通过与含有荧光标记的特定DNA或RNA序列杂交，可以使得这些序列在显微镜下呈现出荧光信号，从而达到检测目的。
在临床上，fish技术主要用于以下几个方面：一、染色体异常的检测fish技术在染色体异常的检测中具有独特的优势。
通过对染色体进行特定序列的染色体间的“配对”检测，可以帮助医生及时准确地发现遗传病变，包括染色体缺失、易位、重复等问题。
这对于患者的疾病诊断、治疗和预后都有着重要的指导意义。
二、肿瘤诊断fish技术在肿瘤的诊断和分析中也有着广泛的应用。
通过检测肿瘤细胞中的染色体异常或基因突变，可以帮助医生确认肿瘤的类型、分级和预后，并指导后续治疗方案的制定。
而且，fish技术对于微小残存病灶的检测也非常敏感，能够在临床上提供更精准的诊断信息。
三、遗传病的筛查fish技术在遗传病的筛查中有着重要的应用。
通过对胎儿细胞或新生儿细胞进行fish检测，可以帮助医生早期发现患有遗传病风险的个体，从而及时进行干预和治疗，减少患病的可能性，保障健康。
四、肿瘤治疗监测除了用于诊断外，fish技术还可用于肿瘤治疗的监测。
通过检测肿瘤细胞的染色体异常和基因变异，可以及时了解肿瘤细胞的发展演化情况，判断治疗效果及肿瘤的耐药机制，为调整治疗方案提供依据。
总的来说，fish技术在临床上的应用前景广阔，不仅可以帮助医生更准确、更快速地进行疾病诊断，提高治疗的精准性和有效性，还可以为个体化医疗、精准医学的发展提供技术支持。
然而，需要指出的是，fish技术虽然在临床上有诸多优势，但也存在着检测范围有限、操作流程复杂、成本较高等问题，需要不断进行技术改进和优化。
医学中的染色体异常检测方法
医学中的染色体异常检测方法染色体是由DNA和蛋白质组成的一种非常重要的细胞器官，它们负责人类遗传信息的传递和处理。
染色体异常是指染色体发生了数量和/或结构方面的改变，这可能会对人的健康产生诸多不良影响。
在医学上，为了确诊和治疗患者，经常需要进行染色体异常的检测。
本文将介绍几种常见的染色体异常检测方法：核型分析、荧光原位杂交（FISH）、DNA微阵列和全基因组测序。
一、核型分析核型分析是将染色体制备成为一系列的悬液，然后通过染色体计数，分析染色体的数量和形态。
该技术可以检测出大部分常见的染色体异常病例。
核型分析在诊断各种遗传病、性染色体异常（如Klinefelter综合征、Turner综合征）、羊水穿刺后诊断胎儿染色体异常等方面有广泛的应用。
核型分析的优点是可以同时诊断出大部分染色体异常，但缺点是需要对细胞进行体外培养，这个过程需要2-3周的时间，且细胞培养的成功率并不高。
此外，核型分析也只能识别数目和结构异常，无法检测到微小的基因组变异。
二、荧光原位杂交（FISH）荧光原位杂交技术是一种特殊的核型分析技术，该技术使用荧光标记的DNA探针，可以精确的定位到染色体上特定的序列位置，用于检测染色体数目和/或结构异常。
这种技术在诊断一些获得性染色体异常和癌症等单基因病例中有广泛的应用。
FISH技术的优点是不需要对细胞进行体外培养，只需要对样本制成薄层，然后进行荧光原位杂交，时间短，成功率高。
此外，FISH技术在细胞学和癌症诊断方面也有广泛的应用。
然而，FISH技术的缺点是只能检测到已知的染色体异常，对未知的异常无能为力，同时也无法检测到微小的基因组变异。
三、DNA微阵列DNA微阵列是目前较为常用的高通量分子技术之一，它将上千个DNA探针按照一定的规则排列在固体底板上，通过对样本DNA进行剪切、标记和杂交，可以对样本中数千个基因进行分析。
DNA微阵列在基因表达、基因变异等方面都有广泛的应用，同时也可以被用来进行染色体异常检测。
fish报告解读
FISH报告，全称荧光原位杂交（Fluorescence in situ Hybridization）报告，是一种用于检测染色体异常的实验室检测方法。
FISH技术可以用于诊断染色体数目异常、结构异常和基因重排等问题。
在解读FISH报告时，需要关注以下几个方面：
1. 样本来源：了解样本的来源，如血液、组织或细胞等，以及采集方法。
2. 检测目的：明确本次FISH检测的目的，如诊断某种疾病、评估预后或监测治疗效果等。
3. 探针信息：报告中会列出使用的探针名称、编号和荧光素颜色等信息。
这些探针通常针对特定的染色体或基因区域，用于检测目标区域的异常情况。
4. 检测结果：报告中会详细描述每个探针的杂交信号分布情况。
正常的染色体或基因区域应该呈现出均匀的杂交信号，而异常区域则可能出现缺失、重复或易位等现象。
此外，报告中还会给出异常区域的染色体位置、大小和比例等信息。
5. 结论：根据检测结果，报告会给出相应的结论，如正常、异常或待进一步分析等。
对于异常结果，报告还会给出可能的病因、临床意义和建议等。
6. 注意事项：报告中可能会提醒一些与检测结果相关的注意事项，如某些异常可能与遗传性疾病相关，或者需要结合其他检查结果进行综合分析等。
fish1检查报告解读
fish1检查报告解读对于fish1检查报告的解读，我将从多个角度给出全面的回答。
首先，fish1（Fluorescence In Situ Hybridization）是一种用于检测染色体异常的分子遗传学技术。
它通过使用荧光探针与特定染色体区域的DNA序列结合，可以直接在细胞核中观察到染色体的结构和数量变化。
在解读fish1检查报告时，需要注意以下几个方面：1. 检测目标，检查报告中应该明确指出所检测的染色体区域或基因。
这可以帮助确定是否存在染色体异常或基因突变。
2. 结果解释，报告中可能会给出阳性或阴性的结果。
阳性结果表示存在染色体异常或基因突变，而阴性结果则表示未检测到异常。
需要注意的是，阴性结果并不代表绝对正常，因为染色体异常可能存在于未检测到的区域。
3. 异常类型，如果报告显示阳性结果，应该详细说明检测到的染色体异常类型。
这可能涉及到染色体缺失、重复、重排或染色体数目异常等。
4. 异常程度，报告中可能会提供染色体异常的程度。
例如，染色体缺失的大小、重复的次数、重排的范围等。
这有助于评估异常对个体健康的影响。
5. 临床意义，解读报告时需要结合临床情况来评估染色体异常的临床意义。
染色体异常可能与某些遗传疾病、肿瘤等相关联，但并非所有异常都会导致疾病。
此外，解读fish1检查报告还需要考虑以下几个因素：1. 技术准确性，fish1技术虽然高度敏感和特异，但仍可能存在假阳性或假阴性结果。
因此，报告结果应该与其他检查方法进行比较和确认。
2. 个体差异，不同个体之间染色体结构和数量可能存在差异。
因此，需要将检测结果与正常参考范围进行比较，以确定是否存在异常。
3. 进一步检查，如果fish1检查报告显示染色体异常，通常需要进一步的检查来确认和评估异常的具体情况。
例如，核型分析、基因突变检测等。
总体而言，解读fish1检查报告需要综合考虑检测目标、结果解释、异常类型和程度、临床意义等因素。
同时，需要注意技术准确性和个体差异，并在必要时进行进一步的检查。
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医生检查申请方法
6生长发育问题新生儿至青
春期
（腭裂、胃食道反流、呕吐导致的）喂养困难、生长激素缺乏；生长发育落
后于同龄正常儿童。
注：1.典型病人具有前4条表现；2.学龄期儿童、青少年、成人患者可能合并5、6两条表现；
3.最常见的是先心病加上后5条表现的一条或多条；
4.以免疫缺陷和低钙血症为突出表现的应考虑到DiGeorge综合征的可能；
FISH法染色体诊断病种介绍（一）
22q11微缺失综合征
概述：22q11微缺失综合征（22q11 deletion syndrome，22q11DS）是指由人类染色体22q11.21-22q11.23
区域杂合性缺失引起的一类临床症候群，包括DiGeorge综合征、腭心面综合征、椎干异常面容综合征，Cayler
以FISH检查为金标准，可以有效地检出大部分缺失。对临床疑似患者和有相关
不良孕产史的父母进行FISH检测，有利于提供遗传咨询和提供临床决策依据。
22q11微缺失综合征病人的临床表现
主要症状和体征发病年龄临床表现
1先天性心脏病产前、新生
儿期
有法洛氏四联症（TOF）、室间隔缺损（VSD）、先天性主动脉弓离断B型（IAA
type B）、肺动脉狭窄、闭锁（PA/PS）以及共同动脉干（TA）或其它心脏流
出道畸形者。
2颜面异常、腭裂新生儿至成
年患者
头部：小颌、长脸、上颌垂直过长、颊部平坦、下颌后移、面部不对称等
耳：双耳低位、耳畸形、小耳廓、耳廓异常折叠、耳轮肥厚、中耳炎等
眼：眼距宽、睑裂狭小、视神经乳头变小、视网膜血管扭曲、视网膜缺损、
身免疫病，细胞性免疫不全
4甲状旁腺机能低
下，低甲状旁腺素
血症
1年内的新
生儿
出现惊厥、喉痉挛、手足抽搐等低钙血症表现
5认知和精神异常儿童、青春
期至成年
（青春期或成年患者）书写、计算、理解困难或学习能力缺失，注意力缺陷
或注意力高度缺陷，智商通常在70-90左右（认知异常）；精神分裂症（主
要为妄想型精神分裂症）、注意缺陷多动障碍、强制性障碍、心境障碍等
白内障等
鼻：球状鼻、方鼻尖、宽鼻梁、鼻翼发育不全、鼻孔狭窄、鼻孔前倾、鼻
后孔闭锁、长人中、短人中、慢性鼻窦炎、慢性化脓性中耳炎。
口腔：U型嘴、鱼形嘴、小口畸形、上唇较薄等
腭：腭裂、悬雍垂裂、高腭弓、腭帆缩短、粘膜下腭裂等
3先天性胸腺不发
育或发育不全
新生儿期反复肺炎、鼻窦炎、中耳炎、鹅口疮等细菌、病毒、真菌、原虫的感染和自
其他的原因有基因突变、染色体易位、其他染色体异
常等，占5%。目前已在缺失区发现30多个基因，其
中研究较多的基因有TBX1、CRKOL、Ufd1L、HIRA、CRKL、COMT、PRODH、ZDHHC8
等；TBX1与心脏圆锥动脉干畸形、颅面畸形、胸腺、甲状旁腺发育不良等表型
密切相关。
诊断：临床诊断主要依靠临床表现及相关的实验室和影像学检查；遗传学诊断
心面综合征和Opitz综合征等数个具有相同遗传学基础的临床综合征，
遗传特点：90-95%的患者为新ห้องสมุดไป่ตู้病例，仅5-10%的患者由父母遗传且为常染色体
显性遗传，因此在患病的父母其子女有50%可能患病，而且子女的临床表现通常较
其父母重。
分子遗传学：最常见的原因是患者一条22号染色体
的q11.2区段发生微缺失，占全部患者的95%左右；