酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理

酶联免疫吸附试验方法类型及反应原理酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）

是一种常用的生物化学分析方法，用于检测并定量测定生物样品中的抗体

或抗原。ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA和间接竞

争ELISA等。下面将对这些方法的类型和反应原理进行详细介绍。

1.直接ELISA

直接ELISA是最简单的ELISA方法之一、在这种方法中，微孔板表面

上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。待检测样品中的抗体与

涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。然后加入特异性抗体，这些抗

体已标记有酶，比如辣根过氧化物酶（horse radish peroxidase，HRP），然后加入适当的底物。酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与

待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。

2.间接ELISA

间接ELISA是常用的ELISA方法之一，比直接ELISA灵敏度更高。在

这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原，然后加入待检测样品，如血清等。待检测样品中的抗体与涂覆的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。然后加

入与待测抗体特异性的二抗，这些二抗已标记有酶，如HRP，再加入适当

的底物。酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗

原或抗体的浓度成正比。

3.竞争ELISA

竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的ELISA方法。在

这种方法中，微孔板表面上涂覆有特异性抗体，然后加入待检测样品和已

标记的抗原或抗体。待检测样品中的抗原或抗体与涂覆的抗体竞争结合，

形成复合物。然后加入特异性的抗原或抗体，这些抗原或抗体已标记有酶，比如HRP，继续竞争与涂覆抗体结合。酶与底物反应产生比色或荧光信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成反比。

4.间接竞争ELISA

间接竞争ELISA是一种用于测定样品中抗原或抗体浓度的高灵敏度ELISA方法。在这种方法中，微孔板表面上涂覆有抗原。首先，加入待检

测样品和已标记的抗原或抗体。待检测样品中的抗原或抗体与特异性抗体

竞争结合，形成复合物。然后加入未标记的特异性抗体，再加入已标记的

二抗，如HRP，继续竞争与涂覆抗原结合。酶与底物反应产生比色或荧光

信号，信号的强度与待测样品中抗原或抗体的浓度成正比。

ELISA的反应原理是利用抗原与抗体之间的特异性结合反应。ELISA

的微孔板表面通常涂覆有抗原或抗体，待检测样品中的抗体或抗原与涂覆

的物质结合形成复合物。经过清洗步骤，加入与样品中的抗体或抗原特异

性结合的二抗，这些二抗已标记有酶。然后加入适当的底物，底物与酶反

应产生比色或荧光信号。这些信号的强度与待测样品中抗体或抗原的浓度

成正比，通过比色或荧光检测设备可以定量测定待测样品中抗体或抗原的

浓度。

总的来说，ELISA是一种简单而有效的生物化学分析方法，广泛应用

于医学诊断、生物学研究、药物研发等领域。不同类型的ELISA方法有不

同的适用范围和优势，可以根据具体实验需求选择合适的方法进行检测和

分析。