注射用大豆卵磷脂的提取纯化与质量分析

1.2.3 紫外吸收光谱测定 分别称取 20mg 的注射用卵磷脂和 20mg Sigma 公司
的标准样品，用无水乙醇定容至 10m l ，用紫外分光光 度计扫描 20 0～300nm 的吸收光谱，最大吸收波长均为 203nm。
1.2.4 红外吸收光谱测定 取 1.0mg 样品涂膜于 100mg KBr 片上，利用 KBr 做
※工艺技术
食品科学
2005, Vol. 26, No. 4 183
注射用大豆卵磷脂的提取纯化与质量分析
王凤玲 1 ，刘爱国 2 ，朱宏吉 1 (1.天津大学化工学院制药工程系，天津 2.天津商学院生物工程与食品学院，天津
300072； 300134)
摘 要：通过对大豆磷脂粉乙醇抽提、氧化铝吸附、活性炭脱色、乙醚溶解后超滤膜过滤、丙酮脱油脱水等工 艺提取与纯化注射用卵磷脂，所得大豆卵磷脂符合药典标准。 关键词：卵磷脂；纯化；注射
↓
常压密封水浴 55℃搅拌脱色 1h
活性炭弃去 布氏漏斗过滤
↓0.8μm 有机膜过滤
脱色
↓
水浴 70℃
通氮气减压蒸干
回收乙醇 ↓加入乙醚
乙醚溶解
冰箱中过夜
↓
0.8μm 有机膜过滤
减压蒸干
回收乙醚 ↓丙酮研洗处理至上层清液无色
脱油脱水
↓
无水丙酮中密封
丙酮回收 ↓暗处低温保存
粘状磷脂 ↓用前真空浓缩
注射级卵磷脂
3
5
6
7
8
10
pH
图３ Ｓｉｇｍａ公司标准品红外吸收光谱图 Fig.3 IR of soybean lecithin for injection from sigma
肪烃链 R1 和 R2，R1 一般是饱和烃链，R2 一般是不饱和 烃链，即卵磷脂尾部为亲脂基端。所以，卵磷脂分子 本身既具有亲水基又具有亲脂基，是非常好的注射用乳 化剂。 3.3 薄层层析分析
分别对进口粗磷脂样品和北京粗磷脂样品精致纯化 后进行分析，指标见表 3。
由表 3 看出，以上指标均达到卫生部 98 年版药品标 准。
３ 卵磷脂质量分析
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食品科学
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Table 3
表３ 注射用卵磷脂理化指标达标一览表 The physics and chemistry standard of soybean lecithin
for injection
性能指标 性状 酸值 碘值 色度 丙酮不溶物(%) 酸度pH 干燥失重(%) 氮含量 磷含量 热源(℃)
美国样品 淡黄 9.91 97.59 0.2 95.4 5.33 0.278 1.57 3.6 0.0
北京样品 淡黄 10.05 95.26 0.3 93.8 5.80 0.444 1.548 3.4 0.0
表２ 脱色温度和脱色效果比较 Table 2 Comparation of temperature and results of fading
30 很差 脱色效果 较差
温度 Temperature(℃)
时间(h)
40
50
55
60 70 Time
较差 较好 较好 较差 差
1
较差
好
好
好差
1.5
因此，磷脂乙醇液脱色条件为：水浴 5 0 ～5 5 ℃， 1 ～1 . 5 h ，搅拌。 2.3 注射用卵磷脂理化指标
lecithin and sample
两个紫外吸收图谱的最大吸收峰波长均为 203nm， 峰强和峰位基本一致，说明按所设计实验流程所得到的 卵磷脂结构与 Si gm a 公司标准品结构相同。 3.2 红外吸收光谱分析
分别对自制样品和 Sigma 公司标准品进行红外光谱 测定，谱图如下：
从图中可以分析出：(1) 3426cm-1 是 -O-C=O 中 -C=O 的倍频谱带；(2) 2915cm-1、2849cm-1 和 1449cm-1 属于 CH2 伸缩振动和 CH3 反对称变形振动；(3) 1742cm-1 是 -CO-O中 C=O 伸缩振动；(4) 1228cm-1 是 R-N(CH3)3 中 N-CH3 伸 缩振动；(5) 1144cm-1 分别是 P=O 和 P-O-C 的伸缩振动。 因此卵磷脂分子离子性头部是电荷基团，有强烈的极 性，易溶于水。尾部是两条含有 14～16 个 C 原子的脂
２ 结果与讨论
2.1 溶剂选择的理论依据 根据大豆磷脂中各组分在有机溶剂的可溶性(表 1)，
卵磷脂溶于乙醇，而脑磷脂溶于热乙醇，所以用乙醇 进行抽提，提取大豆磷脂中的卵磷脂。
表１ 大豆磷脂中各主要成分在有机溶剂中的溶解性 Table 1 The solubility of different composition of soybean
美国中央大豆磷脂厂；
大豆磷脂粉 北京化学试剂公司；卵磷脂标准品 Sigma； 9 5% 乙醇 AR；氯化锌 AR；无水丙酮 AR；氧化铝， 层析用，中性；活性炭 A R ；乙醚 A R 。
1.1.2 主要仪器 旋 82A 型 上海实验仪器厂；调温电热套 ZDHW 型 河北省黄骅市中兴仪器有限公司；电动搅拌 器 FS- 1 型 河北黄骅县齐家务科学仪器厂；电热恒温水 浴锅 HH. S-1 型 北京市医疗设备总厂；垂熔漏斗。高 效液相色谱(HPLC)LC10Avp 日本岛津；红外分光光度 计 983G 美国 PE 公司；紫外分光光度计 UV-2501PC 日 本岛津。 1.2 实验方法
中图分类号：Q946.4
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2005)04-0183-04
卵磷脂是构成人体生物膜的重要物质，在维持生物 膜的生理活性和机体的正常代谢起关键作用。又由于卵 磷脂分子含磷酸根、胆碱基的极性端，具有亲水性， 由碳氢键组成的非极性端，具有亲脂性，是具有多种 生理功能作用及功能特性的静脉注射乳化剂。医药行业 中用大豆磷脂替代蛋黄磷脂，降低了成本，增加稳定 性，又减少了进口量。以高纯度药用大豆磷脂研制的 抗癌新药 1 39 针剂，目前在国内市场供不应求。
在整个精制工艺中，脱色是很关键的一步，脱色 温度和脱色剂是影响脱色效果的主要因素。采用硅藻土 进行脱色，由于脱色后硅藻土颗粒悬浮于乙醇液中，过 滤速度慢，用离心机对其进行离心，则长时间暴露于 空气中易于氧化，硅藻土不可用。
将活性炭在 170℃高温下活化 24h，使其吸附孔径 变大，再对磷脂乙醇液进行脱色，分别在 30、40、50、 55 、6 0 、7 0 ℃的条件下进行，脱色时间为 1 、1 .5 h 。 不同条件下的活性炭脱色效果表 2 所示。
lecithin in organic agent
溶剂 Solvent 卵磷脂 脑磷脂 神经磷脂 胆固醇
乙醚 Bether
溶 溶 不溶 溶
乙醇 Ether
溶 不溶 溶于热乙醇 溶于热乙醇
丙酮 Acetone
不溶 不溶 不溶 溶
磷脂乙醇液中主要磷脂：卵磷脂、脑磷脂、神经 磷脂、胆固醇。脑磷脂不溶于冷乙醇，神经磷脂不溶 于乙醚，而胆固醇及其它油脂及色素溶于丙酮。脑磷 脂已在乙醇抽提液过夜后除去，蒸干后的磷脂应溶于乙 醚和丙酮中，将神经磷脂和胆固醇及其它油脂及色素也 研洗除去。 2.2 脱色条件的确定
deoiled and dehydrated by acetone.All the properties of the final product fulfill the requirements of Chniese codex for intrave-
nous injection.
Key words：phosphatidylidylcholine；purification；injection
空白，用美国PE公司 983G 红外分光光度计测样品和Sigma 标准品红外吸收光谱图，扫描范围是 4000～200cm-1。
1.2.5 薄层层析分析 2% 注射卵磷脂乙醇溶液用硅胶 G 薄层板进行层析，
展开剂为氯仿:甲醇:水(65:25:4)，用 Sigma 公司纯品作对 照。层析完毕后，取出薄板，干燥后放入碘缸内盖好。 升华的碘遇磷脂后，显出黄色的斑点。
Abrstract：In the study,to get purified soybean lecithin for intravenous injection,the raw product successively extracted by
ethanol,absorbed by alumina,decolored by active carbon,and subsequently dissolved in aether and the filtered by ultrafiltration,
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※工艺技术
市售大豆磷脂
95% 乙醇水浴 70～75℃ 10%ZnCl2 沉淀剂 ↓搅拌回流 1h
乙醇抽提
(磷脂乙醇液)
↓ 倾取抽提液
残余脑磷脂 活性氧化铝(300 目)
残渣另处理 水浴 50℃
↓
搅拌吸附 1h
氧化铝弃去 ↓布氏漏斗过滤
吸附
活性炭
1.800
3
5
6
7
8
10
pH
图２ 注射用卵磷脂红外吸收光谱图 Fig.2 IR of soybean lecithin for injection
0.900
0.000 200.0
250.0
300.0
波长Wavelength(nm)
图１ 注射用卵磷脂和Ｓｉｇｍａ公司标准品紫外吸收光谱比较 Fig.1 The comparation of spectrums for standard soybean
将所制得样品与标准品对比进行薄层层析分析，如 图 4。
从图 4 中可以定性看出所制得的卵磷脂有两个斑 点，其中约 80% 以上成分与 Sigma 公司标准品 Rf值相同， 说明所制得的卵磷脂纯度较高。 3.4 液相色谱分析
1.2.1 注射用卵磷脂精制工艺流程图 1.2.2 卵磷脂性能指标的测定
采用消化磷法测定含磷量，使用系数 25 将含磷量 换算成磷脂得质量；采用微量凯氏定氮法测定含氮量； 碘量法测定碘含量；滴定法测定酸价。均按《中国药 典》1995 年版二部附录 46～48 页方法测定。
收稿日期：200 4-11 -01 作者简介：王凤玲(1 9 6 5 -)，女，高级实验师，在职硕士，研究方向为现代制药及质量检测。
1.2.6 液相色谱分析 精确称取 Sigma 公司卵磷脂标准品 20mg，用甲醇定
容至 25ml,得到 0.8mg/ml 标准溶液。自制样品用甲醇配成 0.8mg/ml 溶液。使用日本岛津公司 LC10Avp 高效液相色 谱仪测定。色谱条件为：Li chrosorb Si60 色谱柱，流 动相为甲醇，流速 1.0ml/min，紫外测定波长为 203nm。
但由于注射级卵磷脂在精制工艺方面，一直没有一 套完整可行的方案进行提取与提纯，我国注射用的卵磷 脂主要依赖从欧、美等地区大量进口。其开发是我国 医药科技“十五”计划及 2010 年发展规划的重点任务。 注射用卵磷脂乳化剂的研究与开发在国内有很广阔的市 场前景。
１ 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.1.1 材料 天津奥凯公司大豆磷脂膏
部颁药品标准(98) 黄色或黄棕色 ≤ 12 90～110 ≤ 0.5 ≥ 90 5～7
3 1.5～2.0
≥ 3.3 0.6
达标情况 达标 达标 达标 达标 达标 达标 达标 达标 达标 达标
3.1 紫外分光光度法测卵磷脂最大吸收 将纯化卵磷脂和 Sigma 公司标准品配成 0.1mg/ml 的
乙醇溶液，用日本岛津公司 UV-2501PC 紫外分光光度计 测定 200～300nm 波长下的紫外吸收光谱。如图 1 所示：
Purification and Analysis of Quanlity of Soybean Lecithin for Injection
WANG Feng-ling1，LIU Ai-Guo2，ZHU Hong-ji1 (1.College of Chemical Engineering, Tianjin University, Tianjin 300072, China； 2.Institute of Bioengineering and Food, Tianjin University of Commerce, Tianjin 300134, China)