RASSF1A基因 - 360文档中心

RASSF1A基因甲基化与妇科肿瘤发生发展的关系研究进展

能，ＲＳ１可能是Ｒｓ而ＡＳＦＡａ下游信号转导中的一个效应物，以三磷酸鸟苷依赖的形式与Ｒｓ相互作用，进细胞凋亡、ａ促衰老和坏死。ＲＳＦＡ启动子甲基化造成的抑癌基因失活ＡＳ１
守区… 。
１．％的子宫颈重度鳞状上皮内病变、５的子宫颈鳞状细７５１％胞癌、６１的子宫颈腺癌出现ＲＳ１２．％ＡＳＦＡ启动子异常甲基
化，子宫颈轻度鳞状上皮内病变和正常组织中则没有而ＲＳ１ＡＳＦＡ启动子异常甲基化的出现。子宫颈癌的发生与高危型人类乳头瘤病毒（Ｐ持续ＨＶ）感染密切相关。Ｋｚｉ等在８株子宫颈癌细胞株中发现ｕｍｎ
正常子宫颈组织中的ＲＳＦＡ甲基化情况进行检测，现ＡＳ１发
Ｒｓａ相关区域家族１ＲＳＦ）因有５个不同的转录（ＡＳ１基本：ＡＳＦＡ—Ｅ，中ＲＳＦＡ最为常见。ＲＳｔＲＳ１其ＡＳ１ＡＳＦＡ基因全长ｉ８３ｂ，３０个氨基酸的开放阅读框，７ｐ含４编码相对分子质量为３８００ｋ８０Ｄ的蛋白多肽，Ｎ端与富含半胱氨酸其的甘油二酯或氟波酯结合区高度同源，故又称蛋白激酶ｃ保
发生率为３％，卵巢良性肿瘤和卵巢交界性肿瘤中则没０在有ＲＳＦＡ启动子异常甲基化的发生，ＡＳ１提示ＲＳＦＡ启动ＡＳ１

RASSF1A基因在乳腺癌组织中的表达及意义

ｐｔｎｔｙｈｎｄｔｓａｉｓｉｉｃｔｏｒｔａａｎｔｅｐｔｎｔｏｔｌｍｐｏｅｒａ — ａｉｔｗｉｌｍｐｏｅｍｅａｔｓｓＷａｓｇｆａｌｌｗｅｎｔｔｉｉｔｗｈｕｙｈｎｆｓｅｓｈｎｉｎｙｈｈｈａｅｓｉｄ￣ｔ
ＡｓａｔＯｂｅｔｅＴｖｓｇｔｔｅｒａｏｓｉｅｅｎｔｅｍＮｘｒｓｎｏＲＳＦＡ（ｎｒｂｔｃ：ｊｃｉｏｉｅｔａｈｅｔｎｈｂｔｅＲＡｅｐｅｉｆＡＳ１ａｔｌｒｖｎｉｅｌｉｐｗｈｓｏｕｏ
Hale Waihona Puke ＲＳＦＡｍＮＡＳＩＲＡ的表达缺失与淋巴结转移呈负相关（Ｐ＜００）与年龄、．５；组织学分级及雌激素受体（Ｒ、Ｅ）孕激素受
体（Ｒ及ＣｒＢ２白的表达没有明显的相关性（Ｐ）ｅｂ－蛋Ｐ＞００）．５。结论发展过程及其预后存在着一定的相关性。［关键词】乳腺癌；乳腺良性病变；ＡＳＩＲＳＦＡ基因［中图分类号】Ｒ３．７７９［文献标识码】Ａ［文章编号】１０００—１０（０８００５ — ３９５２０）２— １７０ＲＳＦＡ基因表达缺失可能与乳腺癌的发生、ＡＳＩ
ｍｔａｙｔｓｅ，ｕｏｆｎ２５ｏｅｓｃｒｉｍｓｅ；１ｅｓｐｈｉｕａｏｔｓｓｂｔｔｏｄｉ５．％ｆｒｔａｎａｔｕ ② １ｎｕｎｂａｃｏｉｓ１
ＦＡｍＮｐｅｓｎｉ１ＲＡｅｒｉｘｓｏｎ

RASSF1A基因与结直肠癌关系的研究进展

１００ｈｅａｄｅｄｓｐｅｒｍａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｄｅｆｉｃｉｅｎｔｏｏｚｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎＣａ－ｐａｃｉｔｙ［Ｊ］．ＦｅｒｔｉｌＳｔｅｒｉｌ，１９９７，６８（６）：１１４４—１１４７．［２８］ＨｅｉｎｄｒｙｅｋｘＢ，ＶａｎｄｅｒＥｌｓｔＪ，ＤｅＳｕｔｔｅｒＰ，ｅｔａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｐｔｉｏｎｆｏｒｓｐｅｒｍ－ｏｒｏｅｃｙｔｅ－ｒｅｌａｔｅｄｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｆａｉｌｕｒｅ：船－ｓｉｓｔｅｄｏｏｃｙｔｅａｃｔｉｖａｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｈｅｔｅｒｏｌｏｇｏｕｓＩＣ・ＳＩ［Ｊ］．ＨｕｍＲｅｐｒｏｄ，２００５，２０（８）：２２３７－２２４１．［２９］ＢｅｒｋｏｖｉｔｚＡ，ＥｈｅｓＦ，Ｙａａｒｉｓ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｎｏｒ－ｍａｌｃｙｏｆｔｈｅｓｐｅｒｍｎｕｃｌｅｕｓａｎｄｐｒｅｇｎａｎｃｙｒａｔｅｏｆｉｎｔｒａｃｙｔｏ－ｐｌａｓｍｉｅｉｎｊｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄｓｐｅｒｍ［Ｊ］．ＨｕｍＲｅｐｒｏｄ，２００５，２０（１）：１８５—１９０．［３０］ＢａｒｔｏｏｖＢ，ＢｅｒｋｏｖｉｔｚＡ，ＥｈｅｓＦ，ｅｔａ１．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅｆｉｎｅｍｏｒ－ｐｈｏｌｏｇｙｏｆｍｏｔｉｌｅｈｕｍａｎｓｐｅｒｍｃｅｌｌｓｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＩＶＦ－ＩＣＳＩｏｕｔｃｏｍｅ［Ｊ］．ＪＡｎｄｒｏｌ，２００２，２３（１）：１—８．（收稿日期：２００９—１１—１２修回日期：２００９一１２一１５）ＲＡＳＳＦｌＡ基因与结直肠癌关系的研究进展黄克强综述莫维光审校（广西医科大学第一附属医院病理科，南宁市５３００２１）【关键词】ＲＡＳＳＦｌＡ基因；结直肠癌；抑癌基因【中图分类号】Ｒ７３５．３【文献标识码】Ａ【文章编号】０２５３－４３０４（２０１０）０１－０１００－０５结直肠癌是我国常见的胃肠道恶性肿瘤，其发生发展是多阶段、多步骤的病理过程，与多个癌基因的激活及抑癌基因的失活有关。

RASSF1A抑制肝细胞癌生长的基础和临床研究-中华医学会

中华医学科技奖形式审查结果公布年份2018推荐奖种医学科学技术奖项目名称RASSF1A抑制肝细胞癌生长的基础和临床研究推荐单位推荐单位：江苏省医学会推荐意见：本项目在国内外较早提出RASSF1A等是新的肝细胞癌（HCC）预后的预测分子，初步阐明RASSF1A抑制肝癌发生发展的分子机制，利用自行构建的双重靶向性的纳米载体介导RASSF1A在HCC过表达，可明显抑制HCC在体内外的生长，本项目研究丰富了HCC发生发展的分子机制，还为利用RASSF1A基因进行HCC基因治疗提供了可行性依据，并为进行HCC基因治疗联合化疗药物治疗的临床前研究提供了实验依据。

关键技术还可临床转化。

本项目的实施及推广运用具有开拓性和创新性的贡献，也具有很强的前瞻性和可操作性。

该成果在基层医院中得到运用，对评估HCC患者的预后起到很好的预测作用，进一步指导临床治疗，取得良好的社会效益及经济效益。

目前获得国家发明专利授权1项，发表相关研究论文17篇，其中被SCIE收录17篇、在Web of Science核心合集中共被引用122次，引起国内外的广泛重视和认可，具有广泛的应用前景和深远的社会价值。

经认真审阅，该项目推荐材料真实可靠，候选单位、候选人具备获奖条件，提交资料齐全，符合要求，不存在知识产权纠纷或项目完成单位、完成人员排序争议。

同意申报中华医学科技奖。

项目简介多年来薛万江团队勇于创新，使得RASSF1A（Ras association domain family 1 A）在肝细胞癌（HCC）基础和临床研究处于国内领先地位，部分达到国际先进水平。

本项目已在SCI收录期刊发表论文17篇，已获国家发明专利1项，研究成果已获南通市科技进步二等奖2项。

在多年研究基础上，获得1项国家自然科学基金资助，1项江苏省高校自然科学研究项目资助，1项南通市科技计划项目资助。

此外，研究成果被多家单位应用，并多次在国内学术会议上交流。

本项目主要特色有以下四方面：1、HCC预后相关分子标志物的研究HCC的发生发展过程是一个由多个因素诱导、多基因和多条信号通路激活共同参与的复杂网络机制。

结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化及意义

甲基化检测．ＡＳ１
采用甲基化特
异性ＰＲ（ＰＲ）术。提取结肠癌组织和癌旁ＣＭＳＣ技正常结肠组织中的ＲＳＦＡ基因启动子区域。提ＡＳ１
取基因组ＤＡ后按ＥＮｔｙａｏｉ试剂盒ＮＺＤＡＭｅｌｉＫｔｈｔｎ
越低、有淋巴结转移和远处转移及Ｄｋｓｕｅ分期越晚，
其ＲＳＦＡ基因启动子甲基化发生率越高。结肠ＡＳ１癌组织中ＲＳＦＡ基因启动子甲基化者其ｍＮＡＳＩＲＡ表达缺失。说明ＲＳＦＡ基因启动子甲基化可能ＡＳ１与结肠癌的发生发展及转移有关。
采用ＳＳ１．ＰＳ２０统计软件。计数
资料比较用检验。Ｐ≤００为差异有统计学意．５
２结果
现，结肠癌癌旁正常结肠组织中的ＲＳＦＡ基因启ＡＳ１
动子未见甲基化，而在结肠癌组织中ＲＳＦＡ基因ＡＳ１
８例结肠癌癌旁正常结肠组织中的ＲＳＦＡ０ＡＳ１
ＤｓｏｎＲｅｔｍ，１９，２３：１－２．ｉＣｌｃｏｕ９９４（）３９３６
［］Ｆｖｕｔ，ＢｎｉＬＧｉＢｅａｖｕｔｎｏｐｖｏｅａ－５ａｌｏｅＰｅｏ，ｕ，ｔ１ａａｏｆｏｉｎｂｔｕ．Ｅｌｉｄ
山东医药２１年第５卷第４０ｉｌ２期
发的重要因素。安杰等对胃癌患者进行腹腔冲胞细胞ｌｍｉｎ即可表现出明显的生长抑制作用并诱导细胞凋亡，亡率可达７．％。因此，们认为凋８３我在结肠癌手术中，用稀释碘伏腹腔灌洗可能会杀利死手术过程中脱落的癌细胞，而有效预防、从控制肿瘤的种植转移和复发。

抑癌基因RASSF1A与胆管癌的研究进展

２．２ＲＡＳＳＦ１Ａ调节细胞周期
Ｄｕａｎｄ — Ｆａｒｄｅｌ于１８４０年第一次描述了胆管癌是一种起
源于胆总管上皮的恶性肿瘤，是一种较少见的胆道恶性肿瘤，约占消化道肿瘤的３％。ＲＡＳＳＦ１Ａ是Ｄａｍｍａｎｎ等… 于２０００年利用酵母双杂交筛选方法，在染色体３ｐ２１．３这个区域克隆出的一个新型的Ｒａｓ因子，它属于ＲＡＳＳＦ１家族（Ｒａｓ
等发现ＲＡＳＳＦ１Ａ通过Ｒｂ家族检查细胞分裂周期的关键点来诱导细胞周期停滞。ＣｙｃｌｉｎＤ１积聚可使细胞逃避细胞周期Ｒｂ检查点而无限增殖；ＲＡＳＳＦ１Ａ可抑制内源性ｃｙｃｌｉｎＤ１的积聚，使得Ｒｂ蛋白去磷酸化，诱导细胞周期停滞于Ｇ１一Ｓ期转
疗、预后息息相关。１ＲＡＳＳＦ１Ａ的生物学特征
换点。ＲＡＳＳＦ１Ａ也可以通过直接与转录因子ｐｌ２０Ｅ４Ｆ相互作用进而影响Ｇ１期的过渡Ｊ。ｐｌ２０Ｅ４Ｆ可以通过下调细胞周期蛋白Ａ２（ｃｙｃｌｉｎＡ２）的转录，导致细胞周期停滞在Ｇ１
１５８
肝胆外科杂志２０１３年４月第２１卷第２期ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，２１，Ｎｏ．２，Ａｐｒ．２０１３

RASSF1A、p16基因甲基化与肺癌关系及据此诊疗研究进展

肺癌是目前全世界发病率和死亡率最高的恶
性肿瘤之一，其形成是一个多步骤过程，涉及多种
ＤＡ：、Ｅ２、
２、ＰＡＸ６、ＲＡ耶和ＴＩＭＰ３，实验
采用定量一特异性聚合酶链反应（Ｑ — ＭＳＰ）描述基因ＤＮＡ甲基化的现象。其中ＲＡＳＳ，ｐ１６基因是目前研究较热、较为集中的与肺癌相关的抑癌基因。如何利用简单、可靠、非侵袭性的检查手段有效地进行肺癌的筛查、早期诊断．提高肺癌的治疗效果，是临床面临的迫切需要解决的问题之一
研究显示与肺癌相关的异常甲基化的抑癌基因有很多种，目前已经发现一系列与肺癌相关的抑癌基因，由于发生异常甲基化而导致转录失活。Ｊｉｔ２］等研究了临床上具有代表性的非小细胞肺癌样本中的９个基因，包括ＲＡＳＳＦ１Ａ、ＣＡＬＣ４、ＣＤＨ１、
２ＲＡＳＳＦＩＡ基因与肺癌
尺相关区域家族１Ａ（Ｒａｓａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｄｏｍａｉｎ
ｆａｍｉｌｙｌＡ，ＲＡＳＳＦ１Ａ）是２０００年发现的新型抑癌基
啶第五位碳原子上。大多数ＤＮＡ甲基化发生在
肺癌细胞Ａ５４９的生长，证明了ＳＡＲＡＨ结构域在

白血病患者RASSF1A基因甲基化状态及其临床意义

ｐｏｏｅｒｉａｅｃｄｂｅｈｌｉｎｓｅｉｃｐｌｒｅｃａｅｃｏ（ —ＣｒｍｔｒｅｏｗｓｄｔｔｙｍｔｙｔｐｃｏｙａｈｉｒａｔｎＭＳＰＲ）ｉｔｅｂｎａｏｆ８ｇｎｅｅａｏｉｆｍｅｓｎｉｎｈｏｅｍｌｗｏ６Ｔ
髓中ＲＳＦＡ基因启动子的甲基化状况，ＡＳ１分析不同白血病类型之间的差异。结果
例（３９％）ＡＳ１１．５ＲＳＦＡ基因启动子甲基化，６而０例非白血病患者骨髓均未检测到甲基化，二者比较差异均有统计学意义（Ｐ＜００）．５。淋巴系白血病患者ＲＳＦＡ基因甲基化比例（３１）ＡＳ１２．％明显高于髓系白血病患者
（．％）Ｐ＜００）６４（．５。结论
白血病患者骨髓中存在ＲＳＦＡ基因甲基化，巴系白血病甲基化比例明显高于ＡＳ１淋
髓系白血病。ＲＳＦＡ基因甲基化检测可能成为白血病分型的生物标志物之一。ＡＳ１关键词：白血病；ａ相关区域系统１ＲｓＡ基因；甲基化；物标志生
ｗｒｎｏｅｓｃｎｒｌｅｅｒｌａｏｔｓｅｕｔＴｅｅｏ８（３９％）ｌｋｍａｐｔｎｓｈｄＲＳＦＡｇｎｒｍｔｅｉｅｌｄｏ．Ｒｓｌｗｌｆ６１．５ｓｖｅｅｉａｅｔａＡＳ１ｅｅｐｏｏｅｒｇｎｕｉｒｏ
ｌｕｅａｐｔｎｓｎｅｄｆｒｎｅｏｉｅｅｔｋｎｓｏｅｋｍｉａｎｌｚｄｏａｆ０ｎｎ１ｕｅａｓｂｅｔｅｋｍｉａｉｔ．ａｄｔｉｅｅｃｆｄｆｒｎｉｄｆｌｕｅａｗｓａａｙｅ．Ａｔｔ１０ｏ．ｅｋｍｉｕｉｃｓｅｈｆｆ６

抑癌基因RASSF1A与RASSF1B基因的关系

８２２
ＣｉｓＪｕｎｌｆｌｉｌｄｃｅ２１．ｏ１，．ｈｎｅｏｒａｏＣｉｃｉｎ，００Ｖ１７Ｎｏ６ｅｎａＭｅｉ．
中国临床医学
２１年１第１００２月７卷
第６期
பைடு நூலகம்
・
论著・
抑癌基因ＲＳ１与ＲＡＳ１ＡＳＦＡＳＦ因的关系Ｂ基
ｄａｉｎｉａｇ：
ＣＨＥＮｉ。ｕＭｎＪｎｇ
ＸＩｏｈＥＧｕｚｕ
ＣＨＥＮ
１ＴｉｈｕＰｅｐｅｓｔｌ．ａｚｏｏｌ＇Ｈｏｐｉ，Ｔａｚｏ２５０，Ｃｈｎｓａｉｈｕ２３０ｉａ；２．ＡｆｉｉｔｄＨｏｐｔｌｏｉｎｓｆｌａｅｓｉａｆＪａｇｕ
刘新法陈明军谢国柱陈吉祥
（．江苏省泰州市人民医院，苏泰州２５０；．江苏大学附属医院，苏镇江２２０）１江２３０２江１０１
摘要目的：究ＲＳ１因２个转录本基因在胃癌组织及相对应的癌旁组织中表达情况以及ＲＳ１２个转录本基因与研ＡＳＦ基ＡＳＦ
肿瘤发生的相关性。方法：计特异性的引物，设用逆转录一合酶链反应（聚ＲＴ— Ｒ）方法检测胃癌及癌旁组织中ＲＡＳＦ１家ＰＣ的Ｓ
族中２种不同转录本ｍＲＮＡ的表达情况。结果：０例胃癌组织中ＲＡＳ１基因表达缺失率为６．（４４）ＲＳ１４ＳＦＡ０２２／０，ＡＳＦＢ基因表达缺失率为３．（４）７５１／０。结论：ＡＳＦＡ和ＲＳ１５ＲＳ１ＡＳＦＢ２种转录本在胃癌组织中的表达下调，ＡＳＦＡ基因在胃ＲＳ１

甲状腺乳头状癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化与临床病理学的关系

维普资讯
天津医药２０年ｌ月第３卷第１期０７２５２
８７８
甲状腺乳头状癌组织中ＲＳＦＡ基因ＡＳ１启动子甲基化与临床病理学的关系
唐建东
摘要
欧阳军栗夏莲杜潇潇 Nhomakorabea邱新光
张全武
目的：探讨甲状腺乳头状癌及癌旁组织中ＲＳＦＡ基因启动子甲基化改变的特点与临床特征的关系。ＡＳ１
ｈｒｉｅｏｉＮｆｕｏｓｅａｄａｊｃｎｓｅｅｅｐｒｅｙｓｎａｄｍｔｏｓＴｅｍｅｌｔｎｓｔｓｏｔｙｏｄｇｎｍｃＤＡｏｍｒｓｕｓｎｄａｅｔｉｕｓｗｒｕｆｄｂｔｄｒｅｈｄ．ｈｔｙａｏｔｕｆｔｉｔｔｓｉｉａｈｉａＲＳＦＡｇｎｆｄｔｔｄｙｔｙｔｎｓｅｉｃＣｃｎｑｅ（Ｐ）Ｒｓｌ：ｅｍｔｙｔｎｒｔｏＡＳ１ＡＳ１ｅｅＷ￥ｅｃｅｈｌｉ－ｐｃＲｔｈｉｕＭＳ．ｅｕｓＴｅｌｉｅｆＳＦＡｌｅｂｍｅａｏｉｆＰｅｔｈｈａｏａＲ
ｇｎＩｓｕｓａ５％（９３）ｗｉｅｍｔｙａｏｔｏＡＳＦＡｇｎｄａｅｔｙｏｄｔｓｅａ３％ｅｅＦＥｔｓｅｓ．ｎｉｉｗ５９１／４，ｈｅｅｌｉｒｅｆｌｔｈｈｔｎａＲＳ１ｅｅｎａｊｃｎｒｉｓｓｓ．ｉｈｔｉｕｗ２５（／４．ｈａｆｅｙｔｎｏＡＳ１ｒｍｏｒｉＰＣｃｒｉｏａｗｓｓｎｃｔｉｅａａｆｄｃｎ８３）ＴｅｒｔｏｔｌｉｆＲＳＦＡｐｏｔＴａｃｍａｉｉａｌｈｇｒｎｔｔｊｅｔｅｍｈａｏｅｎｎｇｆｎｙｈｔｈｏａａｉｈ

胃癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化检测

南方医科大学南京临床医学院南京军区南京总医院肿瘤科 ’２００消化科（１０２）美国得克萨斯大学Ｍ。．ｎｅｓｎ肿瘤中心南京大学医学院生理学教研室。ＤＡｄｒｏ
背景：ａ相关结构域家族１ＲＳＦＡ）因是近年发现的新型抑癌基因，启动子区甲基化可能与胃肠道肿ＲｓＡ（ＡＳ１基其瘤的发生、展密切相关。目的：测胃癌患者血清ＲＳＦＡ基因启动子区甲基化情况，讨其在胃癌早期诊断和发检ＡＳ１探
到ＲＳＦＡ基因启动子区甲基化，中４例（０Ｏ术前、后血清标本均检测到ＲＳＦＡ基因启动子区甲基化。ＡＳＡ基因启动子区甲基化与胃癌患者性别、龄、瘤分化程度、无转移以及血清癌胚抗原（Ｅ水平年肿有ＣＡ）均无相关性。结论：血清ＲＳ１ＡＳＦＡ基因启动子区甲基化检测可望为胃癌的早期诊断和预后判断提供依据。
０ｓｐｏｔｒｅｉｎｍｉｈｅａｏｔｎｃａｉｍｎｔｅｄｖｌｐｎｎｒｇｅｓｏａｔｉｔｓｎｌａｃｒＡｉ：ｆｉｒｍｏｅｇｏｇｔｎｉｔｒｂｍｐｒａｔｍｅｈｎｓｉｅｅｏｍｅｔｄｐｏｒｓｆｇｓｏｎｅｔａｎｅ．ｍｓｈａｒｉｃＴｄｎｉｈｒｍｏｅｔｙａｉｎｓａｕｆｓｒｍＡＳＦ１ｇｎｎｐｔｎｓｗｉａｔｃｃｎｅ，ａｄｔｎｅｔａｅｉｏｉｅｔｙｔｅｐｆｏｔｒｍｅｈｌｔｔｔｓｏｅｕＲＳＡｅｅｉａｉｔｔｇｓｒａｃｒｏｅｈｉｎｏｉｖｓｇｔｔｉｓｐｔｎｉｌｕｅｉｈａｌｉｇｏｉａｄｐｏｎｓｓａｓｓｍｅｔｏａｔｃｃｎｅ．Ｍｅｈｄ：Ｐｍｏｅｔｙａｉｎｓａｕｏｅｔｓｎｔｅｅｒｄａｎｓｎｒｇｏｉｓｅｓｎｆｇｓｒａｃｒａｙｓｉｔｏｓｏｒｔｒｍｅｈｌｔｔｔｓｏ

血清RASSF1A基因甲基化对原发性肝癌诊断价值的Meta分析

８６南昌大学学报(医学版)２０２０年第６０卷第２期㊀J o u r n a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s)２０２０,V o l．６０N o．２血清R A S S F１A基因甲基化对原发性肝癌诊断价值的M e t a分析黄宇操,张雨薇,杨文龙(南昌大学第二附属医院感染科,南昌３３０００６)摘要:目的㊀采用M e t a分析评价血清R a s相关区域家族１A(R a s a s s o c i a t i o nd o m a i n f a m i l y１A,R A S S F１A)基因甲基化在原发性肝癌诊断中的价值.方法㊀检索P u b M e d㊁E M B A S E㊁C o c h r a n e㊁万方和知网数据库２０００年１月至２０１９年１０月有关血清R A S S F１A基因甲基化对原发性肝癌诊断的文献,最终纳入文献１１篇,累计试验组８１９例(原发性肝癌),对照组８２７例(包括慢性肝炎㊁肝硬化㊁良性肝脏疾病等),用S t a t a１２．０软件进行M e t a分析.结果血清甲基化R A S S F１A基因检测肝细胞性肝癌合并敏感性(S E N)＝０．５６(９５％C I:０．３６~０．７４),特异性(S P E)＝０．８１(９５％C I:０．６４~０．９２),阳性似然比(P L R)＝３．０(９５％C I:１．５~５．９),阴性似然比(N L R)＝０．５５(９５％C I:０．３６~０．８３),诊断比值比(D O R)＝５(９５％C I:２~１４),S R O C曲线下面积(A U C S R O C)＝０．７５(９５％C I:０．７１~０．７９).结论血清R A S S F１A甲基化检测对肝癌诊断具有一定的价值.关键词:R a s相关区域家族１A;基因甲基化;肝细胞性肝癌;液体活检;M e t a分析中图分类号:R７３５．７㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:２０９５Ｇ４７２７(２０２０)０２－００６８－０５D O I:１０．１３７６４/j．c n k i．n c d m．２０２０．０２．０１４D i a g n o s t i cV a l u e o f S e r u m R A S S F１A M e t h y l a t i o n i nP r i m a r yH e p a t i cC a r c i n o m a:aM e t aＧA n a l y s i sH U A N GY uＧc a o,Z H A N GY uＧw e i,Y A N G W e nＧl o n g(D e p a r t m e n t o f I n f e c t i o u sD i s e a s e s,t h eS e c o n dA f f i l i a t e d H o s p i t a l o fN a n c h a n g U n i v e r s i t y,N a n c h a n g３３０００６,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e㊀T o e v a l u a t e t h e d i a g n o s t i c v a l u e o f s e r u m R a s a s s o c i a t i o nd o m a i n f a m i l y １A g e n e(R A S S F１A)m e t h y l a t i o ni n p r i m a r y h e p a t i cc a r c i n o m au s i n g m e t aＧa n a l y s i s．M e t h o d s T h eP u b M e d,E M B A S E,C o c h r a n e l i b r a r y,W a n f a n g D a t a a n dC N K Iw e r e r e s e a r c h e d f o r l i t e r a t u r e p u b l i s h e db e t w e e n J a n u a r y２０００a n dO c t o b e r２０１９a b o u t t h e d i a g n o s i s o f p r i m a r y h e p a t i c c a r c i n oＧm aw i t h s e r u m R A S S F１A m e t h y l a t i o n．F i n a l l y,１１r e f e r e n c e sw e r e a c c e p t e d,i n c l u d i n g８１９p a t i e n t s w i t h p r i m a r y h e p a t i c c a r c i n o m a a n d８２７c o n t r o l s(c h r o n i c h e p a t i t i s,c i r r h o s i s a n db e n i g n l i v e r d i sＧe a s e s)．M a t aＧa n a l y s i sw a s p e rf o r m e du s i ng S t a t a１２．０s o f t w a r e．R e s u l t s㊀Th e s e n si t i v i t y a n d s p e c iＧf i c i t y o fR A S S F１A m e t h y l a t i o nd e t e c t i o n f o r d i ag n o s i n gh e p a t o c e l l u l a r c a r ci n o m aw e r e０．５６(９５％C I:０．３６Ｇ０．７４)a n d０．８１(９５％C I:０．６４Ｇ０．９２),r e s p e c t i v e l y．T h e p o s i t i v e l i k e l i h o o dr a t i o,n e g a t i v e l i k e l i h o o d r a t i o,d i a g n o s t i c o d d s r a t i o a n d a r e au n d e r t h eS R O Cc u r v ew e r e３．０(９５％C I:１．５Ｇ５．９),０．５５(９５％C I:０．３６Ｇ０．８３),５(９５％C I:２Ｇ１４)a n d０．７５(９５％C I:０．７１Ｇ０．７９),r e s p e c t i v e l y．C o n c l u s i o n S e r u m m e t h y l a t e dR A S S F１Ad e t e r m i n a t i o nh a s c e r t a i nv a l u e i n t h ed i a g n o s i so f p r i m a r y h e p a t i c c a r c i n o m a．K E Y W O R D S:R a s a s s o c i a t i o nd o m a i n f a m i l y１A;D N A m e t h y l a t i o n;h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a;l i q u i db i o p s y;m e t aＧa n a l y s i s收稿日期:２０１９Ｇ１０Ｇ２６作者简介:黄宇操(１９９４ ),男,硕士研究生,主要从事肝炎㊁肝衰竭的临床研究.通信作者:杨文龙,副教授,EＧm a i l:w e n l o o y a n g＠１６３．c o m.㊀㊀肝细胞性肝癌(h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a, H C C)是目前临床上最常见的癌症之一,和大多数恶性肿瘤一样,缺乏典型的早期表现,传统组织活检有着诸如穿刺风险㊁受解剖位置限制㊁体验痛苦㊁操作繁琐㊁价格昂贵等限制性,并且常见的血清肿瘤标志物,如脱ＧΥＧ羧基凝血酶㊁甲胎蛋白异质体３㊁鳞状细胞癌抗原㊁血管内皮生长因子等对早期H C C诊断效能不佳[１],致使很多患者错过了最佳治疗阶段. L E O N等[２]发现肿瘤患者比正常健康人血液中有更多的循环D N A,就此液体活检进入人们的视野.液体活检是指对血液或其他体液进行的低侵入性或非侵入性检测,选择检测有关肿瘤患者的遗传信息,为临床应用提供新的手段和方法.然而肝癌的发病机制涉及的基因繁多,在２０００年,R a s相关区域家族１(R a s a s s o c i a t i o n d o m a i n f a m i l y１, R A S S F１)基因作为D N A修复蛋白X P A的双杂交结合伴侣被偶然发现[３],R A S S F１基因由于２个启动子的不同使用及不同的剪接方式产生７种不同的亚基(R A S S F１A G)[４],但在各种肿瘤中仅有R A S S F１A启动子C p G岛的甲基化被检出[５].有研究[６]报道在肝细胞性肝癌患者组织中R A S S F１A 甲基化检出率达８５％(７２/８２).随着研究的进展,在血清㊁血浆和尿液样本中也观察到R A S S F１A的广泛甲基化,这表明R A S S F１A作为H C C生物标志物具有很强的候选资格[７].然而众多研究中肝癌患者血清的甲基化R A S S F１A检测率差距较大,在C HA N等[８]的研究中检出率高达９３．７％(５９/６３),而在WU等[９]研究中检出率却只有１９．２％(７/２６).基于此,本研究纳入关于R A S S F１A甲基化诊断H C C的研究进行M e t a分析,探讨其准确性.１㊀资料与方法１．１㊀文献检索策略检索２０００年１月至２０１９年１０月P u b M e d㊁E M B A S E㊁C o c h r a n e㊁万方和中国知网数据库收入的相关研究文献.检索关键词为: h e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a R a sa s s o c i a t i o n d o m a i nf a m i l y１A H C C R A S S F１A s e n s i t i v i t y s p e c i f i c i t y 肝细胞性肝癌 D N A甲基化 .通过阅读文献全文和追踪参考文献减少遗漏.１．２㊀纳入和排除标准纳入标准:１)关于外周血中R A S S F l A甲基化对H C C进行诊断的研究;２)能提取出用于计算诊断试验有关指标的数据.排除标准:１)数据无法利用的文献;２)重复发表的文献.１．３㊀数据提取每篇文献由２名研究人员独立阅读标题㊁摘要以及全文并提取数据,分歧均通过第３人裁定.提取数据包括:第一作者㊁发表年限㊁实验地区或国家㊁试验组及对照组例数㊁试验组及对照组疾病分类㊁完整的四格表数据.１．４㊀质量评价标准由２名研究人员对纳入文献逐篇根据诊断准确性研究的质量评价工具Q u a l i t y A s s e s s m e n t o fD iＧa g n o s t i cA c c u r a c y S t u d i e s(Q U A D A S)中的１４个条目进行评价.１．５㊀统计学方法本次研究采用S T A T A１２．０分析软件进行统计学分析.通过S R O C曲线及S p e a r m a n相关性分析来确定有无阈值效应的存在;异质性通过I２值进行评价,当I２ȡ５０％时,表明各研究间异质性明显,采用随机效应模型进行拟合.反之,则采用固定效应模型.合并的统计量采用敏感性(s e n s i t i v i t y, S E N)㊁特异性(s p e c i f i c i t y,S P E)㊁阳性似然比(P L R)㊁阴性似然比(N L R)㊁诊断比值比(D O R)及其９５％置信区间(C I)表示,并绘制S R O C曲线,计算曲线下面积(a r e au n d e r c u n r e,A U C S R O C).通过M e t a回归分析用于探索异质性来源.制作漏斗图评价纳入文献是否存在发表偏倚,当P＜０．０５时,说明纳入的文献存在发表偏倚,反之,则不存在发表偏倚.P＜０．０５为合并指标差异具有统计学意义.２㊀结果２．１㊀纳入文献情况根据检索策略和纳入排除标准,最终纳入研究文献１１篇,１篇为前瞻性研究,１０篇为回顾性研究.共收集病例试验组８１９例(原发性肝癌),对照组８２７例(包括慢性肝炎㊁肝硬化㊁良性肝脏疾病等).８项研究采用甲基化特异性聚合酶链反应(M S P)检测R A S S F１A甲基化;３项研究采用甲基化敏感的内切酶Ｇ定量聚合酶链反应(M S R EＧP).文献筛选流程见图１,纳入文献基本特征见表１.２．２㊀M a t e分析２．２．１㊀阈值分析S R O C曲线不呈肩臂状态,见图２,S p e a r m a n 相关系数r＝０．１５５,P＝０．６５０,提示不存在阈值效应.９６黄宇操等:血清R A S S F１A基因甲基化对原发性肝癌诊断价值的M e t a分析最终纳入文献11篇阅读全文，排外研究样本仅为肝脏组织文章6篇通过题目和摘要，排外综述、荟萃分析、个案报道等文献剩余17篇通过题目和摘要，排外综述、荟萃分析、个案报道等文献632篇初筛后得到文献649篇检索数据库获得文献1011篇剔除重复发表和无效的文献及明显不符合纳入标准的文献362篇图１㊀文献筛选流程图11②①⑩⑨⑧⑦⑥⑤④③1.00.500.51.01.0图２㊀纳入研究的S R O C 曲线表１㊀纳入文献基本特征表序号作者㊀㊀㊀年份国家/地区金标准㊀㊀检测方法试验组例数对照组例数真阳性假阳性假阴性真阴性文献评分/分①Z HA N G 等[１０]２００７中国大陆病理或至少２种影像成像检测阳性M S P ５０１７３５２１５１５１２②C H A N 等[８]２００８中国香港病理M S R E ＧP ６３６３５９３７４２６１２③C H A N G等[１１]２００８中国大陆病理M S P ２６１６７３１９１３１２④MA U R I Z I O 等[１２]２０１１意大利病理M S P４２６３１３１５２９４８１０⑤HU A N G 等[１３]２０１１中国大陆病理和影像学M S R E ＧP ７２３７４０４３２３３１２⑥MO HAM E D等[１４]２０１２埃及病理M S R E ＧP ４０４０３６２５４１５１１⑦HU A N G 等[１５]２０１４中国大陆病理M S P ３１１０１６８１５２１２⑧董晓刚等[１６]２０１６中国大陆病理M S P ６０６０４４０１６６０１２⑨WU等[９]２０１７中国台湾病理M S P ２３７２５６２１１６２１６２４０１１⑩D O N G等[１７]２０１７中国台湾病理M S P ９８１６５５１１４４７１５１１２ P A S H A 等[１８]２０１９埃及病理或A F P 联合磁共振M S P１００１００４０１４６０８６１２２．２．２㊀诊断指标的合并异质性分析I ２＝９６．２１％,提示纳入的研究间存在异质性(P ＜０．０１),对纳入文献进行逐篇排除后,仍存在异质性,采用随机效应模型进行指标合并,结果见表２,血清R A S S F １A 基因甲基化检测诊断H C C 合并S E N 及S P E 森林图见图３４.２．２．３㊀M e t a 回归分析从研究类型(p r o d e s i g n )㊁人群特点(s u b je c t )㊁检测方法(m e t h o d )３个角度进行亚组分析,结果显示,合并S E N 的结果中检测方法(P ＜０．０１)㊁研究类型(P ＜０．０１),这２个因素是异质性的主要来源,而在合并S P E 的结果中未发现能解释其异质性的因素.见图５.２．２．４㊀发表偏倚检测发表偏倚采用D e e k s 试验进行评价(图６),未发现明显的发表偏倚(P ＝０．５７).表２㊀纳入文献的各项指标的合并结果试验组例数对照组例数A U CS R O CS E NS P EP L RN L RD O R８１９８２７０．７５(９５％C I :０．７１~０．７９)０．５６(９５％C I :０．３６~０．７４)０．８１(９５％C I :０．６４~０．９２)３．０(９５％C I :１．５~５．９)０．５５(９５％C I :０．３６~０．８３)５(９５％C I :２~１４)０７南昌大学学报(医学版)２０２０年４月,第６０卷第２期StudyId Pasha2019Wu2017Dong2017Dong2016Huang2014Mohamed2012Maurizio2011Huang2011Chang2008Chan2008Zhang2007COMBINED I 2=96.21[94.90-97.52]Q =263.82,df =10.00,P =0.000.56[0.36-0.74]0.70[0.55-0.82]0.94[0.85-0.98]0.27[0.12-0.48]0.56[0.43-0.67]0.31[0.18-0.47]0.90[0.76-0.97]0.52[0.33-0.70]0.73[0.60-0.84]0.52[0.42-0.62]0.09[0.06-0.13]0.40[0.30-0.50]SENSITIVITY （95%CI ）0.11.0SENSITIVITY图３㊀血清R A S S F １A 甲基化检测诊断H C C 合并S E N 森林图StudyId Pasha2019Wu2017Dong2017Dong2016Huang2014Mohamed2012Maurizio2011Huang2011Chang2008Chan2008Zhang2007COMBINED 0.01.0SPECI FICITYSPECIFICITY （95%CI ）0.86[0.78-0.92]0.94[0.90-0.96]0.92[0.88-0.95]1.00[0.94-1.00]0.20[0.03-0.56]0.38[0.23-0.54]0.76[0.64-0.88]0.89[0.75-0.97]0.81[0.54-0.96]0.41[0.29-0.54]0.88[0.64-0.99]0.81[0.64-0.92]Q =259.14,df =10.00,P =0.00I 2=96.14[94.80-97.48]图４㊀血清R A S S F １A 甲基化检测诊断H C C 合并S P E 森林图Sensitivity(95%CI ）*P <0.05,**P <0.01,***P <0.01Sensitivity(95%CI ）*P <0.05,**P <0.01,***P <0.01㊀㊀注:m e t h o d 中Y e s 表示采用M S P 方法,N o 表示采用M S R E ＧP 方法;p r o d e s i g n 中Y e s 为前瞻性研究,N o 为回顾性研究;s u b je c t ,Y e s 为阐明研究对象人群特点,N o 为未阐明.图５㊀敏感性(左)与特异性(右)M e t a 回归分析11②①⑩⑨⑧⑥⑤④③⑦10010110000.050.100.150.201/r o o t (E S S )Diagnostic Odds RatioDeeks ’Funnel Polt Asymmetry Testpvalue=0.57图６㊀纳入研究的漏斗图３㊀讨论㊀㊀本研究结果发现血清R A S S F １A 甲基化检测诊断肝细胞性肝癌合并S E N＝０．５６(９５％C I :０．３６~０．７４),S P E ＝０．８１(９５％C I :０．６４~０．９２),说明单独的血清中R A S S F １A 甲基化检测在诊断H C C 漏诊率及误诊率偏高,本次纳入的研究中对照组均为患有肝脏疾病个体,未设立正常人群作为对照,可能降低该检测在整体人群中对H C C 诊断的敏感性及特异性;阳性似然比(P L R )＝３．０(９５％C I :１．５~５．９),阴性似然比(N L R )＝０．５５(９５％C I :０．３６~０．８３),说明血清中R A S S F １A 甲基化检测在确定诊断以及排除诊断H C C 中具有一定的价值;诊断比值比(D O R )＝５(９５％C I :２~１４);S R O C 曲线下面积(A U C S R O C )＝０．７５(９５％C I :０．７１~０．７９),说明血清中R A S S F １A１７黄宇操等:血清R A S S F １A 基因甲基化对原发性肝癌诊断价值的M e t a 分析甲基化检测鉴别H C C患者和非患者能力尚可.本研究进一步通过M e t a回归分析确定异质性的来源,结果发现是否为前瞻性研究及检测方法是合并S E N异质性的来源.提示未来需要更多的前瞻性研究帮助明确R A S S F１A甲基化检测对H C C 的诊断价值,另外,虽然有研究表明焦磷酸测序已成为临床诊断中定量检测D N A甲基化最合适的技术之一[１９],但是对甲基化基因的捕捉㊁提纯等方面仍未统一,故在甲基化检测方法可能需要进一步的规范,如探针及引物的选择㊁扩增方法㊁离心方法等.本次研究的亚组分析中发现采用M S R EＧP方法的合并S E N(０．８４)高于采用M S P方法的合并S E N (０．４２),反之,在合并S P E中后者(０．８７)高于前者(０．６０).说明两种检测方法均存在一定的局限性.目前诸多研究中提到多基因或者多种标志物蛋白联合构建诊断模板能提高诊断的准确性,例如在L U等[２０]的研究中发现将３个异常甲基化基因和１个m i R N A组合以建立甲基化H B V相关H C C预测模型,获得了高灵敏度和特异性(＞８０％),然而在WU等[９]的研究指出,D N A甲基化的结合可能会增加评估的风险影响准确性,在董晓刚等[１６]的研究中２个不同的信号传导通路的基因(P１６㊁R A S S F１A)甲基化联合检测却可能提高H C C检出率,因此若联合不同信号通路的异常基因可能对构建诊断模板意义更大.此外,D O N G等[２１]在其一项病例对照研究中指出,血清R A S S F１A甲基化和A F P水平的组合可能是一种有前途的非侵入性生物标志物.本次M e t a分析也存在一定的局限性.在纳入的部分文献中,H C C患者数量相对对照组较少,而且纳入的H C C患者的病因未得到详尽的阐述,无法完成不同病因(乙肝㊁丙肝㊁脂肪肝等)引起的H C C诊断的亚组分析;同时纳入研究的异质性也可能影响M e t a分析的结果.参考文献:[１]㊀陈小炎,刘也夫．血清肿瘤标志物在原发性肝癌诊断中的研究进展[J]．现代肿瘤医学,２０１９,２７(９):１６２５Ｇ１６２９．[２]㊀L E O NSA,S HA P I R O B,S K L A R O F FD M,e t a l．F r e eD N Ai n t h e s e r u mo f c a n c e r p a t i e n t sa n dt h ee f f e c to f t h e r a p y[J]．C a n c e rR e s,１９７７,３７(３):６４６Ｇ６４６．[３]㊀D AMMA N N R,L IC,Y O O NJH,e t a l．E p i g e n e t i c i n a c t i v a t i o n o fa R A S a s s o c i a t i o n d o m a i nf a m i l y p r o t e i nf r o m t h el u n g t u m o u r s u p p r e s s o r l o c u s３p２１３[J]．N a tG e n e t,２０００,２５(３):３１５Ｇ３１９．[４]㊀D AMMA N N R,S C H A G D A R S U R E N G I N U,S T R U N N I K OＧV A M,e t a l．E p i g e n e t i c i n a c t i v a t i o no f t h eR a sＧa s s o c i a t i o nd oＧm a i n f a m i l y１(R A S S F１A)g e n e a n d i t s f u n c t i o n i nh u m a n c a rＧc i n o g e n e s i s[J]．H i s t o lH i s t o p a t h o l,２００３,１８(２):６６５Ｇ６７７．[５]㊀D AMMA N NR,S C H A G D A R S U R E N G I N U,S E I D E LC,e t a l．T h e t u m o r s u p p r e s s o rR A S S F１Ai nh u m a nc a r c i n o g e n e s i s:a nu p d a t e[J]．H i s t o lH i s t o p a t h o l,２００５,２０(２):６４５Ｇ６６３．[６]㊀S O N G MS,S O N GS J,A Y A DNG,e t a l．T h e t u m o u r s u p p r e sＧs o rR A S S F１Ar e g u l a t e sm i t o s i sb y i n h i b i t i n g t h eA P CＧC d c２０c o m p l e x[J]．N a tC e l l B i o l,２００４,６(２):１２９Ｇ１３７．[７]㊀K H A NFS,A L I I,A F R I D IUK,e t a l．E p i g e n e t i cm e c h a n i s m s r e gＧu l a t i n g t h ede v e l o p m e n t of h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a a n dt h e i r p r o m i s e f o r t h e r a p e u t i c s[J]．H e p a t o l I n t,２０１７,１１(１):４５Ｇ５３．[８]㊀C H A N KC,L A I PB,MO K TS,e t a l．Q u a n t i t a t i v e a n a l y s i s o fc i r c u l a t i n g m e t h y l a t e dD N Aa s ab i o m a r k e r f o rh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a[J]．C l i nC h e m,２００８,５４(９):１５２８Ｇ１５３６．[９]㊀WU H C,Y A N G HI,WA N G Q,e t a l．P l a s m aD N A m e t h y l aＧt i o nm a r k e r a n dh e p a t o c e l l u l a r c a r c i n o m a r i s k p r ed i c t i o nm o de lf o r t h eg e n e r a l p o p u l a t i o n[J]．C a r c i n o g e n e s i s,２０１７,３８(１０):１０２１Ｇ１０２８．[１０]㊀Z H A N G YJ,WU H C,S H E NJ,e t a l．P r e d i c t i n g h e p a t o c e l l uＧl a r c a r c i n o m ab y d e t e c t i o no f a b e r r a n t p r o m o t e rm e t h y l a t i o ni n s e r u m D N A[J]．C l i nC a n c e rR e s,２００７,１３(８):２３７８Ｇ２３８４．[１１]㊀C H A N G H,Y IB,L IL,e ta l．M e t h y l a t i o no f t u m o ra s s o c i a t e dg e n e s i n t i s s u e a n d p l a s m a s a m p l e s f r o m l i v e r d i s e a s e p a t i e n t s[J]．E x p M o l P a t h o l,２００８,８５(２):９６Ｇ１００．[１２]㊀MA U R I Z I O M S,F R A C A N Z A N IA L,T A V A Z Z ID,e ta l．A b e r r a n tm e t h y l a t i o n o f o n c o s u p p r e s s o r g e n e s d e t e c t e d i n t h ep e r i p h e r a l b l o o d o f p a t i e n t sw i t h c h r o n i c h e p a t i t i s Ca n d h e p aＧt o c e l l u l a r c a r c i n o m a[J]．H e p a t o l,２０１１,５４(S１):１０７．[１３]㊀HU A N GZ H,HU Y,HU A D,e t a l．Q u a n t i t a t i v ea n a l y s i so f m u l t i p l em e t h y l a t e d g e n e si n p l a s m af o rt h ed i a g n o s i sa n dp r o g n o s i so fh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a[J]．E x p M o lP a t h o l,２０１１,９１(３):７０２Ｇ７０７．[１４]㊀M O H A M E DN A,S W I F YE M,A M I N NF,e t a l．I s s e r u ml e v e l o f m e t h y l a t e d R A S S F１A v a l u a b l ei n d i a g n o s i n g h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a i n p a t i e n t sw i t hc h r o n i c v i r a l h e p a t i t i sC[J]．A r a bJG a s t r o e n t e r o l,２０１２,１３(３):１１１Ｇ１１５．[１５]㊀HU A N G W,L IT,Y A N G W,e t a l．A n a l y s i s o fD N A m e t h y lＧa t i o n i n p l a s m a f o rm o n i t o r i n g h e p a t o c a r c i n o g e n e s i s[J]．G e n e tT e s tM o l B i o m a r k e r s,２０１５,１９(６):２９５Ｇ３０２．[１６]㊀董晓刚,郭文佳,丁伟．p１６㊁R A S S F１A在肝细胞性肝癌患者肿瘤组织及血浆中异常甲基化的检测及临床意义[J]．中国医药生物技术,２０１６,１１(３):２５２Ｇ２５８．[１７]㊀D o n g X,H o uQ,C h e nY,e t a l．D i a g n o s t i c v a l u e o f t h em e t h y lＧa t i o no fm u l t i p l e g e n e p r o m o t e r s i ns e r u mi nh e p a t i t i sBv iＧr u sＧr e l a t e dh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a[J]．D i s M a r k e r s,２０１７,１０(８):１Ｇ６．[１８]㊀P A S H A H F,MO HAM E D R H,R A DWA N MI．R A S S F１Aa n dS O C S１g e n e sm e t h y l a t i o n s t a t u s a s a n o n i n v a s i v em a r k e rf o rh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m a[J]．C a n c e r B i o m a r k,２０１９,２４(２):２４１Ｇ２４７．[１９]㊀Y E M H,C H E NJ,L A IM D．P y r o s e q u e n c i n g a n d i t s a p p l i c aＧt i o n i nc l i n i c a ld i a g n o s i sa n dt h e r a p y[J]．Z h o n g h u aB i n g L iX u eZ aZ h i,２０１３,４２(２):１３８Ｇ１４２．[２０]㊀L U CY,C H E NSY,P E N G H L,e t a l．C e l lＧf r e em e t h y l a t i o n m a r k e r sw i t h d i a g n o s t i c a n d p r o g n o s t i c p o t e n t i a l i n h e p a t o c e lＧl u l a r c a r c i n o m a[J]．O n c o t a r g e t,２０１７,８(４):６４０６Ｇ６４１８．[２１]㊀D O N G X,H E H,Z H A N G W,e ta l．C o m b i n a t i o no fs e r u m R A S S F１A m e t h y l a t i o na n dA F Pi sa p r o m i s i n g n o nＧi n v a s i v eb i o m a r k e r f o rH C C p a t i e n tw i t hc h r o n i c H B Vi n f e c t i o n[J]．D i a g nP a t h o l,２０１５,１０(１):１３３Ｇ１４０．(责任编辑:况荣华)２７南昌大学学报(医学版)２０２０年４月,第６０卷第２期。

RASSF1A基因甲基化状态检测试剂盒及其应用[发明专利]

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910658196.6(22)申请日 2019.07.21(71)申请人广州奥百阕谱生物科技有限公司地址 511400 广东省广州市番禺区市桥街大北路永恒大街6号永隆洗衣厂车间楼213-2室(72)发明人陈敏　汪莉　冯德峰　(74)专利代理机构北京汉鼎理利专利代理事务所(特殊普通合伙) 11618代理人潘满根(51)Int.Cl.C12Q 1/6886(2018.01)(54)发明名称RASSF1A基因甲基化状态检测试剂盒及其应用(57)摘要本发明涉及RASSF1A基因甲基化状态检测试剂盒，所述试剂盒包括茎环状引物，所述茎环状引物用于特异性扩增检测RASSF1A基因的转录起始区上游-1至-187bp中富含CpG岛的序列。

本发明设计的茎环状引物，其能显著提高DNA中甲基化DNA的检出效率，防止非甲基化DNA模板的非特异性扩增；本发明的试剂盒能增加检测肿瘤特异性的同时，提高了检测的灵敏度。

权利要求书1页说明书5页序列表2页附图2页CN 110283913 A 2019.09.27C N 110283913A1.RASSF1A基因甲基化状态检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括茎环状引物，所述茎环状引物用于特异性扩增检测RASSF1A基因的转录起始区上游-1至-187bp中富含CpG 岛的序列。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述茎环状引物的3'端序列是根据RASSF1A基因的转录起始区发生了甲基化的位点序列进行设计，而所述茎环状引物的5'端序列不能和RASSF1A基因的转录起始区发生了甲基化的3'端甲基化序列互补杂交，但可以和非甲基化的3'端序列互补杂交。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述茎环状引物是茎环状上游引物SEQ ID NO:1：AAACACAAACCAAACAAAACCGAAGTCGGGGTTCGTTTTG，其中下划线处为针对亚硫酸盐转化后的基因组DNA互补的特异扩增序列，而非划线部分为茎环形成序列。

RASSF1-A基因和RASSF1-C基因在胃癌组织及细胞中的表达

ＲＡＳＦ一基因和ＲＡＳＦ－基因Ｓ１ＡＳ１Ｃ
在胃癌组织及细胞中的表达
刘新法陈明军谢国柱，，
（．州市人民医院麻醉科，苏泰州２５０；．苏大学附属医院普外科，１泰江２３０２江江苏镇江２２０）１０１
关键词：胃癌；ＡＳＦ — ＲＳＩＡ基因；ＲＳ１Ｃ基因；表达；ＡＳＦ一半定量逆转录聚合酶链反应
中图分类号：Ｒ３．７５２
文献标志码：Ａ
文章编号：００２４２１）２０６４１０—２９（００１—０６ —０
ＥｘｒｓｉｎｏｐｅｓｏｆＲＡＳＦ１－ａｄＲＡＳＦ１－ＧｅＳ－ＡｎＳ－ＣｎｅｉｓｒｃＣａｃｒＴｉｓｅｎｄＣｅｌｎＧａｔｉｎｅｓｕｓａｌｓ
ＬｕｎｆＣＩＸｉ—ａ，ＨＥＮＭｉ【ｊｎ，ＥＧｕ — ｈｎ－ｕＸＩｏｚｕｇ（．ｐｒｍｅｔｆＰ００，ｈｏｅ’ ｓｔｌｏｉｈｕ，１ＤｅａｔｎＡ” ＾ｏＺｇｔｅＰｅｐｌｓＨｏｐｉａｆＴａｚｏＴａｚｏ２３０，ｈｎｉｈｕ２５０Ｃｉａ；２ＤｅａｔｎｆＧｅｅａｕｇｒＡｆ ’ｉｔｄ．ｐｒｍｅｔｎｒｌＳｒｅｙ，Ｊｌａｅｏｉ
ｃｎｅｉｓｅｎｅ＼ＭｅｈｄＴｈｔｐａｃｒｔｓｕｓａｄｅｌｓｔｏｓｅｈｔｆｆ
ｎｂ．ｌｎｈ．ｏ／ａｄＤＮＡｓａｏｔｒｃｉｎｍ．ｉｇｖｎｔｒｓｆｗａｅ

RASSF1A基因在肿瘤发生发展中的作用

展起着重要作用。１９９８年，ｅｉｏ等在肺癌及乳腺癌细胞系的Ｓｋｄ
ｇｃｓｕａｄ蛋白的磷酸化位点。ＡＭ蛋白是人共济失调ｉｔｉｍｔｔ）ｅａａｅＴ
一
研究中发现３２．ｐ１３存在１个１０ｂ长的最小纯合缺失区，此２ｋ据
关。大量研究发现，抑癌基因的失活与其启动子高甲基化有密切关联 …。Ｒｓａ相关区域家族１ＲｓａｓｃｔｎｄｍｉｆｍｌＡ（ａｓｉｉｏａａｉｏａｏｎｙ
１ＲＳＦＡ）２０发现的新型候选肿瘤抑制基因（ｕｒＡ，ＡＳ１是００年ｔｍｏｓｐｒｓｏｇｎ，Ｓ）Ｒｓ因是人类肿瘤研究中１种重要的ｕｐｅｓｒｅｅＴＧ。ａ基
葛东峰综述
关键词：ＡＳ１肿瘤抑制基因；ＲＳＦＡ；甲基化中图分类号：７０２Ｒ３．３文献标识码：Ｂ
姚运红审校
癌等许多实体肿瘤中存在着较高的表达缺失Ｊ由此推断。ＲＳＦＡ基因可能是１ＡＳ１种重要的候选肿瘤抑制基因。２ＡＳ１ＲＳＦＡ作用机制
路的信号传导，阻断Ｒｓ生长效应信号由细胞外传向细胞内，ａ使其丧失介导细胞分化、促进细胞增殖和激活原癌基因的功能，从而发挥抑制肿瘤的作用。目前认为可能有２种机制可以解释其抑制肿瘤生长的作用：ＡＳ１ ①ＲＳＦＡ蛋白通过抑制Ｒｓａ激活生长效应信号的传导途径而发挥抑癌作用；ＡＳ１蛋白的失活 ②ＲＳＦＡ导致Ｒｓａ作用的失衡，使其主要发挥促进生长的作用Ｊｈｖ－。Ｓｉａｋｍａ等研究发现，ＲＳＦＡ瞬时转染人不表达该基因的ｕｒ将ＡＳ１肺腺癌细胞株Ｈ１９２９后发现，胞周期被阻断在Ｇ．细，Ｓ期。ＲＳＦＡ蛋白可能是细胞周期蛋白Ｄ（ｙｌＤ）ＡＳ１１ｃｃｉ１的抑制蛋白，ｎ其通过抑制内源性ｃｃｉ的积累，ｙｌＤ１ｎ并能增强ｐ２（４）ｃ— １０ＥＦ和ｙｅｎ２基因启动子结合，ｌＡｉ抑制ｅｃｉ２的表达，ｙｌＡｎ从而阻滞细胞从

RASSF1A在乳腺癌中表达及临床意义

基金项目：安徽医科大学校科研基金联合资助项目（２０１５ｘｋｊ１１１）通信作者：汤铜，男，主任医师，硕士生导师，研究方向：甲状腺、乳腺
肿瘤，Ｅｍａｉｌ：ｔｔ２０１６４＠１２６．ｃｏｍ
相关基因和分子机制认识的加深，许多引起细胞增殖或抑制凋亡的分子已经成为肿瘤治疗的新靶点［３］，其中有些可能成为推测乳腺癌患者预后的候选标志物［４］。自被发现以来，ＲＡＳＳＦ１Ａ基因已经被广泛研究。多项研究表明，ＲＡＳＳＦ１Ａ几乎在全身正常组织器官中均表达，而在多种实体肿瘤中存在表达缺失［５］。本文旨在研究ＲＡＳＳＦ１Ａ在乳腺癌以及癌旁组织中的表达情况，并分析其临床意义，探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。１资料与方法１．１临床标本收集安徽医科大学第二附属医院普外科２０１５年３月—２０１６年３月经病理确诊的６０
ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＲＡＳＳＦ１Ａｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒａｎｄｉｔｓｃｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ
ＤＵＷａｎｇ，ＴＡＮＧＴｏｎｇ，ＱＩＡＮＢｏ，ＬＩＪｉａ，ＺＨＥＮＧＬｕ，ＴＯＮＧＴｉｎｇｔｉｎｇ（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙ，ＴｈｅＳｅｃｏｎｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
安徽医药ＡｎｈｕｉＭｅｄｉｃａｌａｎｄＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ２０１８Ｍａｒ，２２（３）
·４６３·
ＲＡＳＳＦ１Ａ在乳腺癌中表达及临床意义
杜旺，汤铜，钱波，李佳，郑璐，童婷婷（安徽医科大学第二附属医院普外科，安徽合肥２３０６０１）
摘要：目的研究乳腺癌及癌旁组织中ＲＡＳＳＦ１Ａ的表达情况，并探讨其与临床、病理资料的相关性。方法收集６０例乳腺癌及相应癌旁组织，通过免疫组化染色检测ＲＡＳＳＦ１Ａ的表达情况；统计６０例临床病例的各项临床、病理资料，并分析其相关性。结果ＲＡＳＳＦ１Ａ在乳腺癌组织中的表达阳性率为３５％（２１／６０），而在癌旁组织中８６．７％（５２／６０），癌旁组织中ＲＡＳＳＦ１Ａ的表达明显高于乳腺癌组织（Ｐ＜０．０５）；ＲＡＳＳＦ１Ａ的表达与淋巴结转移有无、组织学分级、脉管侵犯、人类表皮生长因子受体２（ＨＥＲ２）、Ｋｉ６７表达有关；ＴＭＮ分期中的Ⅰ期、Ⅱ期以及部分ⅢＡ期（Ｔ３Ｎ１ＭＯ）患者ＲＡＳＳＦ１Ａ表达４８．４％（１５／３１）高于Ⅲ期（除Ｔ３Ｎ１ＭＯ外）患者２０．７％（６／２９）（χ２＝５．０５３，Ｐ＝０．０２５）。结论相较于癌旁组织，乳腺癌组织中存在ＲＡＳＳＦ１Ａ表达缺失的情况，其缺失表达与和淋巴结转移有无、组织学分级、脉管侵犯、ＨＥＲ２、Ｋｉ６７、ＴＭＮ分期密切相关。关键词：ＲＡＳＳＦ１Ａ；乳腺癌；临床意义ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００９－６４６９．２０１８．０３．０１９

MSP法检测胃癌组织中RASSF1A基因启动子区甲基化改变

ａｅｕａｉｆＶａａｇｎｎｕｌｏｉｘｈｎｅｆｃｏｏｔｒｒｇｌｔｎｏｖ２，ｕａｉｅｎｃｅｔｅｅｃａｇａｔｒｆｒｏｄ
格的胃旁淋巴结清除，并且术后应给予以ＭＧＭＴ或ＥＦＧＲ为
本实验中，ＧＴ和ＥＦＭＭＧＲ二者的相关系数ｒ０２２，＝．７３表明两者的表达呈低度正相关性，果二者均阳性表达，如可
［］吴力娟，４王发亮，薄爱华，Ｏ等．一甲基鸟嘌呤一ＤＡ甲基转移Ｎ酶在大肠癌中的表达及意义［］现代肿瘤医学，０８１（）Ｊ．２０，６３：
ｐｏｔｒｈｐｒｔｙａｉｎｉｓｏｉｔｄｗｉｔｍｕａｏｓｉｒｍｏｅｙｅｍｅｈｌｔｓａｓｃａｅｔＧＡｔｔｎｎＫｏｈｏｉ
—
及其临床价值［］肿瘤防治研究，０，（）ｌ３ｌ５Ｊ．２８３２：ｌ一１．０５［２胡兵，１］魏于全．表皮生长因子受体靶向肿瘤治疗［］癌症，Ｊ．
［］薄爱华，６邢立强，芦广萍，ＤＡ修复酶（等．ＮＭＧＭ在人胃肠癌Ｔ）中表达的临床意义［］中国组织化学与细胞化学杂志，０６，Ｊ．２０
ｌ（）２７— ９．５３：８２１
临床表现ＭＧＭＴ与ＥＦＧＲ均呈阳性的病人，应在术中进行严
２０，３４：７ — ７．０４２（）４１４５（编校：鹏超）李

肺癌早期诊断本可以更精准——SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测

肺癌早期诊断本可以更精准——SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测不多说，先上两个肺癌案例：病例1:病史就诊上海某专科三甲医院患者情况男性63岁，吸烟史30年，6000⽀/年;体检胸部CT提⽰“左肺下叶结节，考虑恶性病变可能性⼤；两肺慢性炎症临床诊断于2018-04-12⾏⽀⽓管镜经左B5a亚段进⾏先⽑刷刷检，后活检取样。

刷检直接涂⽚检测：见异型细胞团刷检⽑刷洗脱细胞甲基化检测：SHOX2 和 RASSF1A 双甲基化检出活检病理提⽰：数⼩⽚肺组织，倾向肺腺癌初步诊断肺恶性肿瘤病例2：病史就诊郑州某三甲医院患者情况⼥性54岁，⽆吸烟史;因“咳嗽咳痰，胸痛1⽉余，⽓促10天”门诊⼊。

临床诊断于2018-05-02⾸次⾏⽀⽓管镜，取得肺泡冲洗液15ml。

肺泡冲洗液细胞学TCT：可见增⽣的⽀⽓管上⽪细胞，并见少量中性粒细胞及淋巴细胞，未见其他异常肺泡冲洗液甲基化检测：SHOX2 甲基化未检出，RASSF1A 甲基化检出于2018-05-16⾏纵隔淋巴结穿刺活检病理提⽰：恶性肿瘤，待免疫组化协诊免疫组化结果：⼩细胞癌CD56（+）,CgA（+），CK（点状+），CK7（少数鳞状+），Ki-67（70%+），NSE（+），P40（-），PAX-8（-），Syn（+），TTF-1（+）。

初步诊断肺恶性肿瘤注意到病例中的“甲基化检测”了没？这是透景⽣命最新推出的新⼀代肺癌甲基化联合细胞学诊断产品——Lung-MeTM，应⽤国家专利的双靶点SHOX2 + RASSF1A甲基化基因组合，可提供早于常规肿瘤标志物检测的肺癌早早期分⼦诊断信息。

检测样本本试剂盒主要使⽤肺泡灌洗液、肺泡冲洗液及刷检洗脱液等肺部疾病特异性样本，⽤于肺癌⾼危⼈群的良恶性鉴别诊断。

主要⽤途任⼀基因检出甲基化即定义为样本甲基化检测阳性，提⽰肺部病变恶性的可能性增加；两基因同时未检出甲基化则定义为样本甲基化检测阴性，提⽰肺部病变良性的可能性增加，但不排除恶性的可能。