饲料粗蛋白测定方法

饲料粗蛋白测定方法
1适用范围
本标准适用于配合饲料和单一饲料。

2原理
凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂上，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。

加入强碱并蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用酸滴定测出氮含量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25计算粗蛋白质量。

此法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。

3仪器设备
①实验室用样品粉碎机或研钵。

②分析筛：孔径0.45mm(40目)。

③分析天平：感量0.0001g。

④消煮炉或电炉。

⑤滴定管：酸式，25或10ml。

⑥凯氏烧瓶：100或500ml。

⑦凯氏蒸留装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。

⑧锥形瓶：150或250ml。

⑨容量瓶：100ml。

4试剂
①硫酸(GB 625—77)：化学纯。

②硫酸铜(GB 665—78)：化学纯。

③硫酸钾(HG 3-920-76)：化学纯或硫酸钠(HG 3-908-76)：化学纯。

④氢氧化钠(GB 629-77)：化学纯,40 g溶成100 IIll配成40％水溶液(W／V)。

⑤硼酸(GB628-78)：分析纯，2 g溶于100ml水配成2％溶液(W／V)。

⑥混合指示剂：甲基红(HG 3-958-76)0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿(HG 3—1220-79)0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期1个月以内。

⑦0.05N盐酸标准溶液(邻苯二甲酸氢钾法标定)：4.2ml 盐酸(GB 622—77)，分析纯，注入l 000 rm蒸留水中。

⑧蔗糖(HG 3—1001—76)：分析纯。

⑨硫酸铵(GB 1396-78)：分析纯。

5试样的选取和制备
取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。

液体或膏状粘液试样应注意取样的代表性。

用干净的、可放入凯氏烧瓶的小玻璃容器称样。

6测定步骤
6.1试样的消煮称取0.5～1 g试样(含氮量5-80 mg)准确至0.002 g，无损失地放人凯氏烧瓶中，加入硫酸铜0.9 g，无水硫酸钾(或硫酸钠)15 g，与试样混合均匀，再加硫酸25ml和2粒玻璃珠，在消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力(360-410”12)直至溶液澄清后，再加热至少2h。

6.2氨的蒸馏
6.2.1常量直接蒸馏法。

将“6.1”中的试样消煮液冷却，加蒸馏水200ml，摇匀，冷却。

沿瓶壁小心加入40％氢氧化钠溶液100ml，立即与蒸馏装置相连，蒸馏装置冷凝管的末端应浸入50ml硼酸吸液1cm。

加混合指示剂2滴，轻摇凯氏烧瓶，使溶液混匀，加热蒸馏，直至馏出液体积约150ml。

先将吸收液取下，再停止加热。

6.2.2半微量水蒸汽蒸馏法。

将“6.1”中的试样消煮液冷却，加蒸馏水20ml，转入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。

取20ml 2％硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入此溶液。

蒸馏装置的蒸汽发生器的水中应加甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，且保持此液为橙红色，否则补加硫酸。

准确移取试样分解液10-20ml注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好人口玻璃塞。

再加10m140％氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流人反应室中，将玻璃塞塞好，且在人口处加水封好，防止漏气，蒸馏4 min，使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水洗冷凝管末端，洗液均流人吸收液。

注：6.21和6.22蒸馏法测定结果相近，可任选一种。

6.3滴定吸收氨后的吸收液立即用0.05N盐酸标准溶液滴定，将溶液由蓝绿色变为灰红色为终点。

6.4空白测定饲料粗蛋白测定方法称取蔗糖0.1 g，代替试样，按第6章进行空白测定，消耗0.05N盐酸标准溶液的体积不得超过0.3ml。

7测定结果的计算
7.1计算见下式：
式中：V2—滴定试样时所需酸标准溶液体积，ml；V1一滴定空白时所需酸标准溶液体积，ml；N－盐酸标准溶液当量浓度；w－重量，g；V－试样分解液总体积，ml；V1—试样分解液蒸馏用体积，ml；0.0140－氮的毫克当量数；6.25－氮换算成蛋白质的平均系数。

7.2重复性每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值为结果；当粗蛋白质含量在25％以上，允许相对偏差为1％；当粗蛋白质含量在10％-25％，允许相对偏差为2％；当粗蛋白质含量在10％以下，允许相对偏差为3％。

参考文献
[1]中华人民共和国国家标准GB6432—86饲料粗蛋白测定方法[s].。