乙肝病毒HVV-DNA检测的研究现状

乙肝病毒ＨＶＶ－ＤＮＡ检测的研究现状

【摘要】：乙型肝炎是当前危害人民健康最严重的传染病。本义对乙型肝炎及其病毒HBV－DNA的检测方法进行了综述

【关键词】：乙型肝炎;HBV－DNA;检测

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病。通过血液与体液传播，具有慢性携带状态。因其可能通过性生活传播，国际上将其列入性传播疾病。本病在我国广泛流行，人群感染率高，在某些地区感染率达到35％以上。据有关资料，肝炎检测阳性的患者已经达到1.89亿，而应就诊未就诊人数（携带者）将近4亿。是当前危害人民健康最严重的传染病。多见于儿童及青壮年。乙肝临床表现多样化，易发展为慢性肝炎和肝硬化，少数病人可转变为原发性肝癌。

1 乙肝病毒在人体的感染情况

“大小三阳”是指进行”乙型肝炎抗原二对半检查”（简称为乙肝二对半）的二种不同结果。”二对半”中的第一对是指表面抗原（HBsAg）和表面抗体（抗-HBs），第一对是E抗原（HBeAg）和E抗体（抗-Hbe），另外第三对是核心抗体（抗-HBc）和核心抗原（HbcAg）。由于在肝细胞中，核心抗原已被全部装配成乙肝病毒，血清中没有游离的核心抗原，故在周围血液中只能检测到第三对中的半对，即核心抗体，故称二对半。

“大三阳”是指表面抗原、E抗原和核心抗体检测均是阳性。一般认为，”大三阳”传染性相对较强，同时演变成慢性乙型肝炎的可能性也比较大。”小三阳”是指表面抗原、E抗体和核心抗体检测均是阳性。”大三阳”和它的区别是前者E 抗原阳性，表示病毒复制活跃，常同时伴有乙肝病毒DNA（脱氧核糖核酸）阳性。”小三阳”通常是由”大三阳”转变而来，是人体针对E抗原产生了一定程度的免疫力，表示病毒已基本停止复制，若乙肝病毒DNA阴性，则基本不再具有传染性。一般认为”小三阳”的传染性较小。但对于一些E抗原和E抗体均为阴性的人，它所感染的乙肝病毒可能是已经产生突变的病毒株感染，它不能表达E 抗原和E抗体。此时需要检查乙型肝炎病毒去氧核糖核酸（HBV－DNA），如果HBV-DNA为阳性，表示病毒血症存在，仍然具有传染性。

2 乙肝病毒检测技术与HBV-DNA检测

目前广泛采用的乙型肝炎检测方法是抗体抗体酶联免疫检测法（Elisa），该方法具有价格便宜、准确、灵敏、易于操作等优点。

但如上所述，真正决定患者病情轻重的是乙肝病毒DNA、肝功能和临床症状。核酸是病毒的核心部分。没有核酸，病毒就不能复制。因此，检测HBV-DNA 是判断乙肝病毒有无复制的”金指标”。乙肝血液”二对半”的检查依然是辅助诊断

乙肝的常规方法，特别对急性乙肝的发现有重要作用，只是该方法对检测慢性乙肝表现得越来越不”灵敏”，特别是在乙肝病毒发生了变异以后，需要进行HBV －DNA检测才能确诊。

HBV－DNA是乙肝病毒复制活动最直接，最可靠的指标；HBV-DNA阳性亦是判别乙肝患者或携带者传染性的指标；HBV-DNA定量的定期检测，可判定乙肝感染量的消长，临床病情的是否稳定和好坏，还可直接评价监测抗病毒药的疗效。

对于乙肝患者，检测的一项重要指标就是HBV-DNA，乙肝极难治疗，保养占了HBV感染者生活中最重要的一部分，而HBV-DNA是衡量感染者是否处于平衡期，是否需要抗病毒治疗，因此该项指标对于乙肝患者自身的保养显得尤为重要。

3 DNA分子杂交技术与DNA的分子导流杂交

目前对DNA的检测一般采用斑点杂交法检测，它的原理是利用有标记的特异性探针与被检测样本中的HBV-DNA结合，再通过显色显示检测结果。用该方法可检测到0.2-1pg的DNA，具有简便、快速、经济等特点。

传统的或反向斑点杂交法在玻璃试管、塑料袋，或在维持一定温度的杂交炉里进行培养、杂交时，DNA在薄膜上进行杂交，其中链与链之间的结合效率在动力学上与液相杂交法不同。所需的杂交时间通常要几个小时。

导流杂交法解决了上述固有缺陷，它利用DNA探究实验议为平台，具体方法是将所有杂交液体强迫性流过点有检测探针的薄膜（通常该硝基纤维网膜的孔径为约0.45微米，当然也可用其它孔径和厚度的薄膜），让所有单链DNA或RNA 与膜上探针充分接触，在微孔中，与固定在孔中相对应的互补单链探针产生杂交结合。这将大大提高渗透速度和反应的有效浓度，从而迅速杂交形成双链，清洗时同样以纯净的清洗液强迫性流过薄膜，完全把未结合的探针冲洗干净，因此既灵敏又快速。它能提供精确的控制反应条件，可达到更高灵敏度和特异性。整个杂交及清洗过程一般不超过二、三十分钟，甚至只需几分钟。

DNA的分子杂交技术能提升DNA分析的特异性，但是大多数杂交方法耗时耗力，无法达到临床快速验测的要求。将PCR检测灵敏性高的特点配合特异性极高的反斑点杂交技术以一种简单、快速且省钱的方式结合起来，由此诞生了一种用于检测和分型HBV-DNA的低密度基因芯片，在该低密度基因芯片上，我们可将它与DNA的半定量技术结合起来，实现对人血液中的HBV-DNA的半定量检测。此外，如有可能，我们在该膜片上面还可以继续加上丙肝病毒或其它更多病毒的检测探针，实现在一张低密度基因芯片上对人体可能感染的多种病毒的检测。这种方法利用了导流杂交技术，大大提高杂交的效率，且操作方便，从而避免了传统杂交方法的冗长的操作过程。

参考文献：

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