松针黄酮的体外抗氧化作用研究

Ａ５３２ｎｍ
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
０．０６ ０．０２ｂ
０．６３ ０．０２
０．１９ ０．０１ｂ ７８．４７
０．１３ ０．０３ｂ ８９．０６
０．１１ ０．０１ｂ ９４．６３
ａ：ｐ＜０．０１ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ．
Ａ５１０ｎｍ ０．３４ ０．０３７ ０．２５ ０．００８ａ ０．２３ ０．００６ａ ０．１８ ０．０１１ａ ０．１７ ０．００８ａ ０．１５ ０．００４ａ ０．０９ ０．００６ａ
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
２９．７７ ３１．３９ ４８．７５ ５１．８７ ５７．２６ ７６．７９
５０
０．２１ ０．０３ｂ ８７．００
０．４１ ０．０３ｂ
５５．４２
８０
０．１６ ０．０５ｂ ８９．００
０．２５ ０．０１ｂ
７３．８５
１００
０．１４ ０．０２ｂ ９２．００
０．２１ ０．０１ｂ
８５．５７
１５０
０．１２ ０．０１ｂ ９４．００
０．１６ ０．０１ｂ
９２．８９
ａ： ｐ＜０．０５ ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ； ｂ： ｐ＜０．０１ ｖｓｃｏｎｔｒｏｌ．
Ｃｏｎｔｒｏｌ＋Ｈ２Ｏ２ ０
１．１５ ０．０３
Ｈ ２Ｏ ２＋ Ｐ Ｆ
５１
０．７１ ０．０６ａ
Ｈ ２Ｏ ２＋ Ｐ Ｆ
１２１
０．４９ ０．０８ａ
Ｈ ２Ｏ ２＋ Ｐ Ｆ
１６８
０．２９ ０．０６ａ
ａ： ｐ＜０．０１ ｖｓ ｃｏｎｔｒｏｌ．
Ｈｅｍｏｌｙｓｉｓ（％）
１４．６９ １０２．４ ６８．５４ ４９．３７ ２９．３６
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
４３．５７ ５７．４５ ７８．２１
６０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２ ４０ ｌ 在 ３７ 下水浴 １ｈ 后 加入 １ｍｌ １５ｇ／１００ｍｌ 三氯乙酸（ＴＣＡ）结束反应 再加入 １ｍｌ０．６７ｇ／ １００ｍｌ 硫代巴比妥酸（ＴＢＡ） 于沸水浴中显色 １５ｍｉｎ 冷 却后离心 测上清液的 Ａ ５３２ｎｍ １．６ 脂质过氧化激发与 Ｍ Ｄ Ａ 含量的测定［１０］ １．７ 小鼠肝线粒体肿胀度的测定［１１］ ３ｍｌ 肝线粒体悬浮 液 加入不同浓度的 ＰＦ 后（图 １） 以 ５ ｍｏｌ／Ｌ ＦｅＳＯ４ 和
１．３．１ 红细胞悬浮液的制备 小鼠眼眶取血 分离红细 胞， 生理盐水洗三次 制成 ０ ． ５ ％ 悬浮液
１．３．２ 组织提取液的制备 迅速取上述小鼠的肝 脾 心 肾 脑 用冷的生理盐水洗净后冰浴下匀浆 制 成含蛋白质 ０．５ｇ／１００ｍｌ 的悬浮液
１．３．３ 肝线粒体和微粒体的制备 取肝组织在冰浴下以０． ２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖制成１０ｇ／１００ｍｌ匀浆，３０００ｇ ４ 离心２０ｍｉｎ，沉 淀用冷的 ０．２５ｍｏｌ／Ｌ 蔗糖溶液洗 ２ 次，合并上清液备用， １００００ｇ ４ 离心２０ｍｉｎ，所得沉淀用冷的０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液 洗 ２ 次 合并上清液备用 所得沉淀即为线粒体［６］ 用
１ 材料与方法
１．１ 材料 实验动物为昆明种小鼠，雌雄各半，体重（２０ ２）ｇ，由吉林大学实验动物中心提供 化学试剂为国产分 析纯 １．２ 松针黄酮的提取分离［５］ 称取松针（ｐｉｎｅｎｅｅｄｉｅ， 采集于吉林农业大学校园）１００ｇ，加 ７０％ 乙醇 １０００ｍｌ，８０
回流抽提 ２ ４ｈ 收集提取液， 减压浓缩后用石油醚萃 取 ２ ３ 次 除去叶绿素 弃醚相 水相用乙酸乙酯反 复萃取 ２ ３ 次 弃水相 乙酸乙酯相浓缩干燥后得粗 黄酮 ４．６ｇ，得率为 ４．６％ １．３ 样品制备
２．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｉｌｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３０１１８， Ｃｈｉｎａ ３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ， Ｂａｓｉｃ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００２１， Ｃｈｉｎａ）
ＡｎｔｉＯｘｉｄａｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ Ｌｅａｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ＺＨＡＮＧ Ｐｅｉ－ｇａｎｇ１ ＺＨＥＮＧ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ２ ＣＨＡＮＧ Ｙｏｕ－ｑｕａｎ１，３，＊ ＱＵ Ｈｏｎｇ－ｇｕａｎｇ３ （１．Ｊｉｌｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ １３００５２， Ｃｈｉｎａ
506 2005, Vol. 26, No. 9
食品科学
营养卫生
松针黄酮的体外抗氧化作用研究
张培刚 １ 郑鸿雁 ２ 昌友权 １，３，＊ 曲红光 ３ （１．吉林工程技术师范学院生物与食品工程系 吉林 长春 １３００５２ ２．吉林农业大学食品工程学院
吉林 长春 １３０１１８ ３．吉林大学基础医学院药理教研室 吉林 长春 １３００２１）
收稿日期 ２００５－０７－０２ ＊通讯作者 作者简介 张培刚（ １ ９ ７ ２ － ） 男 讲师 硕士 主要从事保健食品开发研究
营养卫生
食品科学
2005, Vol. 26, No. 9 507
１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液配成含蛋白质为０．５ｍｇ／ｍｌ线粒体 悬浮液备用 上清液用 １０００００ｇ ４ 离心 ３０ｍｉｎ 所得 沉淀即为微粒体，用１０ｍｍｏｌ／Ｌ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液配成含蛋白 质 ０．５ｍｇ／ｍｌ 微粒体悬浮液备用［７］ １．４ Ｐ Ｆ 清除 Ｏ Ｈ 效果的测定
Ｈｅａｒｔ
Ａ５３２ｎｍ
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
０．３１ ０．０２ａ
０．６１ ０．０４
０．４９ ０．０３
２７．７１
０．３９ ０．０２ａ
７１．１１
０．３１ ０．０２ａ
８８．７６
０．２９ ０．０１ａ
９１．１４
０．３１ ０．０１ａ
９４．８７
Ｓｐｌｅｅｎ
取 １ｍｌ 组织提取液或 ０．５ｍｇ／ｍｌ 肝线粒体 微粒体 加不同浓度 ＰＦ（表 ２） ６ｍｍｏｌ／Ｌ ＦｅＳＯ４１００ ｌ 最后加
表 １ ＰＦ 对 ＯＨ 的清除作用 Table 1 The scavenging effect of PF on OH (ｘ s,n=6)
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ｍｇ／Ｌ） ０（ｃｏｎｔｒｏｌ） ３．３３ ８．３３ １６．６７ ３３．３３ ６６．６７ １００．００
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ａｎｔｉ－ｏｘ ｉｄａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＰＦ． Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｔｈｅ ＯＨ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｓａｌｉｃｙ ｌｉｃ ａｃｉｄ ｍｅｔｈｏｄ， ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＭＤＡ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｍ ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓｏｍｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＴＢＡ ａｓｓａｙ； ｈｅｍ ｏｌｙｓｉｓ ｏｆ ＲＢＣ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｏｆ ｍ ｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ： ＰＦ ｃａｎ ｓｃａｖｅｎｇｅ ＯＨ， ｉｎｈ ｉｂｉｔ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ＭＤＡ， ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｏｆ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ａｎｄ ｈｅｍ ｏｌｙｓ ｉｓ ｏｆ ＲＢＣ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ： ＰＦ ｈａｓ ａｎｔｉ－ｏｘ ｉｄａｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｐｉｎｅｎｅｅｄｉｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ（ＰＦ） ｈｙｄｒｏｘｙｌｒａｄｉｃａｌ ａｎｔｉ－ｏｘｉｄａｔｉｏｎ 中图分类号 Ｒ１５１．２ 文献标识码 Ａ 文章编号 １００２－６６３０（２００５）０９－０５０６－０３
表 ２ ＰＦ 对 Ｈ２Ｏ２ 诱导小鼠血红细胞（ＲＢＣ）溶血的抑制作用 Table 2 Effect of PF on RBC hemolysis induced by H2O2 (ｘ s,n=6)
Ｇｒｏｕｐ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ａ ４ １ ５ ｎ ｍ
（ｍｇ／Ｌ）
Ｎｏｒｍ ａｌ
０
０．１６ ０．０２ａ
２ 结果与分析
２．１ ＰＦ 对 ＯＨ 的清除作用 ＰＦ 在 ３．３３ｍｇ／Ｌ 浓度时对 Ｏ Ｈ 就有一定的清除能力 数据差异显著， 且呈较好的量 效关系（表 ３） ２．２ Ｐ Ｆ 对 Ｈ ２Ｏ ２ 诱导小鼠血红细胞（ Ｒ Ｂ Ｃ ） 溶血的抑制作 用 Ｈ ２Ｏ ２ 加入后溶血量显著高于正常组 Ｐ Ｆ 可显著抑制 溶血的发生，表 １ 数据表明 ＰＦ 可抑制氧化损伤 保护红 细胞膜 且呈良好的剂量效应关系 ２．３ ＰＦ 对小鼠组织及肝线粒体和微粒体脂质过氧化产
摘 要 目的 研究松针黄酮的体外抗氧化作用 方法 用水杨酸法研究松针黄酮（ｐｉｎｅｎｅｅｄｉｅ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ， ＰＦ）清 除 Ｏ Ｈ 的效果 用硫代巴比妥酸法测定小鼠组织及肝线粒体 微粒体中丙二醛含量（ Ｍ Ｄ Ａ ） 用分光光度法测定 小鼠红细胞溶血和肝线粒体膨胀程度研究 Ｐ Ｆ 的抗氧化效果 结果 Ｐ Ｆ 可以清除 Ｏ Ｈ 抑制 Ｏ Ｈ 所致丙二醛 的产生 减少红细胞溶血 减轻肝线粒体膨胀程度 结论 可以认为 Ｐ Ｆ 具有明显的抗氧化作用 关键词 松针黄酮 羟自由基 抗氧化
表 ３ ＰＦ 对小鼠肾 脑 心和脾脂质过氧化的影响 Table 3 Effect of PF on lipid peroxidation of extract from mice kidney brain heart and spleen(ｘ s,n=6)
Ｇｒｏｕｐ
Ｐ Ｆ Ｋｉｄｎｅｙ
０．２４
０．２２
０．２
１
２
３
４
５
６
ｔ（ห้องสมุดไป่ตู้ｉｎ）
图 １ ＰＦ 对小鼠肝线粒体肿胀的影响 Ｆｉｇ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＰＦ ｏｎ ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ ｓｗｅｌｌｉｎｇ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＶＥ＋Ｆｅ２＋
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ ＶＣ 激发线粒体膨胀 测不同时间的 Ａ５２０ｎｍ １．８ 数据处理 以 Ｓ 表示结果 不同实验间差异用 ｔ 检验
Ｂｒａｉｎ
（ｍｇ／Ｌ）
Ａ５３２ｎｍ
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
Ａ５３２ｎｍ
Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ（％）
Ｎｏｒｍａｌ
０
０．０５ ０．０１ｂ
１２ ０．０１ｂ
Ｃｏｎｔｒｏｌ
０
１．１３ ０．０２
０．７４ ０．０４
ＰＦ
２０
０．３７ ０．０４ｂ ６９．００
０．４６ ０．０４ｂ
３９．４８
Ｃｏｎｔｒｏｌ １５ｍｌ／Ｌ ７５ｍｌ／Ｌ
１００ｍｌ／Ｌ ４５ｍｌ／Ｌ
Ａ ５２０ｎｍ
１２０ｍｌ／Ｌ １５０ｍｌ／Ｌ ０．３６
０．３４
０．３２
０．３
０．２８
０．２６
松针（ｐｉｎｅｎｅｅｄｉｅ）为松科（ｐｉｎａｃｅａｅ）松属（ｐｉｎｕｓ）植物的 叶， 别名猪鬃松叶 松毛 山松须［１］ 松针用药历史悠 久， 本草纲目 记载 松针， 气味苦 温 无毒， 久服 令人不老，轻身益气，主治风湿疮，生毛发，安五脏，守中，不饥 延年 ［２］ 别录 谓其 主风湿疮， 生毛发 安五 脏 ［３］现代研究表明， 松针具有镇痛 抗炎 镇咳 祛痰 抗突变 降血脂 降血压 抑菌等作用［４］， 其利 用价值日益受到重视 本研究探讨松针黄酮的抗氧化作 用及其机制
按 Ｓｍｉｒｎｏｆｆ 等的方法改进［８］产生 ＯＨ 以 ＯＨ 氧 化水杨酸所得产物测 Ａ ５１０ｎｍ 以（ 对照组 加药组）／ 对照 组 １ ０ ０ 计算 Ｏ Ｈ 清除率 １．５ 对小鼠红细胞氧化溶血的测定［９］
分别取红细胞悬浮液 １ｍｌ 加不同浓度的 ＰＦ（表 １） 最后加 １００ｍｍｏｌ／Ｌ Ｈ２Ｏ２ 启动反应 ３７ 作用 １ｈ 生理 盐水稀释 ５ 倍 １０００ｇ 离心 １０ｍｉｎ 取上清液测 Ａ ４１５ｎｍ 计算溶血度和抑制率