热休克蛋白90-α在胃癌诊断中的意义

热休克蛋白90-α在胃癌诊断中的意义
程伟才;汪立鑫;宫红彦;万勇
【摘要】目的了解热休克蛋白90-α(heat shock protein 90-α,HSP90-α)在胃癌患者外周血的表达情况,并分析其与胃癌患者临床病理学特点及营养风险之间的关系,探讨热休克蛋白90-α在胃癌诊断中的意义.方法选取2014年7月至2018年4月期间在烟台市烟台山医院接受手术并证实为胃癌的316例患者,术前采用酶联免疫法(ELISA)检测其血清中HSP90-α的水平.结果胃癌患者血清HSP90-α水平(119.15±65.47 pg/ml)明显高于健康对照组(49.31±20.43 pg/ml)及良性病变组(59.36±21.52 pg/ml)(P<0.05).此外,HSP90-α的表达与肿瘤的组织学分级、病理分期、肌肉减少症相关(P<0.05).区别胃癌组与健康对照组及良性病变组的临界值分别是69.88 pg/ml与72.90 pg/ml,对应敏感度分别为85.4％和82.6％,特异性为85.7％和80.7％.结论 HSP90-α在胃癌患者外周血水平升高与组织学分级差、病理分期晚、合并肌肉减少症有关,可能成为一种新的辅助诊断胃癌的肿瘤标志物.【期刊名称】《当代医学》
【年(卷),期】2019(025)018
【总页数】3页(P47-49)
【关键词】胃癌;HSP90-α;酶联免疫法;生物标志物;诊断
【作者】程伟才;汪立鑫;宫红彦;万勇
【作者单位】山东省烟台市烟台山医院普外科,山东烟台 264001;山东省烟台市烟台山医院普外科,山东烟台 264001;山东省烟台市烟台山医院普外科,山东烟台264001;山东省烟台市烟台山医院普外科,山东烟台 264001
【正文语种】中文
据统计，胃癌在我国是年发病率男性第2位、女性第4位，同时致死率在不同性
别中均排第2位的高发、高致死率恶性肿瘤[1]。

即使胃癌患者接受根治性手术后
再进行标准化疗及精准靶向治疗，此类患者的整体预后仍较差。

早诊断、早治疗仍是改善患者预后的关键，因此探索新的有效预测及诊断方法对于更好、更早的筛选患者十分重要。

热休克蛋白90-α（heat shock protein 90 alpha，HSP90-α）是热休克蛋白家
族的重要组成成员之一，是一种细胞内大量表达的分子伴侣蛋白，能与多达100
多种的靶蛋白结合，参与细胞的生长、分化、代谢及应激等多种生理功能的调控[2]。

HSP90-α在肿瘤细胞内的表达水平显著高于正常细胞，有学者推测其对恶性肿瘤的生长、增殖及侵袭起重要作用[3]。

研究发现，实体肿瘤细胞内这些大量表
达的Hsp90-α可以持续分泌至细胞外，并在细胞外同样发挥重要作用[4]。

本研究分析和比较胃癌患者血清中HSP90-α的表达情况，并探讨细胞外HSP90-α水平
在胃癌发生发展过程中存在的生物学意义。

1 资料与方法
1.1 临床资料回顾性分析2014年7月至2018年4月期间在烟台市烟台山医院就诊并经手术及术后病理证实为胃癌的316例患者。

在胃癌治疗前检测其血清
HSP90-α的水平、做NRS2002营养风险量表评估、CT测定第3腰椎水平平面肌肉面积并判定是否存在肌肉减少症，术后确定其病理分期、组织学分级及肿瘤发生中心位置。

入组患者中男211例，女105例，年龄29～78岁，平均年龄
（61.3±17.9）岁。

同时期选取175例行健康体检的健康志愿者作为正常对照组，其中男103例，女72例，平均年龄（65.5±13.5）岁。

另外选取同时期入院治疗的良性病变（包括胃息肉、慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡等）共212例做良
性病变对照组，其中男139例，女73例，平均年龄（57.8±12.2）岁。

各组间年龄、性别方面相比差异无统计学意义。

本研究经过了本院伦理道德委员会的批准，所有患者在留取血液标本前均签署了知情同意书，同意参加本次研究。

1.2 血清HSP90-α水平检测方法所有的血浆标本均在胃癌治疗前使用EDTA-K2
抗凝管收集留取并保存于-18℃冰箱，如血液标本出现溶血即视为无效标本并移出本研究。

所有样本数量都是双盲的。

使用烟台普罗吉生物科技发展有限公司的热休克蛋白90-α定量检测试剂盒，采用酶联免疫法（Enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA）。

试剂盒在37℃平衡30 min，将浓缩洗涤液
加入475 ml去离子水混匀后待用。

将校准品加入0.4 ml分析物稀释液溶解混匀，用稀释液对待测样本进行20倍稀释。

在校准品孔和样本孔分别加入50 μl校准品和稀释后样本，并在每个孔中加入测HSP90-α用标记物液，轻轻震荡摇匀。

温育60 min后甩掉反应液，洗板6次，扣干。

每孔中依次加入显色剂A、B液各50
μl，振荡摇匀后温育20 min，每孔中加入50 μl终止液终止显色。

加入终止液10 min内在450 nm/620 nm波长下读取OD值。

使用仪器自带软件计算HSP90-α含量。

1.3 统计学方法统计分析采用SPSS 2
2.0软件包，HSP90-α因的分析采用t检验、单素方差分析、Kruskal-Wallis H检验。

区分胃癌患者HSP90-α表达效价采用ROC曲线。

所有的检验都是双边的，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果
2.1 各组间HSP90-α水平比较对比胃癌组、良性病变组、健康对照组显示，胃癌组HSP90-α的表达（119.15±65.47）pg/ml显著高于健康对照组
（49.31±20.43）pg/ml及良性病变组（59.36±21.52）pg/ml，组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同组间HSP90-α水平比较Table 1 HSP90-α levels between different
groups组别健康对照组良性病变组胃癌组例数175 212 316 HSP90-α（pg/ml）49.31±20.43 59.36±21.52 119.15±65.47 P＜0.001
2.2 HSP90-α水平与临床病理学及营养风险相关指标的关系随着腺癌分化程度的
降低，患者血清中HSP90-α的水平逐渐升高，差异有统计学意义（P=0.024）；病理分期为Ⅲ-Ⅳ期的患者，HSP90-α的水平明显高于分期为Ⅰ-Ⅱ期的患者（136.74 vs 96.21，P=0.002）；不过HSP90-α的水平与胃癌的肿瘤发生部位
无明显相关（127.74 vs 113.41，P=0.12），见表2。

此外，营养风险评估显示，肌肉量更少的患者血清HSP90-α的水平高于无肌肉减少症的患者（128.55 vs 110.12，P=0.045）。

尽管数据显示NRS2002评分≥3
分的患者血清HSP90-α的水平要高于评分＜3分的患者，但统计学分析显示两组间差异无统计学意义（126.36 vs 108.54，P=0.057）。

表2 HSP90-α水平与临床病理学及营养风险相关指标的关系Table 2 Relationship between HSP90-α level and clinicopathological and nutritional risk characteristics相关指标组织学分级高分化中分化低分化临床分
期Ⅰ-ⅡⅢ-Ⅳ肿瘤中心位置上部癌中-下部癌例数HSP90（pg/ml）P 0.024 20（6.33）94（29.75）202（63.92）89.33±38.35 101.32±57.48 130.25±69.57 0.002 95（30.06）221（69.94）96.21±44.80 136.74±74.58 0.120 77（24.37）239（75.63）127.74±67.41 113.41±57.82肌肉减少症0.045有无152（48.10）164（51.90）128.55±53.24 110.12±52.40 NRS2002评分≥3分＜3分0.057 187（59.18）129（40.82）126.36±70.16 108.54±59.04
2.3 不同组间HSP90-α水平的效价分析预测胃癌的诊断临界值、特异性、敏感度通过ROC曲线分析完成。

如图1及表3所示，对比胃癌组与健康对照组时诊断临界值的选择点是69.88 pg/ml，其敏感度和特异性分别是85.4和85.7，HSP90-
α曲线下面积（AUC）是0.920，95%可信区间是89.6%～94.3%，约登指数为
0.711。

这显示这个诊断临界值可以很好的区分胃癌与健康人群。

如图2及表3所示，当做胃癌组与良性病变组比较时，诊断临界值的选择点是72.90 pg/ml，其敏感度和特异性分别是82.6和80.7。

HSP90-α曲线下面积（AUC）是0.879，95%可信区间是84.9%～90.9%，约登指数为0.633。

由于两组患者的AUC均＞0.8，可以认为血清HSP90-α对于诊断胃癌具有一定的准确性。

相对来讲，血清HSP90-α从健康对照组对胃癌诊断的敏感度和特异性更高。

表3 ROC曲线分析结果Table 3 ROC curve analysis项目胃癌组与健康对照组胃癌组与良性病变组诊断临界值69.88 72.90敏感性85.4 82.6特异性85.7 80.7 ROC曲线下面积0.920 0.879约登指数0.711 0.633 95%可信区间89.6～94.3 84.9～90.9
图1 胃癌组与健康对照组对比的ROC曲线Figure 1 ROC curve of gastric cancer group and normal group
图2 胃癌组与良性病变组对比的ROC曲线Figure 2 ROC curve of gastric cancer group and benign group
3 讨论
在肿瘤研究领域中，肿瘤的血清标志物始终受到人们的重视，人们期望有良好的肿瘤标志物能早期预测肿瘤的发生及预后。

对于胃癌而言，目前尚没有特异性较高的肿瘤标志物作为参考。

本研究结果显示，HSP90-α在胃癌患者血清中的表达水平明显高于健康人群及胃
良性病变人群。

ROC曲线分析中，血清测定HSP90-α的数值在69.88 pg/ml时，在健康人群中鉴别胃癌的敏感度和特异性分别可达到85.4%和85.7%，这一结果
提示在本研究中HSP90-α的升高可以强烈提示发生胃癌的高风险。

在做胃癌组与良性病变组人群对比时，尽管敏感度和特异性均较前有所下降（82.6%和
80.7%），但结果显示HSP90-α仍可以作为良好的肿瘤标志物来甄别良性病变与
胃癌。

通过比较胃癌患者的临床病理学及营养风险相关指标，结果显示，肿瘤的组织学分级越差、病理分期越晚，血清HSP90-α的水平越高，这与之前的一些研究结果也较为相符[5-7]。

这一结果的出现可能与HSP90-α在恶性程度高的肿瘤及分期较
晚的肿瘤中发挥更大抗凋亡作用有关[8]。

本研究发现，合并肌肉减少症的胃癌患者血清中HSP90-α的水平更高，这提示二者在肿瘤发展过程中可能存在一定的相关性。

癌症患者肌肉代谢的关键蛋白AKT、AR、LT-3、NF-κB代谢通路会有不同的异常改变[9]，而这些蛋白均是HSP90的客户蛋白[10]，二者之间是否存在明确关联还需进一步的研究分析。

尽管在本研究结果显示，NRS2002营养风险筛查结果与HSP90-α的水平无明显相关性
（P=0.057），但限于本研究为单中心研究、研究例数不足等因素影响，仍需进一步研究探讨HSP90-α水平与营养筛查之间的关系。

总之，血清HSP90-α检测对胃癌的临床诊断中有一定的临床意义，胃癌患者
HSP90-α水平与肿瘤的组织学分级、病理分期及肌肉减少症有一定相关性。

血清HSP90-α可能会成为一种新的肿瘤标志物应用于胃癌的早期诊断，同时对胃癌的
肿瘤侵袭能力、生物学行为及肌肉消耗情况提供相应临床依据。

参考文献
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