3-氨基苯硼酸为功能单体在壳聚糖上印迹牛血清白蛋白的研究
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应用 ．近年来 ，随着蛋 白质组学 研究 的开展 ，开 拓一 种 新 型 的分 离 技 术 手段 ，已经成 为 决 定蛋 白质 组 学 能否快 速发 展 的关 键性 问题 之一 ．应用 分 子印迹 技术 ， 对复 杂 体系 中的 目标 物大 分 子进 行 分离 富集 的研 究正 在成 为关 注 的热 点 ， 主要 集 中在分离 （ 色谱 固定 相 ＿ ） 如 １ 和检测 （ 压 电传感 器 ） 个方 面 ． 如 两
均 为分 析纯 ， 验用 水为 石英 二次蒸 馏 水 ． 实 紫外 一 可见分 光光 度计 （ Ｖ Ｖ ｓ ｌ Ｓ ｅｔ ｏｏ ｔ Ｖ ２ ５ ｈｍａｚ ） 傅 里 叶变 换 红 外 光谱 仪 Ｕ — ｉ ｂｅ ｐｃｒ ｔ ｅ Ｕ －４ ０ Ｓ ｉ ｄｕ ； ｉ 叩ｈ ｍｅ ｒ
（ Ｖ Ｔ Ｒ ３ ０阿 Ｒ Ｎｃｌｔ ； ｈ ｒ ｏｐ Ａ Ａ Ａ ６ ｉｏ ） Ｔ ｅｍ Ｈ计 （ ｈ ｒ ｒ ｎ４ ０ ｅ Ｔ ｅｍｏＯ ｉ ２ Ａ＋） ｏ ． １ ２ 以壳聚糖 为载 体 的 Ｂ Ａ分 子 印迹及 非 印迹聚 合物 的 制备 ． Ｓ 将分 子 量 为 ３ ０ ０ ０ ０ ０的壳 聚 糖 用 体 积 分数 为 ５ 的 乙酸 水溶 液 溶解 ，制 成 质 量 分数 为 ０ ５ 的溶 ％ ．％
糖， 其基本组成单位为 Ｄ 葡胺糖． 一 壳聚糖上含有大量羟基和氨基 ， 对许 多物质都具有离子交换、 螯合 和吸附等作用 ， 但是壳聚糖本身与物质的这种结合是没有方向性的 ， 因而未改性的壳聚糖并不具备反 应 的选择 性 ．分 子 印迹技 术 作为一 种具 有构 效预定 性 、 异识 别 性及 广 泛 实用 性 的技术 已得 到 了普 遍 特
将 预聚合 的产 物加 入 到改性 后 的壳 聚糖载 体悬 浮 液 中 ， Ａ Ｂ 使 Ｐ Ａ上 的一 Ｎ 过与 载体 上一 Ｃ Ｈ通 Ｈ— Ｏ的 席夫 碱反 应 ， 接枝 到 载体 表面 ．
特异 性洗 脱时 ， 过调 节体 系 的 ｐ 通 Ｈ值 ， 可用 山梨 醇破 坏一 Ｂ（ Ｈ）与 Ｂ Ａ间形成 的氢键 ，即能将 Ｏ Ｓ
行 Ｌ ｎｍ ｉ等温 吸附模型 的数据处理．结果表 明 ， ａｇ ｕｒ 印迹聚合物 上形成 了对于模 板分子 有较高 的吸附 容量和 选择性 的识别位点 ， ａｇ ｉ等温吸附平衡常数为 ４ ． Ｌ ｍ ，结合位点 的最大表 观结 合量为 １． ｇｇ Ｌ ｎｍｕｒ ９ ５ｍ ／ ｇ ６３ ｍ ／ ， 证明了该 印迹 聚合 物对 于牛血红 蛋白和溶 菌酶这些非模板蛋 白的吸附不具 有选择性．
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Ｖｏ ． ９ １２
２０ ０ ８年 ４月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩ ＡＬＪ Ｃ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩ ＮＥＳ Ｅ ＵＮＩ ＥＲＳ Ｔ Ｅ Ｖ ＩＩＳ
Ｎｏ ４ ．
７ ６ ～７ ０ ２ ３
３氨 基 苯 硼 酸 为 功 能 单 体 在 壳 聚 糖 上 印 迹 － 牛 血 清 白蛋 白的 研 究
改性 后 的壳 聚糖 作 为印迹 聚合物 的载 体 ， 应用 于 印迹蛋 白质分 子 的研究 ．另 外 ， 能将 壳 聚糖 与分 子 若 印迹技 术相 结合 ， 无序 的作用 力转 变为 利用 特定 功能 基 团进行 有 序识 别 的结 合 位 点 ，则 可 以提 高其 将
吸 附的选 择性 ． 以壳 聚糖作 为分 子 印迹 的载 体 已有一 些研 究 报 道 ，主 要 集 中在 对 于 金 属 离 子 Ｊ 分 子 有 机 、小
用 同样 方法 ， 加入 洗脱 液洗 脱上 述 聚合 物 ， 到 ２ ０ｎ 直 ８ ｍ处紫 外 吸收光 谱 的吸光 度低 于原 始 吸附溶 液的 ３ ％．然后 ，用二次 水将 聚合 物 中残 留 的洗脱 液充 分洗 去后 备用 ．
１ ５ Ｂ Ａ 的分 子印迹 及 非印迹 聚 合物对 蛋 白的吸 附及洗脱 ． Ｓ
１ 实验 部 分
１ １ 试 剂 与仪器 ．
壳 聚糖 （ Ｔ ， Ｃ Ｓ 浙江金 壳 生物化学 有 限公 司 ） 脱 乙 酰度 ８ ％ ， ， ０ 分子 量 ３００ ； 二醛 （ 津市光 复 ０００ 戊 天
收 稿 日期 ： ０７０ －７ ２０ －６２ ．
基金项 目：国家“ 九七三” 计划 （ 批准号 ： ０ ７ Ｂ １ １ １ 、国家 自然科学基金 （ ２０ Ｃ ９４ ０ ） 批准号 ： ０７ ０ ０ 和天津市 自然科学基金（ ２６ ５ ４ ） 批准号
关键词 ３氨基苯硼酸 ；牛血清 白蛋 白； 聚糖 ； 一 壳 分子印迹技术
０ ５ ． ６ ７３ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０５ －７０ ２ ０ ）４ ７ ６ ５ ２ １ ９ （０ ８ ０ － ２ － ０ ０ ０ 中 图 分类 号
甲壳素 （ ｈｔ ） 脱 乙酰基处 理后 得到 壳 聚糖 （ ｈｔｓｎ Ｔ ） Ｔ Ｃ ｉｎ 经 ｉ Ｃ ｉ ａ ，Ｃ Ｓ ，Ｃ Ｓ是一 种 天 然 聚 阳离 子碱 性 多 ｏ
分 数为 ５ 的戊 二醛水 溶 液 ，充分 反应 后 ， ％ 再用 二 次水将 过量 的戊 二 醛洗 去 ， 备用 ． 将 １０ ｍ ｏ／ 一 ０ ｍ ＬＬ３ 氨基苯 硼 酸 （ Ｐ Ａ） 溶液 与一 定 量 的 牛血 清 白蛋 白 （ Ｓ 混 合 振荡 ２ ｈ 二 者 ＡＢ 水 Ｂ Ａ） ，
的摩 尔 比及 反 应条件 如 文献 ［３ 所 述 ．将 该 溶 液滴 加 到 上述 体 系 中 ，开 动 电磁搅 拌使 反 应体 系均 匀 ， ２］
再静 置 ２ ，即得 到 以壳 聚糖 为 载体 的 Ｂ Ａ分 子印迹 聚合 物 ． ４ｈ Ｓ 非 印迹 聚合 的制 备 步骤 同上 ，只是不 加入 模板 分子 Ｂ Ａ Ｓ．
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Ｎ ． ｏ４
王华芳等 ： 一 基苯硼酸为功能单体在 壳聚糖上 印迹牛血 清 白蛋 白的研 究 ３氨
７７ ２
精 细化工 研究 所 ） 质量 分数 ５ ％ ） 一水 合 ３氨基 苯硼 酸 （ Ｐ Ａ， （ ０ ； 一 Ａ Ｂ 北京 北 化新 元科 技发 展有 限公 司 ） ； 牛 血清 白蛋 白 （ Ｓ Ｍ ＝ ８ ０ Ｉ ４ ９ Ｂ Ａ， ６ ０ ０ｐ ＝ ． ；Ｖ＝ ． ｍ Ｘ４ ０ ｎ ４ ｎ 和溶 菌 酶 （ ｙ ， ４ ０ｎ ． ｍ ｘ１ ｍ） Ｌ ｓ Ｍ ＝１４ ０， ４０ ｐ ：１ ． Ｖ＝ ． ｍ ｘ３ ０ ｎ ． ｍ） 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 ） ， １０； ３ ０ｎ ． ｍ ｘ４ ５ ｎ （ ；牛 血 红 蛋 白 （ Ｈ ， Ｂ ｂ Ｍ ： ８ ０ ｐ ＝ ． ７ ２ ６ ０ ０， ， ６ ９～ ． ；Ｖ＝ ． ｍ ｘ ． ｍ ｘ ． ｍ） 上 海 蓝 季科 技 发 展 有 限公 司 ） ５ ５ｎ ５ ５ ｎ ７ ０ｎ （ ；所 用试 剂
１ ３ 对 Ｂ Ａ 的分 子印 迹及 非印迹 聚 合物 的洗 脱 ． Ｓ
参照 文献 ［ ３ 方法 ，将 聚合物 先用 二 次水充 分洗 净 ， 自保 留印迹及 ： Ｆ 迹 聚合 物 的样 本作 红 外 ２］ 各 Ｉｐ Ｉ ￣
光 谱 表征 ．然 后 ， 再用 洗脱 液 （ 定 浓度 山梨 醇 的磷 酸 盐缓 冲溶液 ） 分洗 脱后 备用 ． 一 充
物 ¨ “ 、手性氨基 酸 ＿ ］ 】 以及蛋 白质 ¨ ” 体 系 的选择 性分 离上 ． ， ３氨基 苯硼 酸 （ Ｐ Ａ） ． Ａ Ｂ 曾作 为亲 和色谱填 料 的接枝 化合 物 已被应 用．近年 来 发现 ， Ｐ Ａ可 作 为一 ＡＢ 种新型的水溶性功能单体 ， 用于合成 以蛋 白质为模板分子的印迹聚合物 ． 本 文采用 该新 型 的功能 单体 ３氨基 苯硼 酸 ，以一 定形 态 的壳聚糖 作 为 载体 ，合成 了牛血 清 白蛋 白 一 的分 子 印迹 聚合 物 ，结果 表 明 ， 印迹 聚合物 对 于牛血 清 白蛋 白具 有 良好 的选择 识别 能力 ． 该
１ ４ Ｂ Ａ 的分子 印迹 及非 印迹 聚合 物 吸附模 板分 子 的动 力学 ． Ｓ
制 备 ００ ２０ｍｇｍ ．５～ ． ／ Ｌ范 围 的 Ｂ Ａ水溶 液 ， Ｓ 将其 在 印迹 或非 印迹 聚合物 上进 行 吸附 实验 ．通过 紫 外一 可见分 光光 度法 测定 聚合 物对 模板 蛋 白的 吸附 等温线 ．当 吸附达 到平 衡之后 ， 先离 心将 上清 液与 聚 合 物分 离 ， 然后 用二 次水 充分 洗脱 ，去除 聚合 物上 非特异 吸 附 的 Ｂ Ａ， 将 上清液 与 聚合物 离 心分离 ． Ｓ 再
液 ， 速加 入 过量 的过饱 和 Ｎ Ｏ 迅 ａ Ｈ水 溶液 ， 壳 聚糖 从溶 液 中析 出 ，形 成小 颗 粒 的悬 浮 混浊 液 ．经 过 使 ２ ４ｈ陈化 后 ，用二 次水 充分 洗 去过量 的 Ｎ Ｏ ａ Ｈ，备用 ．移取上 述悬 浮混 浊液 ２ ， 加 等体积 的体 积 ０ｍＬ 滴
２ 结 果 与讨 论
２ １ Ａ Ｂ Ｃ Ｓ复合 分子 印迹 聚合 物 的制备 ． Ｐ Ａ－ Ｔ
Ｂ Ａ 的 Ａ Ｂ —Ｔ Ｓ Ｐ Ａ Ｃ Ｓ分子 印迹 聚合 物 的制备 过程 如 Ｓｈ ｍｅ１所示 ．首 先 ， 戊二 醛 （ ｌ） Ｃ Ｓ表 ｃｅ 用 Ｇｕ 将 Ｔ
面的一Ｎ Ｈ 转化 为一 ｃ Ｈ— Ｏ ．与 此 同时 ， 功能 单体 Ａ Ｂ Ｐ Ａ与 Ｂ Ａ预聚合 ， 成二 者 的复合 物 ．然后 Ｓ 形
然而传统的分子印迹聚合物多是在有机相中合成，故大多数方法不适用于合成以生物大分子为模板分 子的聚合物， 因此研制新型的、 可以在水溶液 中制备以蛋 白质为模板的分子印迹聚合物势在必行．壳 聚糖 载体 和蛋 白质体 系有着 天 然 的相 容性 ， 且壳 聚糖 本 身 有 较大 的吸 附容 量 ，因此 ，可将 壳 聚糖 或 并
制备 相 同浓 度 的牛 血清 白蛋 白 （ Ｓ 、 血 红 蛋 白（ Ｈ ） Ｂ Ａ） 牛 Ｂ ｂ 和溶 菌 酶 （ ｙ ） Ｌ ｓ 的水 溶 液 ，分别 以 印迹
（ Ｓ — Ｐ 或非 印迹 聚合物 （ ｏ— Ｐ 进 行 吸附实 验．吸 附 以及 非特 异性 和特 异性 洗脱 的步 骤 同上． Ｂ ＡＭＩ） Ｎ ｎＭＩ）
王华芳 何运华 何锡 文 李文友 陈朗星 张 玉奎 ， ， ， ， ， ，
（ ．南 开 大 学 化 学 系 ， 津 ３ ０７ ； ．中 国科 学 院大 连 化 学 物 理 研 究 所 ， 连 １６ １ ） １ 天 ００ １ ２ 大 １０ １
摘要
以壳聚糖为载体 ， 一 ３氨基苯 硼酸为功能单体对 牛血清 白蛋 白进行 了分子印迹的研究 ， 并对 吸附过程进
０ Ｙ Ｊ Ｃ ２ ０ ， ７ Ｃ Ｊ ０ ５０ 资 助 ． ６ ＦＭＪ０ ８０ ０ Ｊ Ｙ Ｃ ０ ０ ）
联系人简介 ： 何锡文 ， ， 男 教授 ， 博士生导师 ， 主要从事分子光谱及分子识别研究． —ａ ： ｉｅｈ＠ｎｎａ ｅｕｃ Ｅｍ ｉ ｘ ｎｅ ａｋｉ ｄ．ｎ ｌ ｗ ．
张玉奎 ， ， 男 研究员 ，博士生导师 ，中国科学院院士，从事色谱基础理论及新技术开发应 用研究 ．Ｅｍａ ： ｋｈ ｎ ＠ｄｃ ．ｃ ｃ — ｉ ｙ ｚａｇ ｉｐ ａ．／ ｌ １
载体 上吸 附 的 Ｂ Ａ洗 脱下来 ． Ｓ
２ ２ 印迹聚 合物 的红 外光 谱表 征 ．
将 Ｂ Ａ， Ｓ — Ｐ和 Ｎ ｎＭＩ Ｓ Ｂ Ａ ＭＩ ｏ — Ｐ制成 样 品 ，测定红 外光 谱 （ １ ．图 １中框 出 的区域 为 彼此 之 间差 图 ）
别 最为 明显 的部分 ．Ｂ Ａ分别 在 １５． ，１３． ，１５ ． Ｓ ６ ０９ ５ ８７ ４ ２９和 １９ ． ｍ 处 有特 征 峰 ，在 Ｂ Ａ— Ｐ红 ３５ ２ｃ Ｓ ＭＩ 外 吸收光 谱 中的对 应波 数 位 置均 有 反 映 ，其 吸收 峰 强 度 比 Ｎ ｎＭＩ 显．说 明 在未 经特 异 性 洗 脱 的 ｏ— Ｐ明
均 为分 析纯 ， 验用 水为 石英 二次蒸 馏 水 ． 实 紫外 一 可见分 光光 度计 （ Ｖ Ｖ ｓ ｌ Ｓ ｅｔ ｏｏ ｔ Ｖ ２ ５ ｈｍａｚ ） 傅 里 叶变 换 红 外 光谱 仪 Ｕ — ｉ ｂｅ ｐｃｒ ｔ ｅ Ｕ －４ ０ Ｓ ｉ ｄｕ ； ｉ 叩ｈ ｍｅ ｒ
（ Ｖ Ｔ Ｒ ３ ０阿 Ｒ Ｎｃｌｔ ； ｈ ｒ ｏｐ Ａ Ａ Ａ ６ ｉｏ ） Ｔ ｅｍ Ｈ计 （ ｈ ｒ ｒ ｎ４ ０ ｅ Ｔ ｅｍｏＯ ｉ ２ Ａ＋） ｏ ． １ ２ 以壳聚糖 为载 体 的 Ｂ Ａ分 子 印迹及 非 印迹聚 合物 的 制备 ． Ｓ 将分 子 量 为 ３ ０ ０ ０ ０ ０的壳 聚 糖 用 体 积 分数 为 ５ 的 乙酸 水溶 液 溶解 ，制 成 质 量 分数 为 ０ ５ 的溶 ％ ．％
糖， 其基本组成单位为 Ｄ 葡胺糖． 一 壳聚糖上含有大量羟基和氨基 ， 对许 多物质都具有离子交换、 螯合 和吸附等作用 ， 但是壳聚糖本身与物质的这种结合是没有方向性的 ， 因而未改性的壳聚糖并不具备反 应 的选择 性 ．分 子 印迹技 术 作为一 种具 有构 效预定 性 、 异识 别 性及 广 泛 实用 性 的技术 已得 到 了普 遍 特
将 预聚合 的产 物加 入 到改性 后 的壳 聚糖载 体悬 浮 液 中 ， Ａ Ｂ 使 Ｐ Ａ上 的一 Ｎ 过与 载体 上一 Ｃ Ｈ通 Ｈ— Ｏ的 席夫 碱反 应 ， 接枝 到 载体 表面 ．
特异 性洗 脱时 ， 过调 节体 系 的 ｐ 通 Ｈ值 ， 可用 山梨 醇破 坏一 Ｂ（ Ｈ）与 Ｂ Ａ间形成 的氢键 ，即能将 Ｏ Ｓ
行 Ｌ ｎｍ ｉ等温 吸附模型 的数据处理．结果表 明 ， ａｇ ｕｒ 印迹聚合物 上形成 了对于模 板分子 有较高 的吸附 容量和 选择性 的识别位点 ， ａｇ ｉ等温吸附平衡常数为 ４ ． Ｌ ｍ ，结合位点 的最大表 观结 合量为 １． ｇｇ Ｌ ｎｍｕｒ ９ ５ｍ ／ ｇ ６３ ｍ ／ ， 证明了该 印迹 聚合 物对 于牛血红 蛋白和溶 菌酶这些非模板蛋 白的吸附不具 有选择性．
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Ｖｏ ． ９ １２
２０ ０ ８年 ４月
高 等 学 校 化 学 学 报
ＣＨＥＭＩ ＡＬＪ Ｃ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＣＨＩ ＮＥＳ Ｅ ＵＮＩ ＥＲＳ Ｔ Ｅ Ｖ ＩＩＳ
Ｎｏ ４ ．
７ ６ ～７ ０ ２ ３
３氨 基 苯 硼 酸 为 功 能 单 体 在 壳 聚 糖 上 印 迹 － 牛 血 清 白蛋 白的 研 究
改性 后 的壳 聚糖 作 为印迹 聚合物 的载 体 ， 应用 于 印迹蛋 白质分 子 的研究 ．另 外 ， 能将 壳 聚糖 与分 子 若 印迹技 术相 结合 ， 无序 的作用 力转 变为 利用 特定 功能 基 团进行 有 序识 别 的结 合 位 点 ，则 可 以提 高其 将
吸 附的选 择性 ． 以壳 聚糖作 为分 子 印迹 的载 体 已有一 些研 究 报 道 ，主 要 集 中在 对 于 金 属 离 子 Ｊ 分 子 有 机 、小
用 同样 方法 ， 加入 洗脱 液洗 脱上 述 聚合 物 ， 到 ２ ０ｎ 直 ８ ｍ处紫 外 吸收光 谱 的吸光 度低 于原 始 吸附溶 液的 ３ ％．然后 ，用二次 水将 聚合 物 中残 留 的洗脱 液充 分洗 去后 备用 ．
１ ５ Ｂ Ａ 的分 子印迹 及 非印迹 聚 合物对 蛋 白的吸 附及洗脱 ． Ｓ
１ 实验 部 分
１ １ 试 剂 与仪器 ．
壳 聚糖 （ Ｔ ， Ｃ Ｓ 浙江金 壳 生物化学 有 限公 司 ） 脱 乙 酰度 ８ ％ ， ， ０ 分子 量 ３００ ； 二醛 （ 津市光 复 ０００ 戊 天
收 稿 日期 ： ０７０ －７ ２０ －６２ ．
基金项 目：国家“ 九七三” 计划 （ 批准号 ： ０ ７ Ｂ １ １ １ 、国家 自然科学基金 （ ２０ Ｃ ９４ ０ ） 批准号 ： ０７ ０ ０ 和天津市 自然科学基金（ ２６ ５ ４ ） 批准号
关键词 ３氨基苯硼酸 ；牛血清 白蛋 白； 聚糖 ； 一 壳 分子印迹技术
０ ５ ． ６ ７３ 文献标识码 Ａ 文章编号 ０５ －７０ ２ ０ ）４ ７ ６ ５ ２ １ ９ （０ ８ ０ － ２ － ０ ０ ０ 中 图 分类 号
甲壳素 （ ｈｔ ） 脱 乙酰基处 理后 得到 壳 聚糖 （ ｈｔｓｎ Ｔ ） Ｔ Ｃ ｉｎ 经 ｉ Ｃ ｉ ａ ，Ｃ Ｓ ，Ｃ Ｓ是一 种 天 然 聚 阳离 子碱 性 多 ｏ
分 数为 ５ 的戊 二醛水 溶 液 ，充分 反应 后 ， ％ 再用 二 次水将 过量 的戊 二 醛洗 去 ， 备用 ． 将 １０ ｍ ｏ／ 一 ０ ｍ ＬＬ３ 氨基苯 硼 酸 （ Ｐ Ａ） 溶液 与一 定 量 的 牛血 清 白蛋 白 （ Ｓ 混 合 振荡 ２ ｈ 二 者 ＡＢ 水 Ｂ Ａ） ，
的摩 尔 比及 反 应条件 如 文献 ［３ 所 述 ．将 该 溶 液滴 加 到 上述 体 系 中 ，开 动 电磁搅 拌使 反 应体 系均 匀 ， ２］
再静 置 ２ ，即得 到 以壳 聚糖 为 载体 的 Ｂ Ａ分 子印迹 聚合 物 ． ４ｈ Ｓ 非 印迹 聚合 的制 备 步骤 同上 ，只是不 加入 模板 分子 Ｂ Ａ Ｓ．
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Ｎ ． ｏ４
王华芳等 ： 一 基苯硼酸为功能单体在 壳聚糖上 印迹牛血 清 白蛋 白的研 究 ３氨
７７ ２
精 细化工 研究 所 ） 质量 分数 ５ ％ ） 一水 合 ３氨基 苯硼 酸 （ Ｐ Ａ， （ ０ ； 一 Ａ Ｂ 北京 北 化新 元科 技发 展有 限公 司 ） ； 牛 血清 白蛋 白 （ Ｓ Ｍ ＝ ８ ０ Ｉ ４ ９ Ｂ Ａ， ６ ０ ０ｐ ＝ ． ；Ｖ＝ ． ｍ Ｘ４ ０ ｎ ４ ｎ 和溶 菌 酶 （ ｙ ， ４ ０ｎ ． ｍ ｘ１ ｍ） Ｌ ｓ Ｍ ＝１４ ０， ４０ ｐ ：１ ． Ｖ＝ ． ｍ ｘ３ ０ ｎ ． ｍ） 北 京 鼎 国 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 ） ， １０； ３ ０ｎ ． ｍ ｘ４ ５ ｎ （ ；牛 血 红 蛋 白 （ Ｈ ， Ｂ ｂ Ｍ ： ８ ０ ｐ ＝ ． ７ ２ ６ ０ ０， ， ６ ９～ ． ；Ｖ＝ ． ｍ ｘ ． ｍ ｘ ． ｍ） 上 海 蓝 季科 技 发 展 有 限公 司 ） ５ ５ｎ ５ ５ ｎ ７ ０ｎ （ ；所 用试 剂
１ ３ 对 Ｂ Ａ 的分 子印 迹及 非印迹 聚 合物 的洗 脱 ． Ｓ
参照 文献 ［ ３ 方法 ，将 聚合物 先用 二 次水充 分洗 净 ， 自保 留印迹及 ： Ｆ 迹 聚合 物 的样 本作 红 外 ２］ 各 Ｉｐ Ｉ ￣
光 谱 表征 ．然 后 ， 再用 洗脱 液 （ 定 浓度 山梨 醇 的磷 酸 盐缓 冲溶液 ） 分洗 脱后 备用 ． 一 充
物 ¨ “ 、手性氨基 酸 ＿ ］ 】 以及蛋 白质 ¨ ” 体 系 的选择 性分 离上 ． ， ３氨基 苯硼 酸 （ Ｐ Ａ） ． Ａ Ｂ 曾作 为亲 和色谱填 料 的接枝 化合 物 已被应 用．近年 来 发现 ， Ｐ Ａ可 作 为一 ＡＢ 种新型的水溶性功能单体 ， 用于合成 以蛋 白质为模板分子的印迹聚合物 ． 本 文采用 该新 型 的功能 单体 ３氨基 苯硼 酸 ，以一 定形 态 的壳聚糖 作 为 载体 ，合成 了牛血 清 白蛋 白 一 的分 子 印迹 聚合 物 ，结果 表 明 ， 印迹 聚合物 对 于牛血 清 白蛋 白具 有 良好 的选择 识别 能力 ． 该
１ ４ Ｂ Ａ 的分子 印迹 及非 印迹 聚合 物 吸附模 板分 子 的动 力学 ． Ｓ
制 备 ００ ２０ｍｇｍ ．５～ ． ／ Ｌ范 围 的 Ｂ Ａ水溶 液 ， Ｓ 将其 在 印迹 或非 印迹 聚合物 上进 行 吸附 实验 ．通过 紫 外一 可见分 光光 度法 测定 聚合 物对 模板 蛋 白的 吸附 等温线 ．当 吸附达 到平 衡之后 ， 先离 心将 上清 液与 聚 合 物分 离 ， 然后 用二 次水 充分 洗脱 ，去除 聚合 物上 非特异 吸 附 的 Ｂ Ａ， 将 上清液 与 聚合物 离 心分离 ． Ｓ 再
液 ， 速加 入 过量 的过饱 和 Ｎ Ｏ 迅 ａ Ｈ水 溶液 ， 壳 聚糖 从溶 液 中析 出 ，形 成小 颗 粒 的悬 浮 混浊 液 ．经 过 使 ２ ４ｈ陈化 后 ，用二 次水 充分 洗 去过量 的 Ｎ Ｏ ａ Ｈ，备用 ．移取上 述悬 浮混 浊液 ２ ， 加 等体积 的体 积 ０ｍＬ 滴
２ 结 果 与讨 论
２ １ Ａ Ｂ Ｃ Ｓ复合 分子 印迹 聚合 物 的制备 ． Ｐ Ａ－ Ｔ
Ｂ Ａ 的 Ａ Ｂ —Ｔ Ｓ Ｐ Ａ Ｃ Ｓ分子 印迹 聚合 物 的制备 过程 如 Ｓｈ ｍｅ１所示 ．首 先 ， 戊二 醛 （ ｌ） Ｃ Ｓ表 ｃｅ 用 Ｇｕ 将 Ｔ
面的一Ｎ Ｈ 转化 为一 ｃ Ｈ— Ｏ ．与 此 同时 ， 功能 单体 Ａ Ｂ Ｐ Ａ与 Ｂ Ａ预聚合 ， 成二 者 的复合 物 ．然后 Ｓ 形
然而传统的分子印迹聚合物多是在有机相中合成，故大多数方法不适用于合成以生物大分子为模板分 子的聚合物， 因此研制新型的、 可以在水溶液 中制备以蛋 白质为模板的分子印迹聚合物势在必行．壳 聚糖 载体 和蛋 白质体 系有着 天 然 的相 容性 ， 且壳 聚糖 本 身 有 较大 的吸 附容 量 ，因此 ，可将 壳 聚糖 或 并
制备 相 同浓 度 的牛 血清 白蛋 白 （ Ｓ 、 血 红 蛋 白（ Ｈ ） Ｂ Ａ） 牛 Ｂ ｂ 和溶 菌 酶 （ ｙ ） Ｌ ｓ 的水 溶 液 ，分别 以 印迹
（ Ｓ — Ｐ 或非 印迹 聚合物 （ ｏ— Ｐ 进 行 吸附实 验．吸 附 以及 非特 异性 和特 异性 洗脱 的步 骤 同上． Ｂ ＡＭＩ） Ｎ ｎＭＩ）
王华芳 何运华 何锡 文 李文友 陈朗星 张 玉奎 ， ， ， ， ， ，
（ ．南 开 大 学 化 学 系 ， 津 ３ ０７ ； ．中 国科 学 院大 连 化 学 物 理 研 究 所 ， 连 １６ １ ） １ 天 ００ １ ２ 大 １０ １
摘要
以壳聚糖为载体 ， 一 ３氨基苯 硼酸为功能单体对 牛血清 白蛋 白进行 了分子印迹的研究 ， 并对 吸附过程进
０ Ｙ Ｊ Ｃ ２ ０ ， ７ Ｃ Ｊ ０ ５０ 资 助 ． ６ ＦＭＪ０ ８０ ０ Ｊ Ｙ Ｃ ０ ０ ）
联系人简介 ： 何锡文 ， ， 男 教授 ， 博士生导师 ， 主要从事分子光谱及分子识别研究． —ａ ： ｉｅｈ＠ｎｎａ ｅｕｃ Ｅｍ ｉ ｘ ｎｅ ａｋｉ ｄ．ｎ ｌ ｗ ．
张玉奎 ， ， 男 研究员 ，博士生导师 ，中国科学院院士，从事色谱基础理论及新技术开发应 用研究 ．Ｅｍａ ： ｋｈ ｎ ＠ｄｃ ．ｃ ｃ — ｉ ｙ ｚａｇ ｉｐ ａ．／ ｌ １
载体 上吸 附 的 Ｂ Ａ洗 脱下来 ． Ｓ
２ ２ 印迹聚 合物 的红 外光 谱表 征 ．
将 Ｂ Ａ， Ｓ — Ｐ和 Ｎ ｎＭＩ Ｓ Ｂ Ａ ＭＩ ｏ — Ｐ制成 样 品 ，测定红 外光 谱 （ １ ．图 １中框 出 的区域 为 彼此 之 间差 图 ）
别 最为 明显 的部分 ．Ｂ Ａ分别 在 １５． ，１３． ，１５ ． Ｓ ６ ０９ ５ ８７ ４ ２９和 １９ ． ｍ 处 有特 征 峰 ，在 Ｂ Ａ— Ｐ红 ３５ ２ｃ Ｓ ＭＩ 外 吸收光 谱 中的对 应波 数 位 置均 有 反 映 ，其 吸收 峰 强 度 比 Ｎ ｎＭＩ 显．说 明 在未 经特 异 性 洗 脱 的 ｏ— Ｐ明