钩藤的HPLC指纹图谱研究pdf
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菜素的 HPLC 测定[J]. 药物分析杂志，2006，26（12）：1773-1776. [4] Li M X，Jia Z P，Hu Z D，et al. Experimental study on the Hemo－
static Activity of Tibet medicinal herb Lamiophlomis rotate[J]. Phy－ totherapy Research，2008：22. [5] 李茂星，贾正平，张汝学，等. 藏药独一味止血有效部位总环烯 醚萜苷对大鼠血液凝集参数的影响 [J]. 中国药房，2007，18（3）： 231-233. [6] Li M X，Zhang R X，Jia Z P，et al. Isolation and Identification of Hemostatic Ingredients from Lamiophlomis rotata （Benth.）Kudo [J]. Phytotherapy Research，2009，23：816-822. [7] 李茂星，李文斌，樊鹏程，等. 独一味制剂中 8-乙酰氧基山栀子 苷甲酯的含量测定 [J]. 中国医院药学杂志，2009，29 （8）：688690. [8] 王娟，李茂星，李文斌，等. HPLC 法测定藏药独一味中 8-乙酰 氧基山栀子苷甲酯的含量[J]. 中国药房，2009，20 （33）：25952596. [9] 谢培山. 中药色谱指纹图谱[M]. 北京：人民卫生出版社，2005： 3，6.
参考文献：
[1] 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草[M]. 第 7 卷. 上海： 上海科学技出版社，1999：6074-6075.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 （一部）[S]. 北京：化学工 业出版社，2005：184，541. [3] 罗米娜，赵亮，刘霞，等. 藏药独一味中槲皮素、木犀草素和芹
中 药 钩 藤 为 茜 草 科 茜 草 属 钩 藤 Uncaria rhyn－ chophylla（Miq.）Jacks、大叶钩藤U.macrophylla Wall.、 毛 钩 藤 U.hirsuta Havil.、 华 钩 藤 U.sinensis （Oliv）. Havil.或无柄果钩藤U.sessilifructus Roxb.的干燥带钩 枝茎，主要用于头痛眩晕、感冒夹惊、惊痫抽搐、妊 娠子痫，以及高血压等症[1]，主产于江西、广东、广 西、湖南、云南等地，近年在广西、贵州等地大量种 植。钩藤来源较多、产地和采收期的不同可造成药材 质量迥异[2]，因此，有必要建立有效的钩藤药材质量 评价方法，确保钩藤药材质量稳定。结合钩藤药材化 学成分特点，本文建立了钩藤药材的HPLC指纹图谱 分析方法，并比较不同产地钩藤药材的指纹图谱。
表1 钩藤药材来源
样品编号 产 地 批 号 样品编号 产 地 批 号
S1 广西桂林 20091015 S7
四川 20081107
S2 广西河池 20091003 S8
贵州 20090925
S3 江西赣州 20091126 S9 广东清远 20091216
S4 广东韶关 20091002 S10
云南 20090817
图2。
mAu
S12
S11
542.78
S10
S9
S8
359.76
S7
S6
S5
176.75
S4
S3
S2
-6.27 0.00
S1
9.42
18.83
28.25
37.66
47.08
56.49
65.91
t / min
图1 不同产地的钩藤药材HPLC指纹图谱叠加图
2.3.2 共有峰确定与归属 通过12批钩藤药材指纹图
时间/min 0~5 5~50 50~65
表2 流动相梯度条件
A（甲醇）/%
B（磷酸二氢铵溶液）/%
20
80
20→60
80→40
60→10
40→90
2.3 指纹图谱的建立
2.3.1 指纹图谱的制备 分别精密吸取对照品溶液和
供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，按“2.2”项所
述色谱条件操作，记录65 min色谱图，结果见图1、
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
玛 曲 的 地 上 部 分 3、 4、 7、 8、 9 的 相 似 度 均 大 于 0.95，表明这 5 批药材品质接近；而甘肃玛曲的地上 部分 1、2 相似度小于 0.90，可能与 03 年与 04 年的 药材储存时间较长有关，提示样品储存时间不易过 长。独一味药材甘肃玛曲的地下部分 11 相似度 0.924 8， 表明与地上部分有差别。独一味药材西藏林芝的地上 部分相似度 0.974 7，独一味药材云南德钦的地上部 分相似度 0.747 5，表明二者与甘肃玛曲的独一味地 上部分有差别。但是西藏林芝与甘肃玛曲相似度都大 于 0.90 表明这两个产地药材质量较为接近，云南德 钦与前两者有较大差异。独一味原药材均为野生，多 年生草本，尚不能栽培，HPLC 色谱图显示 11 批药 材各峰面积百分比有较大差异，可能与不同年份，不 同产地的气候、光照、降雨量、海拔等环境有关。不 同产地样品收集较困难，本实验所考察的样本有限， 有待扩大采集范围以进行90825 S11 福建龙岩 20091101
S6 贵州凯里 20090526 S12 江西九江 20091218
2 方法与结果
2.1 溶液的制备 精密称取钩藤碱对照品2.8 mg，异
钩藤碱对照品1.6 mg，加甲醇溶解定容于10 mL量瓶 中，制成每1mL中含钩藤碱0.28 mg、异钩藤碱0.16 mg的溶液，作为对照品溶液。钩藤药材烘干、粉碎 （40目），取粉末0.5 g精密称定，置具塞三角瓶中， 加入氯仿-甲醇混合溶剂20 mL，放置过夜，加少许 氨水[氯仿-甲醇-氨水（5 ∶ 1 ∶ 0.15）]，10 ℃水浴中超 声40 min，抽滤，蒸干滤液，残清加甲醇5 mL溶解， 0.45 μm滤膜滤过，即得供试液。 2.2 色谱条件 Kromosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）； 流动相：甲醇-10 mmol 磷酸二氢氨溶液，梯度洗脱， 见 表 2。 柱 温 ： 室 温 ； 流 速 ： 1.0ml·min -1； 波 长 ： 254nm。进样量：10 μL；理论塔板数按钩藤碱计算 不低于10 000，按异钩藤碱计算不低于8 000。
（编辑：修春）
钩藤的HPLC指纹图谱研究
黄艳萍，刘 浩（广东食品药品职业学院，广州 510520）
摘要：目的 建立钩藤药材的HPLC色谱指纹图谱。方法 以钩藤碱为参照物，采用HPLC法，色谱条件：Kro－ mosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-10 mmol磷酸二氢铵溶液，梯度洗脱进行色谱分离；检测波 长：254nm；流速：1.0 ml·min-1；柱温：室温。结果 12 批不同产地的钩藤药材中，除 4 批外，其余 8 批与系 统生成的对照指纹图谱的相似度均在0.97以上；归纳出钩藤药材 15个共有峰；通过与对照品的保留时间比较， 11、12号峰分别为钩藤碱和异钩藤碱；不同产地钩藤药材中主要化学成分组成相似，但相对比例有明显的差 异。结论 所建立的方法简单可行，能有效控制钩藤药材的质量。 关键词：钩藤；HPLC；指纹图谱 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0406-04
HPLC Fingerprint of Ramulus Uncariae Cum Uncis HUANG Yanping，LIU Hao （Guangdong Food and Drug Vocational College， Guangzhou 510520，China） Abstract: Objective To study the fingerprint of Ramulus Uncariae Cum Uncis by HPLC. Methods Rhynchophylline was used as the reference compound. The chromatographic condition of HPLC was as follows: Kromosil column C 18 （250 mm × 4.6 mm，5 μm）at room temperature，the mobile phase being methanol with 10 mmol·L-1 ammonium di－ hydrogen phosphate， gradient elution in chromatographic separation， the detective wavelength being 254 nm， and flow rate being 1.0 ml·min-1. Results Except for four batches of 12 batches of Ramulus Uncariae Cum Uncis，the
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 （美国Agilent1100，配有DAD）， Sartorius BP211D型电子天平（0.01 mg），KQ-500E型 超声清洗器 （昆山市超声仪器有限公司），色谱柱： Kromosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）。
甲醇 （色谱纯），超纯水；其它试剂均为分析纯。 钩藤碱对照品 （南昌贝塔生物科技有限公司，批号： 10172-200908，纯度≥98 %）、异钩藤碱对照品 （南 昌贝塔生物科技有限公司，批号： 10525-200901， 纯度≥98 %）。12 批钩藤药材分别购自广州清平药材 市场和广州市药材公司并经广东省中药研究所汪小根 教授鉴定均符合要求，产地见表1。
·408·
Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
收稿日期：2010-01-04 作者简介：黄艳萍（1976-），男，实验师，从事中药及中药制剂质量控制工作。Email：hypgz@。
中药新药与临床药理 2010 年 7 月第 21 卷第 4 期
·407·
fingerprint similarity value of the other eight batches was above 0.97 as compared with system generation spectrum， and 15 common characteristic peaks were presented. The 11th peak was identified as Rhynchophylline and the 12 th peak as isorhynchophylline compared with the retention time of standard sample. The results showed that the main chemical constituents of Ramulus Uncariae cun Uncis were similar among herbs from different habitats，but their rela－ tive ratios are significantly different. Conclusion The method is simple， accurate and reproducibility， and can be used for the quality control of Ramulus Uncariae Cum Uncis. Keywords: Ramulus Uncariae Cum Uncis; HPLC; Fingerprint
static Activity of Tibet medicinal herb Lamiophlomis rotate[J]. Phy－ totherapy Research，2008：22. [5] 李茂星，贾正平，张汝学，等. 藏药独一味止血有效部位总环烯 醚萜苷对大鼠血液凝集参数的影响 [J]. 中国药房，2007，18（3）： 231-233. [6] Li M X，Zhang R X，Jia Z P，et al. Isolation and Identification of Hemostatic Ingredients from Lamiophlomis rotata （Benth.）Kudo [J]. Phytotherapy Research，2009，23：816-822. [7] 李茂星，李文斌，樊鹏程，等. 独一味制剂中 8-乙酰氧基山栀子 苷甲酯的含量测定 [J]. 中国医院药学杂志，2009，29 （8）：688690. [8] 王娟，李茂星，李文斌，等. HPLC 法测定藏药独一味中 8-乙酰 氧基山栀子苷甲酯的含量[J]. 中国药房，2009，20 （33）：25952596. [9] 谢培山. 中药色谱指纹图谱[M]. 北京：人民卫生出版社，2005： 3，6.
参考文献：
[1] 国家中医药管理局中华本草编委会. 中华本草[M]. 第 7 卷. 上海： 上海科学技出版社，1999：6074-6075.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典 （一部）[S]. 北京：化学工 业出版社，2005：184，541. [3] 罗米娜，赵亮，刘霞，等. 藏药独一味中槲皮素、木犀草素和芹
中 药 钩 藤 为 茜 草 科 茜 草 属 钩 藤 Uncaria rhyn－ chophylla（Miq.）Jacks、大叶钩藤U.macrophylla Wall.、 毛 钩 藤 U.hirsuta Havil.、 华 钩 藤 U.sinensis （Oliv）. Havil.或无柄果钩藤U.sessilifructus Roxb.的干燥带钩 枝茎，主要用于头痛眩晕、感冒夹惊、惊痫抽搐、妊 娠子痫，以及高血压等症[1]，主产于江西、广东、广 西、湖南、云南等地，近年在广西、贵州等地大量种 植。钩藤来源较多、产地和采收期的不同可造成药材 质量迥异[2]，因此，有必要建立有效的钩藤药材质量 评价方法，确保钩藤药材质量稳定。结合钩藤药材化 学成分特点，本文建立了钩藤药材的HPLC指纹图谱 分析方法，并比较不同产地钩藤药材的指纹图谱。
表1 钩藤药材来源
样品编号 产 地 批 号 样品编号 产 地 批 号
S1 广西桂林 20091015 S7
四川 20081107
S2 广西河池 20091003 S8
贵州 20090925
S3 江西赣州 20091126 S9 广东清远 20091216
S4 广东韶关 20091002 S10
云南 20090817
图2。
mAu
S12
S11
542.78
S10
S9
S8
359.76
S7
S6
S5
176.75
S4
S3
S2
-6.27 0.00
S1
9.42
18.83
28.25
37.66
47.08
56.49
65.91
t / min
图1 不同产地的钩藤药材HPLC指纹图谱叠加图
2.3.2 共有峰确定与归属 通过12批钩藤药材指纹图
时间/min 0~5 5~50 50~65
表2 流动相梯度条件
A（甲醇）/%
B（磷酸二氢铵溶液）/%
20
80
20→60
80→40
60→10
40→90
2.3 指纹图谱的建立
2.3.1 指纹图谱的制备 分别精密吸取对照品溶液和
供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，按“2.2”项所
述色谱条件操作，记录65 min色谱图，结果见图1、
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
玛 曲 的 地 上 部 分 3、 4、 7、 8、 9 的 相 似 度 均 大 于 0.95，表明这 5 批药材品质接近；而甘肃玛曲的地上 部分 1、2 相似度小于 0.90，可能与 03 年与 04 年的 药材储存时间较长有关，提示样品储存时间不易过 长。独一味药材甘肃玛曲的地下部分 11 相似度 0.924 8， 表明与地上部分有差别。独一味药材西藏林芝的地上 部分相似度 0.974 7，独一味药材云南德钦的地上部 分相似度 0.747 5，表明二者与甘肃玛曲的独一味地 上部分有差别。但是西藏林芝与甘肃玛曲相似度都大 于 0.90 表明这两个产地药材质量较为接近，云南德 钦与前两者有较大差异。独一味原药材均为野生，多 年生草本，尚不能栽培，HPLC 色谱图显示 11 批药 材各峰面积百分比有较大差异，可能与不同年份，不 同产地的气候、光照、降雨量、海拔等环境有关。不 同产地样品收集较困难，本实验所考察的样本有限， 有待扩大采集范围以进行90825 S11 福建龙岩 20091101
S6 贵州凯里 20090526 S12 江西九江 20091218
2 方法与结果
2.1 溶液的制备 精密称取钩藤碱对照品2.8 mg，异
钩藤碱对照品1.6 mg，加甲醇溶解定容于10 mL量瓶 中，制成每1mL中含钩藤碱0.28 mg、异钩藤碱0.16 mg的溶液，作为对照品溶液。钩藤药材烘干、粉碎 （40目），取粉末0.5 g精密称定，置具塞三角瓶中， 加入氯仿-甲醇混合溶剂20 mL，放置过夜，加少许 氨水[氯仿-甲醇-氨水（5 ∶ 1 ∶ 0.15）]，10 ℃水浴中超 声40 min，抽滤，蒸干滤液，残清加甲醇5 mL溶解， 0.45 μm滤膜滤过，即得供试液。 2.2 色谱条件 Kromosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）； 流动相：甲醇-10 mmol 磷酸二氢氨溶液，梯度洗脱， 见 表 2。 柱 温 ： 室 温 ； 流 速 ： 1.0ml·min -1； 波 长 ： 254nm。进样量：10 μL；理论塔板数按钩藤碱计算 不低于10 000，按异钩藤碱计算不低于8 000。
（编辑：修春）
钩藤的HPLC指纹图谱研究
黄艳萍，刘 浩（广东食品药品职业学院，广州 510520）
摘要：目的 建立钩藤药材的HPLC色谱指纹图谱。方法 以钩藤碱为参照物，采用HPLC法，色谱条件：Kro－ mosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-10 mmol磷酸二氢铵溶液，梯度洗脱进行色谱分离；检测波 长：254nm；流速：1.0 ml·min-1；柱温：室温。结果 12 批不同产地的钩藤药材中，除 4 批外，其余 8 批与系 统生成的对照指纹图谱的相似度均在0.97以上；归纳出钩藤药材 15个共有峰；通过与对照品的保留时间比较， 11、12号峰分别为钩藤碱和异钩藤碱；不同产地钩藤药材中主要化学成分组成相似，但相对比例有明显的差 异。结论 所建立的方法简单可行，能有效控制钩藤药材的质量。 关键词：钩藤；HPLC；指纹图谱 中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1003-9783（2010）04-0406-04
HPLC Fingerprint of Ramulus Uncariae Cum Uncis HUANG Yanping，LIU Hao （Guangdong Food and Drug Vocational College， Guangzhou 510520，China） Abstract: Objective To study the fingerprint of Ramulus Uncariae Cum Uncis by HPLC. Methods Rhynchophylline was used as the reference compound. The chromatographic condition of HPLC was as follows: Kromosil column C 18 （250 mm × 4.6 mm，5 μm）at room temperature，the mobile phase being methanol with 10 mmol·L-1 ammonium di－ hydrogen phosphate， gradient elution in chromatographic separation， the detective wavelength being 254 nm， and flow rate being 1.0 ml·min-1. Results Except for four batches of 12 batches of Ramulus Uncariae Cum Uncis，the
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 （美国Agilent1100，配有DAD）， Sartorius BP211D型电子天平（0.01 mg），KQ-500E型 超声清洗器 （昆山市超声仪器有限公司），色谱柱： Kromosil C1（8 250 mn × 4.6 mm，5 μm）。
甲醇 （色谱纯），超纯水；其它试剂均为分析纯。 钩藤碱对照品 （南昌贝塔生物科技有限公司，批号： 10172-200908，纯度≥98 %）、异钩藤碱对照品 （南 昌贝塔生物科技有限公司，批号： 10525-200901， 纯度≥98 %）。12 批钩藤药材分别购自广州清平药材 市场和广州市药材公司并经广东省中药研究所汪小根 教授鉴定均符合要求，产地见表1。
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Traditional Chinese Drug Research ＆ Clinical Pharmacology,2010 July,Vol．21 No．4
收稿日期：2010-01-04 作者简介：黄艳萍（1976-），男，实验师，从事中药及中药制剂质量控制工作。Email：hypgz@。
中药新药与临床药理 2010 年 7 月第 21 卷第 4 期
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fingerprint similarity value of the other eight batches was above 0.97 as compared with system generation spectrum， and 15 common characteristic peaks were presented. The 11th peak was identified as Rhynchophylline and the 12 th peak as isorhynchophylline compared with the retention time of standard sample. The results showed that the main chemical constituents of Ramulus Uncariae cun Uncis were similar among herbs from different habitats，but their rela－ tive ratios are significantly different. Conclusion The method is simple， accurate and reproducibility， and can be used for the quality control of Ramulus Uncariae Cum Uncis. Keywords: Ramulus Uncariae Cum Uncis; HPLC; Fingerprint