内消旋二氢愈创木脂酸对哮喘小鼠呼吸道炎症作用的研究

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内消旋二氢愈创木脂酸对哮喘小鼠呼吸道炎症作用的研究

王 策1，李俊峰1，李 莉1，李良昌1，李 燕2*（通讯作者）

（１．延边大学医学院，吉林　延吉　１３３００２２；延边大学附属医院，吉林　延吉　１３３０００）

摘 要：

目的：观测内消旋二氢愈创木脂酸（ＭＤＧＡ）对呼吸道炎症的作用并探讨其可能机制。方法：将２０只雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠随机分为正常组、哮喘组、ＭＤＧＡ低剂量组、高剂量组。采用鸡卵白蛋白（ＯＶＡ）致敏和激发的方法制备哮喘小鼠模型，两个治疗组的小鼠分别给予１　ｍｇ／ｋｇ、１０　ｍｇ／ｋｇ的ＭＤＧＡ。末次激发２４　ｈ后处死小鼠，收集支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ），测定其中总炎症细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数量及ＩＬ－４，ＩＬ－５，ＩＬ－１３水平。结果：与正常组相比，哮喘组小鼠总炎症细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数量及Ｌ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３含量显著升高；经ＭＧＤＡ治疗后，各项指标均降低（Ｐ＜０．０５）。结论：ＭＤＧＡ可能具有抗哮喘作用，其机制可能与下调Ｔｈ２炎症细胞因子、减少炎症细胞浸润有关。

关键词：

ＭＧＤＡ；哮喘；气道炎症；Ｔｈ２细胞因子中图分类号：

Ｒ７３５．２ 文献标识码：Ａ作者简介：王策，男，生于１９９８年，汉族，浙江温州人，本科，延边大学医学院麻醉学。

通讯作者：李燕，女，生于１９７６年，朝鲜族，吉林延吉人，副主任医师，研究方向：气道炎症及哮喘研究。

哮喘是一种慢性炎症性疾病，其发病机制与炎细胞浸润及细胞因子有关，细胞包括嗜酸性粒细胞、中性粒细胞及淋巴细胞等[1]

，细胞因子如IL-4，IL-5，IL-13等。下调Th2类炎症细胞因子，减少炎症细胞浸润已成为哮喘治疗的方向。

内消旋二氢愈创木脂酸（MDGA）是一种五味子科木脂素类化合物，近年来发现其具备有比较强的抗氧化能力[2]，但MDGA 对哮喘的炎症作用还有待探究。因此，本研究采用OVA 诱导的方法建立哮喘小鼠模型，观察MDGA 对哮喘的作用及可能的机制。1 材料与方法1.1 主要试剂和仪器

OVA、氢氧化铝购自Sigma 公司；MDGA 购自上海同田生物技术股份有限公司；ELISA 试剂盒购自上海恒斐生物科技有限公司；Diff-Quick 染色液购自北京索莱宝生物科技有限公司。1.2 动物分组及模型制备

雌性BALB/c 小鼠20只，体重为20±2g，由延边大学医学院实验动物中心提供。将小鼠随机分成4组：正常组、哮喘组、MDGA 低剂量组（1 mg/kg）、高剂量组（10 mg/kg），每组5只。按照文献[3]的方法制备过敏性哮喘小鼠模型，第1、7、14天致敏，第21天到27天激发，每天30分钟，治疗组在每次激发前分别腹腔注射相应剂量的MDGA。

1.3 实验样本获取及标本制备

最后一次激发24 h 后，用1%戊巴比妥钠将小鼠麻醉后处死，打入1 mL 生理盐水后回抽，收集BALF。1.4 BALF 中炎症细胞分类计数

取50 uL BALF 加入50 uL 白细胞计数液，分类计数炎症细胞。将剩余的BALF，于4℃条件下，3000 r/min 离心10 min，取上清，-80℃保存。细胞沉淀进行Diff-Quick 染色，镜下分类计数。1.5 BALF 中IL -4，IL -5，IL -13的检测

采用ELISA 法测定BALF 上清IL-4，IL-5，IL-13的含量。1.6 统计学分析

采用SPSS 16.0统计软件，实验数据采用的形式表示，多组均数比较采用单因素方差分析，样本均数两两之间比较采用LSD 法，P<0.05为差异有统计学意义。2 结果

2.1 MDGA 对BALF 中炎症细胞数量的影响

如表1所示，与正常组小鼠比较，哮喘组小鼠BALF 中的总炎症细胞数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞明显增高（P<0.05）。MDGA 治疗后，各项指标降低，差异有统计学意义（P<0.05）。

表1 各组小鼠BALF 中的炎症细胞数量（

，×104，n=5）

组别

总炎症细胞数中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞

正常组246.1±5.7124.4±0.1 3.5±0.385.3±1.6哮喘组

3351.1±32.6 #

2427.4±8.1 #57.1±7.6#372.6±10.1#

MGDA 小剂量组

632.4±6.3*355.4±7.6*47.3±6.8*257.4±13.2*

MGDA 大剂量组

544.1±5.2*228.6±5.8*33.5±5.7*236.6±6.8*

注：与正常对照组比较，# P<0.05；与哮喘组比较，* P<0.05。2.2 MDGA 对BALF 中IL -4，IL -5，IL -13的水平的影响

如表2所示，与正常组相比，哮喘组小鼠BALF 中IL-4、IL-5和IL-13水平明显升高(P<0.05)。采用MDGA 治疗后，各指标明显降低(P<0.05)。

表2 各组小鼠BALF 中IL-4、IL-5、IL-13的含量（

，ng/L，n=5）

组别IL-4IL-5IL-13

正常组12.5±2.119.8±1.815.26±1.5哮喘组

38.9±2.9#57.6±5.6#45.6±4.5#MGDA 小剂量组32.4±2.6*46.2±4.1*35.5±3.9*MGDA 大剂量组

28.3±2.1*

36.8±3.5*

29.6±2.7*

注：与正常对照组比较，# P<0.05；与哮喘组比较，* P<0.05。3 讨论

过敏性哮喘是一种由多种炎症细胞和细胞因子参与的慢性气道炎症。炎症细胞如中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞等，细胞因子如Th2细胞因子（IL-4，IL-5，IL-13等）。研究表明，在哮喘中，上述炎症细胞和Th2类细胞因子明显升高。

本次研究中，我们发现，应用MDGA 能够有效抑制炎症细胞的浸润。同时，MDGA 可以有效抑制BALF 中Th2型细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）表达。因此，MGDA 对哮喘小鼠模型具有一定的保护作用，其机制可能与下调Th2类细胞因子，减少炎症细胞浸润有关。参考文献

[1]. Agrawal, D.K. and Z. Shao, Pathogenesis of allergic airway

inflammation. Curr Allergy Asthma Rep, 2010. 10(1): p. 39-48.