迷迭香酸的提取与分离纯化工艺研究

迷迭香酸的提取与分离纯化工艺研究
张琳;杨苏麟;张国良;李治明
【摘要】The new technology of extracting rosmarinic acid as the solvent extraction under normal temperature was studied. Under these conditions, the extraction of rosmarinic acid was 94. 35%. The separation and purification method of rosmarinic acid was adopted to extraction combined with macroporous resin elution. With n-butanol extraction, ethyl acetated to extract, decompression recovered solvents, the appropriate volume was concentrated. With X-5 macroporous resin, the product of rosmarinic acid was obtained by recrystallization, the purity reached 66. 67%, the content of rosmarinic acid was 0. 36%. Results showed that the n-butanol and ethyl can remove large amounts of sugars, pectin and protein. X-5 resin was used to separating and concentrating rosmarinic acid and had the best effect.%研究了常温下提取迷迭香酸的工艺，迷迭香酸的提取率达
到94．35%。

分离纯化采用萃取与大孔树脂洗脱相结合的工艺，先用正丁醇萃取，再用乙酸乙酯萃取，合并萃取液，减压回收溶剂。

采用X-5大孔树脂进行分离富集，最后重结晶得到产品，纯度达到66．67%，产率为0．36%。

结果表明选用
正丁醇和乙酸乙酯作为萃取剂可以除去大量的糖类、果胶、蛋白， X-5树脂对迷
迭香酸分离与富集的效果最好。

【期刊名称】《广州化工》
【年(卷),期】2016(044)019
【总页数】3页(P105-107)
【关键词】迷迭香;迷迭香酸;提取;纯化
【作者】张琳;杨苏麟;张国良;李治明
【作者单位】海南大学材料与化工学院，海南海口 570228;海口经济学院，海南
海口 570203;康县岸门口中学，甘肃陇南 746500;海南大学材料与化工学院，海
南海口 570228
【正文语种】中文
【中图分类】O658.2;O658.9
迷迭香(Rosmarinus Officinalis L.)，别名艾菊，系唇形科迷迭香属植物，原产地
中海沿岸一带，其含的迷迭香酸(Rosmarinic acid, Ros.A.)是一种天然的具有多种生理活性的水溶性酚类化合物[1]，在食品、化妆品、医药等方面[2] 国内外已有着广阔的应用，目前德国己作为解热、镇痛、抗炎药物投放市场，随着大众对迷迭香抗氧化剂的需求，迷迭香的应用领域也正在不断扩大，可见其在国内外有着广阔的应用前景。

1.1 材料与仪器
迷迭香叶。

X-5大孔吸附树脂，天津市光复精细化工研究所；UV-2450紫外可见分光光度计，日本岛津公司；LC-20A高效液相色谱仪，岛津国际贸易(上海有限公司)。

1.2 实验方法
1.2.1 溶剂提取法提取迷迭香酸
本文考察了在常温下迷迭香干叶不同的粉碎度、乙醇浓度、浸提时间、料液比及提取次数对迷迭香酸提取率的影响，称取100 g原料置于3000 mL容器中,加入不
同浓度的乙醇，在常温下搅拌一定时间提取并过滤,提取2次，将提取的滤液合并
后加入0.01 g Vc静止6 h浓缩回收乙醇，用蒸馏水定容至100 mL，以1:1盐酸调节pH值至3.0再进行过滤。

按FeSO4比色法测定吸光度值，来计算迷迭香酸
的提取率[3]。

1.2.2 迷迭香酸的分离与富集纯化[4]
迷迭香酸的提取液经过滤布粗滤后，再用无机膜对浸提液进行处理，滤液经过X-5、D201、NKA-Ⅲ、聚酰胺四种不同的的大孔树脂吸附柱，用洗脱剂进行洗脱，在
进行萃取，测定萃取液吸光度，计算迷迭香酸产品的解吸率。

最后把液体浓缩为饱和液体，低温放置，析出颗粒状，过滤，真空干燥得产品。

1.2.3 迷迭香酸的含量测定[5]
采用高效液相色谱(HPLC)法对迷迭香酸产品进行定量分析，色谱条件Waters
C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.5%磷酸水(35:65)；流速为1.0 mL/min；检测器为紫外检测器，检测波长为332 nm；灵敏度为0.16AFUS；柱
温为室温(25 ℃)；溶解介质为无水乙醇。

标准样品溶液的制备：称取4.95 mg迷
迭香酸标准品用无水乙醇定容到10 mL，浓度为0.495 mg/mL。

2.1 迷迭香酸提取工艺条件优化
由表1可知，迷迭香粉碎度在20目以下时，迷迭香酸提取率随粒度增加而迅速
提高，以20目为最佳粒度。

随浸提次数增多，其提取率的不断增长，而前2次迷迭香酸的提取率总和已达94.35%，故选取提取次数为2次。

随着液料比提高而升高，当液料比达到15:1时提取率比较高，与液料20:1相比几乎一致，因此选择15:1为最佳料液比。

随着提取时间增长，提取率升高，至6 h后提取率几乎不再
变化，故选择6 h为最佳浸取时间。

当乙醇浓度在50%以下时，提取率呈增长趋势，而随乙醇浓度提高开始缓慢降低，故选择乙醇的浓度为50%。

2.2 迷迭香酸分离纯化工艺
2.2.1 微滤膜对浸提液的预处理
由表2可知，采用微滤可除去悬浮颗粒及大部分的果胶、蛋白，微滤后的透过液
澄清透明，颜色比较浅，放置时间长，3和4次过滤基本是透明澄清的液体，从降低生产成本和节能角度考虑，所以实验选取过滤次数为3次。

2.2.2 大孔树脂吸附法富集与分离[6]
2.2.2.1 树脂类型的选择
由表3可知，X-5对迷迭香酸的吸附率比较高，而它的解吸率是最高的，和D201相比其吸附率很大但却很难解吸，故选择X-5树脂进行富集与分离迷迭香酸。

2.2.2.2 洗脱溶剂的选择
从表4可知，蒸馏水对迷迭香酸的洗脱能力最差，乙醇对迷迭香酸具有良好的洗
脱能力，在天然产物的提取纯化过程中一般选择对环境没有污染的有机溶剂，所以本文采用乙醇溶液作洗脱溶剂。

2.2.2.3 洗脱乙醇浓度的选择
由图1可知，不同乙醇浓度对迷迭香酸的解吸有一定的影响，在一定范围内，随
着乙醇浓度的增加其解吸率也提高。

当乙醇浓度达到75%时，解吸率也增加到了89%，当乙醇浓度继续增加时，变化不是很明显，而且乙醇浓度过高时其挥发性
也增大，故选用75%左右的乙醇作为洗脱剂。

2.3 迷迭香酸产品的萃取[7]
2.3.1 萃取剂的选择
由表4可知，正丁醇对迷迭香酸的萃取率最高，石油醚的萃取率则最低。

故实验
先选用正丁醇萃取2次，再用乙酸乙酯萃取3次来获取纯度比较高的迷迭香产品。

2.3.2 正丁醇用量影响
由图2可知，萃取率随萃取溶剂的增加而增加，当料液比为1:1.5之后，增加缓慢。

故选择正丁醇的用量为浓缩液体积的1.5倍。

2.3.3 料液pH值对萃取效果的影响
由图3可知，料液pH值为3.0时，迷迭香酸的萃取率最高，最终选择料液的pH 值为3.0。

2.3.4 萃取时间的选择
由图4可知，萃取率随着混合时间的增大而增大，在超过20 min后萃取率增长缓慢，故最终选择萃取时间为20 min。

2.4 迷迭香酸的定量分析-HPLC法
(1)迷迭香酸标准样品的HPLC分析
(2)迷迭香酸产品的HPLC分析
将迷迭香酸产品溶于10 mL无水乙醇，进行HPLC分析。

由图5和图6可知，迷迭香酸标准品和产品的高效液相色谱图见所得到的产品保
留时间基本一致，以峰面积计算样品中迷迭香酸的含量，分离纯化后得到产品中迷迭香酸的纯度最高为66.67%，产率为0.36%。

本文得出常温下溶剂提取法提取迷迭香酸最佳条件为：物料破碎至20目，用50%乙醇作为提取剂，在15:1液料比下，提取2次，每次为6 h，得到迷迭香酸的提
取率为94.35%。

此迷迭香酸提取工艺在很大程度降低了能耗且设备简单可行，为工业提取迷迭香酸提供了新的途径。

迷迭香中迷迭香酸的分离纯化工艺：用定性滤纸过滤3次浸提液，回收溶液中的乙醇再用1:1盐酸调提取溶液的pH值至3，以1.5倍正丁醇为萃取剂、时间为20 min、萃取2次、回收正丁醇。

将回收正丁醇
的的产品用水溶解，用1:1盐酸调值pH值至2.0～2.5，以10:6(V/V)萃取料液溶剂比，用乙酸乙酯萃取3次，萃取时间为20 min，合并萃取液，减压回收溶剂，浓缩至适当体积。

用75%乙醇洗脱浓缩的产品，再通过X-5大孔树脂收集洗脱液，放置低温下结晶，过滤，干燥得到迷迭香酸产品，纯度可以达到66.67%，产率为0.36%。

【相关文献】
[1] 程贤,毕良武,赵振东,等.迷迭香酸的提取纯化及生物活性研究进展[J].林产化学与工
业,2015(04):151-158．
[2] 周丹,刘艾林,杜冠华.迷迭香酸的药理学研究进展[J].中国新药杂志.2011(07):383-388.
[3] 彭伟.迷迭香精油和抗氧化剂的提取工艺研究[D].广州:华南理工大学,2012.
[4] 毕志成.迷迭香精油和水溶性、脂溶性抗氧化剂的提取、分离及纯化研究[D].长沙:中南林业科技大学,2013.
[5] 罗勇,方铁铮,姚江雄,等.夏桑菊颗粒中迷迭香酸的含量测定[J].中国民族民间医药,2016(12):43-46.
[6] 薛姣,张志军,李晓君,等.大孔树脂分离纯化紫苏迷迭香酸的研究[J].食品科技,2015 (09):184-187.
[7] 翟婷.迷迭香中迷迭香酸的提取及提取物活性测定的研究[D].南宁:广西大学,2008.。