微柱凝胶法交叉配血次侧弱凝集的原因及配血对策

.检验医学.--------------------------中国当代医药2021年6月第28卷第17期微柱凝胶法交叉配血次侧弱凝集的原因及配血对策
朱洁好叶伙梅孙沁杰
广东省云浮市人民医院输血科，广东云浮527300
［摘要］目的探讨微柱凝胶法(MGT)交叉配血次侧弱凝集的原因及配血对策。

方法选取2019年9月~2020年10月云浮市人民院共3606例受血者标本，对MGT交叉配血次侧弱凝集的标本进行DAT检测,并对供血者进行抗体筛查试验，分析MGT交叉配血次侧弱凝集的原因，探讨相应的配血对策。

结果3606例受血者标本中出现次侧弱凝集120例，其中直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性117例,供血者抗体筛查阳性2例,假凝集1例;对DAT阳性且黄疸明显的5例标本进一步做免疫分型及放散试验，发现5例均为IgG型，放散后抗体筛查全阴性的4例，放散后抗体筛查全阳性的1例。

结论MGT交叉配血次侧弱凝集由患者DAT阳性所致占97.50%.，交叉配血次侧凝集强度不强于患者DAT凝集强度即可;对于DAT阳性且黄疸明显的标本应查找原因，采取相应的配血方案，以提高输血的安全性及有效性。

［关键词］微柱凝胶法；交叉配血；次侧弱凝集；直接抗人球蛋白试验;输血
［中图分类号］R457.11［文献标识码］A［文章编号］1674-4721(2021)6(b)-0196-03
Causes of weak agglutination on the secondary side of cross-matching with micro-column gel test and countermeasures of matching
ZHU Jie-hao YE Huo-mei SUN Qin-jie
DeparLmenL of Blood Transfusion,Yunfu People's HospiLal,Guangdong Province,Yunfu527300,China
[Abstract]Objective To invesLigaLe Lhe causes of weak aggluLinaLion on Lhe secondary side of cross maLching wiLh mi­cro-column gel LesL(MGT)and Lhe counLermeasures of maLching.Methods A LoLal of3606blood samples collecLed from SepLember2019Lo OcLober2020in Yunfu People's HospiLal were included in Lhe sLudy.The direcL anLi-human globulin LesL(DAT)was performed on Lhe samples wiLh weak aggluLinaLion on Lhe secondary side of MGT cross-maLch­ing blood,and Lhe anLibody screening LesL was performed on donors.The causes of weak aggluLinaLion on Lhe secondary side of MGT cross-maLching blood were analyzed,and Lhe corresponding maLching counLermeasures were discussed.
Results There were120cases of secondary weak aggluLinaLion in Lhe3606blood samples,including117cases of DAT posiLive,2cases of posiLive donor anLibody screening,and1case of false aggluLinaLion.FurLher immunophenoLyping and diffusion LesLs were performed on Lhe five DAT-posiLive specimens wiLh obvious jaundice.The resulLs showed LhaL all five specimens were IgG-Lype,four were all negaLive for anLibody screening afLer diffusion,and one was all posiLive for anLibody screening afLer diffusion.Conclusion97.50%of Lhe cases of weak aggluLinaLion on Lhe secondary side of MGT cross-maLching blood are caused by DAT posiLiviLy in paLienLs,and Lhe aggluLinaLion inLensiLy on Lhe secondary side of cross-maLching blood is noL sLronger Lhan LhaL of DAT in paLienLs.For Lhe specimen wiLh DAT posiLive and ob­vious jaundice,in order Lo improve Lhe safeLy and effecLiveness of blood Lransfusion,Lhe causes should be found and Lhe corresponding blood maLching scheme should be Laken.
[Key words]Micro-column gel LesL;Cross-maLching;Weak aggluLinaLion on Lhe secondary side;DirecL anLi-human globulin LesL;Blood Lransfusion
交叉配血试验是输血前必做的配合性试验，以确定受血者或供者血液中没有可测的不相配合的抗原和抗体成分，是安全输血的第一要素。

患者血清/血浆与供者红细胞混合后的实验称为主侧交叉配血,而将供者血清/血浆与患者红细胞混合后的实验称为次侧［作者简介］朱洁好(1979-),女，广东云浮人，副主任技师，研究方向：临床输血检验技术，擅长输血相容性检测并对疑难交叉配血有一定的经验，参与广东省医学科学技术研究基金项目一项，负责广东省云浮市科技计划项目一项交叉配血［1］o目前，微柱凝胶法(micro-column gel test, MGT)配血技术已被广泛应用于临床输血相容性检测［2］,但由于其灵敏度高的原因,配血不合率也高于其他检测方法。

本研究对MGT交叉配血次侧弱凝集的现象进行分析，现报道如下。

1资料与方法
1.1一般资料
选取2019年9月~2020年10月在云浮市人民医院输血患者3606例。

MGT交叉配血主侧相合、次
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侧弱凝集的120例,其中男68例,女52例;年龄10个月〜98岁。

本研究已通过医院医学伦理委员会审批。

1.2试剂与仪器
微柱凝胶血型卡、微柱凝胶抗人球卡、低离子液（珠海贝索公司）；抗体筛查细胞、ABO标准细胞（上海血液生物医药公司）；抗人球蛋白（抗IgG、抗C3d）检测卡（江苏力博医药生物技术股份有限公司），以上试剂均在有效期内使用。

血型血清学离心机（Cen­trifuge12S域）、孵育器（Incubator37SI）、CU600型电热恒温水箱，北京白洋BY-120A离心机,CU600型电热恒温水浴箱。

1.3操作方法
1.3.1交叉配血标本经3000r/min离心1min,分离血浆和血细胞，用低离子液制备0.1%左右的红细胞悬液，主侧加受血者血浆50滋L和供者红细胞悬液50滋L,次侧加供者血浆50滋L和受血者红细胞悬液50滋L,37益孵育15min,离心10min判读结果。

红细胞在凝胶柱的上端或中间,判定为阳性;红细胞到达微柱的底部判定为阴性。

1.3.2直接抗人球蛋白试验（DAT）检测用EDTA抗凝血标本,BY-120A离心机3500r/min离心1min,取压积红细胞用生理盐水洗涤三次后配制1%的红细胞悬液,然后取50滋L加至微柱凝胶抗人球卡中，血型血清学离心机离心10min,肉眼观察结果。

1.3.3DAT分型在抗人球蛋白检测卡IgG、C3d及Ctrl三孔中分别加入50滋L的1%红细胞悬液，血型血清学离心机离心10min,肉眼观察结果。

1.3.4热放散试验用EDTA抗凝血标本,BY-120A离心机3500r/min离心1min，移除全部血浆，剩下的压积红细胞用盐水洗涤5~6次，末次去掉上清液后加与压积红细胞等量的盐水,然后放45益水浴箱放散10~ 15min,期间轻轻振摇。

放散后取出离心，用上清液进行抗体筛查。

1.3.5供血者抗体筛查试验供血者标本3500r/min 离心1min,在抗人球蛋白检测卡1、2、3孔中分别加入50滋L血浆及50U抗体筛查细胞,37益孵育15min,离心10min判读结果。

1.3.6假凝集的判读由于受血者标本抗凝不好，导致标本中出现纤维蛋白丝,吸样时纤维蛋白丝被带到凝胶孔内，离心后结果出现一薄层红细胞卡在凝胶孔上层、大部分红细胞在凝胶孔底层的现象;用小吸嘴轻轻挑起薄层红细胞,可见到整层红细胞被挑起。

2结果
2.1交叉配血次侧弱凝集的原因
120例交叉配血主侧相合、次侧弱凝集的患者中,DAT阳性117例（占97.50%）,供者抗筛阳性2例（占1.67%），假凝集1例（占0.83%）；DAT阳性患者的次侧配血凝集强度均弱于或等于其DAT凝集强度。

2.2 DAT阳性与5例溶血性贫血的相关性
DAT阳性117例患者中,5例患者初次配血时的血液标本呈现明显黄疸，对5份标本进行免疫分型及放散试验,结果显示,5例均为IgG型;放散后抗体筛查全阴性4例,放散后抗体筛查全阳性1例,结果见表1。

表1DAT阳性与5例溶血性贫血的相关性
患者编号Hb(g/L)间接胆红素（滋mol/L）LDH(U/L)DAT凝集强度免疫分型放散液抗筛结果出院时诊断145.327.12901+++IgG全阴药物性溶血性贫血266.021.7501++IgG全阴地中海贫血384.029.5425++IgG全阴G-6-PD缺乏462.051.9405++IgG全阴G-6-PD缺乏560.246.0704+++IgG全阳AIHA待排Hb：血红蛋白;LDH：乳酸脱氢酶；G-6-PD：红细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶；AIHA：自身免疫性溶血性贫血
3讨论
DAT是辅助诊断贫血的方式，也是诊断AIHA最直接的证据之一。

DAT阳性的主要原因:①红细胞抗原上吸附有自身抗体;②溶血性输血反应;③胎儿及新生儿溶血性疾病;④药物诱导的抗体;⑤被动获得的同种抗体;⑥非特异性吸附的蛋白；⑦由于细菌感染、自身抗体或同种抗体引起的补体激活和过客淋巴细胞产生的抗体［3］遥DAT阳性导致交叉配血次侧不合的现象在临床输血相容性检测中比较常见,尤其多见于消化科、重症监护病房、肿瘤科和肾病科典这些非AIHA患者球蛋白相对增高，可以导致球蛋白非特异
性黏附于红细胞表面，从而导致DAT阳性叫本研究结果显示,导致交叉配血次侧凝集的主要原因是患者DAT阳性（占97.50%）,这与林嘉等问研究结果一致。

对于DAT阳性导致的交叉配血次侧凝集，配血时只要次侧凝集强度弱于或等于DAT凝集强度，可视为患者血液与供者红细胞配血相合，输注悬浮红细胞并不降低输血的有效性和安全性［6-7］遥
本研究中,5例较异常的DAT阳性标本，标本离心后的血浆外观均呈明显黄疸，抗体筛查均为阴性;DAT 免疫分型为IgG型，放散试验4例呈抗体筛查全阴性, 1例呈抗体筛查全阳性遥5例患者的出院诊断均与溶CHINA MODERN MEDICINE Vol.28No.17June2021「197
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血性贫血相关：1例药物性溶血性贫血,1例地中海贫血,2例G-6-PD缺乏,1例AIHA待排。

提示DAT免疫分型和放散试验可以为临床提供一些直接或间接的诊断依据,辅助医生及时诊断及治疗。

尽管还缺乏更多量的数据分析，但这5例的配血对策应引关注。

药物性溶血性贫血是由于患者在使用某种药物后,体内产生相应的药物性抗体,导致DAT阳性,红细胞被破坏,从而发生的免疫性溶血性贫血叫本研究中,该患者因长期口服抗肿瘤类药物致慢性溶血性贫血，入院后停用该药物,输注悬浮红细胞5.5U,Hb从45.3g/L上升到99.6g/L o
地中海贫血是由于珠蛋白基因突变或缺失、以慢性进行性溶血为特点的一种血液疾病,在广东、广西地区分布最多典此类患者在配血时应做到ABO及Rh 血型系统同型输注，以减少产生同种抗体的可能性［10］；另外，最好输注洗涤红细胞并滤除白细胞，以避免HLA抗体的产生及与白细胞携带病毒相关疾病传播的风险［11］o
G-6-PD缺乏症是人类最常见的酶缺乏症,大多数患者终生无症状,在接触已知氧化药物、感染或摄入蚕豆后出现急性溶血。

此类患者输血时可选择悬浮红细胞或滤除白细胞的悬浮红细胞，尽量选择G-6-PD正常的献血者血液，以提高输血疗效［12-13］遥
AIHA是临床中常见的获得性溶血性疾病，是由于机体产生针对自身红细胞抗原的抗体,导致红细胞破坏增加。

此类患者的DAT阳性的红细胞放散液只有自身抗体，并且患者没有近期输血史的情况下，可以输注配血主侧相合的悬浮红细胞讥
本研究中由供血者抗筛阳性导致的交叉配血次侧凝集，可以另选供血者进行重新配血,并将该抗筛阳性血液退回血站处理。

假凝集导致交叉配血次侧不合,是由标本抗凝不充分，纤维蛋白析出所致，重新处理标本后配血主、次侧相合。

有研究认为,MGT次侧配血不合对悬浮红细胞输注的安全性无影响,在确定受血者与献血者血型无误时,可取消MGT次侧配血［14］遥但笔者认为,MGT次侧配血还是有必要性:①国内目前没有规定献血者必须做不规则抗体筛查，次侧配血阳性可以有助于配血人员发现献血者的不规则抗体,并反馈给血站，避免其血浆类制品用于临床，从而保障临床用血安全问。

②DAT不是输血相容性检测的常规项目,次侧交叉配血阳性可以有助于发现患者DAT阳性，对于有溶血性输血反应、自身溶血性贫血和有近期输血史的DAT 阳性患者,有必要进行红细胞放散试验,确定红细胞上放散下来的抗体特异性,为患者寻找安全有效的血液进行输注［16］遥③次侧交叉配血阳性有助于发现受血者或供血者血型错误,避免输血不良反应的发生问。

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综上所述,MGT交叉配血次侧弱凝集绝大多数由患者DAT阳性所致,交叉配血时次侧凝集强度不强于患者DAT凝集强度即可;对于DAT阳性且黄疸明显的标本应加以关注及分析,采取针对性的配血方案,以提高输血的安全性及有效性。

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(收稿日期：2021-01-11)。