不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定

不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定
冉艳瑞，张　丽，王　灿，陈　艳，王　蕊
（昆明市食品药品检验所，云南昆明 650000）
摘　要：目的：测定不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量。

方法：以云南保山、大理两产地的木瓜为试验材料，通过正交试验对提取方法进行优化，采用高效液相色谱法测定木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量。

结果：当提取试剂为甲醇、浸泡时间为1 h、超声时间为30 min时，提取效果最佳。

结论：不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量有差异，为木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定提供理论依据。

关键词：木瓜；高效液相色谱法（HPLC）；齐墩果酸；熊果酸；含量测定Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in Papaya in
Different Origin
RAN Yanrui, ZHANG Li, WANG Can, CHEN Yan, WANG Rui
(Kunming City Food and Drug Control Institute, Kunming 650000, China) Abstract: Objective: To determine the content of oleanolic acid and ursolic acid in papaya from different regions. Method: Using papaya from Baoshan and Dali regions in Yunnan province as experimental materials, the extraction method was optimized through orthogonal experiments. High performance liquid chromatography was used to determine the content of oleanolic acid and ursolic acid in papaya. Result: The best extraction effect was achieved when the extraction reagent was methanol, soaking time was 1 h, and ultrasound time was 30 min. Conclusion: The main chemical components of papaya from different regions show differences in the content of oleanolic acid and ursolic acid, providing a theoretical basis for the determination of oleanolic acid and ursolic acid content in papaya.
Keywords: papaya; high performance liquid chromatography(HPLC); oleanolic acid; ursolic acid; content determination
木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠的干燥近成熟果实，主产于安徽省、四川省、重庆市、贵州省和云南省等地，酸木瓜、百花木瓜在云南和贵州等地区常作食品使用，具有悠久的食用历史[1-2]。

木瓜中含有果酸、熊果酸等活性成分，其在抗菌、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等方面具有显著作用[2]。

1　材料与方法
1.1　材料和试剂
白花木瓜、酸木瓜（云南腾冲），白花木瓜、酸木瓜（云南大理），各10 kg。

齐墩果酸、熊果酸均为100 mg，中国食品药品检定研究院；甲醇、乙醇、乙酸乙酯和乙酸铵，均为色谱纯。

1.2　仪器
Agilent1260高效液相色谱仪、电热恒温鼓风干燥箱、纯水机/超纯水一体机、数控超声波清洗器。

1.3　样品前处理
将木瓜清洗干净，对半切开，清除木瓜籽后切成薄片，将薄片放于55 ℃烘箱内烘干，将烘干后的木瓜片粉碎，存放于密闭容器中，备用。

1.4　前处理优化
在前期单因素实验的基础上，选择提取溶剂[3-4]、浸泡时间和超声时间作为考察因素，以齐墩果酸和
作者简介：冉艳瑞（1992—），女，云南大理人，本科，助理工程师。

研究方向：食品检测。

熊果酸的含量为评价指标，进行三因素三水平L9(33)正交试验，正交因素水平见表1。

表1　正交因素水平表
水平 A 提取溶剂 B 浸泡时间/h C 超声时间/min
1甲醇010
2乙醇130
3乙酸乙酯350
1.5　对照品溶液的制备
分别准确称取齐墩果酸和熊果酸0.010 12 g和0.010 36 g，使用甲醇溶解并分别定容至5 mL，制成齐墩果酸、熊果酸浓度分别为2.024 0 mg·mL-1、2.072 0 mg·mL-1储备液，用500 μL移液枪分别准确移取100 μL齐墩果酸和熊果酸到1 mL的容量瓶，然后用甲醇定容到刻度线，得到齐墩果酸的浓度为202.400 0 μg·mL-1，熊果酸的浓度为207.200 0 μg·mL-1的混标溶液。

然后将混标溶液稀释成7组不同浓度的标准溶液，齐墩果酸的浓度依次为3.162 5 μg·mL-1、6.325 0 μg·mL-1、12.650 0 μg·mL-1、25.300 0 μg·mL-1、50.6000μg·m L-1、101.2000μg·m L-1和202.400 0 μg·mL-1；熊果酸的浓度依次为3.237 5 μg·mL-1、6.475 0 μg·mL-1、12.950 0 μg·mL-1、25.900 0 μg·mL-1、51.800 0 μg·mL-1、103.600 0 μg·mL-1和207.200 0 μg·mL-1，上机测定。

1.6　色谱条件
色谱柱为Hypersll GOLD C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.2%乙酸铵（85∶15）；流速为0.6 mL·min-1；检测波长为210 nm；柱温为20 ℃。

1.7　样品测定法
称取腾冲白花木瓜粉末约0.5 g，置于离心管中，加入25 mL甲醇，密塞，振荡25 min，浸泡1 h，在20 ℃的条件下超声（功率100 W，频率53 kHz）30 min，冷却至室温，离心10 min（转速4 000 r·min-1），取上清液过0.22 μm滤膜，上机测定。

1.8　齐墩果酸、熊果酸的含量测定
齐墩果酸、熊果酸的含量计算公式为
1000
1000
c V
X
m
××
=
×
（1）式中：X为试样中齐墩果酸、熊果酸的含量，mg·kg-1；c为试样液中齐墩果酸、熊果酸的质量浓度，µg·mL-1；V为被测试样的总体积，mL；m为称取试样的质量，g；1 000—换算系数。

计算结果用重复性条件下获得的3次独立测定结果的算数平均值表示，结果保留3位小数。

2　结果与分析
2.1　齐墩果酸和熊果酸对照品、供试品的色谱图
将对照品、供试品上机检测，对照品、供试品图谱如图1、图2所示。

2.2　前处理条件优化
由表2、表3可知，木瓜中齐墩果酸的最优提取条件为A1B2C2，熊果酸的最优提取条件为A1B2C2，即当提取溶剂为甲醇、浸泡时间为1 h、超声时间为30 min时，齐墩果酸和熊果酸的提取量最优，分别为1.443 mg·kg-1、4.144 mg·kg-1。

mAU
图1　齐墩果酸和熊果酸对照品色谱图
表2　齐墩果酸正交实验结果分析
实验号A试剂B浸泡
时间
C超声
时间
D空白提取量
/（mg·kg-1）
11111 1.130 21222 1.443 31333 1.245 42123 1.111 52231 1.036 623120.580 731220.433 832330.575 933110.643 K1 1.2730.8910.7620.936
K20.909 1.018 1.0660.819
K30.5500.8230.9050.977
R0.7230.1950.3040.158
表3　熊果酸正交实验结果分析
实验号A试剂B浸泡
时间
C超声
时间
D空白提取量
/（mg·kg-1）
11111 3.501 21222 4.144 31333 3.315 42123 3.578 52231 2.781 62312 1.683 73122 1.631 83233 1.817 93311 1.722 K1 3.653 2.903 2.334 2.668
K2 2.681 2.914 3.148 2.486
K3 1.723 2.240 2.576 2.903
R 1.9030.6740.8140.4172.3　标准曲线的绘制
以齐墩果酸浓度为横轴，峰面积为纵轴，绘制标准曲线，见图3、图4。

齐墩果酸和熊果酸分别在3.162 5～202.400 0 μg·mL-1和3.237 5～207.200 0 μg·mL-1时，线性关系良好，齐墩果酸线性方程为Y=8.547 36x-18.619 69，R=0.999 8；熊果酸线性方程为Y=7.885 72x-18.107 12，R=0.999 7。

相关系数＞0.995符合《实验室质量控制规范食品理化检测》（GB/T 27404—2008）要求。

齐墩果酸浓度/（μg·mL-1）
峰
面
积
图3　齐墩果酸曲线图
熊果酸浓度/（μg·mL-1）
峰
面
积
图
4　熊果酸曲线图图2　齐墩果酸和熊果酸供试品色谱图
2.4　回收率试验
取适量的标准溶液和0.5 g的腾冲白花木瓜粉末混合，共4份，按照“1.6”和“1.7”处理后，连续测量4次，确定齐墩果酸和熊果酸的含量。

由表4 可知，齐墩果酸和熊果酸的平均加标回收率分别为96.96%和96.30%，说明本方法准确度良好，符合
GB/T 27404—2008[5]的要求，可行性高。

2.5　不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量的测定
准确称取4种木瓜粉末各0.5 g，每个品种木瓜称取两份，按“1.7”项下的方法制备供试品溶液，在“1.6”的色谱条件下分别进样测定。

由表5可知，不同地区的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量有差异。

表4　加标回收率
化合物样品含量/（μg·mL-1）加标量/（μg·mL-1）测定量/（μg·mL-1）回收率/%平均加标回收率/%
齐墩果酸20.846 02
22.812 698.33
96.96
22.818 198.61
12
32.274 995.24
32.326 495.67
熊果酸66.653 32
68.597 997.23
96.30
68.622 698.46
12
77.946 094.11
78.102 395.41
表5　不同产地含量的测定（n=6）
样品齐墩果酸/（mg·kg-1）熊果酸/（mg·kg-1）腾冲酸木瓜 1.682 0 3.919 3
腾冲白花木瓜 1.085 9 3.214 5
大理酸木瓜 1.833 2 2.310 2
大理白花木瓜 1.981 1 4.087 9
3 结论
本文通过正交实验设计，得到最佳提取条件为提取试剂甲醇、浸泡1 h、超声30 min，在此条件下通过高效液相色谱方法进行检测，能够准确测定出木瓜中的齐墩果酸、熊果酸的含量，说明不同地区的木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量有一定差异。

参考文献
[1] 郭坤元,张美德,吴育中,等.不同产区皱皮木瓜性状及成分指标的比较研究[J].中药材,2020,43(10):2396-2400.
[2] 李聪,熊海容,彭晓蔓,等.木瓜提取物对小鼠脂肪肝的保护作用[J].现代食品科技,2018,34(7):28-34.
[3] 邹妍,鄢海燕.中药木瓜的化学成分和药理活性研究进展[J].国际药学研究杂志,2019,46(7):507-515.
[4] 朱学娟.ICP-MS测定木瓜中26种微量元素[J].惠州学院学报(自然科学版),2009,29(6):15-18.
[5]国家质量监督检验检疫总局.实验室质量控制规范食品理化检测:GB/T 27404—2008[S].北京:中国标准出版社,2008.
结果精密度不佳，检测结果不可靠。

离子色谱法操作过程简单[3]，同时可以测定多种阴离子[4]，且对于硫酸盐含量小于5.0 mg·L-1的水样，检测结果也能得到较好精密度和准确度[5]，但设备和实验过程中使用的耗材成本较高。

由以上可见，两种方法各有优劣，实验室可根据实际检测工作选择适合的检测方法。

参考文献
[1]国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会.中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准: GB 5749—2022[S].北京:中国标准出版社,2022.
[2]国家市场监督管理总局,国家标准化管理委员会.生活饮用水标准检验方法第5部分:无机非金属指标:GB/T 5750.5—2023[S].北京:中国标准出版社,2023.
[3]陈平.高压离子色谱法同时测定生活饮用水中亚硝酸盐、硝酸盐、硫酸盐、氯化物、氟化物[J].江苏预防医学,2023,34(5):592-593.
[4]王宝运.城市饮用水中四种常见无机盐污染物含量监测及去除方法的研究[D].长春:长春工业大学,2022.
[5]赵春华.离子色谱法测定生活饮用水中氟化物、氯化物、硝酸盐、硫酸盐含量的不确定度分析[J].分析仪器,2018(6):117-122.
（上接第79页）。