RP-HPLC法测定新疆哈萨克族常用药材包尔胡特果实中芦丁和槲皮素的含量

RP-HPLC法测定新疆哈萨克族常用药材包尔胡特果实中芦丁
和槲皮素的含量
木合买提·岳尔林;叶力夏提·达那别克;吾古丽汗·努尔哈别克;阿斯亚·拜山伯
【摘要】目的建立测定新疆包尔胡特(Rhamnus cathartica L.)果实中芦丁和槲皮素含量的方法 .方法色谱柱:依利特Hypersil ODS2C18(260mm×4.6mm,5μm)配预柱;芦丁的流动相:甲醇-10mL·L-1乙酸溶液(70:30),槲皮素的流动相:甲醇-4mL·L-1磷酸溶液(35:65);流速均为1.0 mL·min-1;柱温:30℃;芦丁检测波长:257nm,槲皮素检测波长:360nm;进样量均为10μL.结果芦丁质量浓度在
43.4110~165.6000μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9997),平均加样回收率为99.84%,RSD值为1.45%;槲皮素质量浓度在5.4540~87.2640μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.9999),平均加样回收率为99.83%,RSD值为1.49%.结论该方法简便、准确、重复性好,可用于包尔胡特果实原料中芦丁和槲皮素的含量测定.%Objective To establish a method for the determination of rutin and quercetin in Xinjiang Baoerhute (Rhamnus cathartica L.).Methods Elite Hypersil ODS2 C18(260mm×4.6mm,5μm) with pre-column was used.The mobile phase for rutin was methanol-10mL·L-1 acetic acid solution(70:30) and the mobile phase for quercetin was methanol-4mL·L-1 phosphoric acid solution (35:65).The flow rate was 1.0mL·min-1 and the column temperature was 30℃.The rutin detection wavelength was set at257 nm,while the quercetin detection wavelength was set at 360 nm.The injection volume was 10μL.Results The rutin showed good linear relationship in the range of 43.4110-165.6000μg·mL-1(r=0.9997).The average recovery was 99.84%, RSD=1.45%.The quercetin showed good
linear relationship in the range of 5.4540-87.2640μg·mL-1(r=0.9999).The
av-eragere covery was 99.83%,RSD=1.49%.Conclusion This method is simple,accurate,and reproducible.It can be used for the determination of rutin and quercetin in Baoerhute fruit.
【期刊名称】《西北药学杂志》
【年(卷),期】2017(032)002
【总页数】5页(P138-142)
【关键词】芦丁;槲皮素;新疆包尔胡特果实;高效液相色谱法
【作者】木合买提·岳尔林;叶力夏提·达那别克;吾古丽汗·努尔哈别克;阿斯亚·拜山伯【作者单位】新疆医科大学基础医学院药理教研室,乌鲁木齐 830011;新疆哈萨克
医药研究所,乌鲁木齐 830004;新疆哈萨克医药研究所,乌鲁木齐 830004;新疆医科大学基础医学院药理教研室,乌鲁木齐 830011
【正文语种】中文
【中图分类】R282
包尔胡特果实系哈萨克族民间药材，为鼠李科(Rhamnaceae)植物新疆鼠李(Rhamnus cathartica L.)[1-3]的干燥果实，秋季果实成熟后经采收、洗净、去除
杂质阴干而成，包尔胡特是哈萨克语统称的音译。

包尔胡特是哈萨克族民间医师长期使用的药材之一，药用部位主要为茎枝、果实，本品苦涩、性凉，具有清热解毒、疏肝保肝和调节血脂的功能[4]；灌木，高约5～8 m；树皮灰褐色，小枝红褐色，稀被柔毛或无毛，枝端具钝刺；果皮较坚硬，果肉气微，味酸，夏秋季采收；主要分布于欧洲、俄罗斯、西伯利亚南部、高加索北部以及我国新疆北部[5]。

前期研
究表明，包尔胡特果实主要成分为黄酮类成分，黄酮类化合物对自由基[6-9]所致
的肝脏损伤具有良好的功效[10-14]。

目前，国内尚未有关于包尔胡特果实含量测
定的研究报道。

本文采用RP-HPLC法测定包尔胡特果实中芦丁和槲皮素的含量。

1.1 仪器 Agilent 1260 高效液相色谱仪(包括四元梯度泵、自动进样器和紫外检测器，美国安捷伦科技公司)；Mettler-Toledo Group AB104-N电子天平
(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；SK2510HP型数控超声清洗仪(上海科导超
声仪器有限公司)；DT200型电子分析天平(常熟市衡器厂)。

1.1 试药芦丁对照品(批号 20140317，质量分数≥99%),槲皮素对照品(批号20131108，质量分数≥99%)均购于中国食品药品检定研究院；新疆包尔胡特果实(2014年8月采集于北疆地区)，经新疆农业大学草业与环境科学学院植物教研室
吾买尔夏提·塔汉鉴定为鼠李科鼠李属植物Rhamnus cathartica L.的果实；水为沃特浦超纯水；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

2.1 色谱条件色谱柱: 依利特Hypersil ODS2 C18(260 mm×4.6 mm，5 μm)配
预柱；芦丁的流动相: 甲醇-10 mL·L-1乙酸溶液(70∶30)，槲皮素的流动相：甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(35∶65)；流速：1.0 mL·min-1；芦丁的检测波长：257 nm，槲皮素的检测波长：360 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

在上述色谱条件下，理论塔板数不低于3 000，结果见图1。

2.2 对照品溶液的制备
2.2.1 芦丁对照品溶液的制备精密称取在120 ℃干燥至恒质量的芦丁对照品8.280 mg，置于10 mL量瓶中，再加甲醇溶解[15-16]并定容至刻度，摇匀；精密吸取
2 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得质量浓度为0.165 6 mg·mL-1的对照品溶液。

2.2.2 槲皮素对照品溶液的制备精密称取在120 ℃干燥至恒质量的槲皮素对照品5.454 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度
为0.545 4 mg·mL-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备称取包尔胡特果实粉末(过80目筛)2.0 g，置于250 mL的锥形瓶中，加入50 mL的甲醇超声处理30 min(功率200 W，频率40 kHz)，取出，放冷，补足减失质量，摇匀，过滤，过0.45 μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。

称取包尔胡特果实粉末(过80目筛)3.0 g，加入体积分数为80%的甲醇50 mL，称定质量，加热回流1.5 h，放冷，再称定质量，用体积分数为80%的甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液20 mL，精密加入250 mL·L-1的盐酸溶液7 mL，置于85 ℃水浴中水解30 min，取出，迅速冷却，转移至50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察精密吸取对照品储备溶液，配制成质量浓度分别为4
3.411 0，5
4.263 8，67.829 7，84.787 2，10
5.984 0，132.480 0和165.600 0 μg·mL-1的芦丁对照品溶液和质量浓度分别为5.454 0，21.816 0，32.724 0，43.632 0和87.264 0 μg·mL-1的槲皮素对照品溶液，依次进样10 μL，按照2.1项下色谱条件测定峰面积。

以质量浓度X(μg·mL-1)对主峰的峰面积Y进行线性回归，结果芦丁的回归方程为Y=18.664X-3.308 (r=0.999 7)；槲皮素的回归方程为
Y=39.419X-22.702(r=0.999 9)。

结果表明，芦丁质量浓度在43.411 0～
165.600 0 μg·mL-1范围内线性关系良好，槲皮素质量浓度在5.454 0～87.264 0 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 精密度实验精密吸取2.2项下的芦丁和槲皮素对照品溶液，按照2.1项下的色谱条件测定峰面积，连续进样6次，测定芦丁峰面积，结果芦丁和槲皮素峰面积的RSD值分别为1.74%和1.27%，结果表明，仪器精密度良好。

2.6 重复性实验取同一批次的样品，按照2.3项下方法制备6份供试品溶液，按照2.1项下色谱条件测定峰面积，结果芦丁的平均含量为1.482 5 mg·g-1，RSD
值为1.84%，槲皮素的平均含量为0.888 3 mg·g-1，RSD值为2.33%，结果表明，该方法重复性良好。

2.7 稳定性实验精密吸取2.3项下同一供试品溶液，按照2.1项下色谱条件分别在0，1，2，4，6和8 h测定峰面积，结果芦丁和槲皮素的RSD值分别为2.27%和
1.12%，结果表明，供试品溶液在8 h内稳定。

2.8 加样回收率实验
2.8.1 芦丁回收率的测定取同一已知芦丁含量的供试品溶液9份，每份1 g，3份为1组，分别精密加入质量浓度为1.480 0 mg·mL-1的芦丁对照品溶液1 mL，再按照2.3项下方法制备供试品溶液，按照2.1项下色谱条件依法测定含量，计算回收率，结果见表1。

2.9 样品测定取不同产地的3批样品，按照2.3项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，分别对新疆新源县、新疆托里县及新疆伊宁县采摘的包尔胡特果实进行同法操作，实验结果显示，新疆新源县、新疆托里县和新疆伊宁县包尔胡特果实中芦丁的含量分别为1.487 9，2.013 4和2.536 7 mg·g-1，槲皮素的含量分别为0.885 9，1.185 3和1.049 5 mg·g-1。

本实验在操作中，先分别对已鉴定的包尔胡特果实用甲醇提取[17-19]进行制备，再用RP-HPLC法，以芦丁和槲皮素为对照品，按照2.1项下色谱条件，流动相分别为甲醇-10 mL·L-1乙酸溶液(70∶30)和甲醇-4 mL·L-1磷酸溶液(35∶65)进行含量测定。

通过方法学验证，该方法能有效检测出包尔胡特果实中主要成分的含量。

实验中对包尔胡特枝和叶中芦丁和槲皮素的含量进行了同法测定，结果显示，芦丁和槲皮素含量分布为：叶(芦丁0.838 4 mg·g-1、槲皮素0.777 8 mg·g-1)，枝:(芦丁0.568 8 mg·g-1、槲皮素0.375 9 mg·g-1)。

包尔胡特不同部位芦丁和槲皮素含量的分布为：果实>叶>枝。

研究结果表明，不同产地包尔胡特果实中芦丁含量的分布情况为新疆伊宁县>新疆托里县>新疆新源县，不同产地包尔胡特果实
中槲皮素含量的分布情况为新疆托里县>新疆伊宁县>新疆新源县。

结果表明，包尔胡特果实、叶及枝中均含有黄酮类化合物，但比较含量测定结果显示，包尔胡特果实与叶、枝中黄酮类化合物含量相差较大。

关于新疆哈萨克药材包尔胡特果实的含量测定未见文献报道，因此本研究具有一定的创新意义。

研究结果表明，在新资源的研究中，促进包尔胡特果实的药用开发利用，对资源保护具有重要意义。

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