正交设计优选细果角茴香中总黄酮的提取工艺条件

正交设计优选细果角茴香中总黄酮的提取工艺条件
崔廷金
【摘要】[目的]研究细果角茴香中总黄酮的最佳提取工艺,并测定其含量.[方法]以总黄酮含量为考察指标,以甲醇浓度、料液比和提取时间为考察因素,通过正交试验确定提取总黄酮的最佳条件.[结果]吸收曲线测定结果显示,总黄酮在510 nm处有最大吸收.正交试验结果可知,最佳的提取条件为A1B2C2,即甲醇浓度为50％,料液比为1∶15(g/ml),超声提取2次,每次提取时间为20 min;在此条件下,总黄酮的含量最高为48.63 mg/g.[结论]该方法操作简捷,结果准确可靠,提取效率高.
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2013(000)025
【总页数】2页(P10282-10283)
【关键词】细果角茴香(Herb of Thinfruit Hypecoum);超声波法;总黄酮;提取工艺;含量测定
【作者】崔廷金
【作者单位】青海省西宁市八一路陆军四医院,青海西宁810007
【正文语种】中文
【中图分类】S567
细果角茴香(Herb of Thinfruit Hypecoum)为罂粟科(Papaveraceae)角茴香属(Hypercom)一年生草木植物节裂角茴香(Hypercom leprosarium Hook.f.et Thomas)的干燥全草［1］，别名角茴香(《青海常用中草药手册》)，巴尔巴大、
哇日哇哒(藏名)。

其味苦、性凉，具有解热镇痛和消炎解毒的功效［2］，主治伤
风感冒、头痛、四肢关节疼痛和胆囊炎等，并能解食物中毒［3］。

翻阅文献发现，细果角茴香还能治流感、咽喉肿痛和目赤等症［4］。

药理研究表明，细果角茴香中含有多种生物碱成分，含量约为0.38%;其中分离出原阿片碱85.0%、血根碱
0.1%、白屈菜红碱及黄连碱痕迹量，无定形非酚型碱7.8%，无定形酚型碱2.7%。

而且，细果角茴香中还含有黄酮类成分，而黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化和降糖等多种生理活性，对藏药生产有很大的意义。

因此，笔者以总黄酮含量为考察指标，采用分光光度法进行测定［7－9］，并以甲醇浓度、料液比和提取时
间为考察因素，通过正交试验确定提取总黄酮的优化条件，以期为细果角茴香的进一步开发研究提供科学依据和数据参考。

1.1 材料
1.1.1 研究对象。

细果角茴香，于2011年8月采收于青海互助县北山，经西北高
原生物研究所卢学峰研究员鉴定为节裂角茴香(Hypercom leprosarium Hook.f.et Thomas)的全草。

1.1.2 主要仪器。

T6新悦－可见分光光度计，购自南京华璧科学仪器有限公司;N－1100旋转蒸发仪，购自上海爱朗仪器有限公司;AL204电子天平，购自梅特勒－
托利多仪器(上海)有限公司;SHB－3循环水多用真空泵，购自上海一科仪器公
司;KQ300B型超声波清洗器，购自昆山市超声仪器有限公司;FZ102微型植物试样粉碎机，购自北京永光明医疗仪器厂。

1.1.3 主要试剂。

芦丁对照品，购自中国药品生物制品检定所;其他试剂均为分析纯，市售;水为蒸馏水，实验室自制。

1.2 方法
1.2.1 标准溶液的制备。

将芦丁标样于120℃干燥至恒重，精确称取10.0 mg，用浓度50%的甲醇溶液溶解，并用浓度50%的甲醇溶液定容于50 ml的容量瓶中，
摇匀，即得浓度为0.2 mg/ml的标准溶液。

1.2.2 最佳波长的选择。

准确移取5.00 ml“1.2.1”中制备的芦丁标液，于25 ml
容量瓶中，用浓度30%乙醇稀释至10 ml，然后加入0.7 ml浓度5%的NaNO2
溶液，摇匀;接着立刻加入0.7 ml浓度10%的Al(NO3)3溶液，摇匀，放置5 min;再加入5.0 ml浓度1 mol/L的NaOH溶液;最后用浓度30%的乙醇定容至刻度，混合后摇匀，放置5 min，以试剂空白为参比，在450～600 nm波长处测定吸收光谱，根据光谱图确定最佳测定波长。

1.2.3 供试品溶液的制备。

准确称取1.000 g经干燥粉碎处理后的细果角茴香，置于锥形瓶中，加入15 ml浓度50%的甲醇，超声提取2次，每次20 min，抽滤，用旋转蒸发仪回收溶剂，浓缩后用无水甲醇定容于50 ml的容量瓶中，即得。

1.2.4 方法学考察。

(1)线性关系的考察。

分别移取0、0.50、1.00、2.00、3.00、4.00 和5.00 ml“1.2.1”中制备的芦丁标准溶液，于25 ml容量瓶中，然后按照“1.2.2”中相同方法进行操作;以试剂空白为参比，在510 nm处测吸光度值。

以芦丁的浓度C(mg/ml)为横坐标，以吸光度值A为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线，计算标准曲线方程。

(2)精密度试验。

准确移取3.00 ml“1.2.1”中制备
的芦丁标准溶液于25 ml容量瓶中，按照“1.2.2”中相同方法进行操作;测定6次吸光度值，计算吸光度值RSD。

(3)重复性试验。

准确移取2号样品液各6份，按照线性关系下的方法步骤测定吸光度值，计算RSD。

(4)稳定性试验。

分别于芦丁
标准品溶液及样品溶液显色后0、5、15、30、60、90 和 120 min 进行吸光度值测定，并计算RSD。

1.2.5 正交试验。

准确称取1.000 g经干燥粉碎处理后的细果角茴香，置于锥形瓶中，按照表1中参数进行超声提取、抽滤，提取2次，用旋转蒸发仪回收溶剂，
浓缩后用无水甲醇定容于50 ml容量瓶中。

以总黄酮含量为考察指标，以甲醇浓度、料液比和提取时间为考察因素，进行正交试验。

2.1 最佳波长的测定图1表明，对照品溶液在510 nm波长处有最大吸收，故选择510 nm为最佳测定波长。

2.2 方法学考察 (1)线性关系的考察。

计算得标准曲线方程为:Y=8.857 1X －0.003 2，R=0.999 6。

试验结果表明，在0～0.04 mg/ml范围内，芦丁浓度与吸光度的线性关系良好。

(2)精密度试验。

计算得6次吸光度值的RSD为2.01%，表明该方法精密度良好。

(3)重复性试验。

计算得吸光度值的RSD为1.96%，表明重复性良好。

(4)稳定性试验。

试验结果表明，芦丁标准液和样品液在显色90 min内稳定。

2.3 正交试验由表2可知，2号试验的结果最好，对应的优化组合为A1B2C2;由极差分析表明，3个因数对结果影响的主次顺序为B＞C＞A。

由正交条件的均匀可比性得知，各因数的最佳水平组合起来就是最优水平组合，即A1B2C2，与直观分析结果一致。

试验结果表明，超声波法提取的最佳条件为 A1B2C2，即甲醇浓度为 50%，料液比为1∶15(W/V，g/ml，下同)，超声提取2次，每次提取时间为20 min;在此条件下，总黄酮含量为48.63 mg/ml。

2.4 验证试验准确称取经干燥粉碎处理后的一种产地的细果角茴香各1.000 g，置于圆底烧瓶中，用以上得出的最佳提取条件进行提取浓缩，然后按照“线性关系的考察”下方法进行测定，并计算细果角茴香中总黄酮的含量，发现结果与正交试验结果一致。

试验结果表明，超声波法提取细果角茴香的最佳条件为A1B2C2，即甲醇浓度为50%，料液比为1∶15，超声提取2次，每次提取时间为20 min。

该方法操作简捷，结果准确可靠，为细果角茴香的进一步研究开发提供了一定的科学依据和数据参考。

【相关文献】
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