茵陈蒿汤不同提取物对黄疸模型小鼠的药效比较

茵陈蒿汤不同提取物对黄疸模型小鼠的药效比较
安莉萍;窦志华;罗琳;陈敏;杨爱华
【摘要】Objective To screen the liver protection and jaundice elimination fraction of yinchenhao decoction ( YCHD) . Methods The mice jaundice model was induced by i. g. alpha-naphthylisothiocyanate ( ANIT). The total biIirubin(T-BiT.) , alkaline phosphatase ( ALP) , alanine aminotransferase ( ALT) and total bile acid (TBA) in the serum were determined after intragastric administration of low, middle, and high dose of 75% ethanol extract of YCHD ( EE) and water extract of the residue of YCHD extracted by ethanol( WE) , respectively. And the bile secretion of mice was determined as well. Results Compared with the model group, T-BiL, ALP, ALT and TBA of low dose EE group and T-BiL, ALP, ALT of high dose WE group decreased significantly ( P<0. 01 or P<0. 05). In addition, bile secretion of the low and middle EE groups, high dose WE group increased significantly (P<0. 05). Conclusion Both EE and WE of YCHD decoction possess the liver protection and jaundice retreating effect on ANIT-induced jaundice model of mice.%目的筛选茵陈蒿汤保肝退黄的药效部位.方法采用α-萘异硫氰酸酯(ANIT)制备小鼠黄疸模型,分别灌胃给予低、中、高剂量茵陈蒿汤75％乙醇提取物及其药渣水提取物,观察小鼠血清总胆红素(T-BiL)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)及胆汁分泌量.结果与模型组比较,醇提部位低剂量组T-BiL、ALP、ALT、TBA及水提部位高剂量组T-BiL、ALP、ALT显著下降(P＜0.01或P＜0.05)；醇提部位低、中剂量组及水提部位高
剂量组胆汁分泌量明显增加(P＜0.05).结论茵陈蒿汤醇提部位及醇提后的水提部位具有一定保肝退黄作用.
【期刊名称】《医药导报》
【年(卷),期】2012(031)011
【总页数】3页(P1407-1409)
【关键词】茵陈蒿汤;黄疸;保肝退黄;药效
【作者】安莉萍;窦志华;罗琳;陈敏;杨爱华
【作者单位】南京中医药大学药学院,210046;南通大学附属南通第三医院药剂科,226006;南通大学医学院药理教研室,226001;南通大学附属南通第三医院药剂科,226006;南京中医药大学药学院,210046
【正文语种】中文
【中图分类】R286;R965
茵陈蒿汤始载于汉代张仲景所著《伤寒论》，由茵陈18 g、栀子12 g和大黄6 g 组成，具有清热、利湿、退黄功效，为中医治疗湿热黄疸第一要方，历代医家对其推崇备至[1]。

现代研究表明，茵陈蒿汤具有利胆退黄、抗肝损伤、抑制肝纤维化等作用，在肝病治疗领域有广阔应用前景[2]。

筛选该方剂保肝退黄药效部位，对开发成分基本清楚、质量可控、疗效稳定的创新中药，从更深层次上挖掘这一经典名方的现代应用价值具有重要意义。

王立强、史红等[3-4]采用四氯化碳(CCl4)诱导肝损伤小鼠模型，比较该方剂乙醇提取物与水提取物保肝效果，前者研究结果显示乙醇提取物优于水提取物，后者研究结果则显示水提取物优于乙醇提取物。

茵陈
蒿汤传统的用法为水煎，在认定乙醇提取有效的前提下，其药渣中是否还存在水溶性有效物质?有鉴于此，笔者在本实验中先采用乙醇提取，再用水提取药渣，以α-萘异硫氰酸酯(alpha-naphthylisothiocyanate，ANIT)诱导的胆汁淤积小鼠黄疸
模型对茵陈蒿汤进行了保肝退黄的药效部位筛选研究。

1 材料与方法
1.1 试药茵陈、栀子、大黄分别购自南通苏北医药公司、江西樟树天齐堂中药饮片有限公司、甘肃礼县春天药业有限公司，经江苏省南通市药品检验所龚旭东主任中药师鉴定，为菊科植物滨蒿(Artemisia scoparia Waldst et Kit.)干燥地上部分、
茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)干燥成熟果实和蓼科植物掌叶大黄(Rheum palmatum L.)干燥根及根茎。

1.2 动物SPF级ICR小鼠，雌雄各半，体质量(19.08±3.85)g，由南通大学动物实验中心提供，动物使用许可证号:SYXK(苏)2007-0021。

1.3 仪器日立7170全自动生化分析仪(日本日立公司)，80-2离心机(江苏宏凯仪器厂)。

1.4 茵陈蒿汤提取物的制备将茵陈剪碎，栀子、大黄粉碎成粗粉，按3∶2∶1比例混合，75%乙醇回流提取3次(8倍量1 h，8倍量1 h，6倍量0.5 h)，合并回流液，减压回收乙醇，浓缩至每毫升相当于生药1.61 g的浸膏，作为醇提浸膏;以上75%乙醇回流以后的药渣80℃烘干，加去离子水煎煮提取3次(14倍1 h，10倍
1 h，10倍0.5 h)，合并煎煮液，浓缩至每毫升相当于生药1.61 g的浸膏，作为
水提浸膏。

临用前加纯化水稀释。

1.5 模型的制备与给药ICR小鼠80只，随机分成8组各10只:正常组，模型组，
醇提部位低、中、高剂量组(4.68，9.36，18.72 g·kg－1，以生药计)，水提部位低、中、高剂量组(剂量同醇提部位组)。

正常组和模型组灌胃给予0.9%氯化钠溶液，其余各组给予相应药物，qd，连续12 d。

除正常组外，其余各组于第1，4，
7，10天按0.80 mg·(10 g)－1灌胃给予ANIT。

1.6 检测指标第12天所有小鼠先禁食12 h，末次给药1 h后经颈动脉取血，收集血液，摘取胆囊。

血液4℃下静置6 h，4 000 r·min－1离心10 min，取血清，自动生化分析仪检测总胆红素(T-BiL)、碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆汁酸(TBA)。

取胆囊称质量，刺破挤掉胆汁，再称质量，两次质量差即为胆汁质量[5]。

1.7 统计学方法数据以均数±标准差(±s)表示，多组间均数比较采用SPSS15统计软件进行单因素方差分析并进行LSD检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 血清生化指标与正常组比较，模型组小鼠血清T-BiL、ALP、ALT、TBA均明显升高(P＜0.01)，说明造模成功。

与模型组比较，茵陈蒿汤醇提部位低剂量组T-BiL、ALP、ALT、TBA均显著下降(P＜0.01或P＜0.05)，水提部位高剂量组T-BiL、ALP、ALT显著下降(P＜0.05)，见表1。

2.2 胆汁分泌量与正常组比较，模型组小鼠胆汁分泌量显著减少(P＜0.01)，提示造模成功。

与模型组比较，茵陈蒿汤醇提部位低、中剂量组胆汁分泌量明显增加(P＜0.05或P＜0.01)，水提部位高剂量组也明显增加(P＜0.01)，见表1。

表1 茵陈蒿汤醇提与水提部位对小鼠血清生化指标的影响Tab.1Effect of ethanol and water extract of yinchenhao decoction on serous biochemical indexes of mice±s与模型组比较，*1P＜0.05，*2P＜0.01;与正常组比较，*3P＜
0.01Compared with the model group，*1P＜0.05，*2P＜0.01;Compared with the normal group，*3P＜0.01?
3 讨论
本实验结果显示，茵陈蒿汤醇提取部位及其药渣的水提取部位均存在保肝退黄药效物质。

醇提低剂量组血清学指标均明显改善，中剂量组仅胆汁分泌量增加，而高剂
量组各项指标均无明显改善，在实验过程中笔者也观察到高剂量组动物一般状况相对较差，说明随剂量增加药效反而减弱，甚至产生不良反应，这与王喜军等[6]的
研究结果一致，其原因有待进一步研究。

但据实验初步分析，其与大剂量的栀子及大黄具有一定的肝毒性有关。

栀子、大黄分别所含的栀子苷、蒽醌类成分，既是利胆保肝作用的活性成分[7-8]，剂量过大又具有一定的肝毒性[7-9]。

据文献报道，中、高剂量组小鼠栀子每天灌胃剂量折合成生药分别为3.12和6.24 g·kg－1，小鼠连续每天灌胃栀子提取物折合成生药5.96 g·kg－1连续6周[10]、4.0 g·kg－1连续4 d[11]可产生明显的肝脏毒性。

参考文献
[1]邓中甲.方剂学[M].北京:中国中医药出版社，1998:293.
[2]梁会.茵陈蒿汤的研究进展[J].贵阳中医学院学报，2011，33(1):69－71.
[3]王立强，王喜军.茵陈蒿汤乙醇提取物与水提取物对小鼠保肝作用的比较[J].中国医院药学杂志，2002，22(5):200－201.
[4]史红，程丽艳，叶益萍，等.“茵陈蒿汤”复方有效部位群的提取及药效筛选[J].浙江省医学科学院学报，2007，4(12):19－24.
[5]PAUMGARTNER G，BEUERS U.Mechanisms of action and therapeutic efficacy of ursodeoxycholic acid in cholestatic liver disease[J].Clin Liver Dis，2004，8(1):67－81.
[6]王喜军，王萍，孙晖，等.茵陈蒿汤对ANIT诱导的急性肝损伤的保护作用[J].中医药学报，2007，35(4):17－21.
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[8]傅兴圣，陈菲，刘训红，等.大黄化学成分与药理作用研究新进展[J].中国新药杂志，2011，20(16):1534－1538，1568.
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[10]林庆勋，徐列明.栀子水提液对小鼠的肝毒性及健脾保肝方的预防作用[J].上海
中医药大学学报，2009，23(6):59－63.
[11]刘志强，黄嬛，方向明.中药山栀的特殊肝脏毒性[J].浙江医科大学学报，1988，17(5):221－223.。