环介导等温可视扩增(LAMP)检测禽肺炎病毒方法的建立

合集下载

1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。

ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｕｂｌｉｃｓｈｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋｔｏｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓｉｘｄｉｓｔｉｎｃｔｇｅｎｏｍｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｈｅｔＦｇｅｎｅｏｆＡＰＶ．ＡＬＡＭＰａｓｓａｙｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＡＰＶｔｈｒｏｕｇｈｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎａｎｄｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｃｌｉｎｉｃａｌｃｈｉｃｋｅｎｓａｍｐｌｅｓ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅＬＡＭＰａｓｓａｙｃｏｕｌｄｄｅｔｅｃｔＡＰＶｓｔｒａｉｎｓ，ｄｉｄｎｏｔｃｒｏｓｓ．ｒｅａｃｔｗｉｔｈｏｔｈｅｒａｖｉａｎｐａｔｈｏｇｅｎｓ．Ｔｈｅｌｉｍｉｔｏｆｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ１Ｏ０＆ｏｆＩＡｔｅｍｐｌａｔｅｏｆＡＰＶＴｈｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄＬＡＭＰａｓｓａｙｃｏｕｌｄｂｅａｇｏｏｄａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｐｅｃｉｉｆｃｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆＡＰＶｆｒｏｍｃｌｉｎｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ．
中国动物检疫２０１３年第３０卷第３期
环介导等温可视扩增（ＬＡＭＰ）检测禽肺炎病毒方法的建立
谢志勤，谢芝勋，邓显文，谢丽基，庞耀珊，刘加波，范晴，罗思思（广西壮族自治区兽医研究所，广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁５３０００１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｏｂｊｅｃｔｉｖｅｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｔｏｄｅｖｅｌｏｐａｎｄｅｖａｌｕａｔｅａｌｏｏｐ．ｍｅｄｉａｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍａｌａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ（ＬＡＭＰ）ｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
23特异性实验结果用本实验建立的rtlamp方法进行检测只有apvmn10的rna为阳性结果肉眼观察可见淡黄绿色在紫外光下发出明亮的黄绿色荧光琼脂糖凝胶电泳呈现特征性梯形条带而对照的ndlasotaaih9mdvillvmass41aevanrcos1133c481ecoliomg的检测结果均为阴性肉眼观察没见淡黄绿色在紫外线下也没见荧光琼脂糖凝胶电泳没有特征性梯形条带出现l
ＸｉｅＺｈｉｑｉｎ，ＸｉｅＺｈｉｘｕｎ，ＤｅｎｇＸｉａｎｗｅｎ，ＸｉｅＬｉｊｉ，ＰａｎｇＹａｏｓｈａｎ，ＬｉｕＪｉａｂｏ，ＦａｎＱｉｎｇ，ＬｕｏＳｉｓｉ
（ＧｕａｎｇｘｉＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＧｕｎｇａｘｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｙｒｏｆＡｎｉｍａｌＶａｃｃｉｎｅａｎｄＮｅｗＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，５３０００１，Ｎａｎｎｎｉｎｇ，Ｃｈｉｎａ）
摘
要：建立一种快速简单检测禽肺炎病毒的方法。根据已发表的禽肺炎病毒的Ｆ基因序列，设计并合成６条特异扩增禽
ห้องสมุดไป่ตู้
肺炎病毒Ｆ基因片段的引物，通过条件优化，成功建立了针对禽肺炎病毒的环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）检测法，测定其特异性和敏感性，并对采集的禽临床样品的ＤＮＡ分别进行了检测。结果表明该法只检出禽肺炎病毒；敏感性扩增结果表明，Ｌａｍｐ检测禽肺炎病毒为１００ｆｇ的ＲＮＡ模板。该ＬＡＭＰ方法有简便、快速和特异性高的优点，可用于临床上对禽肺炎病毒的快速检测。关键词：禽肺炎病毒；环介导等温扩增（ＬＡＭＰ）；检测
中图分类号：￥８５１．３３文献标识码：Ｃ文章编号：１００５．９４４Ｘ（２０１３）０３．００４８．０４
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａＬｏｏｐ－ＭｅｄｉａｔｅｄＩｓｏｔｈｅｒｍａｌＡｍｐｌｉｉｃｆａｔｉｏｎＡｓｓａｙｆｏｒＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＡｖｉａｎＰｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ
ｏｆａｖｉａｎｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓ（ＡＰＶ）．ＡｓｅｔｏｆｓｉｘｓｐｅｃｉｉｆｃｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｐｒｉｍｅｒｓｗｅｒｅｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅＡＰＶＦｇｅｎｅ