标本溶血对固相免疫层析法检测降钙素原结果影响的实验研究

标本溶血对固相免疫层析法检测降钙素原结果影响的实验研究王亚南
【摘要】目的评估标本溶血对固相免疫层析法检测降钙素原(procalcition,PCT)结果的影响.方法收集2016年11月无溶血标本共66例,其中PCT<0.5 ng/ml组为22例,0.5 ng/ml≤PCT<10 ng/ml组为22例,PCT≥10 ng/ml组22例.将66例无溶血标本制备成不同血红蛋白浓度(0,3,6,9,12,15 g/L)的样本,离心后取50μl血浆,采用固相免疫层析法检测PCT值,计算经稀释因子校正后PCT值,分析不同溶血程度的标本对PCT结果的影响.结果0.5 ng/ml≤PCT<10 ng/ml组中,当血红蛋白浓度为12,15 g/L时,PCT值与对照组相比差异有统计学意义
(t=6.71,P=0.0001;t=6.91,P=0.0000),PCT值是溶血前PCT值的65％和56％.PCT≥10 ng/ml组中,当血红蛋白浓度为9,12,15 g/L时,PCT值与对照组相比差异有统计学意义(t=4.04,P=0.0002;t=6.91,P=0.0000;t=4.04,P=0.0002),PCT 值是溶血前PCT值的0.73％,0.61％和0.53％.结论溶血对PCT检测有干扰作用,使得PCT值假性偏低.医务人员应做好分析前质量控制,尽量避免标本溶血.
【期刊名称】《现代检验医学杂志》
【年(卷),期】2018(033)004
【总页数】4页(P127-130)
【关键词】降钙素原;溶血;固相免疫层析法
【作者】王亚南
【作者单位】苏州市立医院南京医科大学附属苏州医院检验科,江苏苏州 215002
【正文语种】中文
【中图分类】Q503
降钙素原(procalcitonin，PCT)是由116个氨基酸组成的糖蛋白，是降钙素(calcitonin，CT)的前体。

当机体发生细菌感染后血液中PCT水平会明显升高［1］，PCT检测细菌感染时灵敏度较高，特异性较强，尤其在败血症以及脓毒症的早期诊断中具有十分重要的意义，在临床上的应用日益广泛［2～5］。

固相免疫层析法检测 PCT，简便快捷，但在实际临床检测过程中常会遇到溶血的标本。

产品说明书中虽然提到溶血样本对PCT结果有干扰，但表述的十分模糊。

目前标本溶血对固相免疫层析法检测PCT影响的文献比较少，检验医生对临床医生进行结果解释时由于没有充足的文献支持，不能给出更客观的解释。

故本文就样本溶血对固相免疫层析法检测PCT结果的影响进行了实验评估，旨在提供量化的数据说明。

1 材料与方法
1.1 实验样本 2016年11月收集我院住院病人无溶血标本共66例，其中PCT＜0.5 ng/ml组为22例，0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml组为 22 例，PCT≥10
ng/ml组22例，本研究经医院伦理委员会同意并签署病人知情同意书。

采集病人外周血标本2 ml于EDTA-K2抗凝管中，分离血浆，置4℃低温保存待测。

1.2 试剂和仪器本实验使用的降钙素原(PCT)检测试剂盒(免疫层析法，血浆型)和免疫定量分析仪(MD-QMT001)来自武汉明德生物科技股份有限公司。

1.3 方法
1.3.1 溶血样本制备:收集4个PCT值为0.1 ng/ml的无溶血血液标本，静置后吸去血浆，将这4个弃去血浆后的标本充分混匀(混匀后标本量约为3 ml)。

将混匀
后的标本加生理盐水(37 ml)，3000 r/min离心5 min后吸去上清。

如此反复洗
涤3次，最后得到3 ml左右的红细胞悬液。

加2 ml蒸馏水使其溶血，然后置－20℃冻存。

在冻存当日下午和隔日上午再各冻融一次，使其完全溶血。

经洗涤、
加蒸馏水及反复冻融使其完全溶血，制备成血红蛋白浓度为150 g/L的样本，作
干扰物待用。

将66例无溶血标本制备成不同血红蛋白浓度(0，3，6，9，12，15 g/L)的溶血样本，见表 1。

3000 r/min离心5 min后取50 μl血浆进行PCT检测。

将血红蛋白干扰浓度为0 g/L的标本作为对照组。

表1 不同血红蛋白浓度的溶血样本制备表无溶血血浆标本(μl) 150 g/L血红蛋白干扰物(μl) 终体积(μl) 血红蛋白终浓度(g/L) PCT值稀释校正因子4546474849505
4 3 2 1 050505050505015129 6 3 00.900.920.940.960.981.00
1.3.2 PCT检测方法:①打开免疫定量分析仪及PCT检测操作程序。

②将PCT检测卡从密封的铝箔袋中取出，置于干净平坦的台面上。

③用加样枪垂直滴加50 μl血浆于检测卡加样孔内。

④上机检测:加样后的检测卡静置10 s即可放入测试窗(加
样孔侧靠近操作者)，点击“孵育检测”，15 min后自动读取定量结果，并将检测结果显示在电脑屏幕上。

1.4 统计学分析运用SPSS17.0软件进行统计和数据分析，对数据采用单样本Kolmogorov-Smirnov检验法作正态性分布检验，符合正态性分布的两组样本比较，采用成组设计的两样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 PCT＜0.5 ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果见表2。

不同血红蛋白浓度干扰后的PCT值与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表2 PCT＜0.5 ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果(珋x±s)血红蛋白浓
度(g/L) PCT检测值(ng/ml) 经稀释因子校正后PCT(ng/ml) 与溶血前相比(%) t值P值0(对照)3 6 9
12150.27±0.080.26±0.060.26±0.050.25±0.060.26±0.070.27±0.080.28±0.08 0.26±0.060.27±0.050.27±0.060.28±0.070.30±0.081009296961001070.000.2 00.110.100.000.181.00000.84240.91610.92081.00000.8605
2.2 0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果见表3。

当血红蛋白浓度为12，15 g/L时，PCT值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。

PCT值是溶血前PCT值的65%和56%。

表3 0.5 ng/ml≤PCT＜10 ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果(珋x±s)血红蛋白浓度(g/L) PCT检测值(ng/ml) 经稀释因子校正后PCT(ng/ml) 与溶血前
相比(%) t值 P值0(对照)3 6 9
12153.62±0.023.70±0.023.06±0.052.75±0.032.16±0.041.85±0.043.62±0.02 3.78±0.023.19±0.052.93±0.032.35±0.042.06±0.04100104888165560.000.08 0.511.026.716.911.00000.93260.61360.31470.00010.0000
2.3 PCT≥10 ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果见表4。

当血红蛋白
浓度为9，12，15 g/L时，PCT值与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。

PCT值是溶血前PCT值的73%，61%和53%。

表4 PCT≥10ng/ml组不同血红蛋白浓度干扰实验检测结果(珋x±s)血红蛋白浓度(g/L) PCT检测值(ng/ml) 经稀释因子校正后PCT(ng/ml) 与溶血前相比(%) t值 P 值0(对照)3 6 9
121544.15±2.2043.06±2.3040.08±1.9030.67±1.8024.73±1.3021.06±2.1044. 15±2.2043.93±2.3541.75±1.9032.62±1.8226.88±1.3423.43±2.0410******* 61530.000.070.834.046.706.911.00000.94580.41370.00020.00010.0000
3 讨论降钙素原(PCT)对于快速鉴别感染与非感染所致的炎性反应具有重要的意义，检测PCT对临床的诊疗具有非常大的帮助［6～9］。

随着生物技术的发展，降钙
素原固相免疫层析法的灵敏度得到提高，因其简便、快速，在门急诊检验应用较广。

但在临床实际使用过程中往往会遇到溶血的标本，特别是新生儿发生感染需要检测PCT时，由于采血难度大，很容易造成标本溶血。

目前这些溶血标本对固相免疫
层析法检测PCT的影响相关报道较少，产品说明书中虽然提到溶血样本对检测结
果有干扰，但表述的十分笼统模糊。

目前对PCT在感染性疾病临床早期诊断价值
方面研究的文章较多［10～12］，而对于检测时溶血对固相免疫层析法检测PCT
的影响的文献则很少。

在日常检验工作中检测PCT时，对样本溶血影响PCT检测结果，检验医生和临床医生沟通时苦于没有文献支持，无法提供客观的数据说明。

这就更迫切的需要进行溶血干扰对固相免疫层析法检测PCT检测影响的评估。

本
文就此问题进行了研究。

用5个不同血红蛋白浓度和3个不同PCT浓度组进行实
验分析，实验结果表明，溶血对PCT检测有干扰，溶血程度越严重对PCT检测的干扰作用越大，使得PCT值假性偏低。

目前临床上设定的PCT的正常参考值为＜0.5 ng/ml，而我们的干扰实验研究证明，对于PCT≥0.5 ng/ml的标本，当血红
蛋白浓度增高时，对PCT检测会产生干扰。

由于溶血产生的干扰现象，使得PCT
假性偏低，最多的可降低至溶血前PCT值的53%，导致了PCT的假阴性结果，
这会延误临床医生对患者感染的早期治疗时机，对患者的疾病诊治造成一定的影响。

临床上由于采血方式方法的不当、标本运送环节及离心分离血浆过程中操作不当，都会造成溶血的发生。

我们通过研究将样本中溶血干扰因子对固相免疫层析法检测PCT的研究结果量化表示，提醒我们检验医务人员在采样过程中一定要熟练操作，减少人为因素导致的标本溶血，并且在标本运送及整个检测过程中做到一丝不苟，认真负责地对待每一份标本。

对溶血标本应及时通知临床退检，保证PCT检测的
准确性。

同时和临床做好充分的沟通和解释工作，有利于患者疾病的正确诊治。

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