甘蓝型油菜陕油8号杂交种纯度的SRAP鉴定

１ ２ １ 田 间纯度 鉴 定 ． ．
关 键 词 ： 交种 ；纯 度 ；分 子 标 记 杂
油菜 是杂 种 优势 明显 的油 料 作 物 ， 杂 交 种 其
在 产量 、 质及 抗性 方 面较 常 规 种 具 有 明 显 的 优 品
行 ， 问 苗 。在 苗 期 ， 薹 期 调 查 植 株 生 长 一 致 不 抽
性 ， 花期 分 ３次 逐 株调 查 育 性 ， 在 调查 不育 株 率 ， 记 录调 查结 果 ， 跟室 内鉴 定结 果进 行 比较 。 并 １ ２２ Ｄ ． ． ＮＡ 的提 取 及样 品 ＤＮＡ 池 的 构 建 将 亲 本种 子及 网繁 制种 的种 子分 别 培养 在 １ ｍ× ０ｃ
陕
西
农
业
科
学
甘 蓝 型 油 菜 陕 油 ８号 杂 交 种 纯 度 的 Ｓ ＡＰ鉴 定 Ｒ
白红涛 张 海斌 赵 宁娟 王敬 昌 ， 万 虎 胡珍 萍 董振 生。 ， ， 梅 ， ， （． １ 宝鸡 市农 业科 学研 究所 ，陕 西 岐 山 ７ ２ ０ ；． １ １ ０ ２ 西北农 林科 技 大 学 农 学 院 ， 西 杨 凌 陕 ７２０ ） １ １ ０
摘 要 ： １ ５对 Ｓ Ｐ 引 物 对 陕 油 ８号 及 其 父 母 本 扩 增 ， 用 ９ ＲＡ 筛选 出 ５对 偏 父 本 的 引物 组 合 、 ２对 偏 母 本 引物 组 合、 １对 互 补 引物 组 合 。 用 互补 型 引 物 组 合 对 杂 种 纯 度 进 行 鉴 定 ， 果 为 ８ ． ， 于 大 田 鉴 定 结 果 ９ ． 。 结 ８７ 低 １３
１ ３条 反 向引 物 两 两 搭 配 组 合 成 的 １ ５对 引 物 组 ９ 合 ， 别 对 三 个 样 品 的混 合 Ｄ 分 ＮＡ 池 ： 本 混 合 父 池、 母本 混 合池 及 杂 交 种 混合 池 进 行 Ｐ Ｒ 扩 增 。 Ｃ 对 在三 个混 合 ＤＮＡ 池 间表 现 有 多 态 性 的引 物 ，
２ ｍ 的塑 料 盒 中 。 内置 ２层 吸 水 纸 ， 蒸 馏 水 ０ｃ 用
充 分浸 湿 ， 种 子在 １ 的双 氧水 中浸 泡 ２ｈ 用 将 ％ ，
性 不 育为 主 ， 用 细 胞 质雄 性 不 育 系 三 系 配套 培 利
育 的杂 交种 推广 面 积最 大 。生产上 广泛 使用 的 细 胞 质雄 性不 育 系多 数 属 于 温 度 敏感 型 ， 在低 温 或 高 温 天进行 快速 、 效 的鉴 定 一 直 是 育种 家 和种 有
本， 材料 均 由西北 农 林 科 技 大学 董振 生 研 究 员 课 题组 自行 选育 而成 。用 于 田间鉴 定 的商 品杂交 种
购于 市场 。
染 料 ） 自天根生 化科 技 （ 购 北京 ） 限公 司 。 有
扩增 产 物 在 ８ 的 聚 丙 烯 凝 胶 电 泳 检 测 分
析， 稳压 ２ ０Ｖ， ０ 电泳 １ ０ｒｉ ， ５ ｎ 电泳 产物 参考 蔡辉 ａ 儒 ［ 等方 法进 行银 染 。 ９
１２ ３ Ｓ ． ． ＲＡＰ 分 析
（） Ｒ １ Ｓ ＡＰ扩 增 程 序／ 反应 体 系 及 电泳 检 测 。 Ｐ Ｒ反 应 程 序 在 参 考 张 书 芬 的基 础 上 略有 改 Ｃ 动 ：４ ９ ℃变 性 ６ ｓ３ ℃复 一 ０ ，２ ０ ，５ ｌ ６ ｓ ７ ℃延伸 ９ ｓ 共 ｉ ０， ５个 循 环 ；４ 变性 ６ ｓ，０ 复 性 ９ ｓ， ２ ９℃ ０ ５℃ ０ ７ ℃延
势 ， 交种 比常 规种 增 产 ２ 一３ ＿ 。种 子 纯 杂 Ｏ Ｏ １ ］ 度 是 杂交种 质量 的核 心 价 值 体 现 ， 交 种 纯 度 的 杂
高低很 大程 度上 影 响杂种 优 势 的体 现 。 目前 我 国
油 菜杂 种优 势利 用 的几 类 途 径 中 ， 以细胞 质 雄 仍
子 经 营者不 断研 究 的课题 。
蒸 馏水 漂洗 后均匀 撒播 在 吸 水纸 上 ， 于 ２ ℃ 培 置 ６
养箱 中。１周后 取父 、 母本 及 杂 种各 １ ５个 单 株 的 子 叶和胚 轴参 考李 佳 的 Ｓ Ｓ法Ⅲ 提 取 ＤＮＡ。将 Ｄ 提取 的单 株 Ｄ ＮＡ 稀 释至 统一 浓 度 ， 取 １ 各 ０个单
１ 材 料 与方 法
１ １ 材 料 ．
供试 材料 为 目前 推广种 植 的甘蓝 型杂 交油 菜
品种 陕 油 ８号 的手 工 制 取 的杂 交 种 、 其 两 个 亲 及
伸 ９ｓ共 ３ ０ ， ８个 循 环 ； ２ ７￣ Ｃ延伸 ５ｍｉ ， 应体 系 ｎ 反
为 １ ， 用 试 剂 Ｇ ｌｅ ａ ｙＰ Ｒ Ｓ ｓｅ 含 ０ ｌ所 ｏｄ ｎＥ ｓ Ｃ ｙ ｔｍ（
（） Ｒ ２ Ｓ ＡＰ引物 的筛选 。由 １ ５条 正 向引 物与
Ｓ ＡＰ引 物参 考 ＬＥ 等 ， 雁成 等 ， 峰Ｃ Ｒ ｉ 。 文 陈 ］
等 ， 媛媛 等 发表 的引 物 ， 李 由上海 生物 工程 公 司
合成 ， ＭＥ引 物 １ ５条 ， Ｍ 引物 １ 条 。 Ｅ ３
１ ２ 方 法 ．
的基础 上 用 Ｓ ＲＡＰ分 子 标 记 手 段 对 杂 交 种 纯 度 进行 鉴定 。
株混匀， 别 构建父本 Ｄ 分 ＮＡ 混 合 池 、 本 ＤＮＡ 母 混 合 池及 杂种 Ｄ ＮＡ 混合 池 ， 于引物 的筛 选 。 用
随机 选 取 大 田杂 种 单 株 １ ０株 ， 号 ， 取 ５ 编 提 ＤＮＡ， 于纯 度鉴 定 。 用
对 于杂 种纯 度 鉴定 方 法 的报 道 已有 很 多 ， 目 前运 用最 多 的是 Ｄ ＮＡ 分 子 标记 鉴 定 与 田间鉴 定 相结 合 的 方 法 。 分 子 标 记 常 用 的 方 法 主 要 有 Ｒ Ｄ、 Ｓ ＡＰ Ｓ Ｒ及 Ｒ Ｌ Ｆ Ｐ等 。在 参 考 上 述 分 子 标 记