最新Westernblot所需溶液的配制

WB所需溶液的配制

1Tris-甘氨酸电泳缓冲液(Running buffer) 5×

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tris碱和72ｇ甘氨酸，5ｇ电泳级的SDS，双蒸水定容至1L，pH值为8.3。使用前，将5×稀释到1×：取200ml 5×，定容到1000ml。

2转膜缓冲液（Sending buffer）（现用现配）

必须新鲜配置，因为甘氨酸溶于水后易分解。小片段可不加SDS。

310% SDS配置

电泳级十二烷基硫酸钠也叫SDS（Sodium Dodecyl Sulfate，SDS,C12H25O4NaS）溶液: 10g SDS，100ml去离子水配制，50-68度搅拌溶解，浓盐酸调pH到7.2，室温保存。

4Tris.HCl的配置

注：Tris的分子量是121.4. 4度储存。

5 10% APS (Ammonium persulfate ; 过硫酸铵)的配置

称取1g过硫酸铵，加超纯水溶解并定容至10ml，分装到1.5ml微量离心管中，负30度冻存。使用时尽量现配现用，短期内实验频繁可多配。4度存则两周内用完，最多不能超过一个月。负20度可存两个月，但一旦解冻后尽快用完。

6 10×TBS (Tris-buffered saline)的配置

加HCl调pH到7.6，室温储存。

7TBST (Tris-buffered saline with Tween20) 的配置

8 上样缓冲液（loading buffer）的配置

SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml，甘油6.4ml，10%SDS 12.8ml，巯基乙醇3.2ml，0.05%溴酚蓝1.6ml，H2O 32ml混匀备用。按1:1或1:2比例与蛋白质样品混合，在沸水终煮3min混匀后再上样，一般为20-25ul，总蛋白量100μg。

9 stacking gel buffer (4×)

10 5×Sample buffer (10ml)

11 封闭液的配置 Blocking solution 要用TBST 配制牛奶

5% (w/v) nonfat dried milk 或者1%BSA

0.01% antifoam A (Sigma)

0.01%(v/v) sodium azide

12 丽春红溶液：

100微升冰醋酸，加入0.05克丽春红，用水稀释至10毫升。

1）4%多聚甲醛（PFA ）的配制 （1000毫升）

40克多聚甲醛，加入800毫升水，60度搅拌溶解，加入300微升氢氧化钠，全部溶解后冷却到4度，再加入100毫升的10×PBS ，加水定容到1000毫升。调pH 到7.2-7.4。通风橱过滤，4度保存。

13 组织裂解液

步骤：

首先加10-20毫升的水溶解EDTA,再加入0.2%NaOH 使溶解，再调pH 至 7.4；然后分别加入其他成分，溶解一个再加另外一个；去氧胆酸钠开盖后会飞出，应戴口罩。

14. PBS 的配制（1000毫升） （PH 7.2~7.4）

七年级上册英语语法 1．动词be

（is,am,are

）的用法

我(I)用am, 你(you)用are，is跟着他(he)，她(she)，它(it)。单数名词用is，复数名词全用are。变否定，更容易，be后not加上去。变疑问，往前提，句末问号莫丢弃。还有一条须注意，句首大写莫忘记。

2．this，that和it用法

(1)this和that是指示代词，it是人称代词。

(2)距离说话人近的人或物用this, 距离说话人远的人或物用that。如：

This is a flower. 这是一朵花。(近处)

That is a tree. 那是一棵树。(远处)

(3)放在一起的两样东西，先说this, 后说that。如：

This is a pen. That is a pencil. 这是一支钢笔。那是一支铅笔。(4)向别人介绍某人时说This is…, 不说That is…。如：

This is Helen. Helen, this is Tom. 这是海伦，海伦，这是汤姆。(5)This is 不能缩写, 而That is可以缩写。如：

This is a bike. That’s a car. 这是一辆自行车。那是一辆轿车。(6)打电话时，介绍自己用this, 询问对方用that。如：

—Hello! Is that Miss Green? 喂，是格林小姐吗？

—Yes, this is. Who’s that? 是的，我是，你是谁？

注意：虽然汉语中使用“我”和“你”，但英语中打电话时绝不可以说：I am…, Are you…？/Who are you?

(7)在回答this或that作主语的疑问句时, 要用it代替this或that。如：

①—Is this a notebook? 这是笔记本吗？

—Yes, it is. 是的，它是。

②—What’s that? 那是什么？

—It’s a kite. 是只风筝。

3．these和those用法

this, that, these和those是指示代词，these是this的复数形式,指时间,距离较近的或下面要提到的人或事;those是that的复数形式,指时间、距离较远或前面已经提到过的人或事物。

①This is my bed. That is Lily’s bed. 这是我的床。那是莉莉的床。

②These pictures are good. 那些画很好。

③Are those apple trees? 那些是苹果树吗？

在回答主语是these或those的疑问句时，通常用they代替these或those以避免重复。如：