针刀干预兔膝骨关节炎后血清中TGF-β1和Smads蛋白的差异性表达

2020年第21#第$期针刀干预兔膝骨关节炎后血清中TGF-B i和Smads蛋白的差异性表达
杨郁鹏，赵季宇，李佳茹，曹韵茗，闫4,郝重耀，金晓飞
（山西中医药大学，山西晋中030619）
摘要目的：通过针刀对兔膝骨关节炎（kneeosteoarthritis,K0A）血清中转化因子0i（TGF-0i）和Smad蛋白表达的调控，继而探讨针刀的作用机理。

方法:将6月龄f本大耳白兔40只，随机等分为空白组、模型组、电针组、针刀组。

除空白组外其余各组采用石膏对兔左后肢伸直位制动，造膝骨关节炎模型,后针灸组采取常规针刺隔f治疗，1周3次。

针刀组行松解术，1周1次。

3周后采用酶联免疫吸附试验，检测兔血清中TGF-!1和p-Smad2、p-Smad3的蛋白表达。

结果:经治疗后检测，针灸组、针刀组TGF-0.含量显著上升,p-Smad2和p-Smad3含量明显下降，与模型组相比均有有统计学意义（P<0.01）;且针刀组与针灸组相比较,针刀组TGF-0.的上升，磷酸化信号转导分子2（P-SMAD2）、磷酸化信号转导分子3（P-SMAD3）的下降更加显著,有统计学意义（！<0.01）。

结论:针刀相比针灸在膝关节骨性关节炎中使得血清中因子和蛋白的表达改变更加显著,可能是其可能更好地作用于相关信号通路得以实现的。

关键词膝关节骨性关节炎;信号通路;蛋白表达;针刀疗法
中图分类号:R246文献标识码：A D01:10.19763/ki.2096-7403.2020.06.04
Differential expression of TGF-!i and Smads protein in serum after needle knife intervention in rabbit knee osteoarthritis
Yang Yupeng,Zhao Jiyu,Li Jiaru,Cao Yunming,Yan Jing,Hao Chongyao,Jin Xiaofei
(Shanxi University of Chinese Me die i ne,j i nzhong shanxi030619)
Abstract Objective:To regulate the expression of transforming factors TGF-01and Smad protein in serum of rabbit knee osteoarthritis(Kneeosteoarthritis,K0A)by needle knife,and then to explore the mechanism of needle knife.Methods：Forty 6-month-old Japanese white rabbits were randomly divided into blank,model,acupuncture,and needle knife groups.Ex­cept for the blank group,the rest of the groups used plaster to immobilize the rabbit#s left hind limbs in a straight position to create a knee osteoarthritis model.The posterior acupuncture group was treated with conventional acupuncture every other day,3times a week.The needle-knife set performs lysis,once a week.After3weeks,an enzyme-linked immunosor­bent assay was used to detect the protein expression of TGF-0i,Smad2,and Smad3in rabbit serum.Results：After treat-ment,the content of TGF-!1in the acupuncture group and the needle-knife group increased significantly,and the content of p-Smad2and p-Smad3decreased pared with the model group,there was statistical significance(P<
0.01);and the needle-knife group Compared with the acupuncture group,the increase of TGF-0i,the decrease of p-
Smad2and p-Smad3in the needle-knife group were more significant and statistically significant(P<0.01).Conclusion: Compared with acupuncture and moxibustion,in knee osteoarthritis,the expression of factors and proteins in the serum changes more significantly,increasing the content of TGF-!1and decreasing the content of p-Smad.Therefore,the effects of acupuncture on the disease in the experiment The therapeutic advantage is significant,which may be achieved by its possible better effect on related signal pathways.
Key words knee osteoarthritis;signaling pathway;protein expression;needle-knife therapy
膝关节骨性关节炎（knee osteoarthritis,K0A*,是一种常见的膝关节退行性损伤疾病，多发于中老年人群。

近些年的发病率呈上升趋势，成为困扰人民生活的重要疾病之一发病时常伴有膝部的疼痛、肿胀，甚至畸形等症状。

大量的临床实践已经表明针刀治疗膝关节骨性关节炎有良好的疗效,但是治病机理尚未完全明确!2"@有研究表明，
TGF-0/Smads信多种损伤性疾病关，K0A等。

研究针刀疗法治疗K0A,血清进行化生长因子0i（TGF-0j和Smad的，究针刀的@
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验动物40只6月龄成年清洁日本大耳白兔，雌雄各半，量（
2.25±0.1）kg，实
［基金项目上项目（201801D121353）［作者简介，，Email：
［通讯作者，，，Email：
2020Vol.21No.6
由北京市昌扬西山养殖场提供，中国食品药品检定研究院检测，许可证号SCXK（京）2016-0007,饲养于山西中医药大学实验中心清洁级动物实验室。

温度20°C,湿度50%~55%,单笼饲养，自由饮水摄食。

1.1.2材料与试剂一次性无菌针灸针（0.18 mm x25mm）、一次性C针刀（0.35mm x30mm）：北京中研太和医疗器械有限公司；华佗牌电子针疗仪（SDZ-II）：苏州医疗用品有限公司;树脂石膏绷带：华实有限公司；心HC-3018）：中中学仪器有限公司；TGF-!1分析试剂盒:上海广锐物有限公司；号分子2（P-SMAD2）矣分析（ELISA）试剂盒:上海广锐生物有限公司；号分子3（P-SMAD3）分析（ELISA）试剂盒:上海广锐生物
有限公司
1.2实验方法
1.2.1动物造模适应性喂养16月龄日
大40只，分、、电针、针，10。

饲养，用石膏绷动用
定动[3-5]，
动25d上，强
K0A，实验验证了实验模定。

动物无无
状,动物无，实验无。

1.2.2治疗方法：饲养，
o:
饲养。

电针：1,
、、、,电针密波刺激，频率为2/100Hz,强度为3mA,20min/次。

隔日治疗，3次。

针：1，确认定，侧、侧副韧带,0韧带两端连接点及中点针点，消毒，针口线与韧带纤维方向平，垂针旋体在伤处扫散松解，出血按压止血1次，治疗3次。

1.2.3取材治疗结束后,腹主动脉血，取血5mL,缓慢注入离心管,3000i/min,离心20min,上清液。

用ELISA方检测血清中TGF-31和p-Smad2以及p-Smad3的含量。

1.3统计学方法
用SPSS24.0统计软件分析。

实验均均土标准差（!±s）表示，计量资料用单因素方差分析，比较用LSD-t检验（＜0.05为差异有统计学意义。

2结果
2.1治疗后各组血清中TGF-S含量的变化
与相比，TGF-S水平明显下降（«0.01）。

与相比，电针组和针TGF-S 水平显著上升（（＜0.05）。

与电针相比，针TGF-S水平显著上升（（＜0.05）结果见表1。

注:与空白组比较,1）（＜0.01；与模型组比较,2）（＜0.01;与电针组比较,3）（＜0.05
表1各组血清中TGF-01含量比较（ng/L,!±s）
组别TGF-01
空白组10183.93±8.15
模型组10169.05%16.840
电针10175.93±6.29
针10188.20±4.742)3)
*值7.021
（值0.001
2.2治疗后各组血清中p-Smad2和p-Smad3含量的变化
与相比，p-Smad2和p-Smad3表达显著上升（（＜0.01）°与比较，电针和针刀组p-Smad2和p-Smad3表达水平显著下降（（＜0.01）与电针相比，针p-Smad2和p-Smad3表达水平显著下降（（＜0.01）结果见表2。

表2各组血清中p-Smad2和p-Smad3含量比较（ng/mL,!±s）组别p-Smad2p-Smad3
空白组10 1.86±0.29 1.86±0.28
模型组10 2.31±0.051) 2.32±0.051)
电针10 2.21±0.061) 2.20±0.071)
针10 2.07±0.131)2) 2.08±0.131)2)
*值13.56413.226
（值0.0000.000
注:与空白组比较,D（＜0.01；与模型组比较,2）（＜0.01
3讨论
骨性炎，中医又称“痹”“鹤膝，一慢性性，
可由韧带及软伤
裂甚至骨变，情逐渐重。

炎
变血液有研究表明，伤，炎性表达，性因子表达限与，表达，
2020年第21巻第6期
伤的自我修复进程缓慢，甚至长时间的表达障碍会使得病程迁延持续,进而使得组织分解,生理功能丧失，最终导致不可逆危害[6]o
在人体正常的生理功能中，研究表明有众多信号转导通路的参与，在软骨等组织损伤中TGF_!&/Smads通路的表达参与最为重要。

TGF-!&作为一种多功能转化生长因子,在组织的生长、发育、表达过程中广泛参与转化，对肌体产生的损伤进行修复叫另外TGF_!&可的因子表达，使得组织的修复。

Smads 作为TGF_!&/Smads通路的凶，其表达调控通过上的TGF-!&刺得。

Smad2、Smad3占据Smads的重要成分，能否正常表达，系软骨等组织的功能的发与R目，多为TGF-3&的的表达量，可有骨中的软骨
的成，进而缓解组织的损伤。

等凹通K0A的TGF-!&的蛋的表达，可有软骨的损伤。

等[10]发TGF_!&/Smad2/3，可；进成分的成分，缓解间的。

[11]S中发PARP-1J
可骨中MMP-13的表达，而影Smad2、Smad3的化，使得骨
得缓解。

的研究表明,在多种病中可中因子的化。

因为当发生K0A时，作为一种的体，可人体的病，中
的化可能为病的一种的路。

法将传统针刺以及现代外科手术有效结，在充分发灸作用的同时，避免了外科手术的创伤。

作为一种中医代微创手术，在临床的实践中得到了广泛的可，尤是在软组织损伤病中充分发了特有的优势，它通过勾割等手法，可更好地松解组织的粘连，分解
的结、骨赘等，进而的不均匀受力，使得由软组织病导致的失衡得恢复正常。

本研究采灸对K0A病进行干预，发干预后，动物的明显，初次干预后就了范围的屈曲，但灸尚未。

行3次干预后，已经可大范围的伸缩屈曲，且的情况良好，物自如。

刺3后也了范围的，但果远不如明显。

因此对不同组别物
液中的TGF-!i、p-Smad2、p-Smad3的含量进行检，发也了明显。

由可推断
的作不仅仅限于对损伤位的刺激，可以通过对损伤处的松解，有地刺TGF-!i/Smads 信号转导通路，使得中TGF-!i上升,p-Smad2、p-Smad3的表达下降。

由也可以进一步推断的作机可能是在对病组织松解的同时，也对的信号通路的表达进行了调控，而使得血液中的因子也随之发生。

本研究通过对作分因子的表达进行，有证明了的作可深入因子甚至分子，但实验时因子的
有限，且只选取了一条信号通路上的因子，尚未可证明针刀的作机，有后的实验可在TGF-!i/Smads信号转导通路的上进一步深入研究，为病机的的理实验据。

参考文献
[1]李炎,李钊伟，任荣，等•膝关节骨性关节炎治疗的研究进展[J].中国当代医药,2019,26(16):24-27.
[2]王伟,王鸿儒，李伟，等•小针刀治疗膝关节骨性关节炎50例治疗体会[J].中国社区医师,2020,36(7):114-115.
[3]梁楚西，费飞，肖红，等•针刀治疗膝骨关节炎的实验研究[J],上海针灸杂志,2015,34(5):455-459.
[4]Videman T.Experimental osteoarthritis in the rabbit:comparison of different periods of repeated immobilization]J].Acta Orthopaedica Scandinavica,
1902,53(3):339-347.
[5]金晓飞，郭长青,蒋昭霞，等•膝骨关节炎模型内侧副韧带的生物力学特性[J],中国组织工程研究与临床康复,2011,43(15):8046-0049.
[6]邵俊，曹江鹏,袁爱红，等•基于经筋理论指导下治疗膝骨关节炎的临床观察[]•山西中医学院学报,2010,19(4):62-64.
⑺钟庆，贾兆锋,卢敏强，等•转化生长因子-!影响骨性关节炎发生发展作用机制的研究进展[]•国际骨科学杂志,2010,39(3):129-132.
[8],,.转化生长因子!研究进展[]•医学与实，2006,21(4):400-402.
[9]；,江，，等.膝骨关节炎的TGF-p/BMPs的响[J],中中医药杂志,2018,33(12):5401-5405.
[10]吴红,王岚,杨玉涛,等.TGF-!1/Smad2/3信融路在椎间盘退变中的作用[]•基因组学与应用生物学,2019,3(9):4236-4240.
[11].PARP-1性膝骨关节炎中骨TGF-!1/Smad的究[D],:学,2017.
(编辑:翟春涛)。