过氧化氢酶CAT活性测定

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过氧化氢酶活性测定 ------------ 紫外吸收法
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一
定关系，故常加以测定。

一、原理】
H2O2在 240nm 波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度 (A 240)
随反应时间而降低。

根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

【仪器与设备与试剂】
1、材料
小麦叶片等。

2、仪器设备
研钵；离心机； 250ml 容量瓶；移液管（ 0.5ml 、 2ml 各 2支）；10ml 试管 3支；恒温水浴；紫外分光光度计；
3、试剂
0.2mol/L pH7.8 磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/L H 2O2（用 0.1mol/L 高锰酸钾标定）。

【方法】
1.酶液提取：
藻液接种后每隔 1d，取 40ml 藻液（取时需摇匀），于 4℃，于 8 500 r/min （10 000g）下离心 10min 收集藻体，用 0.1mol/L 、pH7.8 磷酸钠缓冲液 3mL重悬浮，然后用冰浴超声破碎细胞，破碎液在 4℃下 10200 r/min 离心 10min, 上清液即为SOD 和 CAT粗酶液。

2.酶活性测定
取10ml 试管 3支，其中 2支为样品测定管， 1支为空白管，按表 2-14-1 顺序加入试剂。

表2-14-1紫外吸收法测定H 2O2样品液配置表
管号S1S2S3管号S0S1S2
粗酶液 (ml)0.20.20.2蒸馏水
1.0 1.0 1.0 /ml
pH7.8 磷酸 (ml) 1.5 1.5 1.5
将 S0号管在沸水浴煮 1min以杀死酶液，冷却。

然后将所有试管在25℃预热后 ,逐管加入 0.3ml 0.1mol/L 的 H O，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色皿中，240nm 下测定吸光度，
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每隔 1min 读数 1次，共测 4min，待 3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。

3.结果计算：
以每分钟 A 240减少 0.1的酶量为 1个酶活单位（U）。

A
240V
T
过氧化氢酶活性U/(g.min)=
0.1 V S t W '.
A 240= A S0－
. ( A S1
A S2 )
2
式中 A S0—加入煮死酶液的对照管吸光值；
A S1, A S2—样品管吸光值；
Vt —粗酶提取液总体积（ml）；
V 1—测定用粗酶液体积（ml）；
FW —样品鲜重（g）；
0.1— A 240每下降 0.1为 1个酶活单位（ u）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min ）。

【注】所用 H2O2溶液及 KMnO4一溶液临用前需重新标定。

【注意事项】
凡在 240nm 下有强吸收的物质对本实验有干扰。

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