细胞成脂油红O染色以及成肌吉姆萨染色

细胞成脂油红O染色以及成肌吉姆萨染色
油红O染色
注：操作过程中往培养皿中加液体时要沿壁轻轻加入
一、0.2% 油红O工作液的配制：
1．油红O粉与异丙醇比例为300mg/100ml，将称好的油红O 粉用100%异丙醇充分溶解配制成饱和溶液
2. 油红饱和溶液与超纯水以3:2比例充分混合均匀，配制成0.2%油红O工作液
3. 0.2?m无菌滤器过滤后即可使用
注：油红O工作液在室温下保存时间最多不超过2h，所以应当严格注意现配现用
二、10%甲醛固定液的配制
取30ml超纯水加入10ml 40%甲醛溶液，混合均匀后配制成10%的甲醛固定液三、60%异丙醇孵育液
将30ml 100%异丙醇与20ml超纯水混合均匀，制成60%异丙醇孵育液
四、油红O与苏木素染色
1.将培养皿中的培养基弃去，用PBS洗3次
2.加入2.4ml 10%甲醛溶液对细胞进行固定1h
3.弃去甲醛固定液，用超纯水冲洗3次
4.往培养皿中加入2.4ml 60%异丙醇溶液孵育2min
5.弃去60%异丙醇，加入1ml配置好的油红O染液，染色10min
6.弃掉油红，用去离子水冲洗数次，至弃液澄清无色
7.加入1ml苏木素染色液室温染色1min
8.弃掉苏木素，用超纯水冲洗数次，至弃液澄清无色
9.加入0.1%氨水溶液显色，然后用超纯水冲洗3次
10.最后往各培养皿中加入少量去离子水，保持细胞湿润，染色后的细胞置于倒
置显微镜下进行细胞形态的观察
五、油红OD值的测定
1.将上述用油红O染色后的细胞培养皿中的液体吸掉
2.向培养皿中加入
3.6ml 100%异丙醇，室温孵育10min，将细胞中的油红洗脱
到异丙醇中
3.将洗脱下的油红吹打混合均匀，加入到5ml离心管中，摇匀
4.吸取200?l 洗脱液加入到96孔酶标板上，每个培养皿测3次重复
5.用酶标仪在520nm波长下测定OD值，以100%异丙醇作为空白对照调零
吉姆萨染色
1.弃去培养皿内的培养基，用PBS反复漂洗2次
2.加入PBS溶液，再加入等体积无水甲醇，边加边混合静止10min（在摇床上
添加，各加2ml）
3.将50%甲醇与PBS混合液弃去，加入新鲜的甲醇液浸泡（各加2ml），固定细
胞10min，然后用PBS漂洗细胞1次
4.每孔各加入1ml吉姆萨染色（吉姆萨染液可重复利用），覆盖细胞层，染色
2min
5.回收染色液，用去离子水冲洗细胞
6.各培养皿加少量水，用显微镜观察单层潮湿的细胞。