肺炎链球菌不同药物敏感性试验系统检测结果准确性比较

肺炎链球菌不同药物敏感性试验系统检测结果准确性比较
苏敏;黄海林;袁梅;李小娟;王海平;杜廷义
【摘要】目的用E-test法作为参比方法,比较肺炎链球菌在不同药敏系统检测结
果的准确性,以期为临床治疗提供准确、可靠的科学依据.方法随机选取2016-2017年昆明医科大学附属儿童医院分离的35株肺炎链球菌为研究对象,分别用E-test、Vitek-2 compact GP68、珠海迪尔DL-96 Strep2药敏分析系统进行药敏试验.结果与E-test法比较,Vitek-2 compact GP68、珠海迪尔DL-96 Strep2对红霉素、左氧氟沙星、万古霉素的检测结果分类符合率为100％;对头孢曲松和美罗培南的
分类符合率<90％;珠海迪尔DL-96 Strep2对青霉素的检测分类符合率为97.1％,
而在Vitek-2 compact GP68对青霉素的检测中,有22株(62.9％)未能输出有效结果,系统提示无法判断其敏感性.结论肺炎链球菌3种药物敏感系统试验显示:与E-test方法比较,Vitek-2 compact GP68及珠海迪尔DL-96 Strep2的检测准确性
存在一定缺陷,药敏报告需要对青霉素、头孢曲松、美罗培南等抗菌药物的准确性
进行进一步测定.
【期刊名称】《检验医学与临床》
【年(卷),期】2019(016)003
【总页数】3页(P410-412)
【关键词】肺炎链球菌;药物敏感性试验;准确性
【作者】苏敏;黄海林;袁梅;李小娟;王海平;杜廷义
【作者单位】昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属
儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆
明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228;昆明医科大学附属儿童医院检验科,昆明 650228
【正文语种】中文
【中图分类】R453;R378.14
肺炎链球菌(SP)是导致婴幼儿脑膜炎、菌血症、肺炎等严重细菌感染疾病的首位病原菌，也是引起鼻窦炎和急性中耳炎的最常见病原菌[1],全球每年约有70万～100万5岁以下儿童死于肺炎链球菌性疾病，2岁以下儿童的病死率尤其高[2]，而肺炎链球菌对抗菌药物的药物敏感试验(简称药敏试验)结果报道，不同试验方法之间存在很大差异[3-5]。

因此本研究对目前主流药敏分析系统提供的结果进行初步比较评估，以期为临床用药提供正确、可靠的科学依据。

目前，虽然肉汤稀释法为药物敏感试验的标准参考方法，但其操作繁琐，试验要求严苛，临床实际工作中较少应用。

E-test法与肉汤稀释法有着较高的一致性，操作简便，实验要求相对较低，因此本研究拟用E-test法为参比方法，比较肺炎链球菌在不同药敏系统检测结果的准确性。

1 资料与方法
1.1 菌株来源从2016-2017年昆明医科大学附属儿童医院分离的肺炎链球菌中随机选取35株作为研究对象(同一患者同一标本类型不重复计入)。

1.2 方法
1.2.1 细菌分离鉴定将标本接种于血琼脂平板(郑州安图生物工程股份有限公司)，经5%CO2、35 ℃培养，通过典型菌落形态观察、奥普托欣(Optochin)实验(温州康泰生物科技有限公司)以及全自动微生物分析系统(法国生物梅里埃Vitek-2 compact GP)鉴定为肺炎链球菌。

1.2.2 药敏试验 (1)E-test 药敏试验：采用苛氧菌药敏琼脂平板(郑州安图生物工程股份有限公司)及E-test纸条(郑州安图生物工程股份有限公司)，按照标准操作进行药物敏感试验。

(2)Vitek-2 compact 药敏试验表：使用法国生物梅里埃Vitek-2 compact GP-68卡按照标准操作进行药物敏感试验。

(3)迪尔药敏试验：使用珠海迪尔DL-96 Strep2按照标准操作进行药物敏感试验。

(4)质控：用ATCC49619对3个药敏分析系统进行质控。

1.3 结果分析方法将3种方法所测结果按照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)所提供的折点判读为敏感(S)、中介(I)和耐药(R)。

以E-test试验结果为对比参照进行结果分析：(1)分类符合率(CA)定义为被评估方法结果S、I、R判断为一致；(2)非常重大误差(VME)定义为被评估方法将R误判为S；(3)重大误差(ME)定义为被评估方法将S误判为R；(4)小误差(mE)定义为被评估方法将I报告为R或S。

可接受的误差范围：CA≥90%，VME≤1.5%，ME≤3%，mE≤10%[6]。

2 结果
2.1 35株肺炎链球菌3种药敏系统检测结果 35株肺炎链球菌标本分别用E-test、Vitek-2 compact、迪尔DL-96 Strep2进行药物敏感试验，结果按照CLSI提供折点进行判读，其R、I、S结果见表1。

2.2 2种商品化药敏系统与E-test测试方法比较以E-test实验方法结果为参照，Vitek-2 compact GP68及珠海迪尔DL-96 Strep2对红霉素、左氧氟沙星、万古霉素的CA均为100%。

针对头孢曲松，Vitek-2 compact GP68的ME、mE、CA分别为5.7%、40.0%、54.3%，而珠海迪尔DL-96 Strep2的mE、CA分别为25.7%、74.3%。

针对美罗培南，Vitek-2 compact GP68的mE、CA分别为34.3%、65.7%，而珠海迪尔DL-96 Strep2的mE、CA分别为28.6%、71.4%。

针对青霉素，Vitek-2 compact GP68仅有13株(37.1%)MIC≤1，判读为S，其CA为100.0%，但其余22株(62.9%)的最低药物浓度(MIC)≥2，系统提示无法判
断敏感性，未能输出有效结果，需要用其他方法确认，珠海迪尔DL-96 Strep2的mE、CA分别为2.9%、97.1%。

两测试系统均未出现VME。

见表2。

表1 35株肺炎链球菌3种药敏系统检测结果(n)抗菌药物RE-testVitek-2 compact GP68迪尔DL-96 Strep2IE-testVitek-2 compact GP68迪尔DL-96 Strep2SE-testVitek-2 compact GP68迪尔DL-96 Strep2青霉素0*00*135*34头孢曲松01121225131228美罗培南1422626218512左氧氟沙星000000353535红霉素353535000000万古霉素000000353535
注：*Vitek-2 compact系统报告需要其他实验方法确认
表2 2种商品化药敏系统与E-test测试方法比较[%(n/n)]抗菌药物Vitek-2 compact GP68VMEMEmECA迪尔DL-96 Strep2VMEMEmECA青霉素
****0.0(0/35)0.0(0/35)2.9(1/35)97.1(34/35)头孢曲松
0.0(0/35)5.7(2/35)40.0(14/35)54.3(19/35)0.0(0/35)0.0(0/35)25.7(9/35)74.3(2 6/35)美罗培南
0.0(0/35)0.0(0/35)34.3(12/35)65.7(23/35)0.0(0/35)0.0(0/35)28.6(10/35)71.4( 25/35)左氧氟沙星
0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35/35)0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35 /35)红霉素
0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35/35)0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35 /35)万古霉素
0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35/35)0.0(0/35)0.0(0/35)0.0(0/35)100.0(35 /35)
注：*Vitek-2 compact系统报告需要其他实验方法确认
3 讨论
肺炎链球菌作为儿童社区获得性肺炎的主要致病菌，是导致儿童肺炎、菌血症、脑
膜炎、中耳炎等疾病的重要病原菌，其导致的严重感染是儿童死亡的重要原因之一[7]。

2016年度全国10家儿童医院监测数据提示大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌是我国儿童临床优势分离株[3],而肺炎
链球菌、流感嗜血杆菌分离比例明显高于成人[8]。

随着青霉素的广泛应用，在20世纪60年代出现了青霉素耐药的肺炎链球菌(PNSP)，而近年来随着抗菌药物的广泛使用，肺炎链球菌对青霉素的耐药呈上升趋势，出现多重耐药菌株，加大了临床治疗的难度。

肺炎链球菌对抗菌药物的药敏结果，尤其是青霉素，在不同报道之间存在较大差异。

2016年儿童耐药监测显示我国肺炎链球菌青霉素不敏感株比例为17.9%[3]，北京协和医院2015-2016年肺炎链球菌青霉素不敏感株为0.9%～6.4%[4]，梧州市2013-2015年肺炎链球菌青霉素不敏感株为71.0%[5]。

肺炎链球菌药敏试验方法有纸片扩散法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和E-test
方法。

Vitek-2 compact全自动微生物分析系统是国内常见的主流微生物鉴定及
药敏分析仪器，其中肺炎链球菌药敏卡片GP-68可测得青霉素、头孢噻肟、头孢
曲松、厄他培南、美罗培南等的MIC值，其药敏试验是按照比浊法原理来动态监
测反应孔浊度，并由仪器计算形成MIC值。

将Vitek-2 compact分析系统与E-test测试结果进行对照：针对青霉素CLSI(非脑膜炎)的判断折点S、I、R分别为
≤2、4、≥8,Vitek-2 compact在35株分析标本中仅有13株(37.1%)给出结果，
其余22株(62.9%)MIC≥2，系统未能输出有效结果，提示需要其他实验方法确认。

头孢曲松的ME、mE、CA分别为5.7%、40%、54.3%，而美罗培南的mE、CA
分别为34.3%、65.7%。

按照CLSI最新版的《体外药敏试验标准和质量控制参数的研究进展》判断[6]，误差范围不可接受。

此外，红霉素、左氧氟沙星和万古霉
素CA均为100.0%，结果准确。

Vitek-2 compact GP68可能由于卡片上的抗菌药物水平覆盖不够导致药敏结果出现飘逸，因此对临床常用的抗菌药物如青霉素、
头孢曲松、美罗培南的测定存在误差，此问题与熊安英等[9]、黄梅等[10]的报道
一致。

将珠海迪尔链球菌药敏分析系统与E-test测试相对照，青霉素的mE、CA分别为2.9%、97.1%，其误差范围可接受。

头孢曲松的mE、CA分别为25.7%、74.3%，美罗培南mE、CA分别为28.6%、71.4%，误差范围不可接受；红霉素、左氧氟
沙星和万古霉素CA均为100.0%，结果准确。

综上所述，对于儿童主要细菌感染病原菌肺炎链球菌体外药物敏感性试验，主流药敏分析系统操作具有简便快速、经济实惠等优点，但与E-test药敏结果相比，国
内主流Vitek-2 compact分析系统GP68卡片中青霉素、头孢曲松、美罗培南的
准确性存在明显差异，红霉素、左氧氟沙星和万古霉素结果准确；珠海迪尔DL-
96 Strep2链球菌药敏分析系统头孢曲松、美罗培南准确性存在明显差异，青霉素结果差异在可接受范围，红霉素、左氧氟沙星和万古霉素结果准确。

因此，使用Vitek-2 compact药敏分析系统报告肺炎链球菌药敏试验结果时，需要对青霉素、头孢曲松和美罗培南等抗菌药物的测试准确性进行进一步测定。

使用珠海迪尔DL-96 Strep2报告肺炎链球菌药敏试验结果时，需要对头孢曲松和美罗培南等抗菌药物的测试准确性进行进一步测定。

参考文献
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