油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP诱导细胞氧化损伤的保护作用

收稿日期:2017-07-10
基金项目:中国检验检疫科学研究院基本科研项目(2017JK001)
第一作者:杨悦(1988-),女,博士研究生,从事食品安全与营养研究,E-mail:100403yang@
通信作者:吴亚君(1975-),女,博士,研究员,从事农产品真伪及质量评价研究,E-mail:wuyajuncaiq@ 油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP 诱导细胞氧化
损伤的保护作用
杨
悦1,刘鸣畅1,王凯2,吴黎明2,杨艳歌1,吴亚君1(1.中国检验检疫科学研究院,北京100176;2.中国农业科学院蜜蜂研究所,北京100093)摘要:为研究油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)抗心血管疾病的作用机制,以RBPF 为研究对象,利用人工建立的血管内皮细胞氧化损伤模型,对RBPF 的抗氧化活性进行初步研究,在体外水平探索RBPF 对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。

采用超声醇提及大孔树脂纯化的方法提取富集RBPF,同时采用过氧化氢叔丁醇(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导细胞氧化损伤,建立人脐静脉内皮融合细胞系EA.hy926的氧化损伤模型,并利用此模型研究RBPF 在细胞水平的抗氧化作用,以公认抗氧化性质良好的黄酮类化合物槲皮素作为阳性对照,CCK8法检测细胞活力。

首先,用梯度稀释的RBPF 及槲皮素作用于正常培养细胞,分析其细胞毒性,确定毒性阈值;然后,在毒性阈值范围内设置梯度浓度的槲皮素溶液作用于细胞损伤模型,确定槲皮素最佳抗氧化浓度剂量,并以此剂量组作为阳性对照组,与毒性阈值范围内梯度浓度的RBPF 同时作用于细胞损伤模型,研究RBPF 对血管内皮细胞氧化损伤的保护情况。

结果表明:其一,体外血管内皮细胞EA.hy926氧化损伤模型的最佳建模条件确定为500μmol ·L -1TBHP 作用3h;其二,细胞毒性试验结果表明,对于血管内皮细胞EA.hy926,RBPF 的毒性阈值为24mg ·L -1,阳性对照品槲皮素的毒性阈值为50mg ·L -1;其三,CCK8法测定RBPF 对细胞氧化损伤模型的保护作用,结果显示在6~18mg ·L -1剂量范围内,RBPF 预处理对EA.hy926细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用(p ≤0.05),其抗氧化作用在低浓度(≤10mg ·L -1)范围内呈上升趋势,在高浓度(≥14mg ·L -1)范围内呈下降趋势,在10,12,14mg ·L -13个剂量组其抗氧化性优于槲皮素(25mg ·L -1),RBPF 浓度为10mg ·L -1时效果最佳。

综上所述得出结论,对于血管内皮细胞氧化损伤模型,RBPF 表现出了极好的体外抗氧化效果,可作为优
质的预防心血管疾病的天然产物资源进行深入开发利用。

关键词:油菜蜂花粉总黄酮;TBHP;人脐静脉内皮融合细胞EA.hy926;抗氧化
中图分类号:S8文献标识码:A 文章编号:1000-1700(2018)01-0108-06Study on Protective Effect of Rape Bee Pollen Flavonoids on TBHP Induced EA.hy926Cell Oxidative Damage in Vitro
YANG Yue 1,LIU Ming-chang 1,WANG Kai 2,WU Li-ming 2,YANG Yan-ge 1,WU Ya-jun 1
(1.Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100176,China;
2.Institute of Apicultural Research,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Beijing 100093,China)Abstract :This paper preliminarily studied the antioxidant activity of Rape Bee Pollen Flavonoids (RBPF)by using an artificial vascular endothelial cell oxidative damage model and explored the protective effect of RBPF on this model in vitro.This paper used ultrasound-assisted ethanol extraction and macroporous resin purification methods to extract and enrich RBPF.Meanwhile,an oxidative damage model of human umbilical vein endothelial fusion cell line EA.hy926was established by using tert-butyl hydroperoxide (TBHP)to induce oxidative damage.The model was used to study the antioxidant activity of RBPF at the cellular level with quercetin as a positive control,and the cell viability was detected by CCK8method.First,gradient diluted RBPF and quercetin were used on normal cultured cells to analyze their cytotoxicity and determine their toxicity threshold.Then,the cell damage model was treated with a gradient of quercetin within the toxicity threshold range to determine the best antioxidant dose of quercetin.Finally,a gradient of RBPF under the toxicity threshold range was applied to the cell damage model,with the best antioxidant dose of quercetin as a positive group at the same time,to study the protective effect of RBPF on vascular endothelial cells oxidative damage.The results were as follows:First,the optimal modeling conditions for the oxidative damage 杨悦,刘鸣畅,王凯,等.油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP 诱导细胞氧化损伤的保护作用[J].沈阳农业大学学报,2018,49(1):
108-113.沈阳农业大学学报,2018,49穴1雪:108-113
Journal of Shenyang Agricultural University http :// DOI:10.3969/j.issn.1000-1700.2018.01.016
杨悦等院油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP 诱导细胞氧化损伤的保护作用
第1期--随着社会经济的发展,人口老龄化及城镇化进程的加速,中国心血管疾病危险因素流行趋势明显,心血管疾病发病人数持续增加,防治心血管疾病刻不容缓[1]。

大量研究表明,高血压及动脉粥样硬化与心血管病关系密切[2],且血管内皮细胞损伤是导致高血压和动脉粥样硬化的关键性因素,氧化应激是造成内皮细胞损伤的主要
诱因[3-10],寻找筛选表现出优良抗氧化活性的化合物对于心血管疾病的防治具有重要意义。

花粉是开花植物有性繁殖的雄性配子体,亦称为植物的“精子”,呈粉状,蜂花粉则是由工蜂采集花粉后,加入特殊的腺体分泌物、花蜜和唾液混合而成的“花粉团”,在蜂群中主要作为蛋白质饲粮,亦可用于人体的营养保健,被誉为“全能营养食品”“浓缩天然药库”“内服的化妆品”等,是人类天然食品中的瑰宝[11-14]。

近年来,许多科学研究发现蜂花粉具有抗氧化功能[11,15-17],目前主流观念认为蜂花粉的抗氧化活性主要与其中的多酚及黄酮类物质有关。

我国蜂花粉产量巨大,种类繁多,来源广泛且初级产品价格低廉,具有明显的开发利用优势。

文献调研发现,蜂花粉在细胞水平抗氧化作用的研究报道尚且不多,在抗血管内皮氧化损伤方面的报道就更为少见,目前尚未发现关于蜂花粉总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用及其作用机制的报道。

另外,属于天然黄酮类化合物的槲皮素,是蜂花粉总黄酮的主要组成成分,大量研究显示,槲皮素是众多黄酮类化合物中活性最高的化合物之一,具有显著的抗氧化活性,常用作黄酮类化合物抗氧化功效试验的阳性参照物。

因此,本研究以油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)为研究对象,选取人脐静脉内皮融合细胞EA.hy926,采用TBHP(过氧化氢叔丁醇)诱导建立体外细胞氧化损伤模型,并选取槲皮素作为阳性对照,观察油菜蜂花粉总黄酮对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用,对油菜蜂花粉总黄酮的抗氧化活性进行初步探索,为开发蜂花粉总黄酮防治心血管疾病提供有效试验数据支持。

1材料与方法
1.1材料与试剂
油菜蜂花粉,2016年采集自青海西宁;芦丁标准品购自中国食品药品检定研究院;大孔树脂购自天津光复精细化工研究所;人脐静脉内皮融合细胞(EA.hy926)购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心;DMEM/高糖培养基、0.25%胰蛋白酶购自Hyclone 公司;二甲基亚砜、青链霉素双抗混合液、TBHP、槲皮素标准品购自Sigma 公司;胎牛血清(特级)购自四季青公司;CCK8检测试剂盒购自日本同仁公司;NAC(N-乙酰半胱氨酸)购自碧云天公司;其余试剂均为国产分析纯。

1.2仪器与设备
酶标仪(美国Thermo)、倒置显微镜(德国蔡司)、离心机(美国SCILOGEX)、水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)、细胞培养箱(美国Thermo)、细胞计数仪(美国Thermo)、生物安全柜(新加坡ESCO)、移液枪(德国艾本德)、冷冻干燥机(美国Thermo)、超声波水浴锅(上海宁商超声仪器有限公司)、旋转蒸发仪(北京时代贝林科技公司)。

1.3方法
1.3.1油菜蜂花粉总黄酮的制备取1g 新鲜油菜蜂花粉,经冷冻干燥、机械破壁后置于-20℃贮存备用。

向破壁后的蜂花粉干粉样品中加入适量正己烷(m/v=1∶1),超声脱脂10min,3000r ·min -1离心3min,弃去正己烷,真
model of vascular endothelial cells EA.hy926in vitro were 500μmol ·L -1TBHP for 3h.Second,the results of cytotoxicity test showed that,for EA hy926,the toxicity thresholds were 24mg ·L -1for RBPF and 50mg ·L -1for quercetin.Third,the protective effect of RBPF on the cell oxidation damage model was detected with CCK8method.The results showed that,in the dose range of 6-18mg ·L -1,RBPF pretreatment had a significant protective effect on EA.hy926cell oxidative damage model (p ≤0.05).The antioxidant activity of RBPF showed an rising trend in low concentration (≤10mg ·L -1)and decreased in high concentration (≥14mg ·L -1).In three dose groups of 10,12and 14mg ·L -1,the antioxidant activity of RBPF was better than that of quercetin (25mg ·L -1),and the effect was the best when the concentration was 10mg ·L -1.In conclusion,for the vascular endothelial cell
oxidative damage model,RBPF showed excellent antioxidant activities in vitro.Therefore,RBPF could be further developed and utilized as a natural product resource to prevent cardiovascular disease.Key words :rape bee pollen flavonoids;TBHP;human umbilical vein endothelial fusion cell EA.hy926;antioxidant 109
第49卷
沈阳农业大学学报
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空冻干回收得蜂花粉脱脂产物。

以1∶70的料液比,往残渣中加入85%乙醇溶液,超声辅助提取60min,待充分提取后过滤,回收滤液并旋蒸浓缩,蒸干后所得产物溶解于适量85%乙醇中,过大孔树脂柱进行吸附洗脱,收集洗脱液,再次进行旋蒸浓缩,所得产物用80%乙醇复溶,以芦丁绘制标准曲线,采用分光光度法测定洗脱液中总黄酮的含量,制成黄酮浓度2mg·mL-1的储备液,经0.22μm滤膜过滤后,-20℃贮存备用。

1.3.2细胞氧化损伤模型建立
1.3.
2.1人脐静脉内皮融合细胞EA.hy926的培养人脐静脉内皮融合细胞EA.hy926培养于含10%胎牛血清的DMEM/高糖培养基中,贴壁细胞在显微镜下观察,呈“铺路石”样排列,边缘光滑。

置于37℃、体积分数5%的CO2培养箱中,生长融合至80%时弃去瓶内培养基,用PBS缓冲液清洗细胞2~3次,加入适量0.25%胰酶,至培养箱中消化2min,镜下观察贴壁细胞变圆脱落时,加入含10%胎牛血清的完全培养基终止消化,用无菌吸管反复轻柔吹打细胞,制成细胞悬液。

细胞计数并调整细胞密度为1×105个·mL-1,以每孔100μL的接种量种于96孔板,于37℃、5%CO2条件下培养24h后,将完全培养基换成无血清DMEM/高糖培养基再孵育24h,此融合状态下的细胞即可用于后续试验。

1.3.
2.2TBHP诱导EA.hy926细胞氧化损伤模型的建立用无血清培养基将TBHP配制成0,100,200,400, 500,600,700,800μmol·L-1的梯度剂量组,分别加入上述培养好的细胞中,每孔100μL,分别作用1,2,3,4,5, 6h,弃上清,采用CCK8法检测各组细胞活力,确定最佳建模条件。

每组6个复孔。

1.3.3油菜蜂花粉总黄酮(RBPF)及槲皮素标准品的体外抗氧化活性
1.3.3.1油菜蜂花粉总黄酮(RBPF)及槲皮素对EA.hy926细胞增殖的影响用无血清培养基分别将RBPF配制成0,4,8,12,16,20,2
2.5,24mg·L-1梯度剂量组,将槲皮素标准品配制成0,1,3,5,10,30,50,60mg·L-1梯度剂量组,分别加入上述培养好的细胞中,每孔100μL,分别作用24h和48h,弃上清,采用CCK8法检测各组细胞活力。

每组6个复孔。

1.3.3.2槲皮素抗EA.hy926细胞氧化损伤最佳保护剂量选择取对数生长期的EA.hy926细胞接种于96孔板中,按照1.3.
2.1中方法进行培养后进行分组,设置空白组、模型组、给药组。

空白组用无血清培养基孵育,不加任何干扰因素;模型组先用无血清培养基孵育24h和48h后,然后改换500μmol·L-1TBHP继续孵育3h;给药组分别加入用无血清培养基配制的终浓度为1,5,10,15,20,25,30,35mg·L-1的槲皮素,孵育24h和48h后,改换500μmol·L-1TBHP继续孵育3h。

各组弃上清,采用CCK8法检测各组细胞活力。

每组6个复孔。

1.3.3.3油菜蜂花粉总黄酮(RBPF)对EA.hy926细胞氧化损伤的保护作用方法同1.3.3.2。

给药组加入用无血清培养基配制的终浓度为6,8,10,12,14,16,18mg·L-1的RBPF孵育24h和和48h,同时设置槲皮素标准品的最佳保护剂量组作为对照。

采用CCK8法检测各组细胞活力。

每组6个复孔。

1.4统计学分析
试验数据采用SPSS22.0软件进行统计分析,采用独立性T-test进行显著性分析,结果以均值±标准差(Mean±SD)表示,p<0.05表示差异具有统计学意义。

采用WPS软件进行图表处理。

2结果与讨论
2.1TBHP诱导EA.hy926细胞氧化损伤模型的建立CCK8试验结果如图1,细胞存活率随TBHP浓度的升高而降低,TBHP低浓度剂量组未发现作用时效性,浓度高于400μmol·L-1各剂量组,随着TBHP作用时间的延长,细胞存活率均表现出明显下降趋势。

作用时间为3h时,500μmol·L-1及600μmol·L-1浓度剂量组的细胞存活率均达到50%,且差异极显著(p≤0.01),为理想造模条件,但600μmol·L-1TBHP作用4h 组与3h组相比,细胞存活率出现大幅度下降,故认为600μmol·L-1的建模条件作用过于剧烈,不利于细胞模型稳定性的控制,综合考虑,选择500μmol·L-1TBHP
120
100
80
60
40
20
0100200400500600700800
TBHP/μmol·L-1
1h2h3h4h5h6h
****
**表示与0μmol·L-1TBHP剂量组比较,差异极显著(p≤0.01) **marks a very significant difference(p≤0.01)compared with0mol·L-1
TBHP dose group
图1不同浓度TBHP及孵育时间对
EA.hy926细胞存活率的影响
Figure1Effects of different concentrations and
incubation time of TBHP on EA.hy926cells
110
杨悦等:油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP 诱导细胞氧化损伤的保护作用第1期--作用3h 作为最佳造模条件。

2.2油菜蜂花粉总黄酮(RBPF )及槲皮素标准品的体外抗氧化活性
2.2.1油菜蜂花粉总黄酮(RBPF )及槲皮素对EA.hy926细胞增殖的影响为选择合适的作用浓度范围以避免出现细胞毒性效应,采用CCK8法测定一系列梯度浓度的RBPF 和槲皮素对EA.hy926细胞增殖的影响,结果如图2和图3。

当RBPF 浓度低于22.5mg ·L -1时,作用24h 与48h 组的细胞活力均未表现出显著性变化(p >0.05);24mg ·L -1RBPF 浓度剂量组在作用24h 时细胞存活率亦没有较大变化,作用48h 时则出现大幅下降,差异极显著(p ≤0.01),说明此浓度RBPF 对细胞具有明显的毒性作用,因此后续研究将RBPF 的作用浓度严格控制在24mg ·L -1以下。

另外,当槲皮素浓度低于30mg ·L -1时,24h 与48h 时效组细胞活力均未发现显著性变化(p >0.05);当槲皮素浓度高于50mg ·L -1时,24h 与48h 时效组的细胞活力均表现出下降趋势,且差异极显著(p ≤0.01),说明本试验中槲皮素对于内皮细胞的毒性阈值是50mg ·L -1,后续试验需将槲皮素的作用浓度控制在此范围以下。

2.2.2槲皮素对EA.hy926细胞氧化损伤的保护作用本试验采用CCK8法测定不同浓度槲皮素对EA.hy926细胞氧化损伤的保护作用,从而选择其最优作用浓度作为后续试验的阳性对照,试验结果如图4。

经统计分析,空白组、模型组与各浓度剂量给药组,随作用时间变化差异不显著(p >0.05)。

当槲皮素浓度低于10mg ·L -1时,与模型组相比,槲皮素给药组细胞活力未出现显著性变化(p >0.05),说明低浓度槲皮素不具备
抗细胞氧化损伤的作用。

当槲皮素浓度高于15mg ·L -1
时,与模型组相比,槲皮素给药组细胞活力明显升高,
并表现出显著性差异(p ≤0.05),且槲皮素对EA.hy926
细胞的保护作用在15~25mg ·L -1范围内呈剂量依赖
性,超过25mg ·L -1浓度剂量组的细胞存活率基本维持
稳定。

许二学[18]研究槲皮素对热应激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞的影响发现,添加槲皮素能够提高热应
激下体外培养的奶牛乳腺上皮细胞的活性,提高细胞
的抗氧化能力和抑制细胞凋亡,添加75μmol ·L -1(即22.65mg ·L -1)剂量组效果最好。

CHEN 等[19]报道了槲皮素对H 2O 2诱导PC12细胞凋亡的保护作用,研究发现添加槲皮素能够通过激活P13K/Akt 信号通路抑制H 2O 2诱导的细胞凋亡,最佳作用浓度为30mg ·L -1。

WENG 等[20]研究发现,槲皮素对H 2O 2诱导人视网膜色素上皮细胞**表示与0mg ·L -1RBPF 剂量组比较,差异极显著(p <0.01)。

**marks a very significant difference (p <0.01)compared with 0mg ·L -1RBPF dose group.图2不同浓度RBPF 对EA.hy926细胞存活率的影响Figure 2Effects of different RBPF concentrations on EA.hy926cells 1201008060402004
812162022.5240RBPF/mg ·L -124h 48h ****表示与0mg ·L -1槲皮素剂量组比较,差异极显著(p ≤0.01)
Note:**marks a very significant difference (p ≤0.01)compared with 0mg ·L -1quercetin dose group 图3不同浓度槲皮素对EA.hy926细胞存活率的影响Figure 3Effects of different quercetin concentrations on EA.hy926cells
120100806040200135103050600槲皮素Quercetin/μmol ·L -1********
24h 48h *表示与模型组比较,差异显著(p <0.05);**表示与模型组比较,差异极显著(p <0.01)。

下同*marks a significant difference (p <0.05)compared with model group;**marks a very significant difference (p <0.01)compared with model group.The same below
图4不同浓度槲皮素对TBHP 诱导的EA.hy926细胞损伤模型的保护作用Figure 4Protective effects of different quercetin concentrations against TBHP induced EA.hy926cells death 1201008060402001510152025空白组Control 槲皮素Quercetin/mg ·L -1*************模型组Model 303524h 48h 111
第49卷沈阳农业大学学报--ARPE-19的氧化损伤具有保护作用,最佳作用浓度为20μmol ·L -1(即6.04mg ·L -1)。

文献调研发现,槲皮素抗细胞氧化损伤的最佳作用浓度并不统一,这可能与试验条件及作为作用对象的细胞不同有关,结合本研究所得数据,最终确定25mg ·L -1为本试验的槲皮素最佳作用浓度,后续研究以此浓度的槲皮素作为阳性对照。

2.2.3油菜蜂花粉总黄酮(RBPF )对EA.hy926细胞氧化
损伤的保护作用采用CCK8法测定RBPF 对EA.hy926
细胞氧化损伤的保护作用,结果如图5。

在作用24h 和48h 时,与模型组相比,RBPF 各浓度剂量组的细胞活力均有明显提高,表现出对TBHP 诱导的细胞氧化损
伤的保护作用,且差异显著(p ≤0.05)。

细胞存活率随着
RBPF 浓度的增加,在低浓度(≤10mg ·L -1)范围内呈上升趋势,在高浓度(≥14mg ·L -1)范围内则表现出下降趋势,说明RBPF 对EA.hy926的保护作用在低浓度时具
有剂量依赖性,而高浓度RBPF 的抗氧化作用明显降
低。

近年来,有相关研究发现,类黄酮在低浓度条件下
表现出抗氧化作用,在高浓度条件下却表现促氧化作用[21-22],与本研究所得到的结果相符,本试验中,高浓度RBPF 导致细胞存活率下降,很可能与其表现促氧化作用有关。

RBPF 各浓度剂量组中,10,12,14mg ·L -1剂量组对细胞氧化损伤的保护作用均优于槲皮素阳性对照组,表现出了极好的抗氧化作用,其中10mg ·L -1剂量组效果最佳。

董均明等[23]研究蓬子菜总黄酮(FGVL)对H 2O 2诱导血管内皮细胞损伤的保护作用发现,浓度为12.5,25,50mg ·L -1的FGVL 均表现出对细胞氧化损伤的保护作用,且呈剂量依赖关系,FGVL 最佳作用浓度为50mg ·L -1,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS 通路,从而增加一氧化氮分泌有关。

高蒙蒙等[24]以红车轴草总黄酮为研究对象,进行了相似研究并得到相同结论,发现红车轴草总黄酮在12.5~50mg ·L -1浓度范围内对细胞氧化损伤具有保护作用,最佳作用浓度为50mg ·L -1,但整体抗氧化水平低于阳性对照槲皮素(30mg ·L -1)。

赵尉丹等[25]研究发现,鸡血藤总黄酮在低、中、高(25,50,100mg ·L -1)3个剂量组对脂多糖诱导的RAW264.7细胞氧化损伤均具有保护作用,总黄酮最佳作用浓度为100mg ·L -1,整体抗氧化水平低于阳性对照Vc(100mg ·L -1)。

通过文献调研发现,由于提取植物种类不同、作用细胞不同以及实验条件不同,各种植物总黄酮的抗细胞氧化损伤的最佳作用浓度亦表现出不同。

本研究中总黄酮的最佳作用浓度(10mg ·L -1)与其他相似研究中报道的总黄酮的最佳作用浓度(50mg ·L -1)相比明显偏低,究其原因,可能是因为本试验中采用的油菜蜂花粉总黄酮仅是粗提产物,并未经过细致纯化,其中除黄酮外,可能还有其他抗氧化作用良好的醇溶性物质发挥作用,这有待后续试验研究发现。

3讨论与结论
血管内皮细胞凋亡是动脉粥样硬化的始动因素,而氧化应激是导致血管内皮细胞损伤的主要诱因之一[26]。

H 2O 2在过氧化条件下分解成氧自由基,通过对生物膜中多不饱和脂肪酸的过氧化引起细胞损伤,最终形成动脉粥样硬化斑块[24]。

根据此原理,本研究建立了TBHP 诱导的血管内皮细胞氧化损伤模型,用以模拟动脉粥样硬化的发病情况。

蜂花粉含有丰富的多酚及黄酮类物质,因而被认为具有良好的抗氧化效果。

本试验结果表明,RBPF 在较低浓度(≤14mg ·L -1)时对TBHP 诱导的内皮细胞氧化损伤具有良好的保护作用,浓度达到10mg ·L -1时效果最佳,其抗氧化作用甚至优于具有显著抗氧化性质的槲皮素。

说明RBPF 是一种具有极高开发利用价值的天然产物,有望开发成预防动脉粥样硬化及心血管疾病的保健品,其极佳的抗氧化性质可能与其中有效成分的种类及配比有关。

此外,RBPF 在细胞水平表现抗氧化性的具体作用机制仍不清楚,本研究将在后续试验中继续深入进行研究讨论。

本试验的另外一个结果显示,高浓度(>14mg ·L -1)剂量组的RBPF 对细胞氧化损伤的保护作用明显不如低浓度剂量组,可能与高浓度黄酮会表现促氧化的性质有关。

文献调研发现,目前现有研究对黄酮类化合物的抗氧化性质报道众多且深入细致,与其相比,对黄酮促氧化作用的研究报道略显匮乏。

黄酮促氧化作用引起的细图5不同浓度RBPF 对TBHP 诱导的EA.hy926细胞损伤模型的保护作用Figure 5Protective effects of different RBPF concentrations against TBHP induced EA.hy926cells death 1201008060402005空白组Control 黄酮Flavone/mg ·L -1
24h 48h ****模型组Model 81012141618槲皮素25Quercetin 25*****************112
113杨悦等院油菜蜂花粉总黄酮对体外TBHP诱导细胞氧化损伤的保护作用
第1期--胞毒性效应可以用于抑制肿瘤细胞的增殖,可用来开发抗肿瘤药物,具有现实研究利用价值,本试验中发现的高浓度RBPF可能表现出的促氧化作用亦可作为一个方向进行深入研究。

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[责任编辑李薇]。