胃癌患者组织中FOXP3和P21表达水平的相关性及与预后的关系

广东医学 2019 年4 月 第 40 卷第 8 期 Guangdong Medical Journal Apr. 2019, Vol. 40, No. 8
• 1139 ・
胃癌患者组织中FOXP3和P21表达水平的相关性 及与预后的关系
**东莞市医疗卫生•般项目(编号:2016105101086)
欧阳杰，李洪，王力斌，李爱辉，谢书勤，梁卓虹
东莞东华医院肿瘤外科(广东东莞523110)
【摘要】目的 探讨胃癌患者组织中FOXP3和P21表达水平的相关性及与预后的关系，方法 选取
因胃癌治疗的患者86例，采用免疫组化染色检测胃癌组织中FOXP3和P21表达水平，分析FOXP3和临床特
征的关系以及和P21表达的相关性，对比FOXP3高表达和低表达患者预后的情况 结果 TNM 分期为1~ II 期、病理分期为I ~ II a 期和没有淋巴侵袭的胃癌患者其FOXP3阳性比例显著高于阴性表达，差异有统计
学意义(P<0.05), FOXP3表达阳性其P21表达阳性的比例显著高于P21表达阴性(£ =5.217,P = 0. 022), 且呈显著的正相关(r=0. 246,P = 0.022), FOXP3表达阳性的患者其总体生存率显著优于表达阴性的患者
(〃R=0.429,P=0.033) 结论 胃癌组织中FOXP3表达与肿瘤TNM 、病理分期和淋巴侵袭密切相关，
FOXP3表达与P21表达呈正相关，癌组织中FOXP3阳性是胃癌患者良好预后的重要因素
【关键词】FOXP3；胃癌；P21；临床特征;预后
【中图分类号】R735.2；R392
【文献标志码】A
DOI ：10. 13820/j. cnki. gdyx. 20183395
胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，目前在
国内是最咼发的癌症之一'，且胃癌是全球癌症相关 死亡的第二大原因⑴。

虽然目前胃癌的多种体细 胞及相关机制研究已经比较深入，但目前针对胃癌
中免疫调节相关的机制仍需要进一步明确。

FOXP3
是参与CD25 +调节性T 细胞(Treg)发育和功能的 forkhead 家族转录因子“。

FOXP3表达被认为仅限
于T 细胞谱系。

然而,一些研究人员利用免疫组织
化学和流式细胞术分析人类黑色素瘤组织，发现 FOXP3不仅在肿瘤浸润性Treg 中表达，而且在黑色
素瘤细胞中也表达⑷。

因此.FOXP3基因在肿瘤发
生中的功能以及调节FOXP3表达的机制目前成为 了研究的热点。

研究⑷表明，乳腺癌细胞中FOXP3 的表达水平与患者的生存相关，提示肿瘤FOXP3的
表达可能与转移潜能有关。

但在胃癌中，肿瘤 FOXP3的作用及仍需要进一步明确。

最近的研 究⑸表明肿瘤FOXP3在胃腺癌细胞中的表达抑制 细胞增殖并增加细胞凋亡。

普遍的细胞周期蛋白依
赖性激酶(CDK)抑制因子P21通过作用于G,检查
点，在阻止细胞周期进程中发挥重要作用"；。

最近 的一项研究显示FOXP3和P21在乳腺癌组织中的
表达强烈相关，特别是在FOXP3诱导后P21上调并 有助于其肿瘤抑制活性⑴。

关于FOXP3和P21之 间的在胃癌组织中的关系仍需要进一步明确。

因
此.本研究旨在探讨胃癌患者组织中FOXP3和P21 表达水平的相关性及与预后的关系。

1资料与方法
1. 1 一般资料 选取2014年7月至2017年1月 因胃癌于我院治疗的患者86例，纳入标准：(1)经
病理确诊为胃癌的患者；(2)病历资料及病理报告
完整；(3)获得完整随访。

排除标准：(1)合并免疫 系统疾病的患者；(2)不能获得随访及了解预后情
况的患者。

本研究经向医院伦理委员会申请并审核
通过。

86例胃癌患者，男48例，女38例，年龄34 ~ 79 岁，平均(49. 8 ±10. 7)岁。

1.2免疫组化检测每例患者的组织保存在甲醛 溶液，并常规石蜡包埋，并制成4 pm 的切片。

在
Leica 全自动免疫组化染色仪Bond 软件操作，使用
Bond Dewax Solution ( Vision BioSystems)常规进行的 组织脱蜡，在100T 下采用Bon.l ER 溶剂进行抗原
修复30 min 。

通过将组织与过氧化氢温育5 min 来 淬灭内源性过氧化物酶。

将切片在室温下与anti -
FOXP3 ( I : 100, ab20034, Abeam , UK ) , anti - P21
(l ：200,abl09520； Abeam, UK)按程序室温孵育 1 h,使用不含生物素的聚合物辣根过氧化物酶二抗孵
育1 h,细胞核用苏木精复染。

在显微镜下评估 FOXP3和P21的表达水平。

1.3免疫组化统计 在高倍镜下(200 x )评估肿
瘤细胞质FOXP3的表达水平。

至少有20%的核和
细胞质染色被认为是FOXP3表达阳性。

P21的表
-1140-
广东医学2019年4月第40卷第8期Guangdong Medical Journal Apr.2019,Vol.40,No.8达M30%的肿瘤细胞则定义为阳性细胞质表达。

P21和FOXP3在胃癌组织中表达均至少选择5个
视野进行评估，取平均值作为结果进行计算。

1.4临床资料收集收集所有患者的基本资料，包
括肿瘤大小，组织类型、肿瘤TNM分期，病理分期，
淋巴结和血管浸润情况，记录患者病理结果中的
P53、Ki67表水平，记录患者随访的生存时间。

1.5统计学方法采用SPSS24.0统计软件分析
数据，正态分布计量资料采用%±5表示，比较采用t
检验，计数资料采用百分比表示，比较采用/检验。

使用Kaplan-Meier生存曲线和log-rank检验对比
FOXP3阳性和阴性表达患者的总体生存率，P<
0.05为差异有统计学意义。

2结果
2.I FOXP3表达与临床特征的关系其中胃癌组
织中FOXP3表达水平与患者的性别、年龄、肿瘤大
小、肿瘤分化程度、血管侵袭比例没有显著的相关性
(P>0.05),而TNM分期为1~II期、病理分期为
I~Ha期和没有淋巴侵袭的胃癌患者其FOXP3
阳性比例显著高于阴性表达，差异有统计学意义
(P<0.05),见表1。

表1胃癌组织中FOXP3表达水平与临床特征的关系例(％)
临床特征
FOXP3表达
X2值P值阳性5=37)阴性5=49)
性别 1.0610.303男23(47.9)25(52.1)
女14(36.8)24(63.2)
年龄(岁)0.6110.434 <5019(47.5)21(52.5)
M5018(39.1)28(60.9)
肿瘤大小(cm) 1.1170.290 M322(48.9)23(51.1)
<315(37.5)25(62.5)
分化程度0.4450.505中低分化20(40.0)30(60.0)
高分化17(47.2)19(52.8)
TNM分期 4.6810.030 I~n26(53.1)23(46.9)
m~iv11(29.7)26(70.3)
病理分期 6.3940.011 I〜Da23(57.5)17(42.5)
ni)~iv14(30.4)32(69.6)
淋巴侵袭7.2130.007否28(54.9)23(45.1)
是9(25.7)26(74.3)
血管侵袭0.8720.350否6(33.3)12(66.7)
是31(45.6)37(54.4)2.2FOXP3表达与P21及相关蛋白表达的关系
胃癌组织中FOXP3表达阳性其P21表达阳性的比例显著高于P21表达阴性(/=5.217,P=0.022),且呈显著的正相关(r=0.246,P=0.022),FOXP3表达与P53和Ki67表达无显著的相关性(P> 0.05)，见表2和图10
表2FOXP3表达与P21及相关蛋白表达的关系例(％)
相关蛋白
FOXP3表达
X2值P值
阳性5=37)阴性5=49)
P21 5.2170.022阳性22(47.9)17(52.1)
阴性15(36.8)32(63.2)
P530.8330.362阳性24(47.5)27(52.5)
阴性13(39.1)22(60.9)
Ki670.4270.514阳性17(48.9)26(51.1)
阴性20(37.5)23(62.5)
2.3胃癌组织中FOXP3表达水平与预后的关系
其中86例患者其随访时间为6~48个月，中位随访时间为33个月，总体存活率为69.8%,Kaplan-Meier生存曲线结果显示胃癌组织中FOXP3表达阳性的患者其总体生存率显著优于表达阴性的患者，差异有统计学意义(W«=0.429,95CI%0.197~ 0.934/=0.033),见图2。

3讨论
目前研究表明FOXP3的表达多被认为仅限于T细胞系，而肿瘤细胞中的FOXP3表达本身并不涉及肿瘤发生⑻。

在一些癌症包括胃癌、肝癌、乳腺癌、胰腺癌和肺癌、肿瘤微环境中浸润的FOXP3阳性Tregs增加已被报道为预后不良的风险因素|9-I0]o而最近的研究表明肿瘤细胞本身中的FOXP3表达与肿瘤的进展同样具有密切的联系。

FOXP3在多种肿瘤细胞中也表达，如乳腺癌细胞、黑色素瘤细胞、胰腺腺癌细胞和各种实体瘤：进一步的研究结果显示FOXP3基因是乳腺癌、前列腺癌和非小细胞肺癌的肿瘤抑制基因。

FOXP3表达的丧失通过允许HER-2/ErbB2癌基因的增强表达促进肿瘤发生，从而FOXP3参与HER-2/ErbB2癌基因在乳腺癌进展中的调节作用氏]。

肿瘤FOXP3的上调同时可抑制了卵巢癌细胞的增殖，减少细胞的迁移和细胞侵袭但对于胃癌中FOXP3的表达水平是否与临床特征具有联系仍未明确。

广东医学2019年4月第40卷第8期Guangdong Medical Journal Apr.2019,Vol.40,No.8•1141•
图2胃癌组织中FOXP3表达与临床总体生存率的关系
本研究结果显示胃癌组织中癌细胞中也存在FOXP3阳性表达的情况，同时进一步分析胃癌组织FOXP3阳性表达与患者临床特征的情况，表明了胃癌FOXP3表达与TNM、病理分期和淋巴侵袭密切相关，同时FOXP3表达与P21的表达呈显著的正相关,表明了FOXP3在调控Treg的功能时.也调控了肿瘤本身的生长。

本研究结果也与既往研究中FOXP3与P21在人类乳腺癌中的相关性结果相似。

既往研究⑹显示了P21作为FOXP3转录调控的下游靶点发挥重要作用，并且其表达介导的乳腺癌细胞系的生长抑制。

P21是肿瘤抑制基因的主要下游靶点，由于P21能够引起G期细胞周期停滞⑷，因此它是P53信号通路中G./S转换的重要检查位点。

最后,本研究也分析了胃癌FOXP3表达与患者预后的关系，结果显示了胃癌FOXP3阳性表达的患者其临床预后显著优于FOXP3阴性表达的患者，这也进一步确认了胃癌中FOXP3的阳性表达是胃癌中的一个抑癌因素。

既往关于肿瘤FOXP3亚细胞定位的研究报道了其在细胞质和细胞核中的异源定位3。

尽管体外证据表明肿瘤FOXP3的肿瘤抑制功能，一种理论认为体外实验和临床应用之间的这种差异是因为肿瘤FOXP3的差异细胞质定位，在癌细胞中发现的FOXP3的各种亚细胞定位模式可能并不反映特定的功能状态：回。

但其如何调控胃癌病情进展的分子机制仍需要进一步明确。

综上所述，胃癌组织中FOXP3表达与肿瘤TNM、病理分期和淋巴侵袭密切相关,FOXP3表达与P21表达呈正相关，癌组织中FOXP3阳性是胃癌患者良好预后的重要因素。

参考文献
[1]郑朝旭，郑荣寿，张思维.等.中国2010年胃癌发病与死亡
分析[J]•中国肿瘤，2014,23(10)：795-800.
[2]Wang LU,Su L,Wang JT.Correlation between elevated FOXP3
expression and increased lymph node metastasis of gastric cancer [J].Chin Med J(Engl),2010,123(24):3545-3549. [3]Yoshii M.Tanaka H,Ohira M,et al.Expression of Fork h ead box
P3in tumour cells c-auses imniunoregulatorv function of signet ring cell carcinoma of the stomach J.Br J Cancer,2012,106(10):
1668-1674.
[4]Merlo A,Casa!ini P.Carcangiu ML,et al.FOXP3expression and
overall survival in breast cancer[J.J Clin Oncol,2009,27
(11)：1746-1752.
[5]Ma GF,Chen SY,Sun ZR,et al.FoxP3inhibits proliferation and
induces apoptosis of gastric cancer cells by activating the apoptotic signaling pathway[J].Biochem Biophvs Res Commun,2013, 430(2):804-809.
[_6]Liu R,Wang L,Chen G,et al.FOXP3up-regulates p21ex­pression by site-specific inhibition of histone deacetylase2/his-tone deacetylase4association to the locus J.Cancer Res,2009, 69(6):2252-2259.
[7]Jung DJ,Jin DH,Hong SW,et al.Foxp3expression in p53一de­
pendent DNA damage responses[J.J Biol Cheni,2010,285
(11)：7995-8002.
(下转第1146
页)
・1146•
广东医学2019年4月第40卷第8期Guangdong Medical Journal Apr.2019,Vol.40,No.8
ging modality for clinical assessment of the microcirculation J]•
Opt Express,2007,15(23)：15101-151148.
13Pennings FA,Ince C,Bouma GJ.Continuous real-time visual­ization of the human cerebral microcirculation during arteriovenous malfonnation surgery using orthogonal polarization spectral imaging
[J].Neurosurgery,2006,59(1)：167-171.
14j Den Uil CA.Bezenier R,Miranda DR.et al.Intra-operative as­sessment of human pulmonan alveoli in vivo using sidestream dark field imaging：a feasibility study J J.Med Sei Monit,15(10):
MT137-141.
15Dubin A,Edul VS,Pozo MO,et al.Persistent villi hypoperfusion explains intramucosal acidosis in sheep endotoxemia[J丨.Crit
Care Med,2008,36(2):535-542.
]16]Novljan G,Rus RR,Koren Jeverica A.Detection of Dialysis Ac­cess Induced Limb Ischemia by Infrared Thermography in Children
[J].Ther Apher Dial,2011,15(3)：298-305.
[17]Bagavalhiappan S,Saravanan T,John Philip JT.Infrared thermal
imaging for detection of peripheral vascular disorders[J].J Med
Phys,2009,34(1)：43-47.
L18]Mariot Amerioti A,Grossi GP,Orlando G.Finger thermoregulato-ry mode)assessing functional impairment in Raynaud's plienonie-
(上接第1141页)
[8]Fontenot JI),Rasmussen JP,Williams LM,et al.Regulatory T
cell lineage specification by the forkhead transcription factor foxp3
[J],Immunity,2005.22(3)：329-341.
[9Shimizu K,Nakata M,Hirami Y,et al.Tumor一inGltrating Foxp3+regulatory T cells are correlated with cyclooxygenase-2
expression and are associated with recurrence in resected non-
small cell lung cancer[J].J Thorax Oncol,2()10,5(5)：585-
590.
10]Gao Q,Qiu SJ,Ean J,et al.Intratunioral balance of regulator) and cytotoxic T cells is associated with prognosis of hepatocellular
carcinoma after resection J'.J Clin Oncol,2007,25(18)：2586-
2593.
[II]Won KY,Kim HS,Sung JY,et al.1'umoral FOX1^3has potential oncogenic function in conjunction with the p53tumor suppressor protein and infiltrated Tregs in human breast carcinomas[].
Pathol Res Pract,2013.209(12)：767-773.
'12]Zuo T,Wang L,Monison C,et al.FOXP3is an X-linked
non[J.Ann Biomed Eng,2009,37(12):2631-2639. [19]Malafaia0,Brioschi ML,Aoki SM.et al.Infrared imaging con­
tribution for intestinal ischemia detection in wound healing[J「.
Acta Cir Bras,2008,23(6):511-519.
[20]Gorbach AM,Wang H,Dhanani NN,et al.Assessment of critical
renal ischemia with real-time infrared imaging]J1.J Surg Res.
2008,149(2):31()-318.
21J Pereira CB,Czaplik M,Blanik N,et al.Contact-free monitoring of circulation and periusion dynamics based on the analysis of ther­mal imagery_J_.Biomed Opt Express,2014,5(4)：1075-
1789.
[22]Volovik MG,Kiselev DV,Polevaya SA,et al.The Effect of Re­
peated Local Ischemia on the Temperature and Skin Microcirculation in Human Hand[J.Fiziol Cheloveka,2015,41(4)：100—
109.
[23Nieuwenhoff MD,Wu Y.Huygen FJ,et al.Reproducibility of ax­on reflex一related vasodilation assessed by dynamic thennal ima­ging in healthy subjects[J].Microvasc Res,2016,106：1-7.
[24]Chojnovvski M.Infrared thermal imaging in connective tissue dis­
eases J.Reumatologia,2017,55(1)：38-43.
(收稿日期:2018-7-30编辑:杜冠辉)
breast cancer suppressor gene and an important repressor of the HER-2/Erl)B2oncogene[J].Cell,2007,129(7)：1275-
1286.
[13]Zhang HY,Sun H.Up-regulation of Foxp3inhibits cell prolifer­
ation,migration and invasion in epithelial ovarian cancer[J
Cancer Lett,2010,287(1)：91-97.
[14]徐丽,金清东，宫喜，等.褪黑素的抗胃癌效应及其引起的叨-
2、Bax、p21和])53的表达变化[J].生理学报,2014,66(6)：
723-729.
[15]Quaglino P,Osella-Abate S,Marenco F,et al.FoxP3expres­
sion on melanoma cells is related to early visceral spreading in melanoma patients treated by electrochemotherapy[J].Pigment Cell Melanoma Res,2011,24(4)：734-736.
[16]Triulzi T,Tagliabue E,Balsari A,et al.FOXP3expression in
tumor cells and implications for cancer progression[J J.J Cell Physiol,2013,228(1)：30-35.
(收稿日期:2018-06-19编辑:朱绍煜)。