血清蛋白质组学技术在结核病诊断中的研究进展
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蛋 白质 是 目前 蛋 白质 组 学研 究 的重 要 手段 。下 面介 缺陷。该技术不仅能获得肽段质量 ，而且 能获得肽 段 的氨基酸序列信息 ，具有较 高的敏感度 ，近年来 绍 几种 常用 的血清 蛋 白质组 学分 离 鉴定 技术 。 １ ． １蛋 白 质 分 离 技 术 双 向 凝 胶 电 泳 技 术 （ ｔ ｗｏ —
・
２ ２６ ・
结 核 病 与胸 部 肿瘤 ２ ０ １ ７ 年 第 ３期
Hale Waihona Puke Ｔ ｕ ｂ ｅ ｒ ＆Ｔ ｈ ｏ ｒ Ｔ ｕ ｍｏ ｒ ， Ｓ ｅ ｐ ｔ ２ ０ １ ７ ， Ｎｏ ． ３
．
综述 ．
血清 蛋 白质组学技术在 结核病诊 断 中的研 究进 展
孙会姗 潘丽萍 贾红彦 张宗德
得 到 了快 速 发展 ，逐 步 应 用 于 结 核 病 患者 的 血 清研 快速准确的诊断方法对于有效控制结核病意义重大。 究。
样 品进行绝对 和相对定量的研究 ，但该技术存在需
要 同位 素标记 、标签 昂贵及标 记过程复杂 等问题。 ２蛋 白质 组 学技 术在 结核 病 血 清标 志物 筛选 中的 而 非 标 记 定 量 蛋 白质 组 学 方 法 不 需 要 同位 素标 记 ， 应 用 目前 多种 蛋 白质 组 学 技 术 已用 于 筛 选 结 核 病 患 依靠色谱和质谱数据来定量样本 中的肽段对不 同的 样本进行单独的质谱分析 Ｍ 】 ，获得分馏成分后检测 者 的血 清 特 异 性 蛋 白标 志 物 ，这 些 差 异 蛋 白质 可 能 峰强度或肽段 总次数 ，就能直接得到不同样本 的比 参与 了结核病 的潜伏期 、活动期 、转归期和复发期 较蛋 白质组结果 『 ５ 】 。这两种方法都具有较 高的蛋 白 过程 ，为深入研究其发病机制提供了重要信 息。
高 ，通 常 只用 于 ＭＡＬ ＤＩ — Ｔ ＯＦ — ＭＳ不 能 鉴 定 的样 品 。 通过 ２ 次 凝胶 电泳 达 到分 离效 果 ，分辨 率 高 ，重 表 面增 强 激 光 解 吸离 子 化 飞 行 时 间质 谱 （ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ． 复 性 好 ，但 对 疏 水 蛋 白质 、极 端 碱 性 蛋 白质 和 低
的研 究 应用 进 行综 述 。
基 质 辅 助 激 光 解 吸 电离 飞行
时 间 质谱 （ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ — ａ ｓ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｄ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｄ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ／ ｉ ｏ ｎ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
这为结核病的诊断与鉴别诊断提供 了重要 的理论依 ｔ ｉ ｍｅ — ｏ ｆ － ｌｉ ｆ ｇ ｈ ｔ ｍａ ｓ ｓ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ，Ｍ ＡＬＤＩ － Ｔ ＯＦ — ＭＳ ）
ｅ ｎ ｈ ａ ｎ ｃ ｅ ｄ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｄｅ ｓ ｏｒ ｐｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｏ ｎｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｉ ｍｅ ｏ ｆ ｌｉ ｆ ｇｈ ｔ ｍａ ｓ ｓ
ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｍｅ ｔ ｒ ｙ ，Ｓ Ｅ Ｌ Ｄ Ｉ ． Ｔ ＯＦ — ＭＳ ） 通 过将 芯 片 技 术 与 质
谱技术相结合 ，能够敏感 、高通量 的从复杂 的体液
（ 血 清 和胸 腔 积 液 等 ） 中分离 蛋 白质 ，形成 比较 蛋 白 质 谱 。该 技 术 简 单 、快 速 ，检 测 只需 要 少 量 的样 本 （ ０ ． ５～ ５ ． ０ ｇ １ ）【 ７ 】 ，但 不 能对 检 测 到 的蛋 白质 进行 直 接 鉴定 ，需 要 对该 技术 的实验 条 件进 一步 优 化 。
结核 病是 严重 威胁 人 类健 康 的重 大传染 病 之 一 ，
目前 ，蛋 白质组学技术 已广泛应用于结核病患者血 １ ． ２蛋 白质 鉴 定 技 术
清 学 的 研 究 中 ，并 发 现 了一 些 重 要 的 蛋 白质 分 子 ， 据 。本 文对 血 清 蛋 白组 学 技 术 在 结 核病 患 者 诊 断 中
具 有 高 精 确 性 、高敏 感 度 和 宽 分 子 量 检 测 范 围 ，主 要 用于 肽质 量 指纹 （ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｍａ ｓ ｓ ｉ ｆ ｎ ｇ ｅ ｒ ｐ ｒ ｉ ｎ ｔ ｉ ｎ ｇ ， Ｐ ＭＦ ）
１ 血清 蛋 白质组学技术研究进展 血液中的蛋 白质 的鉴 定 ，不需 要全部 肽片段质 量均与理 论值相符 ， 处 于 不 断 的变 化 中 ，但 血 清 中含 量 只 有 １ ％ 的低 丰 可 同 时 处 理 许 多 样 品 ，是 大 规 模 鉴 定 的 首 选 方 法 。 ＭＦ路 线 来 鉴 定 蛋 白质 并 非 总能 获 得 成 功 ， 度蛋 白质却是与疾病相关 的组织病理信息的载体 】 ， 但单靠 Ｐ 因此 ，富集血清 中的低 丰度蛋 白质并筛选鉴定差异 因此 ，电喷 雾 串联 质谱 （ Ｅ Ｓ Ｉ — Ｍｓ ／ Ｍｓ ） 弥 补 了这 一
丰度蛋 白质等的分离仍有一定 困难 ［ ２ 】 。因此不基于 胶 分离 的蛋 白质组 学技术 逐渐 发展 起来 ，包括 同 位 素标 记 相对 和 绝对 定 量 （ ｉ ｓ ｏ ｂ ａ ｒ ｉ ｃ ｔ ａ ｇ ｓ ｆ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ
ａ ｎ ｄ ａ ｂ ｓ ｏ ｌ ｕ ｔ ｅ ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｉ Ｔ Ｒ ＡＱ ） 及 非 标 记 技 术。 ｉ Ｔ Ｒ ＡＱ技 术 分 辨 率 高 ［ ３ 】 ，通 过 ｉ Ｔ ＲＡ Ｑ 同 位 素 试 剂 标 记 氨 基 酸 Ｎ 端 及赖 氨 酸 侧链 基 团 ，能 同时 对 ８种
ｄ ｉ ｍｅ ｎ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｇ ｅ ｌ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｐ ｈ ｏ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ，２ Ｄ— ＤＩ Ｇ Ｅ ）
常 与 液 相 色谱 联 用 ，具 有 在 高 复 杂 性 样 本 中鉴 定 低 丰 度 蛋 白质 的 强 大 功 能 ，但 其 系统 复 杂 、操 作 要 求
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结 核 病 与胸 部 肿瘤 ２ ０ １ ７ 年 第 ３期
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血清 蛋 白质组学技术在 结核病诊 断 中的研 究进 展
孙会姗 潘丽萍 贾红彦 张宗德
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样 品进行绝对 和相对定量的研究 ，但该技术存在需
要 同位 素标记 、标签 昂贵及标 记过程复杂 等问题。 ２蛋 白质 组 学技 术在 结核 病 血 清标 志物 筛选 中的 而 非 标 记 定 量 蛋 白质 组 学 方 法 不 需 要 同位 素标 记 ， 应 用 目前 多种 蛋 白质 组 学 技 术 已用 于 筛 选 结 核 病 患 依靠色谱和质谱数据来定量样本 中的肽段对不 同的 样本进行单独的质谱分析 Ｍ 】 ，获得分馏成分后检测 者 的血 清 特 异 性 蛋 白标 志 物 ，这 些 差 异 蛋 白质 可 能 峰强度或肽段 总次数 ，就能直接得到不同样本 的比 参与 了结核病 的潜伏期 、活动期 、转归期和复发期 较蛋 白质组结果 『 ５ 】 。这两种方法都具有较 高的蛋 白 过程 ，为深入研究其发病机制提供了重要信 息。
高 ，通 常 只用 于 ＭＡＬ ＤＩ — Ｔ ＯＦ — ＭＳ不 能 鉴 定 的样 品 。 通过 ２ 次 凝胶 电泳 达 到分 离效 果 ，分辨 率 高 ，重 表 面增 强 激 光 解 吸离 子 化 飞 行 时 间质 谱 （ ｓ ｕ ｒ ｆ ａ ｃ ｅ ． 复 性 好 ，但 对 疏 水 蛋 白质 、极 端 碱 性 蛋 白质 和 低
的研 究 应用 进 行综 述 。
基 质 辅 助 激 光 解 吸 电离 飞行
时 间 质谱 （ ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ — ａ ｓ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｄ ｌ ａ ｓ ｅ ｒ ｄ ｅ ｓ ｏ ｒ ｐ ｔ ｉ ｏ ｎ ／ ｉ ｏ ｎ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ
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（ 血 清 和胸 腔 积 液 等 ） 中分离 蛋 白质 ，形成 比较 蛋 白 质 谱 。该 技 术 简 单 、快 速 ，检 测 只需 要 少 量 的样 本 （ ０ ． ５～ ５ ． ０ ｇ １ ）【 ７ 】 ，但 不 能对 检 测 到 的蛋 白质 进行 直 接 鉴定 ，需 要 对该 技术 的实验 条 件进 一步 优 化 。
结核 病是 严重 威胁 人 类健 康 的重 大传染 病 之 一 ，
目前 ，蛋 白质组学技术 已广泛应用于结核病患者血 １ ． ２蛋 白质 鉴 定 技 术
清 学 的 研 究 中 ，并 发 现 了一 些 重 要 的 蛋 白质 分 子 ， 据 。本 文对 血 清 蛋 白组 学 技 术 在 结 核病 患 者 诊 断 中
具 有 高 精 确 性 、高敏 感 度 和 宽 分 子 量 检 测 范 围 ，主 要 用于 肽质 量 指纹 （ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ ｍａ ｓ ｓ ｉ ｆ ｎ ｇ ｅ ｒ ｐ ｒ ｉ ｎ ｔ ｉ ｎ ｇ ， Ｐ ＭＦ ）
１ 血清 蛋 白质组学技术研究进展 血液中的蛋 白质 的鉴 定 ，不需 要全部 肽片段质 量均与理 论值相符 ， 处 于 不 断 的变 化 中 ，但 血 清 中含 量 只 有 １ ％ 的低 丰 可 同 时 处 理 许 多 样 品 ，是 大 规 模 鉴 定 的 首 选 方 法 。 ＭＦ路 线 来 鉴 定 蛋 白质 并 非 总能 获 得 成 功 ， 度蛋 白质却是与疾病相关 的组织病理信息的载体 】 ， 但单靠 Ｐ 因此 ，富集血清 中的低 丰度蛋 白质并筛选鉴定差异 因此 ，电喷 雾 串联 质谱 （ Ｅ Ｓ Ｉ — Ｍｓ ／ Ｍｓ ） 弥 补 了这 一
丰度蛋 白质等的分离仍有一定 困难 ［ ２ 】 。因此不基于 胶 分离 的蛋 白质组 学技术 逐渐 发展 起来 ，包括 同 位 素标 记 相对 和 绝对 定 量 （ ｉ ｓ ｏ ｂ ａ ｒ ｉ ｃ ｔ ａ ｇ ｓ ｆ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ
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常 与 液 相 色谱 联 用 ，具 有 在 高 复 杂 性 样 本 中鉴 定 低 丰 度 蛋 白质 的 强 大 功 能 ，但 其 系统 复 杂 、操 作 要 求