Agilent 1100色谱工作站操作培训课件.ppt
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安捷伦1100培训手册
使用均一的载体 仔细填充柱子 选择粒度小的载体 优化流速 减小进样量 降低系统死体积 降低输出回路响应时间
No.24
第二章 HPLC 仪器工作原理
本章内容：
•往复活塞泵的结构及工作原理 •手动进样器（六通阀）结构及工作原理 •常见检测器检测原理
No.25
溶剂传输系统
往复活塞泵(单向阀)
Gold Seal Sapphire Insert Ruby Ball Spring Insert
60℃
0
5 Time in Minutes
10
No.14
柱效
Detector Response Inject
低柱效
高柱效
Time
No.15
计算柱效
tR
Inject
W 1/2
W Time
B
N = 16
t R WB L N
2 = 5.54
t R W 1/2
2
HETP =
No.16
扩散
范德姆特方程 The Van Deemter Equation
150 4.0
100 3.0 2.0
50
1.0
10
No.6
高效液相色谱 (HPLC)
进样口 混合器 泵 色谱图 色谱柱
检测器
溶剂
No.7
液相色谱类型
Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak Bases
Mode
Stationary Phase
No.31
Necessity for More than One Detector
Selectivity
Flecainide in Serum
No.24
第二章 HPLC 仪器工作原理
本章内容：
•往复活塞泵的结构及工作原理 •手动进样器（六通阀）结构及工作原理 •常见检测器检测原理
No.25
溶剂传输系统
往复活塞泵(单向阀)
Gold Seal Sapphire Insert Ruby Ball Spring Insert
60℃
0
5 Time in Minutes
10
No.14
柱效
Detector Response Inject
低柱效
高柱效
Time
No.15
计算柱效
tR
Inject
W 1/2
W Time
B
N = 16
t R WB L N
2 = 5.54
t R W 1/2
2
HETP =
No.16
扩散
范德姆特方程 The Van Deemter Equation
150 4.0
100 3.0 2.0
50
1.0
10
No.6
高效液相色谱 (HPLC)
进样口 混合器 泵 色谱图 色谱柱
检测器
溶剂
No.7
液相色谱类型
Types of Compounds Separated Neutrals Weak Acids Weak Bases
Mode
Stationary Phase
No.31
Necessity for More than One Detector
Selectivity
Flecainide in Serum
Agilent1100操作方法课件
高效液相色谱知识收藏Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项：高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法液相色谱柱使用及保养高压液相色谱HPLC培训教程(一)高压液相色谱HPLC培训教程(七)高效液相色谱仪中反相HPLC柱子的清洁和再生HPLC对流动相的基本要求高效液相色谱Waters 600E-2487 HPLC系统SOPWaters高效液相色谱系统操作规程高效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱扫盲班Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC 通讯，进入的工作站画面。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok 关泵，关闭Purge valve。
安捷伦1100工作站详细图文操作手册
每个模块右下方都有开关键，点击 后出现开泵、开灯等提示，选择 “Yes”即将泵、灯等打开。
点击“on”将打开所有模块，点 击“off”将关闭所有模块。
2021/2/16
7
Author：Tianyou Yue
改变仪器运行参数
对着仪器模块点击左键然后 点击Set up Pump…,显示右 面的对话框,在此对话框中可 以设置泵的参数。
2021/2/16
4
Author：Tianyou Yue
通过View改变GUI不同的显示风格
自动进样控制
打开Offline
显示快捷工具条 显示状态工具条
在线信号显示
显示仪器控制区
2021/2/16
5
Author：Tianyou Yue
输入流动相的量
对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框
在Total Volume下输入溶剂瓶容量，一 般为1.00Liter，Actual Volume下输入溶 剂实际加入的量，比如0.5Liter
选中下面两个选项后，在溶剂低于 0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵 自动关闭。
2021/2/16
6
Author：Tianyou Yue
在工作站上开启仪器
Control为泵的控制，点击 Not Ready Information则显 示没有准备好或错误信息。 Help为在线帮助。
2021/2/16
柱箱、检测器、自动进样器等 参数改变操作与此相同
8
Author：Tianyou Yue
选择在线显示信号
在Online Plot上点击“Change”， 显出右面对话框，在此对话框中左 面为可用信号，右面为在线显示信 号，通过“Add””Remove”改变不 同的显示信号。
Agilent化学工作站讲义解析PPT教学课件
色谱峰 h
信 号
进样 空气峰
色谱流出曲线 a
• 色谱流出曲线和色谱峰
• 基线（a）
• 峰高（h）
第4页/共81页
色谱流出曲线及有关术语
（四）保留值 1. 死时间t0
不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值 所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。
信 进样 号
t0
第5页/共81页
色谱流出曲线及有关术语
因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其 流动速度将与流动相流动速度相近。测定流动相平 均线速ū时，可用柱长L与t0的比值计算，即
ū = L/t0
2. 保留时间tr
信 进试样样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时 号间，称为保留时间，如下图。
tr
第6页/共81页
据； (v) 色谱峰两峰间的距离，是评价固定相（或流动相）选择是否
合适的依据。
第13页/共81页
第14页/共81页
色谱定性鉴定方法
1.利用纯物质定性的方法
利用保留值定性：通过对比试样中具有与纯物质相同保 留值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图 中的位置。不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。
第7页/共81页
色谱流出曲线及有关术语
4. 死体积V0
指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中 管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。当后两相很小可忽略不 计 时 ， 死 体 积 可 由 死 时 间 与 色 谱 柱 出 口 的 载 气 流 速 F co（ c m 3·m i n -1） 计 算 。
V0 = t0Fco
式中 Fco为扣除饱和水蒸气压并经温度校正的流速。 • 仅适用于气相色谱，不适用于液相色谱。
最新安捷伦高效液相色谱工作站高级操作培训ppt课件
• 从 Integration 菜单选择积分或自动积分 • 选择积分工具。 • 运行一个包括数据分析的完整方法。
Slide 54
自动积分
•检查开始和结束区域，确定噪音。 •赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. •对第一次积分赋予一个临时峰宽值。 •设置Area Reject为0。 •执行测试性积分，有可能重复几次。 •基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。 •优化Slope Sensitivity和Height Reject。 •从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。
Slide 34
泵的辅助功能
选择Instrument More Pump Auxiliary…菜单，即 可弹出下图窗口。
在该窗口可以设置泵 的最大升流速率、泵 冲程大小以及设置溶 剂的压缩补偿因子。
Slide 35
自动进样器的扩展功能
Slide 36
色谱柱信息的输入
Slide 37
VWD停泵扫描采集光谱
Slide 59
Peak width: (半峰宽)
如果没有设置半峰宽的时间积分表，半峰宽在整个积分过程中自动变化，变化 遵从0.75×exiting peak + 0.25×current peak。
Timed Events :(时间性积分事件)
•Area Sum ON or OFF:设定某一时间段内进行峰面积加和，加和后保 留时间被分配到第一个峰的保留时间上。
使用VWD停泵扫描的功能，可以采集样品的吸收光谱， 主要操作步骤如下： 1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口； 2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据，并保证能够在
Online Signal窗口中观测到色谱信号； 3.进样后，色谱图上出现基线时，扫描空白吸收光谱
Slide 54
自动积分
•检查开始和结束区域，确定噪音。 •赋予初始Slope Sensitivity和Height Reject值. •对第一次积分赋予一个临时峰宽值。 •设置Area Reject为0。 •执行测试性积分，有可能重复几次。 •基于较早洗脱出的色谱峰宽计算峰宽值。 •优化Slope Sensitivity和Height Reject。 •从初始的峰宽和噪音水平计算Area Reject。
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泵的辅助功能
选择Instrument More Pump Auxiliary…菜单，即 可弹出下图窗口。
在该窗口可以设置泵 的最大升流速率、泵 冲程大小以及设置溶 剂的压缩补偿因子。
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自动进样器的扩展功能
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色谱柱信息的输入
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VWD停泵扫描采集光谱
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Peak width: (半峰宽)
如果没有设置半峰宽的时间积分表，半峰宽在整个积分过程中自动变化，变化 遵从0.75×exiting peak + 0.25×current peak。
Timed Events :(时间性积分事件)
•Area Sum ON or OFF:设定某一时间段内进行峰面积加和，加和后保 留时间被分配到第一个峰的保留时间上。
使用VWD停泵扫描的功能，可以采集样品的吸收光谱， 主要操作步骤如下： 1.在Online工作站界面的View菜单下打开VWD Scans窗口； 2.按照正常的进样方式采集样品色谱数据，并保证能够在
Online Signal窗口中观测到色谱信号； 3.进样后，色谱图上出现基线时，扫描空白吸收光谱
Agilent1100型高效液相色谱仪操作规程-PPT课件
Agilent 1100型高效液相色谱仪操作规程
溶剂瓶 溶剂架
在线脱气
Purge阀 泵
自动进样器 柱温箱 检测器
仪器各组件
泵 ：四元泵、二元泵 在线脱气器 进样器：自动进样器及手动进样器 柱温箱 检测器： DAD检测器、UV检测器
Agilent1100在线脱气机
Agilent1100在线脱气机工作原 理
何时需要使用Agilent在线脱气机
如果在低UV波长段，用最高灵敏度进行检测 如果要求使用最佳进样精度 如果要求保留时间重现性很高 （在0.5ml/min流速以下） 如果样品和检测对流动相中溶解氧敏感
Agilent 1100泵
Agilent 1100四元泵工作原理
Agilent 1100泵头结构
编辑分析方法
新方法建立：点击【 Method】，点击 【 Edit entire method】 或 【 New method】选项，进行方法编缉。
在Method Comments 中加入方法的信息如方 法的用途等
泵参数设定
在Flow 处输入流量, 在Solvent A、B、C、D 处输入比例，也可Insert一 行”Timetable” ,编辑梯度，在Pressure Limits Max 处输入柱子的最大耐高 压。单击Ok进入下一画面
排气
将流动相放入溶剂瓶中，打开 Purge 阀，依次单击 【 Pump】→【Set up Pump】， 设 Flow 为 2 ml/min， 单 击 OK ， 再 依 次 单 击 【 Pump】→ 【control】，选中 on，单击OK，则系统开始 Purge 至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均 无气泡。 在【control】选项中选off，关闭泵，关闭Purge 阀。 单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 如图所示。 打开10％异丙醇溶液控制阀，用针筒抽吸至管路中有 液体流出。调节控制阀松紧，控制流量至流出量约为 每分钟5～15滴。
溶剂瓶 溶剂架
在线脱气
Purge阀 泵
自动进样器 柱温箱 检测器
仪器各组件
泵 ：四元泵、二元泵 在线脱气器 进样器：自动进样器及手动进样器 柱温箱 检测器： DAD检测器、UV检测器
Agilent1100在线脱气机
Agilent1100在线脱气机工作原 理
何时需要使用Agilent在线脱气机
如果在低UV波长段，用最高灵敏度进行检测 如果要求使用最佳进样精度 如果要求保留时间重现性很高 （在0.5ml/min流速以下） 如果样品和检测对流动相中溶解氧敏感
Agilent 1100泵
Agilent 1100四元泵工作原理
Agilent 1100泵头结构
编辑分析方法
新方法建立：点击【 Method】，点击 【 Edit entire method】 或 【 New method】选项，进行方法编缉。
在Method Comments 中加入方法的信息如方 法的用途等
泵参数设定
在Flow 处输入流量, 在Solvent A、B、C、D 处输入比例，也可Insert一 行”Timetable” ,编辑梯度，在Pressure Limits Max 处输入柱子的最大耐高 压。单击Ok进入下一画面
排气
将流动相放入溶剂瓶中，打开 Purge 阀，依次单击 【 Pump】→【Set up Pump】， 设 Flow 为 2 ml/min， 单 击 OK ， 再 依 次 单 击 【 Pump】→ 【control】，选中 on，单击OK，则系统开始 Purge 至管路无气泡为止，切换管路反复操作至所需管路均 无气泡。 在【control】选项中选off，关闭泵，关闭Purge 阀。 单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。 如图所示。 打开10％异丙醇溶液控制阀，用针筒抽吸至管路中有 液体流出。调节控制阀松紧，控制流量至流出量约为 每分钟5～15滴。
AgilentHPLC1100ChemStation高级操作培训(安捷伦科技公司)
HPLC 1100 ChemStation 高级操作培训
2020年9月25日
授课教师 纪学海
2005-3-212020/9/25
Slide 1
HPLC 1100 Advance操作培训日程安排
第一天 第二天
上午： 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍 3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置
进样和运行位置
2005-3-212020/9/25
Slide 19
标准自动进样器的程序进样
2005-3-212020/9/25
Slide 20
Wellplate自动进样器参数
2005-3-212020/9/25
Slide 21
柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次 数
从View菜单选择Logbook，单击Current Logbook 显示当前Logbook内容。
2005-3-212020/9/25
Slide 12
第二章 方法编辑、保存
•方法的概念：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要 的所有参数。
•方法文件名：xxx.m。
•方法的组成： 方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist)
2005-3-212020/9/25
Slide 5
化学工作站Views菜单
显示当前日记本，察 看错误信息等内容
2020年9月25日
授课教师 纪学海
2005-3-212020/9/25
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HPLC 1100 Advance操作培训日程安排
第一天 第二天
上午： 1 课程简介及相互介绍 2 化学工作站各个工作界面介绍 3 完整方法的编辑、修改、存储及运行 4 HPLC 1100 仪器配置及参数设置
进样和运行位置
2005-3-212020/9/25
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标准自动进样器的程序进样
2005-3-212020/9/25
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Wellplate自动进样器参数
2005-3-212020/9/25
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柱温箱参数设置
控温范围：低于室温10℃～80℃ 两个单独的加热区 安装切换阀可以进行柱切换 可以容纳30 cm长色谱柱 安装柱识别可以自动记录进样次 数
从View菜单选择Logbook，单击Current Logbook 显示当前Logbook内容。
2005-3-212020/9/25
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第二章 方法编辑、保存
•方法的概念：方法是一个参数集，它包括分析一个样品所需要 的所有参数。
•方法文件名：xxx.m。
•方法的组成： 方法信息(Method information) 仪器参数及采集参数(Instrument/Acquisition) 数据分析参数(Data Analysis) 运行时间表(Run Time Checklist)
2005-3-212020/9/25
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化学工作站Views菜单
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Agilent-GCMS培训优秀课件
5973 旳放气 阀位置
46
质谱旳本地控制面板
• 诊疗 • 放空 / 抽真空 • 调谐 • 运营 / 停止
47
第三章 调 谐
48
主要内容
• MS调谐旳基本原理 • 化学工作站中旳不同调谐
49
调谐做什么?
▪ 设定离子源部件旳电压,以得到良好旳敏捷度 ▪ 设定 amu gain 和 amu offset 以得到正确峰宽 ▪ 设定 mass gain 和mass offset以确保正确旳质量分配 ▪ 设定 EM 电压
22
常见元素同位素表
元素
A
质量 %
H 1 100
P 31 100
F 19 100
I 127 100
C 12 100
N 14 100
O 16 100
S 32 100
Si 28 100
Cl 35 100
Br 79 100
A+1 质量 %
2
0.05
13
1.1
15
0.37
17
0.04
33
0.80
29
5.1
31
总离子流色谱
Abundance 8000000
TIC: ALKDEMO.D
33
34
6000000
32
4000000 2023000
31 30
35 36
Time 5.25 5.26 5.27 5.28 5.29 5.30 5.31 5.32 5.33
AbundanceScan 32 (5.281 min): ALKDEMO.D
26
四极杆
27
高能打拿极和电子倍增器
四级杆
安捷伦1100工作站详细图文操作手册
在Total Volume下输入溶剂瓶容量，一 般为1.00Liter，Actual Volume下输入溶 剂实际加入的量，比如0.5Liter
选中下面两个选项后，在溶剂低于 0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵 自动关闭。
2020/5/13
5
Author：Tianyou Yue
在工作站上开启仪器
2020/5/13
1
Author：Tianyou Yue
熟悉化学工作站
快捷工具条 状态工具条
仪器控制区
自动进样控制
Macro命令行
在线信号显示
仪器参数显示区
2020/5/13
2
Author：Tianyou Yue
通过View切换不同的任务界面
1，方法与运行控制-信号采集； 2，数据处理； 3，报告设计； 4，OQ/PV认证； 5，诊断功能；
Author：Tianyou Yue
了解您的化学工作站
• 熟悉化学工作站； • 通过View切换不同的任务界面； • 通过View改变GUI不同的显示风格； • 输入流动相的量； • 在工作站上开启仪器，开泵、开灯、打开柱温调节等； • 改变仪器控制参数； • 选择在线显示信号； • 调用/储存方法；
2020/5/13
3
Author：Tianyou Yue
通过View改变GUI不同的显示风格
自动进样控制
打开Offline
显示快捷工具条 显示状态工具条
在线信号显示
显示仪器控制区
2020/5/13
4
Author：Tianyou Yue
输入流动相的量
对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框
选中下面两个选项后，在溶剂低于 0.1Liter时停止样品分析，溶剂用完后泵 自动关闭。
2020/5/13
5
Author：Tianyou Yue
在工作站上开启仪器
2020/5/13
1
Author：Tianyou Yue
熟悉化学工作站
快捷工具条 状态工具条
仪器控制区
自动进样控制
Macro命令行
在线信号显示
仪器参数显示区
2020/5/13
2
Author：Tianyou Yue
通过View切换不同的任务界面
1，方法与运行控制-信号采集； 2，数据处理； 3，报告设计； 4，OQ/PV认证； 5，诊断功能；
Author：Tianyou Yue
了解您的化学工作站
• 熟悉化学工作站； • 通过View切换不同的任务界面； • 通过View改变GUI不同的显示风格； • 输入流动相的量； • 在工作站上开启仪器，开泵、开灯、打开柱温调节等； • 改变仪器控制参数； • 选择在线显示信号； • 调用/储存方法；
2020/5/13
3
Author：Tianyou Yue
通过View改变GUI不同的显示风格
自动进样控制
打开Offline
显示快捷工具条 显示状态工具条
在线信号显示
显示仪器控制区
2020/5/13
4
Author：Tianyou Yue
输入流动相的量
对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框
Agilent1100色谱工作站操作培训课件 共42页
• 甲醇（100%）
安捷伦广州培训中心 于保生
20.07.2019
手动进样器
样品定量管
前视图
后视图
流路连接
安捷伦广州培训中心 于保生
样品回路 废液
排空管 样品回路 到色谱柱 来自泵出口
20.07.2019
自动进样器
步骤1
步骤2
步骤3
安捷伦广州培训中心 于保生
20.07.2019
混合器 泵
HPLC 结构框图
打开View 菜单下的Online Signal 窗口，单击Change 键，选择需要监测的色谱信号并设定合适的X、 Y轴范围，观测色谱基线；
基线稳定后可以进样分析（经验上，基线波动1~2m AU（常规分析）或~0.5mAU（痕量分析）就可算 是基线稳定。）
填写Sample Information
Holographic Grating
安捷伦广州培训中心 于保生
20.07.2019
单元泵工作原理
单元泵工作原理
Outlet Ball Valve
Damper Purge valve
Active Inlet Valve
Seal
Piston
Ball Screw Drive
Authoring Division Name File Name Security Notice (if required)
7.6
7.8
8.0
8.2
8.4
Time (min)
Purity Match 999
Purity Match 764
200
Wavelength (nm)
400
200
Wavelength (nm)
安捷伦广州培训中心 于保生
20.07.2019
手动进样器
样品定量管
前视图
后视图
流路连接
安捷伦广州培训中心 于保生
样品回路 废液
排空管 样品回路 到色谱柱 来自泵出口
20.07.2019
自动进样器
步骤1
步骤2
步骤3
安捷伦广州培训中心 于保生
20.07.2019
混合器 泵
HPLC 结构框图
打开View 菜单下的Online Signal 窗口，单击Change 键，选择需要监测的色谱信号并设定合适的X、 Y轴范围，观测色谱基线；
基线稳定后可以进样分析（经验上，基线波动1~2m AU（常规分析）或~0.5mAU（痕量分析）就可算 是基线稳定。）
填写Sample Information
Holographic Grating
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20.07.2019
单元泵工作原理
单元泵工作原理
Outlet Ball Valve
Damper Purge valve
Active Inlet Valve
Seal
Piston
Ball Screw Drive
Authoring Division Name File Name Security Notice (if required)
7.6
7.8
8.0
8.2
8.4
Time (min)
Purity Match 999
Purity Match 764
200
Wavelength (nm)
400
200
Wavelength (nm)
Agilent 1100原理及操作
Add Licenses：添加或查看工作站软件的Licenses号码； HP 1100 Series CDROM：查看随机的维护光盘； HP Configuration Editor：配置仪器； Installation Qualification：进行软件的安装认证； Instrument online：进入在线工作站，可以控制仪器；
工作原理：
性 能：
流量范围0.2~10ml/min； 四通路可灵活进行等度或梯 度洗脱； 自动冲程调节，混合均匀， 降低基线噪音。
泵头结构图
Agilent 1100 系列自动进样器
技术指标：
样品容量： 100 x 2 ml vials in 1 tray 进 样 量: Standard: 0.1~100 µ l Up to 1.8 ml using multi draw option Expanded injection range : 0.1~900 µ l 精 度: 1~5 µ l <1% RSD 5~100 µ l <0.5% RSD 残 留: Without needle wash <1% With needle wash <0.05% 延迟体积: Standard mode : 300 µ l + injection volume In by pass mode : 6.2 µ l
Agilent 1100 HPLC 系统 组成及基本操作
赵晓莉
2003.10
汇 报 提 纲
第一部分 液相色谱的基本原理及主要参数
第二部分 Agilent 1100 的仪器组成及工作 原理（硬件部分） 第三部分 Agilent 1100 化学工作站及其操 作系统（软件部分）
工作原理：
性 能：
流量范围0.2~10ml/min； 四通路可灵活进行等度或梯 度洗脱； 自动冲程调节，混合均匀， 降低基线噪音。
泵头结构图
Agilent 1100 系列自动进样器
技术指标：
样品容量： 100 x 2 ml vials in 1 tray 进 样 量: Standard: 0.1~100 µ l Up to 1.8 ml using multi draw option Expanded injection range : 0.1~900 µ l 精 度: 1~5 µ l <1% RSD 5~100 µ l <0.5% RSD 残 留: Without needle wash <1% With needle wash <0.05% 延迟体积: Standard mode : 300 µ l + injection volume In by pass mode : 6.2 µ l
Agilent 1100 HPLC 系统 组成及基本操作
赵晓莉
2003.10
汇 报 提 纲
第一部分 液相色谱的基本原理及主要参数
第二部分 Agilent 1100 的仪器组成及工作 原理（硬件部分） 第三部分 Agilent 1100 化学工作站及其操 作系统（软件部分）
Agilent1100色谱工作站操作培训课件 PPT资料共42页
NOR1% M
安捷伦广州培训中心 于保生
14.11.2019
一、标样 1
C标 A标
RF
二、样品
1′
A样
外标法
∵ CRF A ∴ ES样 T R D FA 样
ES样 TRD F A 样 k
安捷伦广州培训中心 于保生
14.11.2019
一、标样
1 ISTD
二、样品
C标 C标内 A标 A标内 RF标 RF标内
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
安捷伦广州培训中心 于保生
14.11.2019
5、校正设置（Calibration Setting）
样品单位 Amount units
校正曲线 Calibration Curve
类型Type 原点Origin 权重Weight
6、设定报告格式
工作站 系统初始化：（主要目的：排除系统中的气泡）；
打开Purge 阀； 加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验所用的各个通道，至无气泡从废液管排出，（eg. 设A通道100%，5mL/min，冲洗A通道至无气泡
排出；再分别依次冲洗所需其余通道B、C、D等）； 降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；（eg. 实验二的条件Flow: 1.0mL/min，A：20% (H2O), B: 80% (MeOH)； 关闭Purge阀，完成系统初始化。
后运行 时间表
压力限
Posttime Timetable PressureLimits
大于溶剂的截止波长20nm以上 ≥Slit 尽量靠近样品的最大吸收
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14.11.2019
安捷伦广州培训中心 于保生
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一、标样 1
C标 A标
RF
二、样品
1′
A样
外标法
∵ CRF A ∴ ES样 T R D FA 样
ES样 TRD F A 样 k
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一、标样
1 ISTD
二、样品
C标 C标内 A标 A标内 RF标 RF标内
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
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14.11.2019
5、校正设置（Calibration Setting）
样品单位 Amount units
校正曲线 Calibration Curve
类型Type 原点Origin 权重Weight
6、设定报告格式
工作站 系统初始化：（主要目的：排除系统中的气泡）；
打开Purge 阀； 加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验所用的各个通道，至无气泡从废液管排出，（eg. 设A通道100%，5mL/min，冲洗A通道至无气泡
排出；再分别依次冲洗所需其余通道B、C、D等）； 降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；（eg. 实验二的条件Flow: 1.0mL/min，A：20% (H2O), B: 80% (MeOH)； 关闭Purge阀，完成系统初始化。
后运行 时间表
压力限
Posttime Timetable PressureLimits
大于溶剂的截止波长20nm以上 ≥Slit 尽量靠近样品的最大吸收
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14.11.2019
agilent-HPLC化学工作站操作培训 PPT资料共368页
No.10
影响R值的因素
R=
ห้องสมุดไป่ตู้
Δt = 1/4
N
x
α- 1
x
k'
W
α
1 + k'
柱效
选择性
容量因子
No.11
容量因子
各组份的容量因子（K’）随溶剂洗脱强度的 变化增大或缩小
溶剂洗脱强度弱
1100 700
60% Acetonitrile 40% Water
mA
U
300
100
2
4
6
8
10
Time (min.)
C=O - COOR - CHO - COOH - NO 2
-
max
= wavelength of absorption maximum
max(nm)
195 190 195 205 210 200-210 310 202, 255 220, 275
No.35
Instrumentation - Absorbance Detectors
柱塞B后退
No.27
溶剂传输系统
消除流量脉冲－串联柱塞泵
单向阀
P
脉冲阻尼器
减少了单向阀用量 需要阻尼器 压缩因子补偿
Agilent 1100 Series Pum ps: Solvent Com pressibility Com pensation
P is to n D isplacem ent (祃)
Water/Organic Ion-Pair Reagent Organics
Aqueous/Buffer Counter Ion
Gel FiltrationAqueous Gel PermeationOrganic
Agilent 1100化学工作站操作详述
3D图谱
故障诊断
仪器详细信息及 常规信息
▪ 显示DAD详细信息及运行记录
最关心！
▪ 显示紫外灯详细信 息
▪ 显示诊断项目
▪ 输入维护日记
▪ 早期维护
根据仪器的情况和 使用经验，输入需 要维护的限制值 （Limit），当实际 值达到需要维护的 限制值时，EMF图 标上的绿色对勾标 记变成黄色问号
设置Detect Shoulers 设置Fixed Peak Width 设置Area Reject 设置Slope Sensitivty
19种积分事件 ▪ Baseline Now：设置点之
后不再积分认为是基线
ON
▪ Baseline at Valleys：基 线起始点均在峰谷
ON
▪ Baseline Hold： 保持基线
PeakWidth (min) <0.01 >0.01 >0.03 >0.05 >0.10 >0.20 >0.40 >0.85
ResponseTime (sec) 0.1 0.2 0.5 1.0 2.0 4.0 8.0 16.0
Data Rate(Hz) 20 20 10 5 2.5 1.25 0.62 0.31
8.Full 9.Library Search 10.Performance 11.Performance+Noise 12.Performance+Library Search 13.Extend Performance
Short:最常用的报告格式 Performance:性能报告,可以给出柱效高低和分离度等数据 Performance+Noise:可以给出各色谱峰的信噪比.
Agilent1100操作方法剖析
高效液相色谱知识收藏Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识保养事项：高压液相色谱HPLC常见故障及排除方法液相色谱柱使用及保养高压液相色谱HPLC培训教程(一)高压液相色谱HPLC培训教程(七)高效液相色谱仪中反相HPLC柱子的清洁和再生HPLC对流动相的基本要求高效液相色谱Waters 600E-2487 HPLC系统SOPWaters高效液相色谱系统操作规程高效液相色谱仪(Agilent 1100)操作注意事项色谱扫盲班Agilent1100高压液相色谱仪基本操作步骤Agilent1100液相基本操作步骤(一)、开机：1、打开计算机,进入Windows NT （或Windows 2000）画面,并运行Bootp Server程序。
2、打开 1100 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online图标，化学工作站自动与1100LC 通讯，进入的工作站画面。
4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面, 单击”View”菜单中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开Purge阀。
7、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setup pump选项，进入泵编辑画面。
8 、设Flow：5ml/min，单击OK。
9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump control选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pump Control选项，选中Off，单击Ok 关泵，关闭Purge valve。
安捷伦1100工作站详细图文操作手册
2019/11/10
9
Author：Tianyou Yue
其它功能菜单
文件处理 运行控制
仪器控制
序列
放弃任务
在线帮助
运行序列 运行方法
工作站任务切 换快捷键
方法存取快捷键
序列存取快捷键
2019/11/10
10
2019/11/10
1
Author：Tianyou Yue
熟悉化学工作站
快捷工具条 状态工具条
仪器控制区
自动进样控制
Macro命令行
在线信号显示
仪器参数显示区
2019/11/10
2
Author：Tianyou Yue
通过View切换不同的任务界面
1，方法与运行控制-信号采集； 2，数据处理； 3，报告设计； 4，OQ/PV认证； 5，诊断功能；
2019/11/10
3
Author：Tianyou Yue
通过View改变GUI不同的具条 显示状态工具条
在线信号显示
显示仪器控制区
2019/11/10
4
Author：Tianyou Yue
输入流动相的量
对着瓶子击左键，然后左键单击Solvent bottles Filling，显示右面对话框
Control为泵的控制，点击 Not Ready Information则显 示没有准备好或错误信息。 Help为在线帮助。
2019/11/10
柱箱、检测器、自动进样器等 参数改变操作与此相同
7
Author：Tianyou Yue
选择在线显示信号
在Online Plot上点击“Change”， 显出右面对话框，在此对话框中左 面为可用信号，右面为在线显示信 号，通过“Add””Remove”改变不 同的显示信号。
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C1
C1 C2
C3
100
%
∴
NORM 1%
RF1 A1 RF1 A1 RF1 A2 RF3 A3
100 %
NORM 1%
RF1
RF1 A1 A1 RF1
A2
100 %
NORM 1%
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2020/1/5
一、标样 1
C标 A标
2020/1/5
Absorbance
六通阀之扎针
泵
1
2
定
量
6
环
废液
3 色谱柱
5
4
排空
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2020/1/5
六通阀之装样
泵
1
2
定
量
6
环
废液
3 色谱柱
5
4
排空
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2020/1/5
六通阀之进样
泵
1
2
定
量
6
环
废液
3 色谱柱
5
4
排空
Ruby Ball
Spring Insert
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2020/1/5
串联柱塞泵
减小流量脉冲－并联柱塞泵
P 单向阀
A
B
B P
A 柱塞A前进
Single Piston Delivery
Combined Delivery
柱塞B后退
相消干扰 通常也需要阻尼器 增加了单向阀的使用数量
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90% 10%
40% 60%
10 Stoptime =10
35 Postime =25
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2020/1/5
C AIV
D
四元比例阀
B
缓冲盐+有机相，析出的盐被A路的水相稀释，
避免沉淀的发生
A
缓冲盐+有机相，盐析出会沉淀
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2020/1/5
洗柱子的方法
• 流动相：甲醇（80%） +水（20%） • 样品：有机物
二元泵工作原理
二元泵工作原理
Purge
Damper
valve Mixer
Waste
Inlet valve
Outlet valve
Inlet valve
Outlet valve
A
B
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2020/1/5
Vespel rotor seal (6-port) Ceramic stator
Slits
Flow Cell
Photodiode Array
Holographic Grating
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2020/1/5
单元泵工作原理
单元泵工作原理
Damper
Outlet Ball Valve
Purge valve
Active Inlet Valve
Seal
Piston
Ball Screw Drive
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
平均/取代 平均/取代
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2020/1/5
5、校正设置（Calibration Setting）
样品单位 Amount units
校正曲线 Calibration Curve
类型Type 原点Origin 权重Weight
6、设定报告格式
2020/1/5
自动进样器
步骤1
步骤2
步骤3
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2020/1/5
混合器 泵
HPLC 结构框图
进样口
色谱柱
色谱图
检测器
溶剂
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2020/1/5
涡流扩散相
A = 涡流扩散——多径扩散 仔细填充柱子 使用均一的载体
H E T P
A
线速度
初始 带宽
最终 带宽
后运行 时间表
压力限
Posttime Timetable PressureLimits
大于溶剂的截止波长20nm以上 ≥Slit 尽量靠近样品的最大吸收
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2020/1/5
三、数据分析（Data Analysis）
1、调用数据文件
2、谱图优化： Range
Full
3、积分优化： 自动积分 （Auto Integrate）
RF
二、样品
1′
A样
外标法
∵ C RF A ∴ ESTD样 RF A样
ESTD样 RF A样 k
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2020/1/5
一、标样
1 ISTD
二、样品
C标 C标内 A标 A标内 RF标 RF标内
1′
ISTD
假定：
C样 A样
C样内 A样内
内标法
则：
RF样 RF样内
流量 Flow
溶剂 Solvent
停止时间 Stoptime
VWD DAD
WLsam WLsam BWsam WLref BWref Save
PeakWidth 样品的最大吸收 ≈吸收光谱的半峰宽 样品没有吸收/吸收比较弱处 BWref≥BWsam
PeakWidth 最窄峰的半峰宽
All
ALS
TCC
打开View 菜单下的Online Signal 窗口，单击Change 键，选择需要监测的色谱信号并设定合适的X、 Y轴范围，观测色谱基线；
基线稳定后可以进样分析（经验上，基线波动1~2m AU（常规分析）或~0.5mAU（痕量分析）就可算 是基线稳定。）
填写Sample Information
Monochromator
Detector Element
flow Cell
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2020/1/5
DAD 光路图
Instrumentation - Absorbance Detectors
Photodiode Array (UV/Visible) Light Source
Lenses
b
Log I0 = A = abc I
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2020/1/5
VWD 光路图
Instrumentation - Absorbance Detectors
Variable Wavelength (UV/Visible)
Slits Light Source
Mechanical Grating
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2020/1/5
传质阻力
扩散
C = 传质阻力 在低流速下可以降低传质阻力 使用小颗粒载体可以降低传质阻力
H E T P
线速度
固定相
流动相
滞流的 流动相
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2020/1/5
单向阀及往复活塞泵
往复活塞泵(单向阀)
Gold Seal
Sapphire Insert
工作站 系统初始化：（主要目的：排除系统中的气泡）；
打开Purge 阀； 加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验所用的各个通道，至无气泡从废液管排出，（eg. 设A通道100%，5mL/min，冲洗A通道至无气泡
排出；再分别依次冲洗所需其余通道B、C、D等）； 降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；（eg. 实验二的条件Flow: 1.0mL/min，A：20% (H2O), B: 80% (MeOH)； 关闭Purge阀，完成系统初始化。
ALS
积
甲醇 40% 水 60%
40% 60%
Column
死
体
TCC
积
Det
甲醇 40% 水 60%
泵
进样器
90% 10%
40% 60%
色谱柱
检测器
甲醇 40%
90%
水 60%
10%
5倍以上的总延迟体积，平衡柱子，置换流动相
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2020/1/5
甲醇 40% 水 60%
Posttime
保存/另存方法Save/Save As
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2020/1/5
1
2
面积百分比
3
假定： 已知：
C1
C2
C3
Conc1 %
ห้องสมุดไป่ตู้
C1
C1 C2
C3
100 %
A1
A2
A3
假定： C k A
∴
AREA1 %
k
A1
k A1 k A2
k
A3
100 %
∴
AREA1%
输入含量
第二针 Recalibrate
选级别Level
第三针 Recalibrate
选级别Level
Level 3 第一针 Add Level
输入含量
第二针 Recalibrate
选级别Level
第三针 Recalibrate
选级别Level
……………………
手动积分 （Manual events）
指定参考峰、内标峰
4、建立校正表 Calibration
积分事件 （Integration events）
Level 1 第一针 New Calibration Table 输入组分名称、含量