双硫仑联合Cu抑制伯基特淋巴瘤Raji细胞移植瘤生长的动物实验论文
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ｏｒ
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万方数据
壁擅煎壅量！堕压！Ｑ！鱼堡！旦箜垫鲞筮！塑ｇ塑！竺旦塑！坐！塑！垡！地！：叁！鲤坠垫！鱼ｙ！！：垫：盟！：！
ＤＳ，Ｃｕ
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【Ａｂｓｔｒ牡ｔ】
Ｂｕｒｋｉｔｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ
【关键词】双硫仑；铜；伯基特淋巴瘤；ＪＮＫ信号通路
基金项目：国家自然科学基金（８１０７０４２５，８１５７０１５６）；广东省重大研究专项（２０１５８０２０２２７００３）
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６３．４８％ａｎｄ ８０．２４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ
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【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
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ＦＩｍｄ ｐｍｇｍｍ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｃｈｉｎａ（８１０７０４２５，８１５７０１５６）；
（３ｍｇ／２０９）、ＤＳ（３ｍｇ／２０９）和ＣｕＳ０４（０．１７ｍｇ／２０９）。
从首次给药前起每２ ｄ用游标卡尺测量肿瘤的最大 垂直径，根据长×宽ｚ×０．５计算肿瘤体积，比较各组 治疗后肿瘤体积。连续给药结束后２４ ｈ，颈椎脱臼法 处死裸鼠，将移植瘤完整切除，分离瘤体，用电子天平 称取肿瘤质量，计算抑瘤率（ＩＲ）。
ｃ－ｊｕｎ
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ＤＳ／Ｃｕ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ＡＮＯＶＡ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ
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ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎ ＤＳ
ＩＲ＝（１一实验组平均肿瘤质量／对照组平均肿瘤质量）×
１００％
１．５组织形态学观察
将肿瘤置于４％的中性甲醛溶液中固定２４ ｈ，用 梯度增高的乙醇置换出组织内水分，石蜡包埋，并切 成４斗ｍ厚度的石蜡切片，用二甲苯脱蜡，梯度乙醇水 化，苏木精．伊红（ＨＥ）染色，树胶封固。在光学显微镜 下观察移植瘤细胞形态学变化。
世鳖婴蕉兰堕鏖！Ｑ！垒生！旦筮垫鲞笙！塑鱼塑！竺壁塑！！堡！塑旦堡！ｉ里ｉ！：垒坠丛塾！Ｑ！垒：！尘：！！：盟！：！
・５０５・
・论著・
双硫仑联合Ｃｕ抑制伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞 移植瘤生长的动物实验
查洁周勇 邓漫漫骆宜茗谢泗停徐兵 ３６１００３厦门大学附属第一医院血液科 通信作者：徐兵，Ｅｍａｉｌ：）（ｕｂｉｎｇｚｈａｎ自ｉａｌｌ＠１２６．ｃｏｍ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
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Ｂｕｒｋｉｔｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ
ｍｉｎ，离心，吸出上清液，移入ＥＰ管中，冰上保存，
准备测定蛋白浓度。采用ＢＣＡ法蛋白定量后以等量 蛋白进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和半干法转膜，蛋白转移至硝酸 纤维素膜。５％脱脂奶粉封闭过夜，去离子水漂洗硝 酸纤维素滤膜，加入一抗，３７℃培养２ ｈ，ＰＢＳ漂洗， 在封闭液中稀释碱性磷酸酶标记的羊抗鼠二抗， ３７℃培养ｌ ｈ，ＰＢＳ漂洗３次。用ＥＣＬ混合液显色、曝 光、显影、定影，用凝胶成像分析系统测定吸光度，以 ＧＡＰＤＨ作为内参照，进行蛋白表达的定量分析。 １．７统计学方法 应用ＳＰｓＳ １３．０统计软件对数据进行统计学分
１材料与方法
１．１
药物和试剂
Ｄｓ、ｃｕｓＯ。（ｃｕ２＋）均购自美国ＳｉｇＩＴｌａ公司，兔抗
ｃ—ｊｕｎ多克隆抗体购自美国ｓａｎｔａ Ｃ１１ｌｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 公司，兔抗Ｐｈｏｓｐｈｏ—ＳＡＰＫ／ＪＮＫ单克隆抗体购自美
国Ｃｅｌｌ
Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ
１．６免疫印迹法（ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ）检测移植瘤细 胞ｐ．，ＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达变化
ＤＯＩ：１０．３７６０，ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－９８０１．２０１６．０８．００１
【摘要】目的探讨双硫仑（Ｄｓ）联合铜（ｃｕ）对人伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作
用及分子机制。方法 每只裸鼠给予全身２ Ｇｖ ｘ线照射２ ｍｉｎ，于背部近腋下处皮下接种对数生长期 Ｒａｊｉ细胞１×１０７个，建立Ｒ ａ＿ｊｉ细胞裸鼠移植瘤模型；１８只造模成功的裸鼠按数字表法随机分为三组：对 照组、Ｄｓ组、ＤＳ／ｃｕ组；观察不同用药组裸鼠移植瘤生长的情况，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，比 较三组移植瘤体积和质量。免疫印迹法检测不同用药组处理后移植瘤组织中ｐ—ＪＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达。 结果ＤＳ组、Ｄｓ／ｃｕ组和对照组裸鼠移植瘤的体积分别为（６７．７１±２．１５）ｍｍ３、（３３．３５±７．７４）ｍｍ３、 （２４６．４０±４２．８８）ｍｍ３，肿瘤质量分别为（４３．３５士４．２２）ｍｇ、（１８．０５±２．８８）ｍｇ、（９１．３０士２７．２７）ｍｇ，三组间 差异具有统计学意义（Ｆ＝２７．５７９，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１６．３６９，Ｐ＝０．０００）。多重比较结果显示，Ｄｓ组、ＤＳ／Ｃｕ组 裸鼠移植瘤的体积和质量与对照组比较差异均具有统计学意义（均Ｐ＜０．０５）；ＤＳ／Ｃｕ组移植瘤体积和质 量均低于ＤＳ组（均Ｐ＜０．０５）。ＤＳ组和Ｄｓ／ｃｕ组抑瘤率分别为６３．４８％和８０．２４％。Ｄｓ和Ｄｓ／Ｃｕ处理 后移植瘤细胞出现了凋亡的改变，Ｄｓ／ｃｕ组更加明显。Ｄｓ和Ｄｓ／ｃｕ处理后ｐ．ＪＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达均上 调，其中Ｄｓ／ｃｕ组上调更加明显。结论Ｄｓ／ｃｕ可抑制伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞裸鼠移植瘤生长，其机 制可能与活化ＪＮＫ通路有关。
Ｄｓ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｅｄ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｍｃａｎｔ．Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐ—ＪＮＫ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒｓ ｗｅｒｅ
ｐｍｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ
ｉｍｐｍｖｅｄ出ｅｒ
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ＤＳ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎ ＤＳ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＣｏｎｃＩｕｓｉｏｎ
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
Ｐｒｏｖ砌ａｌ
Ｋｅｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１５８０２０２２７００３）
非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）是临床上常见的恶性血 液肿瘤，而伯基特淋巴瘤是高度侵袭性的ＮＨＬ，多见 于儿童和青年，疾病进展快，常规化疗效果不佳，预后 差［１．２］。目前多采用大剂量多药联合化疗治疗，疗效 有明显提高，但药物不良反应及肿瘤的多重耐药影 响患者的预后。双硫仑（ｄｉｓｕｌｆｉｍｍ，Ｄｓ）是传统的抗酗 酒药物［３］，具有安全、低毒的特性。近年来，Ｄｓ在抗 肿瘤方面的作用越来越受到重视，研究显示其对多 种肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，ＤＳ螯合铜（Ｃｕ） （ＤＳ／Ｃｕ）后对肿瘤诱导凋亡能力明显增强［４‘６］。诱导 凋亡是淋巴瘤治疗的重要策略之一，我们前期研究 发现ＤＳ及ＤＳ／Ｃｕ能够在体外激活ｃ．ｉｕｎ氨基末端 激酶（ＪＮＫ）通路诱导伯基特淋巴瘤Ｒａｉｉ细胞凋亡。本 研究进一步采用体内实验验证Ｄｓ及Ｄｓ／ｃｕ对伯基 特淋巴瘤Ｒａｉｉ细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用，并 探讨ＪＮＫ通路在其抑制裸鼠移植瘤生长分子机制中 的作用，为临床应用提供更可靠的理论依据和实验只，雌雄各半，体质量 为１４～１６ ｇ，购自广东省医学实验动物中心，饲养于 无特定病原体级（ＳＰＦ）屏障系统中，环境恒定温度为
１８～２２
ｃＣ，恒定相对湿度为４５％～５５％；裸鼠分笼置
于ＩＶＣ超净层流笼中，每笼３只；动物自由进食饮 水，饮用水及饲料均经高压灭菌处理，实验前适应性
１．４裸鼠移植瘤模型构建及给药
２４只裸鼠接种前２ ｄ每只全身给予２
Ｇｙ
Ｘ线照
射２ ｍｉｎ，于裸鼠背部近腋下处皮下接种对数生长期 Ｒａｉｉ细胞ｌ×１０，个，液体总量为Ｏ．２ ｍＩ，每２ ｄ观察活 动情况和体质量。将造模成功的１８只荷瘤裸鼠按 数字表法随机分为三组：空白对照组、ＤＳ组、ＤＳ／ ｃｕ组，每组各６只。各组裸鼠分别于＋８天～＋１２天、 ＋１５天～＋１９天经灌胃给予Ｏ．９％ＮａＣｌ溶液、ＤＳ
ｘｅｎｏｇｒｍ
ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｍｓｃａｐｅ．Ｔｈｅ ｐｍｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｐ－ＪＮＫ ａｎｄ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ．Ｒ姻ｌｌｌｔｓ Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ａｎｄ
ｏｎ
ＤＳ，Ｃｕ ｇｍｕｐ．Ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＳ／Ｃｕ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ
ｔｕｍｏｒ
ｔｈｅ
ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ， ｔｕｍｏｒ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ
Ｖｏｌｕｍｅｓ，ｗｅｉｇｈｔｓ ａｎｄ山ｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｎ，ｅｓ ｏｆ
ｔｕｍｏｒｓ
ｏｒ
ＤＳ，Ｃｕ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ
ｓ远ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｉｎ
ｖｅｈｉｃｌｅ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ
（Ｆ＝２７．５７９，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１ ６．３６９，Ｐ＝Ｏ．０００）．ＦｕｒｔｈｅＨｎｏｒｅ，ｍｕｌｔｉｐｌｅ
ｏｒ
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｒｅＶｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔ｝ｌｅ ＤＳ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｄｓ
喂养。
万方数据
万方数据
万方数据
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
Ｒａｊｉ
ｃｅＵ ｉｎｔｏ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ａｆｔｅｒ ２ Ｇｙ ｗｈｏｌｅ ｂｏｄｙ ｂｅａｒｉｎｇ
ｔｕｍｏｒ
Ｘ－ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ（１×１ ０７ Ｒａｊｉ
ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ
ｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｉｎ ２００斗ｌ
ｓａｌｉｎｅ）．１８
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎⅡ＿ｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＤＳ ｇｍｕｐ ａｎｄ
于一８０℃冰箱中称取肿瘤组织０．２ ｇ，以预冷的 ＰＢＳ洗涤３次，用眼科剪将组织剪碎于ＥＰ管中，将组 织转入匀浆器，再加人组织裂解液于４℃研磨，裂解
３０
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。
１．２细胞培养
Ｒａｊｉ细胞购自中国医学科学院血液学研究所。用 含体积分数为１０％小牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液， 在３７℃、饱和湿度和体积分数为５％ＣＯ：的恒温培 养箱中培养。选取对数生长期细胞制备成单细胞悬 液，调整细胞密度至１×１０７／ｍｌ。
Ｄｓ／Ｃｕ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ｈａｄ ｓｉｇｎｍｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ
ｗｅｒｅ
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（ａｌｌ Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉＨ．ｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ ｉｎ Ｄｓ
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壁擅煎壅量！堕压！Ｑ！鱼堡！旦箜垫鲞筮！塑ｇ塑！竺旦塑！坐！塑！垡！地！：叁！鲤坠垫！鱼ｙ！！：垫：盟！：！
ＤＳ，Ｃｕ
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【Ａｂｓｔｒ牡ｔ】
Ｂｕｒｋｉｔｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ
【关键词】双硫仑；铜；伯基特淋巴瘤；ＪＮＫ信号通路
基金项目：国家自然科学基金（８１０７０４２５，８１５７０１５６）；广东省重大研究专项（２０１５８０２０２２７００３）
ｍｓｕｍｒ锄ｃ咖蛐ｌｅｄ耐ｍ Ｃｕ ｏｎ ｍｅ ｇｒｏｗｍ ｏｆ ｈ哪ａｎ Ｂｕｒｋｉｎ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｘｅｎ咽ｒａ胝ｉＩｌ ｎｕｄｅ ｌｌＩｉｃｅ ｚ耽Ｊｚｅ，Ｚ如ｕ ｙｏ晦Ｄｅ几ｇ＾锄．ｍ∞，￡∞ｌ，ｉｍｉ％Ｘ拓Ｓ血ｉ％ｘＭ Ｂ嘶
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ＤＳ，ｃｕ—ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ
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６３．４８％ａｎｄ ８０．２４％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｃｈａｎｇｅｓ ｉｎ ｔｈｅ
ｘｅｎｏｇｒ撕ｔｕｍｏｒ ｃ．ｊｕｎ
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【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】
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ＪＮＫ ｓｉｇｌｌａｌ ｐａｔｈｗａｙ
ＦＩｍｄ ｐｍｇｍｍ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｃｈｉｎａ（８１０７０４２５，８１５７０１５６）；
（３ｍｇ／２０９）、ＤＳ（３ｍｇ／２０９）和ＣｕＳ０４（０．１７ｍｇ／２０９）。
从首次给药前起每２ ｄ用游标卡尺测量肿瘤的最大 垂直径，根据长×宽ｚ×０．５计算肿瘤体积，比较各组 治疗后肿瘤体积。连续给药结束后２４ ｈ，颈椎脱臼法 处死裸鼠，将移植瘤完整切除，分离瘤体，用电子天平 称取肿瘤质量，计算抑瘤率（ＩＲ）。
ｃ－ｊｕｎ
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ｗｅｒｅ（６７．７１±２．１５）ｍｍ３，（３３．３５士７．７４）ｍｍ３ ａｎｄ（４３．３５±４．２２）ｍｇ，（１８．０５士２．８８）ｍｇ．Ｏｎｅ—ｗａｙ
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ＩＲ＝（１一实验组平均肿瘤质量／对照组平均肿瘤质量）×
１００％
１．５组织形态学观察
将肿瘤置于４％的中性甲醛溶液中固定２４ ｈ，用 梯度增高的乙醇置换出组织内水分，石蜡包埋，并切 成４斗ｍ厚度的石蜡切片，用二甲苯脱蜡，梯度乙醇水 化，苏木精．伊红（ＨＥ）染色，树胶封固。在光学显微镜 下观察移植瘤细胞形态学变化。
世鳖婴蕉兰堕鏖！Ｑ！垒生！旦筮垫鲞笙！塑鱼塑！竺壁塑！！堡！塑旦堡！ｉ里ｉ！：垒坠丛塾！Ｑ！垒：！尘：！！：盟！：！
・５０５・
・论著・
双硫仑联合Ｃｕ抑制伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞 移植瘤生长的动物实验
查洁周勇 邓漫漫骆宜茗谢泗停徐兵 ３６１００３厦门大学附属第一医院血液科 通信作者：徐兵，Ｅｍａｉｌ：）（ｕｂｉｎｇｚｈａｎ自ｉａｌｌ＠１２６．ｃｏｍ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔ｝ｌｅ
ｅ虢ｃｔｓ
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ｔｈｅ ｈｕｍａｎ
ｃｅＵ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ ｉｎ ｎｕｄｅ ｏｆ
ｍｉｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ
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ｍｉｎ，离心，吸出上清液，移入ＥＰ管中，冰上保存，
准备测定蛋白浓度。采用ＢＣＡ法蛋白定量后以等量 蛋白进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和半干法转膜，蛋白转移至硝酸 纤维素膜。５％脱脂奶粉封闭过夜，去离子水漂洗硝 酸纤维素滤膜，加入一抗，３７℃培养２ ｈ，ＰＢＳ漂洗， 在封闭液中稀释碱性磷酸酶标记的羊抗鼠二抗， ３７℃培养ｌ ｈ，ＰＢＳ漂洗３次。用ＥＣＬ混合液显色、曝 光、显影、定影，用凝胶成像分析系统测定吸光度，以 ＧＡＰＤＨ作为内参照，进行蛋白表达的定量分析。 １．７统计学方法 应用ＳＰｓＳ １３．０统计软件对数据进行统计学分
１材料与方法
１．１
药物和试剂
Ｄｓ、ｃｕｓＯ。（ｃｕ２＋）均购自美国ＳｉｇＩＴｌａ公司，兔抗
ｃ—ｊｕｎ多克隆抗体购自美国ｓａｎｔａ Ｃ１１ｌｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 公司，兔抗Ｐｈｏｓｐｈｏ—ＳＡＰＫ／ＪＮＫ单克隆抗体购自美
国Ｃｅｌｌ
Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ
１．６免疫印迹法（ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ）检测移植瘤细 胞ｐ．，ＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达变化
ＤＯＩ：１０．３７６０，ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－９８０１．２０１６．０８．００１
【摘要】目的探讨双硫仑（Ｄｓ）联合铜（ｃｕ）对人伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作
用及分子机制。方法 每只裸鼠给予全身２ Ｇｖ ｘ线照射２ ｍｉｎ，于背部近腋下处皮下接种对数生长期 Ｒａｊｉ细胞１×１０７个，建立Ｒ ａ＿ｊｉ细胞裸鼠移植瘤模型；１８只造模成功的裸鼠按数字表法随机分为三组：对 照组、Ｄｓ组、ＤＳ／ｃｕ组；观察不同用药组裸鼠移植瘤生长的情况，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，比 较三组移植瘤体积和质量。免疫印迹法检测不同用药组处理后移植瘤组织中ｐ—ＪＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达。 结果ＤＳ组、Ｄｓ／ｃｕ组和对照组裸鼠移植瘤的体积分别为（６７．７１±２．１５）ｍｍ３、（３３．３５±７．７４）ｍｍ３、 （２４６．４０±４２．８８）ｍｍ３，肿瘤质量分别为（４３．３５士４．２２）ｍｇ、（１８．０５±２．８８）ｍｇ、（９１．３０士２７．２７）ｍｇ，三组间 差异具有统计学意义（Ｆ＝２７．５７９，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１６．３６９，Ｐ＝０．０００）。多重比较结果显示，Ｄｓ组、ＤＳ／Ｃｕ组 裸鼠移植瘤的体积和质量与对照组比较差异均具有统计学意义（均Ｐ＜０．０５）；ＤＳ／Ｃｕ组移植瘤体积和质 量均低于ＤＳ组（均Ｐ＜０．０５）。ＤＳ组和Ｄｓ／ｃｕ组抑瘤率分别为６３．４８％和８０．２４％。Ｄｓ和Ｄｓ／Ｃｕ处理 后移植瘤细胞出现了凋亡的改变，Ｄｓ／ｃｕ组更加明显。Ｄｓ和Ｄｓ／ｃｕ处理后ｐ．ＪＮＫ、ｃ．ｊｕｎ蛋白表达均上 调，其中Ｄｓ／ｃｕ组上调更加明显。结论Ｄｓ／ｃｕ可抑制伯基特淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞裸鼠移植瘤生长，其机 制可能与活化ＪＮＫ通路有关。
Ｄｓ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｅｄ ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ｓｉｇｎｍｃａｎｔ．Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐ—ＪＮＫ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒｓ ｗｅｒｅ
ｐｍｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ
ｉｍｐｍｖｅｄ出ｅｒ
ｔｈｅ ＤＳ
ｏｒ
ＤＳ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｍｏｒｅ ｏｂｖｉｏｕｓ ｉｎ ＤＳ／Ｃｕ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＣｏｎｃＩｕｓｉｏｎ
Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ
Ｐｒｏｖ砌ａｌ
Ｋｅｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｐｒｏｇｒａｍ（２０１５８０２０２２７００３）
非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）是临床上常见的恶性血 液肿瘤，而伯基特淋巴瘤是高度侵袭性的ＮＨＬ，多见 于儿童和青年，疾病进展快，常规化疗效果不佳，预后 差［１．２］。目前多采用大剂量多药联合化疗治疗，疗效 有明显提高，但药物不良反应及肿瘤的多重耐药影 响患者的预后。双硫仑（ｄｉｓｕｌｆｉｍｍ，Ｄｓ）是传统的抗酗 酒药物［３］，具有安全、低毒的特性。近年来，Ｄｓ在抗 肿瘤方面的作用越来越受到重视，研究显示其对多 种肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，ＤＳ螯合铜（Ｃｕ） （ＤＳ／Ｃｕ）后对肿瘤诱导凋亡能力明显增强［４‘６］。诱导 凋亡是淋巴瘤治疗的重要策略之一，我们前期研究 发现ＤＳ及ＤＳ／Ｃｕ能够在体外激活ｃ．ｉｕｎ氨基末端 激酶（ＪＮＫ）通路诱导伯基特淋巴瘤Ｒａｉｉ细胞凋亡。本 研究进一步采用体内实验验证Ｄｓ及Ｄｓ／ｃｕ对伯基 特淋巴瘤Ｒａｉｉ细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用，并 探讨ＪＮＫ通路在其抑制裸鼠移植瘤生长分子机制中 的作用，为临床应用提供更可靠的理论依据和实验只，雌雄各半，体质量 为１４～１６ ｇ，购自广东省医学实验动物中心，饲养于 无特定病原体级（ＳＰＦ）屏障系统中，环境恒定温度为
１８～２２
ｃＣ，恒定相对湿度为４５％～５５％；裸鼠分笼置
于ＩＶＣ超净层流笼中，每笼３只；动物自由进食饮 水，饮用水及饲料均经高压灭菌处理，实验前适应性
１．４裸鼠移植瘤模型构建及给药
２４只裸鼠接种前２ ｄ每只全身给予２
Ｇｙ
Ｘ线照
射２ ｍｉｎ，于裸鼠背部近腋下处皮下接种对数生长期 Ｒａｉｉ细胞ｌ×１０，个，液体总量为Ｏ．２ ｍＩ，每２ ｄ观察活 动情况和体质量。将造模成功的１８只荷瘤裸鼠按 数字表法随机分为三组：空白对照组、ＤＳ组、ＤＳ／ ｃｕ组，每组各６只。各组裸鼠分别于＋８天～＋１２天、 ＋１５天～＋１９天经灌胃给予Ｏ．９％ＮａＣｌ溶液、ＤＳ
ｘｅｎｏｇｒｍ
ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｔｉｓｓｕｅ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｏｐｔｉｃａｌ ｍｉｃｍｓｃａｐｅ．Ｔｈｅ ｐｍｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｐ－ＪＮＫ ａｎｄ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ．Ｒ姻ｌｌｌｔｓ Ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔ ｔｕｍｏｒ ｓｉｚｅ ａｎｄ
ｏｎ
ＤＳ，Ｃｕ ｇｍｕｐ．Ｄｕｒｉｎｇ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＤＳ／Ｃｕ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｔｈｅ
ｔｕｍｏｒ
ｔｈｅ
ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒｓ ｗｅｒｅ ｅｘａｍｉｎｅｄ， ｔｕｍｏｒ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ
Ｖｏｌｕｍｅｓ，ｗｅｉｇｈｔｓ ａｎｄ山ｅ ｇｒｏｗｔｈ ｃｕｎ，ｅｓ ｏｆ
ｔｕｍｏｒｓ
ｏｒ
ＤＳ，Ｃｕ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ
ｓ远ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｉｎ
ｖｅｈｉｃｌｅ－ｔｒｅａｔｅｄ ａｎｉｍａｌｓ
（Ｆ＝２７．５７９，Ｐ＝０．０００；Ｆ＝１ ６．３６９，Ｐ＝Ｏ．０００）．ＦｕｒｔｈｅＨｎｏｒｅ，ｍｕｌｔｉｐｌｅ
ｏｒ
ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ ｒｅＶｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔ｝ｌｅ ＤＳ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｄｓ
喂养。
万方数据
万方数据
万方数据
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ
Ｒａｊｉ
ｃｅＵ ｉｎｔｏ ｎｕｄｅ ｍｉｃｅ ａｆｔｅｒ ２ Ｇｙ ｗｈｏｌｅ ｂｏｄｙ ｂｅａｒｉｎｇ
ｔｕｍｏｒ
Ｘ－ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ（１×１ ０７ Ｒａｊｉ
ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ
ｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｉｎ ２００斗ｌ
ｓａｌｉｎｅ）．１８
ｍｉｃｅ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｃｏｎⅡ＿ｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＤＳ ｇｍｕｐ ａｎｄ
于一８０℃冰箱中称取肿瘤组织０．２ ｇ，以预冷的 ＰＢＳ洗涤３次，用眼科剪将组织剪碎于ＥＰ管中，将组 织转入匀浆器，再加人组织裂解液于４℃研磨，裂解
３０
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ公司。
１．２细胞培养
Ｒａｊｉ细胞购自中国医学科学院血液学研究所。用 含体积分数为１０％小牛血清的ＲＰＭＩ １６４０培养液， 在３７℃、饱和湿度和体积分数为５％ＣＯ：的恒温培 养箱中培养。选取对数生长期细胞制备成单细胞悬 液，调整细胞密度至１×１０７／ｍｌ。