甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建

甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库的构建
郑天然;李荣田;孙晓凌;李海英;郭德栋
【期刊名称】《生物技术》
【年(卷),期】2004(14)6
【摘要】为了克隆甜菜单体附加系M14无融合生殖相关基因 ,采用cDNA文库快速构建法制备了M14花蕾cDNA文库。

根据甜菜单体附加系M14无融合生殖的细胞胚胎学研究结果 ,提取甜菜M14花蕾三个关键时期的RNA ,分离纯化mRNA ,以Oligo(dT)为引物 ,在逆转录酶的作用下 ,合成第一链cDNA ,进而合成第二链cDNA。

含有EcoRⅠ和NotⅠ粘性末端的双链cDNA在T4DNA连接酶的作用下与载体λZAP臂相连 ,并对连接产物进行体外包装 ,得到噬菌体颗粒 ,即甜菜单体附加系M14花蕾cDNA文库。

经大肠杆菌寄主菌株XL1-blueMRF’平板检测 ,三个文库滴度分别为2 .8× 10 5pfu·mL-1、1.6× 10 5pfu·mL-1和3.5× 10
5pfu·mL-1,克隆重组率为 83%、78%和 81%。

【总页数】3页(P10-12)
【关键词】甜菜;无融合生殖;单体附加系;cDNA文库
【作者】郑天然;李荣田;孙晓凌;李海英;郭德栋
【作者单位】黑龙江大学生命科学学院
【正文语种】中文
【中图分类】Q785
【相关文献】
1.甜菜单体附加系M14与栽培甜菜蛋白质的SDS-PAGE比较分析 [J], 朱宏
2.甜菜单体附加系M14种子形成方式 [J], 马兰;•杜洪岩;李荣田
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5.甜菜M14品系花期cDNA文库的构建及特异表达基因的筛选 [J], 马春泉;张莹;崔颖;王冰;王玉婷;刘金玲;王宏建;李海英
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