2022届高考生物二轮复习专题十一考点二微生物的分离培养及应用课件202211021171

2．(2019·全国卷Ⅰ)已知一种有机物X(仅含有C、H 两种元素)不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培 养基筛选土壤中能高效降解X的细菌(目标菌)。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X(5 g/L)。
Ⅱ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他 无机盐(适量)，X(15 g/L)。
解析：(1)该研究小组的目标菌是能够降解物质W的 细菌，而物质W是一种含氮有机物，故可作筛选培养基 中的氮源。
(2)研究小组的目标菌，是能够降解物质W的细菌， 培养基中乙菌落的周围出现透明圈，说明乙菌落能够降 解物质W，故乙菌落为该小组的目标细菌。
(3)目标菌能够利用空气中的氮气作为氮源，故选用 的筛选培养基不添加氮源，能够在无氮源的培养基上生 存的细菌便是目的细菌，故实验操作为：将甲、乙菌分 别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细 菌能利用空气中的氮气作为氮源。
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(4)①C处作为空白对照，要排除作为溶剂的缓冲液 对实验可能造成的影响，故需要在C处滴加缓冲液，且 保持滴加量相同；②培养基中的透明圈表示物质W被降 解的情况，若C处不出现透明圈，则说明缓冲液不能降 解物质W；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明 物质W被降解的程度相近，即酶E与天然酶降解物质W 的能力相近。
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2．微生物培养的基本操作 (1)培养基的制备：计算→称量→溶化→灭菌→倒平 板。 (2)倒平板操作：待培养基冷却至50℃左右时，在酒 精灯火焰附近倒平板。 (3)平板划线操作：通过接种环在琼脂固体培养基表 面连续划线的操作，将聚焦的菌种逐步稀释分散到培养 基的表面。注意划线的方法如图所示。
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②过程：土壤取样→样品稀释→微生物的培养与观察 →细菌的计数。
③测定微生物数量的常用方法：活菌计数法和显微镜 直接计数法。
④鉴定方法：用含酚红指示剂的以尿素为唯一氮源的 培养基培养细菌→指示剂变红，则说明该菌能分解尿素。
(2)分解纤维素的微生物的分离 ①原理
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②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出 现透明圈，说明________________；若A、B处形成的透 明圈直径大小相近，说明__________________________
___________________________________________。
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要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选 择的依据是_____________________________________
___________________________________________。
(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为 氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气 中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和 结论，即_________________________________________
②流程：土壤取样→选择培养基→梯度稀释→涂布平 板法→挑选菌落。
a．分离能分解纤维素的微生物时，有时需要进行选 择培养，选择培养的目的是增大选择对象在样液中的浓 度，以确保用刚果红染色法鉴别时确实能得到所需菌种。
b．培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 c．筛选方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明 圈来筛选纤维素分解菌。
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答案：(1)W (2)乙 乙菌落周围出现透明圈，说明 乙菌能降解W (3) 将甲、乙菌分别接种在无氮源培养 基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮 气作为氮源 (4) 缓冲液 缓冲液不能降解W 酶E与天 然酶降解W的能力相近
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1．(2019·全国卷Ⅱ)物质W是一种含氮有机物，会污 染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透 明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌(目标 菌)。回答下列问题。
(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮 源应该是________。
(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上 甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图所示)。如果
专题 十一 生物技术实践
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考点二 微生物的分离、培养及应用
1．微生物培养中的无菌操作技术 (1)三种常用的消毒方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法 及化学药剂消毒法。 (2)三种常用的灭菌方法：灼烧灭菌——接种环、接 种针等金属器具：干热灭菌——主要针对玻璃器皿等； 高压蒸汽灭菌——主要针对培养基等。
___________________________________________。
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Байду номын сангаас
(4)该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使 大肠杆菌产生能降解W的酶(酶E)。为了比较酶E与天然 酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善 相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含 有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲 液，C处滴加________，三处滴加量相同。
Ⅲ号培养基：氯化钠(5 g/L)，硝酸铵(3 g/L)，其他 无机盐(适量)。X(45 g/L)。
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回答下列问题。 (1)在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是 ________。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物 是________。 (2)若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一 段时间后，不能降解X的细菌比例会________，其原因 是______________________________________________ ___________________________________________。
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(4)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列的梯度稀 释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养 基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集 在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基 表面形成单个的菌落。
3．微生物分离与计数的实例 (1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。