食品生物技术《实验二 血型鉴定及交叉配血试验》

实验二血型鉴定及交叉配血试验
一、目的及要求
二、1、了解血型鉴定的原理，掌握其鉴定方法；
三、2、了解交叉配血的意义。

二、根本原理
Landsteiner根据人类天然存在于红血细胞上凝集原与血清中凝集素的不同，将人类血型分为四个不同的类型，即A、B、AB 和O型，称作ABO血型系统。

A型血的人，其红血细胞上有抗原A，血清中有抗B抗体β〔β凝集索〕；B型血的人有抗原B 和抗A抗体α〔α凝集素〕；AB型血的人有抗原A和B，没有抗体；O型血的人没有抗原，而有抗体α和β。

据此，如分别将抗A和抗B血清与待测红细胞混合，那么抗A或／和抗B血清与红细胞外表上的相应抗原结合而引起红细胞的凝集，根据凝集反响的情况，便可知待检者的血型〔表2〕。

表2 用抗血清鉴定血型的结果与判定
＋表示凝集；－表示不凝集。

下同。

假设将标准A型血清和标准B型血清与待测红细胞混合，标准血清中所含的β或α凝集素就与红细胞外表上的相应抗原结合，出现红细胞的凝集现象，据此，便可知待测红细胞的血型〔图3，表3〕。

表3 用标准血清鉴定血型的结果与判定
由于人血清中可含有天然的抗A或抗B的抗体，如将携带
某种血型抗原物质的红细胞输注到具有相应红细胞抗体的个体中，那么因抗原和抗体结合，在体内补体的参与下，发生溶血。

因此，为了防止因亚型或技术操作不当使血型鉴定发生过失而引起的输血反响或意外事故，输血前，必须作交叉配血试验，该试验是通过供血者血清与受血者红细胞以及供血者红细胞与受血
者血清相互交叉混合，观察有无凝集或溶血现象，用以鉴定供血者与受血者之间血型是否相合。

血型鉴定和交叉配血试验均有玻片法和试管法两种，下面介绍血型鉴定玻片法和交叉配血试验的试管法。

三、器材
〔一〕、材料和试剂
诊断用人血型抗A血清、诊断用人血型抗B血清〔常在血清中参加不同颜色的染料以示区别，如A型红色，B型蓝色〕、生理盐水、供血者血清、受血者血清、供血者的2%红细胞悬液、受血者的2%红细胞悬液。

〔二〕、器具
凹玻片或载玻片、小试管、尖嘴滴管、无菌刺血针、牙签、酒精棉球、无菌干棉球、试管架、显微镜、记号笔等。

四、操作步骤
〔一〕、血型鉴定
1、用酒精棉球消毒被检者的指尖或耳垂，用无菌刺血针刺破皮肤，取血1～2滴放入盛有05～lmL生理盐水的小试管中，摇匀即成为1%～2%的红细胞悬液。

取血后，用无菌干棉球压迫针眼止血；
2、取双孔凹玻片一张或载玻片—张，在二孔〔或二端〕处标明A、B。

用尖嘴滴管分别吸取诊断用人血型抗A和抗B血清，各加一滴于相应的孔内〔注意两滴管切勿混用〕；
3、用尖嘴滴管吸取待检红细胞悬液于A、B血清中各加1滴；〔注意勿使滴管尖端和血清接触〕。

4、分别用牙签将抗血清与红细胞悬液混匀〔也可前后左右轻轻晃动载玻片使其混匀，用牙签混匀应分别用两端搅拌，切不可用同—端在A、B两抗血清中搅拌〕；
5、充分混匀后，置室温于实验台上静置10～15mon后观察有无凝集发生。

如混合液由均匀混浊的红色逐渐变为透明，并出现
大小不等的红色凝集块，即为红细胞凝集；假设混合液呈均匀分散混浊状，边缘整齐，那么为不凝集。

如观察不够清楚，可置显微镜下用低倍镜观察；血型判定可参照图3及表3，红细胞凝成大块或有数个红细胞凝集在—起为凝集。

〔二〕、交叉配血试验
1、取小试管2支，分别标明1、2；
2、按下表参加各成分；
3、摇匀，3000rin；
4、结果观察：先观察上清液的颜色，然后再轻摇试管观察有无红细胞凝集现象发生；结果判定：如试管内红细胞呈均匀混浊无颗粒出现即无凝集，上清液呈正常血清状颜色为交叉配血试验相合。

如上清液呈红色即有溶血现象，红细胞成块即为凝集现象，为交叉配血试验不相合〔表4〕。

表4 交叉配血试验结果判断
五、考前须知
1、待检红细胞悬液不宜过稀或过浓；
2、所用的试剂必须在有效期内；
3、气温较高时，为防止标本干涸所致的假阳性，可将玻片放入有一湿棉球的平皿中。

假设室温过低，可将玻片置于28℃右右的温箱中；
4、注意区分红细胞的叠连现象与凝集现象。

前者滴加生理盐水1～2滴混匀后，红细胞即可分散成浑浊状，而后者那么不因此而改变；
5、利用A型和B型红细胞与一系列稀释的待检血清作凝集反响，根据凝集效价〔以出现凝集的最高稀释度〕的上下可作为判断体液免疫功能的一项指标。

多数免疫功能正常的半岁婴儿，除AB型外，血清中相应的抗A效价≥1:8，抗B效价≥1:4。

一岁后，凝集效价也相应提高。

六、作业与思考题
1、你的血型是何型你是如何判断的
2、你能接受何种血型的血液能辅血给何种血型的人为什么
3、根据下表中提供的凝集反响的结果，请将血型检查结果填入表中。

4、如果要检测血清中血型抗体的效价，请你写出主要的操作过程。