伊贝沙坦对兔心肌缺血再灌注血管内皮细胞粘附分子-1、细胞间粘重点

广西医科大学
硕士学位论文
伊贝沙坦对兔心肌缺血/再灌注血管内皮细胞粘附分子-1、细胞
间粘附分子-1表达的影响
姓名：陈聿峰
申请学位级别：硕士
专业：内科学
指导教师：李醒三
20040601
伊贝沙坦对兔心肌缺血，再灌注血管内皮细胞粘附分子．１、细胞间粘附分子．１表达的影响
摘要
目的：目标是探讨伊贝沙坦对兔心肌急性缺血／再灌注损伤和缺血，再灌注区血管内皮细胞粘附分子．１、细胞间粘附分子．１表达的影响。

方法：２４只（１８００．２０００９／只）雄性新西兰白兔随机分成３组：即假手术组，对照组，治疗组。

每组８只。

每天均用普通饲料喂养。

治疗组每只兔子在此基础上加以伊贝沙坦每天每公斤５ｍｇ灌胃。

２周后建立心肌急性缺血／再灌注模型。

假手术组，开胸暴露心脏，４—Ｏ线穿过左冠状动脉主干近端，但不结扎。

另两组，结扎左冠状动脉主干近端６０分钟后，松开结扎线，于以３６０分钟再灌注。

心肌缺血前，缺血及再灌注过程中分别记录心电图变化。

开胸前，分别从每只兔子耳静脉取４ｍｌ血液。

假手术组，在开胸后４５０分钟；另两组在再灌注后３６０分钟；分别从右房取５ｍｌ血液。

测定ＣＫ－ＭＢ水平。

假手术组，开胸后４５０分钟；另两组再灌注后３６０分钟；处死动物。

从再灌注区取下组织作标本，１０％中性福尔马林溶液固定后，石蜡包埋，于以常规组织学处理。

组织ＨＥ染色后，光镜下检查。

用免疫组化ＳＰ方法和计算机图象分析系统检测ＩＣ舢Ⅵ一１、ｖＣＡＭ．１在标本组织中的表达情况。

结果：假手术组，ｓ—Ｔ段无明显异常改变。

在再灌注后２小时内，治疗组与对照组相比，抬高的Ｓ—Ｔ段下降更显著（Ｐ＜０．０５）；但两组再灌注后３６０分钟均有“ＱＳ”波出现，无差异。

再灌注后３６０分钟，治疗组和对照组ＣＫ．ＭＢ水平显著升高（Ｐ＜Ｏ．０１，ＶＳ假手术组）；但治疗组明显低于对照组（Ｐ＜Ｏ．０１）。

与对照组相比，治疗组的组织损伤和中性粒细胞渗润程度明显减少（Ｐ＜Ｏ．０１；Ｐ＜０．０１）；假手术组更低。

对照组和治疗组再灌注区的ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．１表达明显上调（Ｐ＜Ｏ．０１，Ｐ＜０．０１，ｖｓ假手术组）；但两组上述指标有显著差异，前者ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ。

１表达更强（Ｐ＜ｏ．０１，Ｐ＜０．０１）。

结论：（１）研究认为心肌急性缺血，再灌注诱导再灌注区ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ一１表达上调。

（２）伊贝沙坦能明显抑制ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１表达上调。

（３）伊贝沙坦对兔心肌急性缺．町再灌注损伤有重要的保护作用；这种作用可能是通过抑制ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１表达上调有关。

关键词：缺血，再灌注；ＶＣＡＭ．１；ＩＣＡＭ一１；伊贝沙坦
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｉｒｂｅｓａｒｔａｎｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｖａｓｃｕｏｌａｒｅｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｔｏｏｌｅｃｕｌｅ－Ｉ（ＶＣＡＭ－１）ａｎｄｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－Ｉ（ＩＣＡＭ－１）ｉｎｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｒｅａｓｏｆｒａｂｂｉｔｓ
ＡＢＳＴＲＡＣＴ
ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ：Ｔｈｅａｉｍｗａｓｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｐｒｏｖｉｄｅｄｂｙｉｒｂｅｓａｒｔａｎ０１１ａｃｕｔｅ
ｍｙｏｃａｒｄｉａｉｓｃｈｅｍｉａｌ－・ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙａｎｄｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ・・１ａｎｄＶＣＡＭ－１ｉｎｔｈｅｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎａｒｅａｓ．
ⅣｍＴＨｏＤＳ：脚ｅｎｔｙ—ｆｏｕｒｍａｌｅＮｅｗＺｅａｌａｎｄＷｈｉｔｅｒａｂｂｉｔｓ（ｗｅｉｇｈｉｎｇ１８００－２０００９
ｗｅｒｅｕｓｅｄ）ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｒｅｅｇｒｏｕｐｓ：ｓｈａｍ，ｃｏｎｔｒｏｌａｎｄ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｅａｃｈｉｎｖｏｌｖｅｓｅｉｇｈｔｒａｂｂｉｔｓ．Ｔｈｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｆｅｄｄａｉｌｙｗｉｔｈｏｒｄｉｎａｒｙｆｏｏｄ．Ｅａｃｈａｎｉｍａｌｉｎｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｗａｓａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙｆｅｄｄａｉｌｙｗｉｔｈｉｒｂｅｓａｒｔａｎ（５ｍｇ．ｋｇ．ｋｄａｙ＂１）．Ｔｗｏｗｄｅｋｓｌａｔｅｒ，ｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆＩ／Ｒｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｎｔｈｅｓｈａｍｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｈｅａｒｔｗａｓｅｘｐｏｓｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｃｈｅｓｔｈａｄｂｅｅｎｏｐｏｎｅｄ，ｂｕｔｃｏｒｏｎａｒｙａｒｔｅｒｙｗａｓｎｏｔｌｉｇａｔｅｄ．Ｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｒａｂｂｉｔｓｗｅｒｅｓｕｈｊｅｃｔｅｄｔｏ６０ｍｉｎｏｆｌｅｆｔｍａｉｎｃｏｒｏｎａｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙ３６０ｍｉｎｏｆｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍｗａｓｒｅｃｏｒｄｅｄｂｅｆｏｒｅｉｓｃｈｅｍｉａ，ｄｕｒｉｎｇｉｓｃｈｅｒｎｉａａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｉｎｅｖｅｒｙｒａｂｂｉｔｏｆｍｏｄｅｌ．Ｔｈｅｂｌｏｏｄ（４ｍ１）ｗａｓｔａｋｅｎｆｒｏｍｖｅｉｎｉｎｖｅｒｙｒａｂｂｉｔｅａｒｓｂｅｆｏｒｅｔｈｅｃｈｅｓｔｗａｓｏｐｅｎｅｄ．Ｔｈｅｂｌｏｏｄ（５ｍ１）ｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｒｉｇｈｔａｔｒｉｕｍａｔｔｈｅｔｉｍｅｏｆ４５０ｍｉｎａｆｔｅｒｔｈｅｃｈｅｓｔｈａｄｂｅｅｎｏｐｅｎｅｄｉｎｔｈｅ
ｓｈａｍｇｒｏｕｐ，ｂｕｔｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏｇｒｏｕｐｓａｔ３６０ｍｉｎａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．ＳｅｒｕｍｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅＭＢｉｓｏｅｎｚｙｍｅｏｆｃｒｅａｔｉｎｅｋｉｎａｓｅ（ＣＫ－ＭＢ）ｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｔｈｅｒａｂｂｉｔｗａｓｋｉｌｌｅｄａｔ
４５０ｍｉｎａｆｔｅｒｔｈｅｃｈｅｓｔｈａｄｂｅｅｎｏｐｅｎｅｄｉｎｔｈｅｓｈａｍ
ｇｒｏｕｐ，ｂｕｔａｔ３６０ｍｉｎａｆｔｅｒ
ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｔｈｅｏｔｈｅｒｔｗｏ
ｇｒｏｕｐｓ．ＴｈｅｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓｒｅｍｏｖｅｄｆｒｏｍＩｆＲａｒｅａｓ．１１１ｅｓａｍｐｌｅｓＷｅｒｅｅｍｂｅｄｄｅｄｉｎｐａｒａｆｆｉｎｗａｘａｆｔｅｒｆｉｘｅｄｗｉｔｈ１０％ｎｅｕｔｒａｌｓｏｌｕｔｉｏｎａｎｄｄｉｓｐｏｓｅｄｗｉｔｈｒｏｕｔｉｎｅｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓ．Ｔｈｅｙｗｅｒｅｅｘａｍｉｎｅｄｂｙｌｉｇｈｔｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙａｆｔｅｒｓｔａｉｎｉｎｇ
ｗｉｔｈｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎａｎｄｅｏｓｉｎ（ＨＥ）．Ａｌｓｏ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＩＣＡＭ一１ａｎｄＶＣＡＭ一１Ｗｅｌ＇ｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｂｙｅｍｐｌｏｙｉｎｇｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌＳＰｍｅｔｈｏｄａｎｄｃｏｍｐｕｔｅｒｉｍａｇｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎｔｈｅｔｉｓｓｕｅｓａｍｐｌｅｓ．
ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｉｎｔｈｅｓｈａｍｇｒｏｕｐ．ｔｈｅＳ—－Ｔｓｅｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｎｏｔｏｂｖｉｏｕｓｌｙａｂｎｏｒｍａｌｃｈａｎｇｅｓ．Ｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ，Ｔｈｅｅｌｅｖａｔｅｄ
Ｓ—＿Ｔｓｅｇｍｅｎｔｓｄｅｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｌｙｄｕｒｉｎｇｔｗｏｈｏｕｒｓｏｆｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（Ｐ＜Ｏ．０５，ＶＳｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ）．Ｂｕｔａｌｌ
ｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｅｄ
３
ｇｒｏｕｐｏｒｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｔｈｅｒｅｗｅｒｅＱＳ”ａｔ３６０ｍｉｎｏｆｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ．ＢｏｔｈｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＣＫ－ＭＢｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１，ＶＳｓｈａｍｇｒｏｕｐ），ｈｏｗｅｖｅｒｔｈｅｌｅｖｅｌｓｏｆＣＫ－ＭＢｏｆｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐｗｅｒｅｅｖｉｄｅｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０１）．Ａｓｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｔｈｅｄａｍａｇｅｄｅｇｒｅｅｏｆｍｙｏｃｙｔｅｓａｎｄｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｇｒｅａｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜０．０１），ａｎｄｇｏｔｍｏｒｅｌｏｗｅｒＩｎｔｈｅｓｈａｍｇｒｏｕｐ．ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＣＡＭ－－１ａｎｄＩＣＡＭ・－１ｉｎｔｈｅＩ／Ｒａｒｅａｓｂｏｔｈｉｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｅｄ
ｇｒｏｕｐｗｅｒｅｇｒｅａｔｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｄ（Ｐ＜Ｏ；０１，Ｐ＜０．０１，ＶＳｓｈａｍｇｒｏｕｐ）．Ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆａｂｏｖｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄｉｎｄｅｘｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄｔｈｅｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ，ｉｎｔｈｅｆｏｒｍｅｒ，ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｏｆＶＣＡＭ一１ａｎｄＩＣＡＭ一１ｔｅｎｄｅｄｔｏｂｅｍｏｒｅｓｔｒｏｎｇ（Ｐ＜Ｏ．＇０１，Ｐ＜０．０１）．
ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ：Ｔｈｅｓｅｄａｔａｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔ（１）ＶＲｍａｒｋｅｌｙｉｎｄｕｃｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＣＡＭ一１ａｎｄＩＣＡＭ一１ｉｎｔｈｅＵＲａｒｅａｓ．（２）ｉｒｂｅｓａｒｔａｎＣａｎｇｒｅａｔｌｙｄｅｐｒｅｓｓｅｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＣＡＭ一１ａｎｄＩＣＡＭ一１ｉｎｔｈｅＩ／Ｒａｒｅａｓ．（３）ｉｒｂｅｓａｒｔａｎｅｘｅｒｔｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔａｇａｉｎｓｔｍｙｏｃａｒｄｉａｌＩ／ＲｉｎｊｕｒｙｏｆｒａｂｂｉｔｓｂｙｄｅｐｒｅｓｓｉｎｇｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＶＣＡＭ—ｉａｎｄＩＣＡＭ一１．
ＫｅｙＷｏｒｄｓ：ｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ（１／Ｒ）；ＶＣＡＭ・１；ＩＣＡＭ－１；ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ．
４
—１Ｌ。

．Ｌ
目ｌＪ舌
有关研究表明，在心肌缺血再灌注中，常常伴有细胞粘附子表达的改变。

细胞粘附分子包括免疫球蛋白超家族，整合素家族，选择素家族三大类。

免疫球蛋白超家族主要包括细胞间粘附分子一１（ＩＣＡＭ．１），血管内皮细胞粘附分子．１（ＶＣＡＭ一１），血小板内皮细胞粘附分子．１（ＰＥ．ＣＡＭ－１），其中以前两者与心血管事件关系最密切。

心肌缺血再灌注损伤（ＭＲＩ）过程中，粘附分子明显表达，它们介导中性粒细胞和单核细胞对血管内皮细胞、心肌细胞的粘附【１’引；白细胞细胞通过一系列炎性反应造成组织的损伤。

近年来的研究表明，抑制或清除粘附分子的作用，可有效减轻Ｍｍ【３“】。

血管紧张素Ⅱ受体有４种亚型，即ＡＴ】，ＡＴ２，ＡＴ３，ＡＴ４。

伊贝沙坦是ＡＴｌ的阻滞剂。

有报道认为ＡＴ】的阻滞剂，如氯沙坦，缬沙坦等可减少心肌缺血再灌注时的损伤；可使患者血中可容性ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１水平降低【５～。

但伊贝沙坦是否能减轻ＭＲ／，是否能减少再灌时ＩＣＡＭ－１和ＶＣＡＭ一１的表达，国外报道结果并不完全一致；国内未见报道。

本研究通过新西兰白兔，建立心肌缺血再灌注模型，探讨伊贝沙坦对ＭＲＩ及再灌注区ＩＣＡＭ．１和ＶＣＡＭ一１表达的影响。

材料与方法
一．要试剂和仪器
（１）主要试剂：伊贝沙坦（杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司分装，法国赛诺菲圣德拉堡公司生产，１５０ｍｇ／片）。

１０％中性福尔马林溶液。

单克隆ＩＣＡＭ．１抗体、ＶＣＡＭ一１抗体（武汉博士德公司生产提供，工作浓度为１：５０）。

Ｓ．Ｐ试剂盒（内含：试剂Ａ即内源性过氧化酶阻断剂；试剂Ｂ即正常非免疫动物血清；试剂Ｃ即生物素标记的第二抗体；试剂Ｄ即链霉菌抗生物素蛋白．过氧化酶）和ＤＡＢ显色试剂盒（两种试剂盒均为福洲迈新生物技术开发公司产品）。

（２）主要仪器：１２导普通心电图机（日本手提式）。

日立７１７０Ａ自动生化检测仪。

光学显微镜。

分析天平。

精密ＰＨ值测量仪。

病理图象分析系统。

二．心肌缺血再灌注动物模型的建立
２４只（ｔ８００．２０００∥只）雄性新西兰白兔（广西医科大学实验动物中心提供）随机分成３组：即假手术组，对照组，治疗组。

每组８只。

每天均用普通饲料喂养。

治疗组每只兔子在此基础上加以伊贝沙坦每天每公斤５ｍｇ灌胃。

２周后肌注氯氨酮４０ｍｇ和氯丙嗪１２．５ｍｇ，麻醉后将兔子固定在手术台上。

用５号针头刺入四肢远端，接上导线，记录心电图（Ⅱ导）１次。

剃去胸毛、消毒皮肤、铺无菌洞巾，在胸骨正中线上开胸，在不损伤胸膜下切开心包，暴露左冠状动脉左前降支，并沿该支找到主干近端。

假手术组，４＿＿０线穿过主干近端，但不结扎；对照组和治疗组结扎主干近端６０分钟后，完全松开结扎线，予以３６０分钟再灌注。

整个模型的建立在开胸后３０分钟内完成。

三．心电图记录
对照组和治疗组结扎左冠脉主干近端后，分别于１、５、２０、６０分钟记录１次心电图；完全松开结扎线后，分别于１、５、２０、６０、１２０、３６０分钟记录１次心电图。

假手术组４＿＿ｏ线穿过后分别于１、５、２０、６０、６１、６５、８０、１２０、１８０、４２０分钟记录１次心电图。

四．标本的采集与处理
各组麻醉后，开胸前从耳静脉取４ｍｌ血液。

假手术组，在开胸后４５０分钟；另两组在再灌注后３６０分钟；分别从右房取５ｍｌ血液；直接送广西医科大学第一附属医院检验科，用自动生化检测仪检测ＣＫ－ＭＢ。

右房完成取血后立即
处死动物，迅速切下再灌注区损伤组织，生理盐水洗净后，置于１０％中性福尔马林溶液固定１６．１８小时后，石蜡包埋。

每个标本取２张切片（切片厚度６Ｉｔｍ）作组织ＨＥ染色后，光镜下检查。

每个标本再取６张切片（切片厚度４ｕｍ）用免疫组化ＳＰ方法检测ＩＣＡＭ．１和ＶＣＡＭ一１表达。

五．免疫组化染色操作步骤
１、蜡切片脱蜡和水化后，用ＰＢＳ（ＰＨ７．４）冲洗三次，每次３分钟。

２、用柠檬酸盐缓冲液（ＰＨ６．Ｏ）高温高压对组织抗原进行修复。

３、片加５０ｕ１试剂Ａ即过氧化酶阻断剂，温室下孵育１０分钟，以阻断内源性过氧化酶的活性。

ＰＢＳ冲洗三次，每次３分钟。

４、去ＰＢＳ液，每张切片加５０ｕ１试剂Ｂ即正常非免疫动物血清封闭非特异抗原，温室下孵育１０分钟。

５、去血清，每张切片加５０ｕｌ的单克隆ＩＣＡＭ．１抗体或单克隆ＶＣＡＭ．１抗体（工作浓度均为ｌ：５０），温室下孵育６０分钟。

６、ＰＢＳ冲洗三次，每次３．５分钟。

除去ＰＢＳ液，每张切片加５０ｕ１试剂Ｃ即生物素标记的第二抗体，温室下孵育１０分钟。

ＰＢＳ冲洗三次，每
次３分钟。

７、去ＰＢＳ液，每张切片加５０ｕ１试剂Ｄ即链霉菌抗生物素蛋白．过氧化酶，温室下孵育１０分钟。

ＰＢＳ冲洗三次，每次３分钟。

８、去ＰＢＳ液，每张切片加１００ｔｚ１新鲜配制的ＤＡＢ显色液，光学显微镜下观察８—１０分钟。

９、自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝。

加、切片经过梯度酒精脱水干燥，中性树胶封片。

附一：柠檬酸盐缓冲液高温高压对组织抗原进行修复方法
取一定量柠檬酸盐缓冲液（ＰＨ６．０）８００．１５００ｍｌ于压力锅锅中，大火加热至沸，将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上，放入已沸腾的缓冲液中。

盖上锅盖，扣上压力阀，继续加热至喷气，从喷气开始计时，２分钟后，压力锅离开热源，冷却至温室，取出玻片，先用蒸馏水冲洗三次，之后用ＰＢＳ僻日７．２．７．４夕冲洗二次，每次３分钟。

附二：以上实验均在温室下进行。

用已知阳性片（狼疮肾）作阳性对照，ＰＢＳ代替一抗做阴性对照。

六．免疫组化染色结果分析方法
采用多媒体彩色免疫组化病理图象分析系统对染色进行定量分析，在４００倍视野下，计数１００个细胞，在代表部位随机选取１０个不重叠视野，根据视野染色颗粒，平均ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ一１表达的百分比分级（＋＋＋至一），＋＋＋表示细胞膜明显染色（深棕黄）且阳性细胞占７５％以上；＋＋表示细胞膜中度染色（黄色）且阳性细胞占５０＿＿７５％；＋表示细胞膜轻度染色（浅黄）且阳性细胞占１０＿＿５０％；一表示细胞膜无染色或阳性细胞＜１０％。

七．心电图结果及组织损伤分析方法
记下各个时间点抬高的Ｓ—Ｔ段值及实验终点“ＱＳ”波变化。

光镜下组织损伤参考于严［７】等的分级标准分成ｏ＿１Ｖ级，即０级为无病变；Ｉ级为心内膜下局性病变；ＩＩ级为心肌小范围灶性病变，肌纤维肿胀和断裂；Ⅲ级为心肌广泛融合性病变，肌纤维肿胀和断裂，灶性坏死；Ⅳ级为心肌广泛融合性坏死。

八．坏死区中性粒细胞计数方法
腼染色，低倍镜下确定心肌坏死区，各自取坏死边缘区及中央区的心外膜下、中层和心内膜下心肌共６个视野，高倍镜（４００倍）计数中性粒细胞总数，取平均值。

九、统计学处理
采用１０．０版ＳＰＳＳ软件包进行处理。

ｓ—Ｔ段值的变化及中性粒细胞数比较用成组ｔ检验；ＣＫ－ＭＢ的变化及比较用实验终点减去缺血前的差值作单因素方差分析；心肌组织病理损伤程度比较及心肌组织ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１表达比较用多组等级资料秩和检验。

Ｐ＜＝０．０５有统计学意义。

结果
一、心电图Ｓ—Ｔ段值的变化比较
假手术组Ｓ—Ｔ段手术前后无明显变化。

治疗组和对照组缺血后均明显上抬，但两组缺血后各时间点（即１、５、２０、６０分钟）分别比较无差异（各Ｐ＞０．０５）；与对照组相比，再灌注后，治疗组２小时内各个时间点（１、５、２０、６０、１２０分钟）分别比较，上抬的Ｓ—－Ｔ段下降更显著（各Ｐ＜０．０５）。

治疗组和对照组实验终点心电图均出现“Ｑｓ”波，无差异。

治疗组和对照组抬高的Ｓ—Ｔ段（毫伏）动态变化及比较
ｉ±ｓ：均数士标准差。

二、三组实验动物中性粒细胞平均数比较
假手术组仅见３—５个中性粒细胞。

对照组１３５±３４个；治疗组７８±１５个。

两组比较有显著差异（Ｐ＜Ｏ．０１）。

（注：数据为均数±标准差）。

三、三组实验动物开胸前及实验终点血ＣＫ－ＭＢ的变化及比较
实验终点三组间比较总的有差异（Ｐ＜ｏ．０１）。

与假手术组比较，治疗组和对照组血ＣＫ－ＭＢ均明显增高（Ｐ＜ｏ．０１）；但治疗组比对照组显著减少（Ｐ＜０．０１）。

说明治疗组损伤比较轻。

假手术组、治疗组和对照组缺血前和实验终点血ＣＫ－ＭＢ（ｕ／Ｌ）的变化及比较
Ｆ－１８２．８８９Ｐ总＜ｏ．０１。

一ｘｑ－ｓ：均数±标准差；均数：用实验终点减去缺血前的差值计算ａ
四、三组Ｉ／Ｒ心肌组织病理损伤程度比较
对照组损伤程度明显重于治疗组（Ｐ＜０．０１）。

而假手术组最轻。

三组Ｉ／Ｒ心肌组织病理损伤程度比较
Ｐ＜Ｏ．Ｏｌ。

五、三组实验终点心肌ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．Ｉ表达结果
假手术组ＩＣＡＭ．１仅少量表达；ＶＣＡＭ－Ｉ未见表达。

与假手术组比较，治疗组、对照组ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ一１表达均增加（Ｐ＜０．０１；Ｐ＜Ｏ．０１）。

治疗组ＩＣＡＭ。

１、ＶＣＡＭ．１表达弱于对照组；但强于假手术组。

三组心肌组织ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．１表达比较
组别阳性表达程度
只假手术组８
ＩＣＡＭ－１
一＋４－＋＋＋＋３５ＯＯ
治疗组８０２６０
ＶＣＡＭ．１
８
０
Ｏ０
６２
＋＊
Ｏ
０
对照组８００ｌ７００８０———■獗丽正面面面百翥孤夏■——函画而歪万丽忑百菊砑薇。

１ｌ
讨论
一、伊贝沙坦对心肌缺血再灌注损伤（ＭＲＩ）的保护作用
１：近年研究表明，血管紧张素ＩＩ（ＡｎｇＵ）受体之一，Ａ瓦阻滞剂对心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。

ＪｕｇｄｕＲ等嘲研究发现，在缺血前３０分钟，静脉注射ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ（１ｍｇ／ｋｇ）后结扎狗冠状动脉９０分钟，再灌注１２０分钟；与对照组比较，ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ能显著减少左室前负荷、左室收缩压和舒张压，减少心梗面积。

Ｓａｔｏ等【９１研究亦表明，用含ｌｏｓａｒｔａｎ（４．５ｍｉｃｒｏｍｏｌ／Ｌ）的灌注液处理后的大鼠离体心脏，工作１０分钟后，予以缺血３０分钟再灌注２小时；与无ｌｏｓａｒｔａｎ的对照组比较，ｌｏｓａｒｔａｎ组的心梗面积、凋亡细胞明显减少。

但也有报道认为【１０】，ＭＲＩ并不依赖ＡＴｌ受体机制，ＡＴｌ阻滞剂（１０ｓａｒｔａｎ）对减轻ＭⅪ并无效果。

我们的研究表明，尽管治疗组与对照组一样，于再灌注６小时后均有ＱＳ波出现，但治疗组在再灌注后２小时内各观察点抬高的Ｓ—Ｔ段显著回落：说明伊贝沙坦有助于损伤心肌的恢复；ＨＥ染色结果及ＣＫ．ＭＢ结果亦表明：伊贝沙坦能显著减轻治疗组心肌组织的损伤。

我们认为这种效应可能与伊贝沙坦可减少再灌注区ＰＭＮｓ渗润有关；因为在治疗组再灌注区中性粒细胞（ＰＭＮｓ）显著少于对照组，而目前认为ＰＭＮｓ是造成心肌再灌注后无复流现象和组织损伤的主要原因。

Ａｎｇｌｌ能促进交感神经末梢释放儿茶酚胺致冠脉收缩增强、冠脉血管阻力增加，使血流减少；具有正性肌力作用，使心肌耗氧增加。

此外尚有增加毛细血管阻力、通透性和扩大内皮细胞、吸引ＰＭＮｓ参与炎症、加重再灌注区产生无复流现象等作用。

有研究证实【１１１，Ｒ／Ｉ可使ＡｎｇＩＩ水平显著增加。

ＡｎｇＩＩ的产生有两个途径：即经血循环的血管紧张素转化酶（ＡＣＥ）途径；另一个是由组织（如心脏，肾脏和脑等）合成非ＡＣＥ途径（糜酶途径）。

我们推测ＡＴｌ阻滞剂伊贝沙坦对ＭＲＩ的保护作用与其可从受体水平完全阻断ＡｎｇｌＩ的上述作用亦有关系。

有待进一步研究。

二、伊贝沙坦对ＭＲＩ心肌ＩＣ削Ⅵ一１、ＶＣＡＭ．１表达和ＰＭＮｓ渗出的影响
现已肯定炎症反应是造成ＭⅪ的重要原因之一。

自细胞向炎症部位游走、聚集有二个途径【１２】：（１）是炎症时立即出现，这是炎性刺激使白细胞与内皮细胞发生的一过性粘附；（２）是炎性刺激ＩＣｐｄ讧．１、ＶＣＡＭ．１表达后参与的白细胞进入炎症部位途径，这是最主要的途径。

研究表明【ｌ３’１４】，在心肌Ｉ／Ｒ中，伴有ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１表达增强。

而用抗ＩＣＩＡＭ．１或ＶＣＡＭ一１单克隆抗体处理后，所建立的Ｉ／Ｒ模型表明，抗体处理后能阻止白细胞牢固地粘附到内皮
细胞上；心梗面积、中性粒细胞出土渗出明显减少［１５１；ＪｏｎｅｓＥｌ６１研究发现，结扎野生型大鼠左冠３０分钟后再灌２４小时，冠脉内皮细胞ＩＣＡＭ．１表达显著增加，但用ＩＣＡＭ．１基因缺馅大鼠建立相同的模型表明，ＩＣＡＭ．１表达和白细胞聚积、渗润显著减少，ＭＲＩ显著减轻。

粘附分子有三大家族，即选择素、整合素家族和免疫球蛋白超家族；不同粘附分子在再灌注损伤所起的作用是不同的；首先是ｐ．选择素调节ＰＭＮｓ沿着内皮细胞滚动；紧接着是由Ｅ．选择素介导ＰＭＮｓ和内皮细胞的粘附和ＰＭＮｓ的激活，最后是免疫球蛋白超家族的ＩＣＡＭ．１和其配体整合素家族中的ＣＤｌｌｂ／ＣＤｌ８调控内皮细胞和ＰＭＮｓ的牢固结合【１７】。

ＭⅪ过程中，表达后的粘附分子主要功能是介导中性粒细胞和单核细胞对血管内皮、心肌细胞的粘附【１．ｚ】；粘附后的炎症细胞通过一系列炎性反应造成组织的损伤。

我们的研究表明，兔心肌急性缺血再灌注可以使再灌注区ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．１表达增强，且损伤重、白细胞渗出多的对照组更为明显；说明ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１表达对ＭⅪ及ＰＭＮｓ渗润有重要关系。

有研究发现【１引，口服ＡＴｌ受体阻滞剂ｌｏｓａｒｔａｎ，可以明显减少循环中的ＶＣＡＭ．１浓度（７５０＋／．７３ＶＳ５７２＋＃３９）和ＩＣＡＭ．１浓度（４５０＋／－２６ＶＳ１９６＋／－１０）。

但亦有研究认为１１９１，ｌｏｓａｒｔａｎ并不能够减少循环中的ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ一１浓度。

Ｇｕｂａ等【Ⅻ亦认为ｌｏｓａｒｔａ并不能减少Ｒ／Ｉ心肌ＩＣＡＮＩ一１、ＶＣＡＭ．１表达。

我们的研究表明，治疗组的ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ－１表达程度和组织损伤程度、ＰＭＮｓ渗润程度显著少于对照组；表明伊贝沙坦可减少Ｒ／Ｉ心肌ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ一１的表达。

我们认为ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１的表达减少有助于减轻Ｍ魁。

因为ＩＣＡＭ一１、ＶＣＡＭ．１的表达减少，白细胞对血管内皮及心肌的粘附减弱、在缺血区的聚积和渗出减少，对组织损伤则轻。

二、伊贝沙坦减少Ｒ／Ｉ心肌ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ－１表达可能机制
１：通过影响Ａｎｇｌｌ的可能机制。

伊贝沙坦的口服生物利用度是目前同类药物中最高，达６０．８０％；口服后２小时血药浓度达峰值；与ＡＴｌ受体的亲和力比ｌｏｓａｒｔａｎ强１０倍。

研究表明［２０ｌ，把ＡｎｇｌＩ与人脐静脉内皮细胞一起培养，２小时后ＩＣＡＭ—ｌｍＲＮＡ强烈增加；可容性ＩＣＡＭ一１也显著增加（Ｐ＜Ｏ．０２）；但这种情况均可被ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ完全抑制。

在人体内，给予高血压患者或正常人注射Ａｎｇｌｌ，９０分钟后血可容性ＩＣＡＭ一１水平显著升高（Ｐ＜０．００１）；而口服ｌｏｓａｒｔａｎ者，可容性ＩＣＡＭ－１水平明显减少（Ｐ《０．０５）；认为ＡＴｌ阻滞剂能抑制ＡｎｇＨ刺激内皮细胞所引起的ＩＣＡＭ．１表达和可容性ＩＣＡＭ一１释放。

１３
Ｔｕｍｍａｌａ等口¨研究亦发现，ＡｎｇｌＩ能使大鼠动脉平滑肌细胞显著表达
ＶＣＡＭ－１，而口服ｌｏｓａｒｔａｎ（５０ｍｇ．ｋｇ．（－”ｄ．（－”），可完全抑制这种效应；ＡｎｇｌＩ能诱导ＮＦ－ｋＢ结合力增加，使ＮＦ－ｋＢ与ＶＣＡＭ一１启动子结合增强，ＶＣＡＭ．１转录增强，ｌｏｓａｒｔａｎ能阻止ＮＦ－ｋＢ激活和ＶＣＡＭ一１表达。

ＮＦ－ｋＢ和ＡＰ一１是ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．１表达调控的最重要的核转录因子；Ｖａｌｓａｒｔａｎ能完全抑制ＮＦ．ｋＢ和ＡＰ．１激活｛２２］ｏ我们推测，在心肌Ｒ／Ｉ模型中，伊贝沙坦减少Ｒ／Ｉ区心肌ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ．１表达主要是通过抑制ＡｎｇｌＩ或直接抑制核转录因子而起作用。

这有待进一步研究。

２：ＡｎｇＩＩ是ｐ３８ＭＡＰＫ和信号传导与转录活化因子．１（ＳＴＡＴ－１）强有力的激活剂瞄】．ｐ３８ＭＡＰＫ是丝裂素激活蛋白激酶（ＭＡＰＫ）的新成员，它调节着细胞的许多应激反应，是细胞信息传递的共同通路。

研究发现【２４１缺血再灌注５分钟ｐ３８ＭＡＰＫ活性增强，３０分钟达高峰。

ｐ３８ＭＡＰＫ可在转录后水平调控内皮细胞ＶＣＡＭ．１蛋白表达；也是目前所知道的唯一的ＶＣＡＭ．１转录后水平调控机制１２５１。

而阻断ｐ３８ＭＡＰＫ激活能显著减少Ｉ／Ｒ所诱导ＶＣＡＭ．１、
ＩＣＡＭ．１蛋白表达瞄’２６】。

ｊａｎｕｓ激酶和ＳＴＡＴ－１蛋白活化可迅速使ＩＣＡＭ．１蛋白表达增加ｃ２７】。

研究发现ＡＴｌ受体活化可使ｐ３８ＭＡＰＫ、ｊａｎｕｓ激酶和ＳＴＡＴ－１蛋白同时活化；但这种效应可被ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ完全抑制【ｚ研。

我们推测伊贝沙坦可阻断ＡｍｇⅡ效应、阻止ＡＴｌ受体活化，而影响ｐ３８ＭＡＰＫ．ｊａｎｕｓ激酶和ＳＴＡＴ－１活化而使ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ一１蛋白表达减少。

这有待进一步研究。

３：其他因素。

诱导ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ．１表达的主要因素为缺血再灌注、ＩＬ．１Ｂ、ＴＮＦ－ｄ等ｆ２９】；我们认为伊贝沙坦可有效减轻ＭＲＩ；ＭＲＩ减轻，损伤的组织产生的Ⅱ，１Ｂ、ＴＮＦ－ａ等细胞因子则减少；心肌组织ＶＣＡＭ．１、
ＩＣＡＭ一１表达减少。

反过来，ＶＣＡＭ一１、ＩＣＡＭ．１表达减少，白细胞的粘附、聚积和渗出减少，对组织损伤则轻。

我们推测伊贝沙坦可能通过这种效应而减少ＶＣＡＭ－ｌ、ＩＣＡＭ－ｌ表达。

小结
本研究结果表明：
１、缺血再灌注可诱导再灌注心肌组织的ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ．１表达增加。

提示ＶＣＡＭ－１、ＩＣＡＭ一１在ＭⅪ的发生发展有重要作用。

２、伊贝沙坦可显著减少再灌注心肌组织的ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ－１表达及ＰＭＮｓ渗润。

３、伊贝沙坦可有效减轻兔ＭＲＩ。

这种效应可能是通过减少ＶＣＡＭ．１、ＩＣＡＭ．１表达及ＰＭＮｓ渗润起作用。

４、贝沙坦对临床上缺血再灌注损伤的治疗可能有较为重要的指导意义。

附图：
三组心电图比较
假手术组：心肌纤维完整，很少中性粒细胞浸润。

ＨＥ染色Ｘ４００
治疗组：心肌纤维肿胀，横纹消失，部分细胞核溶解消失（蓝箭头所示）。

问质水肿（红箭头所示）少量中性粒细胞反应（黄箭头所示）ＨＥ染色
Ｘ４００
对照组ｚ左箭头示梗死灶周围有中性粒细胞反应，右箭头示梗死灶，心肌细胞大分横纹消失。

伊红浓染，核溶解漓失，还可见心肌纤维断裂。

脏染色Ｘ４００
１７
治疗组ＶＣＡＭ－１可见少量表达（细胞膜染成黄色，左箭头所示）．明显少于下图对照组。

×４００
对照组ＶＣＡＭ－１可见比较明显的表达（细胞膜染成黄色，右箭头所示），明显
多于上图治疗组。

Ｘ４００
１８
假手术组：ＩＣＡＭ－Ｉ可见少量表达（细胞膜染成黄黑色，右箭头所示）。

Ｘ４００
治疗组ＩＣＡＭ－１可见比较明显的表达（细胞膜染成黄色，右箭头所示），明显多于上圈假手术组。

但少于下图对照组。

Ｘ４００
对照组ＩＣＡＭ－１可见明显表达（细胞膜染成黄色，右箭头所示），明显多于上图治疗组。

×４００
１９
致谢
入学三年，不管是生活上还是学习上均得到我的恩师李醒三教授深切的关心和精心的指导，在此表示衷心的感谢。

在科室学习期间得到陶新智、曾知恒、朱立光、伍伟锋、钟国强等教授，李浪、韦金儒、黄凯等副教授无私的关心与帮助，在此表示深深的感谢。

感谢在我完成本研究过程中给与我帮助的梁秀就老师、蓝东和黄荣杰同学。

感谢学校和研究生院老师的帮助。

感谢我的爱人和家人三年来给我的支持。

参考文献
１：ＳｕｎＢ，ＦａｎＨ，ＨｏｎｄａＴ＇ｅｔａ１．ＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＮＦ－ｋａｐｐａＢａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＣＡＭ—ｌｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｅｄｃａｎｉｎｅｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ．ＪＭｏｌＣｅｌｌＣａｒｄｉａｌ
２００１Ｊｕｎ．３３（１）：１０９—１９．
２：ＬｉＤ，ＷｉｌｌｉａｍｓＶＬｉｕＬ，ＣｈｅｎＨ，ｅｔａ１．Ｌｏｘ一１ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌ
ｉｓｃｈｅｍｉａ—ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ：ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＭＭＰ—ｌａｎｄｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉｏｌ，２００２Ｎｏｖ；２８３（５）：Ｈ１７９５—８０１．
３：ＮａｋａｎｏＨ，ＮａｇａｓａｋｉＨ。

ＹｏｓｈｉｄａＫ．ｅｔａ１．Ｎ—ａｃｅｔｙｌｃｙ—ｓｔｅｉｎｅａｎｄａｎｔｉ—ＩＣＡＭ－ｌｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙｒｅｄｕｃｅｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｏｆｔｈｅｓｔｅａｔｏｔｉｃｒａｔ
ｌｉｖｅｒ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｐｒｏｃ，１９９９，３０：３７６３—３７６７．
４：ＢｏｗｄｅｎＲＡ，ＤｉｎｇＺＭ，ＤｏｎａｃｈｉｅＥＭ，ｅｔａ１．Ｒｏｌｅｏｆａｌｐｈａ４ｉｎｔｅｇｒｉｎａｎｄＶＣＡＭ一１ｉｎＣＤｌ８一ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌｍｉｇｒａｔｉｏｎａｃｒｏｓｓｍｏｕｓｅｃａｒｄｉａｃ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ．ＣｉｒｃＲｅｓ２００２Ｍａｒ２２；９０（５）：５６２—９．
５：ＪｉｌｍａＢ，Ｌｉ—Ｓａｗ—Ｈｅｅ，ＷａｎｇｅｒＯＦ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｅｎａｌａｐｆｉｌａｎｄｌｏｓａｒｔａｎｏｎｃｋｃｕｌａｆｉｏｎａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ一１．Ｃｌｉｎ‘Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ）；２００２
Ａｕｇ；１０３（２）：１３１－６．
６：ＰｒａｓａｄＡ，ＫｏｈＫＫ，ＳｃｈｅｎｋｅＷＨ，ｅｔａ１．ＲｏｌｅｏｆａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎＩＩｔｙｐｅ１－ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎａｔｈｅｒｏｓｃｈｅｒｏｓｉｓ．ＡｍＨｅａｒｔＪ．２００１Ａｕｇ；１４２（２）：２４８—５３．
７：于严，汤健等。

牛黄酸对大鼠异丙肾上腺索性心肌损伤的保护作用。

中国病理生理杂志，１９９１，７：５６６．５６８。

Ｍ．ＥｎｈａｎｃｅｄｒｅｇｉｏｎａｌＡＴ（２）－ｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄＰＫＣ（ｅｐｓｉｌｏｎ）８：ＪｕｇｄｕｔｔＢＩ。

Ｂａｌｇｈｉｔｈ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｄｕｒｉｎｇｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｉｎｄｕｃｅｄｂｙＡＴ（１）一ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｌｏｃｋａｄｅａｆｔｅｒｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．ＪＲｅｎｉｎＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｏｎＡｌｄｏｓｔｅｒｏｎｅＳｙｓｔ．２００１Ｊｕｎ；２（２）：１３４－４０．
９：ＳａｔｏＭ。

ＥｎｇｅｌｍａｎＲＭ，ＯｔａｎｉＨ，ｅｔａ１．Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎｂｙｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｏｆｈｅａｒｔｗｉｔｈｌｏｓａｒｔａｎ，ａｎａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩｔｙｐｅ１－ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｌｏｃｋｅｒ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆ
ａｎｄｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ．．ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
２０００Ｎｏｖ７；１０２（１９ｓｕｐｐｌ３）：ＩＩｌ３４６—５１．
２１
１０：ＧｕｂａＭ，ＳｔｅｉｎｂａｕｅｒＭ，ＢｕｃｈｎｅｒＭ，ｅｔａ１．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｈｏｒｔ－ｔｅｒｍａｃｅ．ａｎｄＡＴｌ一ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｎｐｏｓｔｉｓｃｈｅｍｉｃｉｎｊｕｒｙａｎｄｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｄｈｅｒｅｎｃｅｉｎｖｉｖｏａｎｄｉｎｖｉｔｒｏ．Ｓｈｏｃｋ．２０００Ｍａｒ；１３（３）：１９０—６．
１１：王万铁．林丽娜．谢克俭．血管紧张素ＩＩ在家兔心肌缺血再灌注损伤中的作用及巯甲丙脯酸保护效应．中国胸心血管外科临床杂志，１９９９，０１，４５—５２。

１２：范钦华等。

细胞间粘附分之．１在细菌性角膜炎角膜组织表达的实验研究。

解放军医学杂志，２００ｌ，８；２６（８）：５８５—５８９。

１３：ＪｏｎｅｓＳＰ，ＴｒｏｃｈａＳＤ，ｅｔａ１．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎａｃｈｒｏｍｉｃｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉ０１．２０００ｖｏｖ，２７９（５）Ｈ２１９６－２０１．
１４：ＧａｏＹＬｅｃｋｅｒＳ，ＰｏｓｔＭＪ，ＨｉｅｔａｒａｎｔａＡＪ，ｅｔａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅｐａｔｈｗａｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄＩｋａｐｐａＢａｌｐｈａｄｅｇｒａｄｍｉｏｎｂｙａ
ｎａｔｕｒａｌｌｙｏｃｃｕｒｒｉｎｇａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅ．ＪａｉｎＩｎｖｅｓｔ．２０００Ａｕｇ；１０６（３）：４３９—４８．
１５：ＮｉｇａｍＡ，ＫｏｐｅｃｋｙＳＬ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｆｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙ．ＡｍＪＣａｒｄｉｏｖａｓｃＤｒｕｇｓ．２００２；２（６）：３６７・７６．
１６：ＪｏｎｅｓＳＰ，ＴｒｏｃｈａＳＤ，ＳｔｒａｎｇｅＭＢ，ｅｔａ１．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅａｎｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎａｃｈｒｏｎｉｃｍｕｒｉｎｅｍｏｄｅｌｏｆｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ
ｉｎｊｕｒｙ．ＡｍＪＰｈｙｓｉｏｌＨｅａｒｔＣｉｒｃＰｈｙｓｉ０１．２０００Ｎｏｖ；２７９．
１７：ＬｅｆｅｒＡＭ．Ｒｏｌｅｏｆｔｈｅｂｅｔａ２一ｉｎｔｅｇｒｉｎｓａｎｄｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙｍｅｍｂｅｒｓｉｎｍｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．ＡｎｎＴｈｏｒａｃＳｕｒｇ１９９９
Ｎｏｖ；６８（５）：１９２０—３．
１８：ＲａｊａｇｏｐａｌａｎＳ，ＢｒｏｏｋＲ，ＭｅｈｔａＲＨ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｌｏｓａｒｔａｎｉｎａｇｉｎｇ—ｒｅｌａｔｅｄｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ．ＡｍＪＣａｒｄｉ０１．２００２Ｍａｒ１；８９（５）：５６２—６．
１９：ＰｒａｓａｄＡ，ＫｏｈＫＫ，ＳｃｈｅｎｋｅＷＨ，ＭｉｎｃｅｍｏｙｅｒＲ，ｅｔａ１．ＲｏｌｅｏｆａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ
ｔｙｐｅ１ｒｅｃｅｐｔｏｒｉｎｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．ＡｍＨｅａｒｔＪ．２００１Ａｕｇ；１４２（２）：２４８—５３．
２０：ＰａｓｔｏｒｅＬ，ＴｅｓｓｉｔｏｒｅＡ，ＭａｒｔｉｎｏｔｔｉＳ，ｅｔａ１．ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ—ｌｆＩＣｈＭ一１）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙｈｕｍａｎｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｓｓｏｌｕｂｌｅＩＣＡＭ一１ｒｅｌｅａｓｅｉｎｖｉｖｏ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．
１９９９０ｃｔ１２；１００（１５）：１６４６．５２．
２１：ＴｕｍｍａｌａＰＥ，ＣｈｅｎＸＬ，ｅｔａ１．：ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩｉｎｄｕｃｅｓｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ一１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｒａｔｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ：Ａｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｉｎｋｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｒｅｎｉｎ—ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｓｙｓｔｅｍａｎｄａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ．１９９９Ｓｅｐ１４；１００（１１、：１２２３—９．
２２：ＭｕｌｌｅｒＤＮ，ＭｅｒｖａａｌａＥＭ，ＤｅｃｈｅｎｄＲ，ｅｔａ１．ＡｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ（ＡＴ（１））ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｌｏｃｋａｄｅｒｅｄｕｃｅｓｖａｓｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅｆａｃｔｏｒｉｎａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ．ｉｎｄｕｃｅｄｃａｒｄｉａｃｖａｓｃｕｌｏｐａｔｈｙ．ＡｍＪＰａｔｈ０１．２０００Ｊｕｌ；１５７（１）：１１１－２２．
２３：ＬｉＪＭ，ＣｌｌｉＴＸ，ＳｈｉｕｃｈｉＴ’ｅｔａ１．ＮｉｃｏｔｉｎｅｅｎｈａｎｃｅｓａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩ－ｉｎｄｕｃｅｄｍｉｔｏｇｅｎｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｉｎｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓａｎｄｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒＴｈｒｏｍｂＶａｓｃＢｉ０１．２００４Ｊａｎ；２４（１）：８０－４．Ｅｐｕｂ２００３Ｏｃｔ３０．
２４：ＴａｋａｇｉＹ，ＮｏｚａｋｉＫ，ＳｕｓｎｏＴ，ｅｔａ１．Ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆｃ－ＪｕｎＮＨ２－ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅａｎｄｐ３８ｍｉｔｏｇｅｎ—ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅａｆｔｅｒｔｒａｎｓｉｅｎｔｆｏｒｅｂｒａｉｎｉｓｃｈｅｍｉａｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＮｅｕｒｏｓｃｉＬｅｔｔ，２０００，２９４（２）：１１７—１２０．
２５：Ａｎｎｅｋｅ只ＢａｎＣＺＭｏｈｈｉａｓＧｅｔａｌ。

ｐ３８ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｒｅｇｕｌａｔｅｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＶＣＡＭ一１ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｔｔｈｅｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｌｅｖｅｌ［Ｊ］．ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ．１９９７．２３０（１）：４４—４８．
２６：ＧａｏＦ，ＹｕｅＴＬ，ＳｌｌｉＤＷ，ｅｔａ１．ｐ３８Ｍ匕～ＰＫｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒｅｄｕｃｅｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｊｕｒｙｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｂｌｏｃｋａｄｅｏｆＰ心心Ｔａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ．
ＣａｒｄｉｏｖａｓｃＲｅｓ．２００２Ｆｅｂ１；５３（２）：４１４—２２．
２７：ＢｉｔｏＴ＇ＲｏｙＳ，ＳｅｎＣＫ，ＳｈｉｒａｋａｗａＴ，ＧｏｔｏｈＡ，ＵｅｄａＭ，ＩｃｈｉｈａｓｈｉＭ，ＰａｃｋｅｒＬ．ＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｒｅｇｕｌａｔｅＩＦＮｇａｍｍａ－ｉｎｄｕｃｅｄＩＣＡＭ－ｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎ
ａｃｔｉｏｎ．唧ＳＬｅｔｔ．２００２Ｊｕｎｈｕｍａｎｋｅｒａｔｉｎｏｃｙｔｅｓ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆ
５；５２０（１．３１：１４５．５２．
２８：ＯｍｕｒａＴ，ＹｏｓｈｉｙａｍａＭ，ＩｓｈｉｋｕｒａＦ，ｅｔａ１．ＭｙｏｃａｒｄｉａｌｉｓｃｈｅｍｉａａｃｔｉｖａｔｅｓｔｈｅＪＡＫ－ＳＴＡＴｐａｔｈｗａｙｔｈｒｏｕｇｈａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎＩＩｓｉｇｎａｌｉｎｇｉｎｉｎｖｉｖｏｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｏｆｒａｔｓ．ＪＭｏｌＣｅｌｌＣａｒｄｉ０１．２００１Ｒ出；３３（２）：３０７－１６．
２９：ＫｕｐａｔｔＣ，ＨａｂａｚｅｔｔｌＨ，ＧｏｅｄｅｃｋｅＡ，ｅｔａ１．Ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ－ａｌｐｈａｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓｔｏｉｓｃｈｅｍｉａ—ａｎｄｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ—ｉｎｄｕｃｅｄｅｎｄｏｔｈｅｆｉａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｉｎｉｓｏｌａｔｅｄｈｅａｒｔｓ．ＣｉｒｃＲｒｓ１９９９Ｍａｒ５；８４（４）：３９２—４００．
细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ．１）、血管内皮细胞粘附分子１（ＶＣＡＭ．１）与心肌缺血再灌注
陈聿峰综述李醒三审核
～：前言：
已肯定，心肌缺血再灌注损伤（ＭＩ／Ｒ），可发生于冠状动脉溶栓术、经皮冠状动脉成行术（ＰＴＣＡ）、ＰＴＣＡ加支架植入术、心脏移植术等治疗之后。

但其确切的原因尚不完全清楚。

目前认为可能与下歹Ⅱ因素有关：氧自由基增加，钙离子超载，细胞凋亡增加，ＮＯ减少，补体系统介导损伤，肾素．血管紧张素增加，核因子．ｋＢ增加，热休克蛋白减少，细胞粘附分子家族增加。

近年来，对细胞粘附分子家族研究得比较多；ＩＣＡＭ．１、ＶＣＡＭ一１为其家族的重要成员，研究表明，ＭＩ／Ｒ的发生发展与两者有密切的联系。

本文综述该领域近年来的研究成果。

二：ＩＣＡＭ－１与心肌缺血再灌注损伤（Ｍ矾【）
现已肯定中性粒细胞（ＰＭＮｓ）对ＭＩ／Ｒ的发生发展有着重要的作用。

而ＩＣＡＭ．１介导ＰＭＮｓ对ＭＩ／Ｒ损伤，已被人们所认识。

１９８６年ＩＣＡＭ．１首次被鉴定。

８８年有研究发现ＰＭＮｓ粘附及跨血管内皮迁移依赖于其表面的ＣＤｌ８（ＩＣＡＭ．１的配体）和内皮细胞上的ＩＣＡＭ．１。

９３年Ｋｕｋｉｅｌｋｕ等【ｌ】首次报道狗心肌缺血１ｈ再灌注１ｈ，在再灌注区的心肌微血管内皮细胞表面的ＩＣＡＭ．１蛋白表达即开始增加。

心肌组织ＩＣＡＭ。

１ｍＲＮＡ水平明显上调。

ＰＭＮｓ对组织的浸润增加；认为ＩＣＡＭ．１参与ＰＭＮｓ介导心肌的损害过程。

Ｙｏｕｋｅｒ等【２】研究进一步发现：狗心肌缺血３ｈ，缺血区的心肌微血管内皮细胞及心肌细胞并无ＩＣＡＭ一１ｍＲＮＡ产生；缺血２４ｈ仅有少量ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ，且无明显炎细胞浸润。

而当再灌注１ｈ，再灌注区内即有ＩＣＡＭ．１ｍＲＮＡ及其蛋白表达；再灌注３ｈ显著增加；有明显炎细胞浸润。

认为缺血再灌注（矾ｔ）是ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ及其蛋白表达的诱导因素；ＩＣＡＭ一１参与介导了炎症的发生。

此后有关研究支持上述观点。

Ｓｕｎ等【３１报道，结扎狗冠状Ａ主干６０分钟，之后给予再灌注；用免疫组化方法检测ＩＣＡＭ一１蛋白表达，发现整个缺血期ＩＣＡＭ．１蛋白表达水平降低；而再灌注１５分钟，再灌注区心肌组织ＩＣＡＭ．１蛋白表达水平升高，且与ＩＣＡＭ一１ｍＲＮＡ出现（用Ｎｏｒｔｈｅｎｂｌｏｔｔｉｎｇ检测方法）密切相关。

此后有研究报道［４ＩＩＣＡＭ．１蛋白表达高峰在心肌再灌注２４ｈ时。

但不同的研究对
ＩＣＡＭ一１蛋白表达出现及达高峰时间并不一致。

国内有研究表明垆］，脑缺血２ｈ，再灌注２ｈ，ＩＣＡＭ．１蛋白表达才出现，再灌注４８ｈ达高峰；同时发现再灌注区损伤程度与ＩＣＡＭ．１蛋白表达强度有密切关系。

在心肌再灌注的炎性瀑布反应中【６】，ＰＭＮｓ被激活，其表面ＣＤｌｌ／ＣＤｌ８（ＩＣＡＭ一１的配体）的表达水平上调，通过它与内皮细胞表达的ＩＣＡＭ。

１相互作用，使ＰＭＮｓ粘附于内皮并进一步活化，经细胞变形从血管内皮细胞间隙外移到周围组织中；另一方面ＰＭＮｓ跨内皮迁移到心肌内，通过ＣＤｌｌ／ＣＤｌ８与心肌细胞表面已表达的ＩＣＡＭ一１相互作用，使ＰＭＮｓ牢固粘附于心肌细胞。

孙椭ｓ释放毒性介质到心肌细胞造成损伤。

Ｍａｒｕｂａｙ等【乃报道，在再灌注前，用抗ＩＣＡＭ．１抗体处理的大鼠，与对照组相比，其再灌注区组织ＰＭＮｓ的浸润明显减少、组织的损伤明显减轻；Ｓｏｒｉａｎｏ等【８】，用ＩＣＡＭ－１的配体ＣＤｌｌ／ＣＤｌ８表达缺失的大鼠制作缺血再灌注模型，结果其再灌注区ＰＭＮｓ的粘附率、组织损伤程度及死亡率均较对照组明显减少。

而用ＩＣＡＭ．１抑制剂，如ＮＡＣ等可明显减少ＰＭＮｓ的粘附和浸润，并可有效减轻组织的损伤。

用ＣＬｌ８／６（ＩＣＡＭ．１的阻断剂）在Ｉ／Ｒ模型中，冠状Ａ内灌注ＣＬｌ８／６组的坏死心肌占危险心肌的Ｅ匕例为１５％±４％，少于对照组；缺血心肌的ＭＰＯ活性（ＰＭＮｓ聚积的标志）明显下降驯。

Ｍｅｔｚｌｅｒ【１０】研究表明心肌缺氧３０分钟再复氧２小时，ＩＣＡＭ－１基因缺失型大鼠的心肌细胞释放的肌钙蛋白、ＣＫ－ＭＢ、ＬＤＨ、心肌梗塞面积均明显少于野生型大鼠。

ⅢＪｏｎｅｓ分别结扎大鼠左冠状Ａ主干３０分钟，再灌注２４小时，亦发现ＩＣＡＭ．１基因缺失型大鼠在再灌注２４小时时，缺血区的ＰＭＮｓ渗出少于野生型大鼠；心肌组织损伤亦减轻。

在人体内，Ｋａｌａｗｓｋｉ掣１１】报道，分别从１５名进行冠脉旁路移植术（ＣＡＢＧ）患者的肘前静脉、肘动脉、冠脉窦部位抽取血浆标本。

抽取时间为：主动脉完全结扎之前、再灌注开始时、再灌注开始时后３０分钟。

用ＥＬＬＡ方法进行检测。

结果显示，在冠脉窦部位标本，再灌注３０分钟时，可容性ＩＣＡＭ．１水平显著高于前两个时间所采标本；并且显著高于同一时间在肘动脉部所取标本。

认为ＣＡＢＧ再灌注损伤与ＩＣＡＭ．１升高有关。

三：ＶＣＡＭ一１与心肌缺血再灌注
ＶＣＡＭ．１基因作为一种炎症基因，有关研究表明，在心肌缺血再灌注时其表达上调。

临床研究亦发现心肌缺血再灌注损伤与ＶＣＡＭ一１有密切关系。