裸鼠成瘤实验注意事项
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裸鼠活体荧光
相关裸鼠皮下成瘤的建议
1、裸鼠的品系。 2、裸鼠成瘤用的材料：细胞的选择。 3、客户的具体要求：比如说肿瘤形成部位，是否需要详细
记录肿瘤的大小变化，是否需要取材后需要怎么拍摄裸鼠 的照片等等。
谢谢大家！
感谢观看
• 裸大鼠(基因符号rnu )：
一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无 毛，头部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。
裸鼠的选择
虽然说以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植肿瘤大，取血 量多，可行某些外科小手术等优点。因此比裸小鼠有一定 优越性，其缺点是维持经费比裸SPF小鼠更高，另外裸大 鼠目前不怎么流行。所以我们实验室常用的是BALB/c-nu 裸小鼠。
-
A549 +
裸鼠成瘤
细胞培养：
细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。细胞 状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会 导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸鼠成瘤的最佳时期
-
+
裸鼠成瘤
细胞接种：
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。也 就是一只裸鼠最少要用200W个细胞，有的细胞需求可能会达到 1000W个/只。
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一 种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小 鼠（nn/+）各方面表现都正常。
小鼠中有若干突变基因，它可产生一种为无毛的表现型（ phenotype），例如无胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、无 毛鼠（Hairless）、无鼻毛鼠（Rhinol），不要把这些突变鼠基 因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表现型，因此，不能 将“裸鼠”与“无毛鼠”两词交换使用。
裸一大些鼠 比易较患有2呼争.根吸议道的据疾细病胞体。：内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有
。 附因：此我 ：们感实染很验24一孔高些板裸中的鼠1孔出成的瘤镜H的EP成率-G功2，细案胞例但所需是要实的慢际病毒上体，积为基：本(20*都*10是5*10从8 体外开始有名
-
+
裸大鼠易患呼吸道疾病。
所以我们实当验室然常用，的是我BAL们B/c-n对u裸小于鼠。细胞株的选择是没有选择的！
Hep-G2细胞
A375细胞
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
一些比较有争议的细胞：
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
常见的细胞株
常规较容易成瘤的细胞：
Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮 癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑 色素瘤细胞）。
裸鼠
裸小鼠 裸大鼠
形态特征
• 裸小鼠(基因符号nu):
无毛(hair less),无胸腺(athymus).幼鼠(3－4周龄),成年鼠(6－8周龄。 抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、 饮水 患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都要求 经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。
色 一素些瘤比细 较胞 有） 争附。 议的：细胞一： 些细胞的慢病毒感染效果图
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。
细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。
裸大鼠(基因符号rnu )：
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。
K562 细胞状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会导致失败。
随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响如病毒感染裸鼠体内正常t细胞会增加故接种肿瘤实验一般采用4裸鼠的选择裸鼠的选择我们实验室均采用细胞株作为材料这个方式是性价比最高的操作简便材料安全且容易获取
裸鼠成瘤实验注意 事项
裸鼠
无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠）。目前已成为医学 生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学 、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等 实验方面，它有着特殊的价值。
可以成瘤但是比较慢的细胞：
CNE（鼻咽癌），A549（肺癌），SPC-A-1（肺腺癌）。HT-29 （结肠癌），EL-7402（肝癌）。
一些比较有争议的细胞：
Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。
细胞慢病毒感染
1、慢病毒保存
理论上慢病毒可在-80℃保存6个月，在4℃可保存3天。因为 慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好 是提前分装。
慢病毒滴度单位为TU/ml 例如： Hep-G2细胞，MOI=20，慢病毒滴度*108 TU/ml, 24孔板的细胞总数：*105个。 因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2细胞所需要的慢病毒体积 为： (20**105*108
细胞慢病毒感染
Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑
2、MOI值
细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以 查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI 值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。
细胞慢病毒感染
附：慢病毒使用量的相关计算公式
MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数 其中：慢病毒使用体积单位为ml
瘤
2.建株的人体肿瘤组织培养细胞
理论上建株的肿瘤细胞均可以
我们实验室均采用细胞株作为材料，这个方式是 性价比最高的，操作简便，材料安全且容易获取。
细胞株的选择
细胞的选择大致有一下几个面：
理CN论E上 （慢鼻病咽1毒癌.国可）在，际-A8504公℃9（保认肺存癌6度个）月，较，SP在高C4-℃A的-可1（细保肺存腺胞3天癌株。）。。
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
当然，我们对于细胞株的选择是没有选择的！
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、 饮水患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都
要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。
裸小鼠(基因符号nu):
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
附：一些细胞的慢病毒感染效果图
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。
MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数
随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染), 裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4-6周龄的裸鼠。
裸鼠成瘤方式
1.人体原发癌
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
裸
、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织
鼠
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
成
分比（35.7%）的良好生长，并可传代。
接种的部位大部分颈部和腋下皮下。血丰富，能提供大量的营养。 当然，这个也是可以调整的。
另外裸鼠理论上是1个裸鼠只能接种1针，形成1个肿瘤。因为2个或 者以上的肿瘤是会相互影响的。
裸鼠成瘤
附：我们实验一些裸鼠成瘤的成功案例
Hep-G2细胞
A375细胞
一些其他情况下的裸鼠成瘤 裸鼠皮下成瘤后，除了一些常规的检测外 我们一般可进行以下一些实验操作：
相关裸鼠皮下成瘤的建议
1、裸鼠的品系。 2、裸鼠成瘤用的材料：细胞的选择。 3、客户的具体要求：比如说肿瘤形成部位，是否需要详细
记录肿瘤的大小变化，是否需要取材后需要怎么拍摄裸鼠 的照片等等。
谢谢大家！
感谢观看
• 裸大鼠(基因符号rnu )：
一般特征似裸小鼠，但躯干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那样完全无 毛，头部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。
裸鼠的选择
虽然说以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植肿瘤大，取血 量多，可行某些外科小手术等优点。因此比裸小鼠有一定 优越性，其缺点是维持经费比裸SPF小鼠更高，另外裸大 鼠目前不怎么流行。所以我们实验室常用的是BALB/c-nu 裸小鼠。
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A549 +
裸鼠成瘤
细胞培养：
细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。细胞 状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会 导致失败。即浪费了细胞，又错过了裸鼠成瘤的最佳时期
-
+
裸鼠成瘤
细胞接种：
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。也 就是一只裸鼠最少要用200W个细胞，有的细胞需求可能会达到 1000W个/只。
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一 种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。杂合子小 鼠（nn/+）各方面表现都正常。
小鼠中有若干突变基因，它可产生一种为无毛的表现型（ phenotype），例如无胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、无 毛鼠（Hairless）、无鼻毛鼠（Rhinol），不要把这些突变鼠基 因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表现型，因此，不能 将“裸鼠”与“无毛鼠”两词交换使用。
裸一大些鼠 比易较患有2呼争.根吸议道的据疾细病胞体。：内生长情况来确定，很多细胞株，在文献中有
。 附因：此我 ：们感实染很验24一孔高些板裸中的鼠1孔出成的瘤镜H的EP成率-G功2，细案胞例但所需是要实的慢际病毒上体，积为基：本(20*都*10是5*10从8 体外开始有名
-
+
裸大鼠易患呼吸道疾病。
所以我们实当验室然常用，的是我BAL们B/c-n对u裸小于鼠。细胞株的选择是没有选择的！
Hep-G2细胞
A375细胞
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
一些比较有争议的细胞：
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
常见的细胞株
常规较容易成瘤的细胞：
Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮 癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑 色素瘤细胞）。
裸鼠
裸小鼠 裸大鼠
形态特征
• 裸小鼠(基因符号nu):
无毛(hair less),无胸腺(athymus).幼鼠(3－4周龄),成年鼠(6－8周龄。 抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、 饮水 患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都要求 经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。
色 一素些瘤比细 较胞 有） 争附。 议的：细胞一： 些细胞的慢病毒感染效果图
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。
细胞的状态以及数量是裸鼠皮下成瘤很关键的一步。
裸大鼠(基因符号rnu )：
接种的细胞量：无血清培养基重悬成1*107个/ml的悬液，只/针。
K562 细胞状态良好，对数生长期，接种很容易形成肿瘤，反之则会导致失败。
随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响如病毒感染裸鼠体内正常t细胞会增加故接种肿瘤实验一般采用4裸鼠的选择裸鼠的选择我们实验室均采用细胞株作为材料这个方式是性价比最高的操作简便材料安全且容易获取
裸鼠成瘤实验注意 事项
裸鼠
无胸腺裸鼠（Nude Mouse，简称裸鼠）。目前已成为医学 生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。特别是在肿瘤学 、免疫学、药品与生物制品的安全性评价及有效药品的筛选等 实验方面，它有着特殊的价值。
可以成瘤但是比较慢的细胞：
CNE（鼻咽癌），A549（肺癌），SPC-A-1（肺腺癌）。HT-29 （结肠癌），EL-7402（肝癌）。
一些比较有争议的细胞：
Hela（宫颈癌），HCT（人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞）。
细胞慢病毒感染
1、慢病毒保存
理论上慢病毒可在-80℃保存6个月，在4℃可保存3天。因为 慢病毒每次冻融会降低病毒滴度10%，因此慢病毒实验最好 是提前分装。
慢病毒滴度单位为TU/ml 例如： Hep-G2细胞，MOI=20，慢病毒滴度*108 TU/ml, 24孔板的细胞总数：*105个。 因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2细胞所需要的慢病毒体积 为： (20**105*108
细胞慢病毒感染
Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大细胞肺)，A431(表皮癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑
2、MOI值
细胞感染达到80%以上所需MOI值，这个大部分细胞是可以 查到，不过因为因为慢病毒感染细胞是很灵活的，因此MOI 值的选择也是很有差异性的，具体情况具体分析。
细胞慢病毒感染
附：慢病毒使用量的相关计算公式
MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数 其中：慢病毒使用体积单位为ml
瘤
2.建株的人体肿瘤组织培养细胞
理论上建株的肿瘤细胞均可以
我们实验室均采用细胞株作为材料，这个方式是 性价比最高的，操作简便，材料安全且容易获取。
细胞株的选择
细胞的选择大致有一下几个面：
理CN论E上 （慢鼻病咽1毒癌.国可）在，际-A8504公℃9（保认肺存癌6度个）月，较，SP在高C4-℃A的-可1（细保肺存腺胞3天癌株。）。。
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
当然，我们对于细胞株的选择是没有选择的！
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
抵抗力差，易在SPF环境下可生存，所用的笼具、垫料、饲料、 饮水患病毒性肝炎和肺炎，因而饲养和繁殖要求条件比较严格，等都
要求经过严密灭菌消毒并采用隔离器饲养，以保证长期存活并进行繁殖。
裸小鼠(基因符号nu):
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
附：一些细胞的慢病毒感染效果图
裸鼠（纯合子nu/nu突变鼠）主要表现为无毛（但可看到一种细毛组织学证明有被毛滤泡）以及缺乏正常胸腺。
MOI=（慢病毒使用的体积*慢病毒滴度）/ 需要感染的细胞数
随着裸小鼠年龄增长或有关因素的影响(如病毒感染), 裸鼠体内正常T细胞会增加，故接种肿瘤实验一般采用4-6周龄的裸鼠。
裸鼠成瘤方式
1.人体原发癌
结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤
裸
、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织
鼠
肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百
成
分比（35.7%）的良好生长，并可传代。
接种的部位大部分颈部和腋下皮下。血丰富，能提供大量的营养。 当然，这个也是可以调整的。
另外裸鼠理论上是1个裸鼠只能接种1针，形成1个肿瘤。因为2个或 者以上的肿瘤是会相互影响的。
裸鼠成瘤
附：我们实验一些裸鼠成瘤的成功案例
Hep-G2细胞
A375细胞
一些其他情况下的裸鼠成瘤 裸鼠皮下成瘤后，除了一些常规的检测外 我们一般可进行以下一些实验操作：