【实验】培养基的配制和灭菌

的代谢产物 素、牛肉膏、蛋
白胨等
特殊营 生长必不可少的 酶和核酸的组 维生素、氨基
养物质 微量有机物
成成分
酸、碱基等
在生物体内含量 水 很高，在低等生
物体内含量更高
为微生物提供除 碳、氮以外的各 无机盐 种重要元素，包 括大量元素和微 量元素
不仅是优良的 溶剂而且可维 持生物大分子 结构的稳定 细胞内的组成 成分，生理调 节物质；某些 化能自养菌的 能源，酶的激 活剂
区别： 加入琼脂的量决定培养基的形态。
熔点：96℃ 凝固点：40℃ 注意：一般细菌不能利用琼脂。
培养基种类 固体培养基
特点
作用
菌落 外观固态
微生物的纯化、分离、计数
半固体培养基 液体培养基
容器倒放不致流出， 观察微生物的运动、 剧烈震动则破散 鉴定菌种
呈液态
常用于工业生产
选择培养基
用途：从众多微生物中选择、分离出所需要的微生物 原理：依据某些微生物对某些物质的抗性而设计 制备方法：在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需
4.常用的消毒与灭菌的方法
(1) 常用的消毒方法：
煮沸消毒法:在100℃煮沸5-6min可以杀死微 生物细胞和一部分芽孢。
巴氏消毒法：在70-75 ℃煮30min或 80 ℃ 煮 15min可以杀死不耐高温的液体中的微生物，并 且使液体中的营养成分不被破坏。（如牛奶）
化学药剂消毒法:用70%的酒精擦拭进行皮肤 消毒;用氯气消毒水源等。
富含：氮源、一些维生素
(2)特殊营养：维生素、碱基等 （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）
(3)pH、氧气的需求
例如: 培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素； 培养霉菌时需将PH调至酸性； 培养细菌时需将PH调至中性或微碱性； 培养厌氧型微生物时则需要提供无氧的条件。
培养基的成分及功能
营养要素 含义
3.消毒与灭菌的概念
（1）消毒定义： 指使用较为温和的物理或化学方法仅
杀死物体表面或内部一部分对人体有害的 微生物。（不包括芽孢和孢子）
对象：操作空间、双手
（2）灭菌的定义：
使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达 到完全无菌之过程。
对象：接种环、接种针、玻璃器皿、 培养基等
3.培养基的类型和用途
据化学成分可分为：_天__然__培养基和_合__成__培养基
培
养 基
据外观物理状态可分为：液__体__培养基半__固__体__培养
的 基和_固__体__培养基
类
型 据培养基功能可分为：选__择__培养基和_鉴__别_培养基
和基础培养基
比较：固体培养基和半固体培养基、液体培养基。
二、无菌技术
1、获得纯净培养物的关键：防止外来杂菌的入侵
2、无菌技术包括：
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ；
（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进 行灭菌 ；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒 精灯火焰附近旁进行；
（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相 接触。
碳源
凡能提供所 需碳元素的 物质
氮源
凡能提供所 需氮元素的 物质
作用
主要来源
构成生物体细 无机化合物：CO2、 胞的物质和一 NaHCO3； 些代谢产物； 有机化合物：糖
有些是异养生 类、脂肪酸、花
物的能源物质 生饼粉、石油等
无机化合物：N2、 合成蛋白质、 NH3、铵盐、硝酸盐； 核酸以及含氮 有机化合物：尿
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源
牛肉膏
又称牛肉浸膏，是采用新鲜牛肉经过剔除脂肪、消化、 过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。 有牛肉自然香味，易溶于水，水溶液呈淡黄色。
富含：糖类、碳源、维生素、磷酸盐等
蛋白胨
蛋白胨是将肉、酪素或明胶用酸或蛋白酶水解后干燥 而成的外观呈淡黄色的粉剂，具有肉香的特殊气息。 蛋白质经酸、碱或蛋白酶分解后也可形成蛋白胨。在 胃内蛋白质的初步消化产物之一就是蛋白胨。蛋白胨 富含有机氮化合物，也含有一些维生素和糖类。
要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。
常见选择培养基举例： 加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物 唯一碳源为纤维素的培养基：分解纤维素的细菌
鉴别培养基
用途：鉴别不同种类的微生物 原理：依据微生物产生的某些代谢产物与培养基中特定
一、培养基
1.培养基定义：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配
置出供其生长繁殖的营养基质称培养基。
2.培养基的营养构成
(1)基本成分： 碳源、氮源、水、无机盐 ①碳源 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 自养微生物
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等 异养微生物
②氮源
无机氮源：NH4＋、NO3有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
紫外线消毒……
(2) 常用的灭菌方法：
灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶 口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌。
(2) 常用的灭菌方法： 干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并 需要保持干燥的物品放到干热Biblioteka Baidu菌箱内，在 160～170OC中加热1～2h即可。
试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计 制备方法：在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以
鉴别不同种类的微生物。
鉴定培养基举例：
大肠杆菌在伊红美蓝 培养基上典型特征
大肠杆菌菌落呈黑色中心 ,有金属光泽
4.培养基配制原则：
（1）目的要明确：要根据所培养的微生物的种类、培 养的目的等，选择原料配制培养基。
到目前为止 几十项诺贝尔生理学和医学奖、化学奖
都与微生物学有关
微生物基础知识
病毒 原核生物 微生物的分类 真菌 原生生物 特点： 结构都相当简单,个体多数十分微小。通常 要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚。
专题2 :微生物的培养与应用
主要内容
一、培养基作用、种类 二、无菌技术 三、制备牛肉膏蛋白胨培养基 四、纯化大肠杆菌
（2）营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。 （碳源和氮源的比最为重要）
如：谷氨酸生产中 C:N=4:1菌体大量繁殖而产生的谷氨酸少。 C:N=3:1菌体繁殖受抑制但谷氨酸的合成量大增。
（3）pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同。 细菌pH为：6.5-7.5；放线菌pH为：7.5-8.5； 真菌pH为：5.0-6.0。