甘氨酸对硫酸黏杆菌素体外抑菌作用的影响

注： ＋表 示 相 加 作 用 ； ×表示 协 同作 用 ； 表 示 无 关 。 Ｎ
Ｎｏ ｅ：＋ Ｍ ｅ ｎ ｄ ｉｉ ｅ ｅ ｆ ｃ ； Ｍ ｅ ｎ ｙ ｅ ｇ ｓ ｉ ｆｅ ｔ Ｎ ｅ ｎ ｏ ａ ａ ｏ ｉｔｃ ｅ ｆ ｃ ｔ ａ ｓ ａ ｄ ｔｖ ｆｅ ｔ × ａ ｓ ｓ ｎ ｒ ｉ ｔ ｅ ｆ ｃ ； Ｍ ａ ｓ ｎ ｎｔ ｇ ｎ ｓ ｉ ｆ ｅ ｔ ｃ
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＋簧 菩
抑菌试验结果见表 ２ 。
２ ３ 沙 门菌抑 菌试 验结 果 －
甘氨酸 和硫 酸黏杆 菌素单 用及联 合对 大肠 埃希
菌抑 菌试验 结果 见表 １ 。 ２ ２ 绿脓杆 菌抑 菌试 验结果 ． 甘氨酸 和硫 酸黏杆 菌素单 用及 联合 对绿脓 杆菌
甘 氨酸 和硫酸 黏杆菌 素单 用及 联合对 沙 门菌抑
动 物 医 学 进 展 。 ０ ２， ３ １ ） ５ — Ｏ ２ １ ３ （ ０ ： ７６
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
甘氨 酸对 硫 酸黏 杆 菌 素体 外 抑 菌作 用 的 影 响
刘萌萌， 高存 帅 ， 徐 玉 ， 可 东 毕
素对 ３ ３株 细 菌 的单 药 ＭＩ Ｃ值 ， 种 菌 量 为 １ ０ 接 ×１ ｃｕ ｍＬ，７℃孵 育 １ ～２ ， 察 结果 。试 验 时 ， ｆ／ ３ ８ｈ ４ｈ 观
致病 性大肠 埃 希 菌 、 脓 杆 菌 和沙 门菌 各 ｌ 绿 Ｏ株 ， 由
青 岛农 业大 学药 理实 验室提 供 ； 准菌 株 ： 标 大肠 埃 希 每个浓 度各做 ３个 重 复 ， 同时 以标 准 菌 Ａ Ｃ ５ ２ 、 Ｔ Ｃ２ ９ ２
和 内毒 素受 体基 因 Ｃ ４蛋 白 的表 达 ］ 从 而有 效 Ｄ１ ， 减 轻肝 损伤 。
安 医疗 器 械厂产 品 ； Ｐ ６ ０ Ｆ电子 天平 ， 特 勒一 Ｓ Ｓ ００ 梅 拖 利多称 量设 备公 司产 品 ； 道 可 调移 液 器 、 单 ８道 可 调
移液 器 ， ｐ ｅ ｄ ｒ 公 司产 品。 Ｅ ｐｎ ｏｆ
菌 ＡＴＣ ２ ９ ２ 购 自中 国兽 医药 品监 察 所 ， 脓 杆 Ｃ ５２ ， 绿 菌 Ａ Ｃ ７ ５ ， 济 南 ９ 医 院 提 供 ； 沙 门 菌 ＴＣ ９ ８ ３ 由 Ｏ 猪 （ ７－ １ ， 自中 国兽 医药 品监察 所 。 Ｃ ８５ ） 购 １ １ ３ 培 养基 Ｍ— 肉汤 ， 养 琼 脂 ， 康 凯 琼 ．． Ｈ 营 麦
收 稿 日期 ： ０ ２０ — ３ ２ １ — ４２ 作 者 简 介 ： 萌 萌 （９ ７ ） 女 ， 东青 岛人 ， 士研 究 生 ， 刘 １８一 ， 山 硕 主要 从 事 兽 药 制 剂研 究 。 ＊通 讯 作 者
５ ８
动物医学进展
２１ ０ ２年
第 ３ ３卷
第 １ Ｏ期 （ 总第 ２ ２ ） ３ 期
菌 试 验 结 果 见 表 ３ 。
表 ｉ 甘 氨酸 和 硫 酸 黏 杆 菌 素 单 用 及 联 合 对 大肠 埃希 菌抑 菌试 验 结 果
Ｔａ ｌ Ｉ ｈｉ ｉ ｏ ｆ ｅ ｔ ｆｇ ｙ ｉ ｅ ｃ ｍｂ ｎ ｄ ｗｉｈ ｃ ｌ ｔ ｕ ｐ ａ ｅ ａ ａ ｎ ｔ Ｅ． ｏ ｉｉ ｉｒ ｂ ｅ １ ｎ ｂ ｔ ｎ ｅ ￣ ｃ ｓｏ ｌ ｅ ｎ ｏ ｉ ｅ ｔ ｏ ｉ ｉ ｓ ｌ ｈ ｔ ｇ ｉ ｓ ｃ ｌ ｎ ｖ ｔ ｏ ｉ ｓｎ
表 ２ 甘 氨 酸 和 硫 酸 黏杆 菌素 单 用及 联 合 对 绿 脓 杆 菌 抑 菌 试 验 结 果
Ｔａ ｌ Ｉ ｈ ｂｉ ｏ ｆ ｅ ｔ ｆｇ ｙ ｉ ｅ ｃ ｍｂ ｎ ｄ ｗｉｈ ｅ ｌ ｔｎ ｓ ｌ ｈ ｔ ｇ ｉ ｔＰ． ｒ ｇｉ ｏ ａ ｉ ｉｒ ｂｅ２ ｎ ｉ ｔ ｎ ｅｆｃｓｏ ｌｃｎ ｏ ｉ ｉ ｅ ｔ ｏ ｉ ｉ ｕ ｐ ａ ｅ ａ ａｎｓ ａｅ ｕ ｎ ｓ ｎ ｖ ｔｏ ｓ
（ 岛农业大学动物科技学院 ， 青 山东 青 岛 ２ ６０ 硫 酸黏杆 菌素 体 外抑 茵作 用 的影 响 ， 用微 量 肉汤棋 盘 稀释 法 ， 标 准株 及 为 采 对 临床 分 离的猪 源 大肠埃希 菌 、 门茵 、 脓杆 菌（ ３ 株 ） 沙 绿 共 ３ 进行 了体外联 合抑 菌试 验 。结果表 明 ， 验 菌株 中 试
稀 释法 准确 、 可靠 ， 操 作 繁琐 ； 脂 稀 释 法 易发 现 但 琼
污染 菌 ， 但制 备 含 药 琼 脂 平 板 费 时 费力 ， 测 得 的 且
屏 障 作用 。这些 物 质在 胞 内具 有 较 高 的浓 度 ， 均 平 比胞外 高 出 ４ ０倍 ～ ５ ０倍 ， 此 可 保 持 胞 内高 渗 ０ ０ 因
合 ＭＩ Ｃ值 ， 以两药 对 应各 菌 的 ＭＩ Ｃ值 的 ４ ２ １ １ 、 、 、／ ２ １４ １８ １１ 、／ 、 ／ 、 ／ ６倍浓 度在 ９ ６孔 细胞 培养 板 上 分别
按 纵 列 和 横 列 进 行 联 合 ， 种 菌 量 为 １× １ 接 ０
眦指 一 数
２ 结 果
２ １ 大肠埃 希菌 抑菌试 验结 果 ．
箱 ， 海森 信 试 验 仪 器 有 限公 司产 品 ； Ｃ １ ０型 上 Ｂ Ｍ一０ 超净 工 作 台 ， 州 安 泰 空 气 技 术 有 限 公 司 产 品 ； 苏 Ｚ Ｘ ３ １型座式 自动 电热 压 力 蒸 汽灭 菌器 ， 海 申 Ｄ 一５ 上
结 构 中和革 兰 阴性 菌 产 生 的 内毒 素 ， 颃 内毒 素 的 颉 致 热性 ［３。甘 氨酸是 一种 中性 氨基 酸 ， 通 过破 坏 ２］ ， 可 内毒素 的结 构 ， 有效 降低 血 浆 中肠 源性 内毒 素 的水 平［， ４ 同时还 可下调 肝 组织 脂 多 糖 结 合蛋 白 ｍＲＮＡ ］
大 部分革 兰 阴性 细 菌 具 有强 大 的杀 菌 作 用 ， 绿 脓 如
杆 菌 、 肠 埃 希 菌 、 门 菌 和 变 形 杆 菌 等 ， 绿 脓 杆 大 沙 对
菌 的作 用尤 为显 著 ， 于 生 长期 和静 止期 的细 菌 均 处
能 很快被 杀 死 。同 时 ， 能 通过 破 坏 内毒 素 的超 微 还
Ａ Ｃ ７ ５ 做 质量控制 。 Ｔ Ｃ９ ８ ３ １ ２ ４ 联 合 抑 茵 试 验 采 用 微 量 肉汤 棋 盘 稀 释 ． ． 法 ］测定 甘 氨酸和硫 酸黏 杆 菌素对 ３ ， ３株 细 菌的联
ｃｕ ｍＬ，７ ℃孵 育 １ ～２ ， 察 结 果 。 ｆ／ ３ ８ｈ ４ｈ 观
刘 萌 萌 等 ： 氨 酸 对 硫 酸 黏 杆 菌 素 体 外 抑 菌 作 用 的 影 响 甘
５ ９
注 ： 表 示相 加 作 用 ； ＋ ×表 示 协 同 作 用 ； Ｎ表 示 无 关 。
Ｎｏ ｅ：＋ Ｍ ｅ ｎｓａ ｄ ｔｖ ｆｅ ｔ × Ｍ ｅ ｎ ｙ ｅ ｇ ｓ ｉ ｆ ｅ ｔ Ｎ ｅ ｎ ｏ ａ ｔ ｇ ｎ ｓ ｉ ｆ ｅ ｔ ｔ ａ ｄ ｉｉ ｅ ｅ ｆ ｃ ； ａ ｓ ｓ ｎ ｒ ｉｔｃ ｅ ｆ ｃ ； Ｍ ａ ｓ ｎ ｎ ａ ｏ ｉｔｃ ｅ ｆ ｃ ．
１ １ 材料 ．
３ ６ ｇ ｍＬ和１６ ８ ４ｇ ／ ２７ ８￣ ／ ３ ． ． ｍＬ 的储备 液 ， 菌 条 ｇ 无
１ ２ ３ 单 药最低 抑 茵 浓度 （ Ｃ） 定 方 法 采 用 ．． ＭＩ 测
备 １ １ １ 药品 硫 酸 黏 杆 菌 素 ， 号 １０ １ ， 量 件 下过 滤 除菌 ， 用 。 ． ． 批 １１６ 含
１ ２ ５ 结果判 定 以部分 抑菌浓 度 （ Ｉ ） ． ． Ｆ Ｃ 指数 做 为
联合 药 敏试 验 的判 定 依 据 ： Ｉ ０ ５为 协 同作 用 ， Ｆ Ｃ≤ ．
０ ５ Ｆ Ｃ １为相 加作 用 ， ＜Ｆ Ｃ ２为无 关作 用 ， ．＜ Ｉ ￣ １ Ｉ≤ ＦＣ Ｉ ＞２为颉 颃作 用 。
注： ＋表 示 相 加 作 用 ； ×表 示 协 同作 用 ； 表 示 无关 。 Ｎ
Ｎｏ ｅ ｔ ：＋ Ｍ ｅ ｎ ｄ ｉｉ ｅ ｅ ｆ ｃ ； Ｍ ｅ ｎ ｙ ｅ ｇ ｓ ｉ ｆ ｅ ｔ Ｎ ｅ ｎ ｏ ａ ｔ ｇ ｎｉｔｃ ｅ ｆ ｃ ａ ｓ ａ ｄ ｔｖ ｆ ｅ ｔ × ａ ｓ ｓ ｎ ｒ ｉｔｃ ｅ ｆ ｃ ； Ｍ ａ ｓ ｎ ｎ ａ ｏ ｓ ｉ ｆｅ ｔ
关键 词 ： 氨 酸 ； 酸黏杆 菌 素 ； 茵作 用 甘 硫 抑
中 图分 类 号 ： ８ ９ ７ ￥ ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ：０ ７ ５ ３ （ ０ ２ １ 一 。 ｏ １ ０—０ ８ ２ １ ）０Ｏ ５ ４
黏 杆 菌 素 （ｏｉ ｉ） 名 多 黏 菌 素 Ｅ（ ｏｙ ｘｎ ｃｌｔ 又 ｓｎ ｐ ｌｍｙ ｉ
ｌ ２ 方 法 －
甘氨酸 和黏杆 菌 素联合 应用 可有 效 地颉 颃 内毒 素 引起 的 发 热 ， 轻 黏杆 菌素 的毒 副 反 应 ＿ 。但 甘 减 ７ ］ 氨酸对 黏杆 菌素抑 菌作 用 的影 响未 见报 道 。本 试 验 通 过 观察 甘 氨 酸 和硫 酸 黏 杆 菌 素 联 用 对 大 肠 埃 希 菌、 绿脓 杆 菌和沙 门菌 体外 抑菌 作用 的影 响 ， 以期 了 解 甘 氨酸对 硫 酸黏 杆 菌 素 是 否 具有 增 效 作 用 ， 而 从
脂 ， Ｓ琼 脂 ， Ｓ 十六烷 三 甲基溴 化铵 琼脂 。
１ １４ 仪 器及 设 备 ． ． Ｄ 一１ ２型 电 热 恒 温 培 养 ＲＰ ９ ６
Ｅ ， 多 黏 芽 胞 菌 （ ａ ｎｂ ｃｌ ｓｐ ｌｍｙ ａ） 生 ）是 Ｐ ｅ ｉ ｉ ｕ ｏｙ ｘ 产 ａ ｌ 的一组碱 性环 状多 肽类抗 生 素 。硫 酸黏 杆 菌素 对 ］
为 临床用药 提供 依据 。
１ ２ １ 茵 液制 备 ． ．
将 全 部 菌株 经 复 苏 、 养 （ 肠 培 大
埃希 菌 于 麦康 凯 培 养基 、 门菌 于 Ｓ 沙 Ｓ培养 基 、 脓 绿 杆菌 于 十六烷基 三 甲基溴 化铵 培养 基 ） 重 新 划线 分 ， 离后 ， 取单 菌 落 ２个 ～３个 ， 种 到 ３ｍＬ～５ｍＬ 挑 接
３ 讨 论
体外 抑菌 试验 的常 用方法 主要 有常量 肉汤稀释
法、 微量 肉汤稀 释 法 和琼 脂 稀 释 法 ３种 。常 量 肉汤
甘氨 酸对硫 酸黏 杆菌 素 的增 效机 理 目前 尚不 清
楚 。细菌 的胞浆 膜 富含 磷 脂 ， 胞 内 的低分 子 物 质 对 （ 氨基 酸 、 苷 酸 、 核 无机 盐 、 嘧啶 、 嘌呤 等） 有选择 性 具
２ ０ Ｕ／ ， 州 市 某 有 限 公 司 生 产 ； 氨 酸 ， ３ｏ ０Ｉ ｍｇ 广 甘 批
号 １ ０ １ ， 量 ９ ． ， 津市某 有 限公 司生产 。 １ ４４含 ９９ 天
１ １ ２ 菌株 来源 ．． 试 验用 菌株 ： 床分 离 的猪 源 性 临
微 量 肉汤稀 释 法 ， 别 测 定 甘 氨 酸 和硫 酸 黏杆 菌 ］分
Ｍ— 肉汤 中 ， ３ Ｈ 于 ７℃培 养 ８ｈ １ 。以平 板计 数 ～ ０ｈ 法［ 进行 细菌计 数 。 ８ １ ２ ２ 药液制 备 甘氨 酸 和 硫 酸 黏杆 菌 素 分 别 用 ． ． 无 菌蒸 馏水及 ｐ ． Ｈ６ ０的磷 酸盐 缓 冲液 溶 解后 ， 成 制
ｌ 材 料 与 方 法
２． ７ ３％呈协 同作 用 ，６ ７ 呈相 加作 用 ， 关作 用 的 占 ６ ， 颉 颃作 用 ； ６． 无 无 大肠 埃 希 菌、 脓杆 菌和 沙 门茵 绿 的平均 Ｆ Ｃ指数 分别 为 ０ ５ 、 ． ９和 ０ ５ 。说 明甘 氨 酸对硫 酸黏 杆 菌素有 增效 作 用。 Ｉ ．３０ ３ ．２